红细胞生成素3'-增强子片段对内皮细胞缺氧时环加氧酶-2基因表达的影响

目的和方法：体外合成红细胞生成素（Ｅｐｏ）３′－增强子野生型及突变型片段，借助脂质体，转入内皮细胞，用半定量ＲＴ－ＰＣＲ方法测定分离细胞在常氧或缺氧条件下培养４ｈ的环加氧酶２（ＣＯＸ－２）ｍＲＮＡ。结果：（１）大鼠主动脉内皮细胞、肺微血管内皮细胞在常氧下培养，有ＣＯＸ－２基因表达；（２）缺氧能诱导这两种细胞ＣＯＸ－２基因表达增加；（３）野生型Ｅｐｏ３′－增强子片段能阻断缺氧对内皮细胞ＣＯＸ－２基因表达的诱导作用，而突变片段则无此作用。结论：在ＣＯＸ－２基因序列中，可能存在Ｅｐｏ３′－端增强子片段，它参与了内皮细胞的缺氧反应     

乙醛脱氢酶2在大鼠心肌缺氧损伤中的抗凋亡作用

目的： 检测大鼠心肌在缺氧条件下发生细胞凋亡的变化，以及乙醛脱氢酶2（ALDH2）在此过程中所起的作用。 方法： 运用缺氧模型，比较大鼠心肌细胞在单独缺氧和经ALDH2特异性抑制剂daidzin预处理24 h后缺氧的凋亡改变，酶活性检测采用乙醛代谢法、凋亡的测定通过用Hoechest 33324、免疫荧光标记用流式细胞仪测定和TUNEL试剂盒检测。 结果： 心肌细胞在daidzin作用下，其酶活性被抑制而细胞无凋亡发生。在daidzin预处理24 h后再经缺氧诱导，比单独缺氧引起的心肌细胞凋亡更为明显：表现为在Hoechest 33324染色中，细胞核溶解和核碎裂(P<0.05)，FACS和TUNEL显示，凋亡细胞明显增加(P<0.05)。 结论： ALDH2酶活性降低可增加心肌细胞对缺氧导致凋亡的易感性，ALDH2对缺氧引起的细胞凋亡有拮抗作用。     

塞来昔布诱导不表达环氧合酶-2的胃癌细胞凋亡研究

目的： 探讨选择性COX-2抑制剂celecoxib诱导COX-2不表达胃癌细胞MGC-803凋亡。 方法： 应用MTT法研究celecoxib对细胞存活率的影响；Hoechst33258染色，DNA 琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术分别检测celecoxib处理后细胞形态学改变，DNA断裂情况和DNA含量的变化。 结果： COX-2高表达于AGS胃癌细胞株，而MGC-803中未检测到COX-2表达; 选择性COX-2抑制剂 celecoxib呈浓度和时间依赖性诱导MGC-803细胞凋亡。 结论： Celecoxib 可诱导不表达COX-2的胃癌细胞MGC-803凋亡。     

大鼠心肌细胞缺氧预处理中COX2、iNOS和p38MAPK间信号转导关系的研究

目的:探讨大鼠心肌细胞缺氧预处理时COX₂的作用及COX₂、iNOS、p38MAPK3者间的关系。方法:实验分为5组:对照组、缺氧预处理组(IPC组)、SMT干预组(SMT组)、NS₃₉₈干预组(NS₃₉₈组)和SB₂₀₃₅₈₀干预组(SB组), 用Westernblotting法测定心肌细胞的COX₂、iNOS表达量和Phosph-p38MAPK量, 以LDH释放和台盼蓝排斥试验判断心肌细胞损伤程度。结果:SMT组和SB组COX₂表达明显少于缺氧预处理组(P＜0.01)。缺氧预处理组和NS₃₉₈组间iNOS表达量无显著差异。SB组iNOS表达量比缺氧预处理组和NS₃₉₈组低, 差异极显著(P<0.01)。SMT组和NS₃₉₈组的Phosph-p38MAPK量与缺氧预处理组无显著差异(P>0.05)。缺氧预处理组的LDH释放较对照组少、细胞存活率高;SMT组、NS₃₉₈组和SB组LDH释放较缺氧预处理组多、细胞存活率低。结论:缺氧预处理时COX₂、iNOS和p38MAPK表达、活化, 在其信号转导中, p38MAPK活化是iNOS的上游、并通过iNOS活化介导COX₂表达。     

银杏叶提取物对缺氧复氧诱导大鼠大脑皮层神经细胞凋亡的保护作用

应用原代分离培养的Wistar胎鼠大脑皮层神经细胞缺氧复氧模型。研究银杏叶提取物对神经细胞凋亡的抑制作用。方法：采用流式细胞术检测DNA含量及凋亡细胞百分率。原位末端标记法检测DNA断裂;光镜及透射电镜观察细胞形态学变化。结果：银杏叶提取物能改善神经细胞亚微结构的变化。减少凋亡细胞数,使缺氧复氧诱导神经细胞凋亡百分率明显下降。结论：银杏叶提取物对缺氧复氧所引起的胎鼠大脑皮层神经细胞凋亡有明显抑制作用。     

NF-κB/IκB信号通路在IL-1β诱导的肾系膜细胞环氧化酶-2表达中的作用

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)/IκB信号通路在肾小球系膜细胞环氧化酶-2(COX-2)表达中的作用。方法:放射免疫测定法检测系膜细胞培养上清中PGE₂水平;RT-PCR和Westernblot检测COX-2表达;凝胶电泳迁移率(EMSA)和Westernblot检测肾小球系膜细胞中NF-κB活化、p65亚基核转位以及IκBα和IκBβ的降解。结果:IL-1β显著上调系膜细胞PGE₂释放和COX-2表达,PDTC显著抑制IL-1β诱导的COX-2表达及PGE₂释放;IL-1β诱导系膜细胞NF-κB活化,p65核转位及胞浆内IκBα和IκBβ的降解。结论:IL-1β通过NF-κB/IκB信号转导通路诱导肾小球系膜细胞中COX-2表达。     

PPAR-γ激动剂减轻缺氧性大鼠神经细胞损伤的作用机制

目的：观察过氧化物酶增殖物激活受体γ（PPAR-γ）在原代培养的大鼠皮质神经细胞缺氧再复氧损伤中的作用以及PPAR-γ与环加氧酶-2(COX-2)的关系。方法: 原代培养大鼠皮质神经细胞,随机分为对照组、缺氧再复氧组、PPAR-γ激动剂（ciglitazone）+缺氧再复氧组。用噻唑蓝(MTT)比色法测定神经细胞生存率,用Western印迹法检测COX-2蛋白表达情况。结果: 大鼠原代皮质神经细胞经ciglitazone预处理的缺氧再复氧组神经细胞生存率明显高于单独缺氧再复氧组(P<0.05);并且其COX-2蛋白表达水平也明显低于缺氧再复氧组(P< 0.05)。结论: PPAR-γ激动剂（ciglitazone）能够减轻缺氧再复氧后神经细胞的损伤。保护作用可能是通过降低COX-2蛋白表达水平而实现的。     

环氧合酶-2抑制剂对盐酸诱导大鼠胃粘膜损伤后上皮细胞增殖和愈合的影响

目的:探讨特异性和非特异性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂,对盐酸诱导胃粘膜损伤后上皮细胞增殖和损伤愈合的影响。方法:大鼠胃内给予06mol/LHCl1mL后,胃内给予NS-398或吲哚美辛,Westernblot和免疫组化法分析盐酸灌胃前、后胃粘膜COX-2表达,免疫组化检测增殖细胞核抗原(PCNA)评价上皮细胞的增殖状态,小格图纸法计算胃损伤指数(LI)。结果:盐酸灌胃后,COX-2在胃粘膜表层上皮细胞和腺颈部成体干细胞高表达。盐酸灌胃后24h,NS-39840mg/kg组及吲哚美辛组PCNA标记指数(PCNA-LI)分别为(22.72±4.33)%和(21.98±5.18)%,明显低于对照组(34.46±3.61)%(P<0.05);NS-3984mg/kg组和40mg/kg组LI分别为(1.28±0.58)%和(1.16±0.56)%,显著高于对照组(0.58±0.24)%(P<0.05)。结论:COX-2抑制剂抑制胃粘膜上皮细胞增殖,延迟大鼠胃粘膜损伤的愈合,提示COX-2表达在胃粘膜再生过程中起重要作用。     

NS-398对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的:探讨选择性环氧合酶II(COX-2)抑制剂NS-398对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法: 应用MTT法研究不同浓度NS-398对HepG2细胞增殖的影响,DNA梯状电泳(DNA ladder)检测凋亡的发生,流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡百分率的变化,竞争性RT-PCR检测环氧合酶II COX-2 mRNA及抑凋亡基因bcl-2 mRNA表达的改变。结果: NS-398呈剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖,并诱导其凋亡,细胞周期分析表明随着浓度增大S期细胞明显减少,有G₀/G₁期细胞累积现象,并伴有Bcl-2 mRNA表达的下调,而对COX-2 mRNA表达改变无明显影响,且COX-2表达改变与NS-398引起的HepG2细胞的增殖和凋亡均无相关性(相关系数分别为:r=0.056,P>0.05和r=0.119,P>0.05)。结论: NS-398能明显抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,与细胞G₀/G₁期阻滞以及bcl-2基因表达下调有关,而非依赖于抑制COX-2基因的表达。     

缺氧复氧诱导大鼠大脑皮层神经细胞凋亡的形态学研究

目的　　应用原代分离培养的Ｗｉｓｔａｒ胎鼠大脑皮层神经细胞缺氧复氧模型,探讨缺氧复氧诱导神经细胞凋亡的形态学变化。方法　　采用光镜、透射电镜观察并用原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测ＤＮＡ断裂。结果　　缺氧复氧可使胎鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡,凋亡的细胞皱缩,细胞核染色质凝集、边聚呈半月形等多种形式形成核碎块,内质网扩张,线粒体肿长,其它细胞器未见明显变化。结论　　凋亡参与了缺氧复氧诱导大脑皮层神经细胞死亡过程。     

灵芝提取物对神经元缺氧复氧损伤的保护作用及其机制的离体研究

目的: 研究灵芝提取物(GLE)对原代大鼠皮层神经元氧糖剥夺-再复氧(OGD/R)损伤模型的影响,在细胞水平探讨GLE神经保护作用的机制。方法: 新生SD大鼠的皮层神经元原代培养至第7 d,用GLE预处理神经元OGD/R模型。选取OGD/R后的0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h和72 h作为观察点,观察GLE干预后对各个时点的细胞形态学、细胞毒作用、细胞线粒体活性、细胞凋亡率及凋亡相关蛋白表达量的影响。结果: GLE(0.1、1、10 mg/L)能明显减少神经元LDH的释放,提高线粒体活性。流式细胞术结果证实了GLE能抑制神经元OGD/R损伤导致的凋亡,这种作用甚至能持续至OGD/R后的72 h。GLE(0.1、1、10 mg/L)下调caspase-3、caspase-8蛋白的表达,GLE (10 mg/L)还能下调caspase-9蛋白表达。结论: GLE对OGD/R诱导的神经元损伤有一定的保护作用,可能是有效防治急性缺血性卒中的神经保护药物。     

左旋卡尼汀对缺氧/复氧诱导的子鼠心肌细胞凋亡的影响

目的：探讨左旋卡尼汀（L-carnitine）对缺氧/复氧（I/R）诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法： 采用原代培养大鼠子鼠心肌细胞作为模拟缺血再灌注损伤实验模型，实验分3组：①正常对照组（control）；②I/R组:缺氧120 min,复氧240 min;③L-carnitine组：I/R前2 h加用L-carnitine设4个浓度梯度。观察各组细胞经I/R损伤后，细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量的变化情况，并用流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率。结果： I/R组SOD活性低于对照组，MDA含量、细胞凋亡率均高于对照组，与control组相比均有显著差异(P＜0.05)；在L-carnitine用药组，SOD活性高于I/R组，MDA含量、细胞凋亡率均显著高于I/R组，P＜0.05。结论： 左旋卡尼汀对I/R损伤诱导的子鼠心肌细胞凋亡有抑制作用，其作用在一定范围内呈剂量依赖关系。     

蒺藜皂苷对缺氧/复氧诱导大鼠皮层神经元凋亡及细胞内钙变化的作用

目的： 观察蒺藜皂苷(TTLS)对缺氧/复氧诱导的大鼠皮层神经元凋亡及细胞内游离钙离子浓度变化的影响。方法： 原代培养大鼠皮层神经元，建立缺氧/复氧损伤的皮层神经元凋亡模型。比色法测定细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放漏出率；Annexin V-FITC/PI双染，流式细胞仪定量分析细胞凋亡百分率；Fluo-3荧光染色，激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙平均荧光值变化。结果： 缺氧3 h复氧12 h可诱导出皮层神经元凋亡，引起细胞内钙离子浓度增高,高于对照组（P<0.01）。蒺藜皂苷(0.025 g/L)能明显降低缺氧/复氧诱导的神经元凋亡，并可降低细胞内钙浓度,与模型组比较有显著差异（P<0.01）。结论： 蒺藜皂苷可降低由缺氧/复氧诱导的皮层神经元的凋亡，减轻细胞损伤，这种作用机制可能与其抑制神经细胞内钙超载有关。     

低分子肝素抗新生大鼠大脑皮层神经细胞缺氧性凋亡

目的：探讨低分子肝素对体外培养的新生大鼠大脑皮层神经细胞缺氧性凋亡的作用机制。方法： 应用“neurobasal 加 B27 supplement”体外培养大鼠大脑皮层神经细胞，并在缺氧条件下使用Hoechst 33342荧光染色法、免疫细胞化学染色法观察低分子肝素对原代神经细胞的抗凋亡作用。结果： 在250-500 U/L的浓度范围內，低分子肝素能降低缺氧诱导的神经细胞凋亡率（P<0.05），并且较BDNF（50 μg/L）抗凋亡阳性对照组的凋亡率更低（P<0.05）。低分子肝素（500 U/L）增加缺氧的神经细胞Bcl-2蛋白的表达（P<0.05），减少Bax蛋白的表达（P<0.01），提高Bcl-2/Bax比值（P<0.01）。低分子肝素500 U/L组的Bcl-2/Bax比值比正常对照组、BDNF抗凋亡阳性对照组和凋亡阳性组都高（P<0.05）。结论： 低分子肝素通过上调缺氧神经细胞Bcl-2表达和下调Bax表达，提高Bcl-2/Bax比值减少缺氧的神经细胞凋亡。     

人参皂苷Rb1对大鼠胎鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的：以原代培养的大鼠胎鼠海马神经细胞缺氧/缺糖再给氧为模型,观察人参皂苷Rb₁对神经细胞凋亡的抑制作用。方法：流式细胞术检测凋亡细胞百分率,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死细胞百分率,同时,测定细胞LDH的释放和NO的产生量。结果：神经细胞缺氧/缺糖5 h后再给氧可诱导神经细胞凋亡和细胞坏死,并显著增加LDH的释放和NO的产生,并随再给氧时间的延长而增加。人参皂苷Rb₁能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率,减少LDH的释放和NO的过量产生,人参皂苷Rb₁的作用随剂量增加而作用增加。结论：人参皂苷Rb₁具有拮抗海马神经细胞凋亡的作用,这种作用可能与降低或抑制NOS活性,减少NO的过量产生有关。     

左旋卡尼汀对缺氧/复氧诱导的心肌细胞氧化、凋亡影响的体外研究

目的：探讨左旋卡尼汀（L-carnitine）对缺氧/复氧（A/R）诱导的乳鼠心肌细胞抗氧化、抗凋亡效应及其可能的作用机制。方法： 采用原代培养乳鼠心肌细胞作为模拟缺血再灌注损伤实验模型，实验分3组：①正常对照组（control）；②A/R组:缺氧120 min,复氧240 min;③L-carnitine组：A/R前2 h加用L-carnitine设4个浓度梯度，1组20 mg/L，2组50 mg/L，3组100 mg/L，4组200 mg/L。观察各组细胞经A/R损伤后，细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量、琥珀酸脱氢酶（SDH）活性的变化情况，并用流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率，透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果： A/R组SOD活性、SDH活性明显低于对照组，MDA含量、细胞凋亡率均高于对照组(P＜0.05）；在L-carnitine用药组，随给药浓度的增加，MDA含量逐渐恢复正常，SOD活性、SDH活性逐渐回升，而且细胞凋亡率下降，各药物治疗组与A/R组比较各实验指标均显著差异(P＜0.05)；A/R组心肌细胞超微结构损伤明显重于药物治疗组。结论:左旋卡尼汀对心肌细胞具有保护作用，其作用在一定范围内呈剂量依赖关系。     

β-肾上腺素能刺激促进离体小鼠心脏缺氧/复氧诱导的细胞凋亡

目的：观察β-肾上腺素能刺激与缺氧/复氧损伤对离体小鼠心脏细胞凋亡的影响。 方法： 逆行灌注离体小鼠心脏，观察不同剂量异丙基肾上腺素（Iso）和不同时间缺氧/复氧心肌细胞凋亡率的变化，并观察β1-肾上腺素能受体阻滞剂、caspase-拮抗剂、Bcl-2对其凋亡率的影响，以TUNEL法检测心肌细胞凋亡率。 结果： 单独Iso未引起心肌细胞凋亡率的变化，但可增加缺氧/复氧所诱导的细胞凋亡率；Bcl-2转基因鼠细胞凋亡率明显低于正常小鼠；β1-受体拮抗剂（美托洛尔）及caspase -拮抗剂（zVAD.fmk）可明显抑制Iso和缺氧/复氧所致细胞凋亡。 结论： β-肾上腺素能受体激动剂可促使缺氧/复氧所诱导心肌细胞凋亡，其诱导凋亡的作用主要通过β1-受体介导，β1-受体拮抗剂可抑制二者共同作用所诱导心肌细胞凋亡。     

肝细胞生长因子减轻皮质神经元的缺氧/复氧损伤

目的研究肝细胞生长因子(HGF)对缺氧/复氧诱导大鼠皮质神经元凋亡的保护。方法分离培养SD大鼠皮质神经元,经HGF(15、30和60μg/L)预处理后经缺氧/复氧诱导凋亡,用MTT比色法检测细胞存活率;用Hoechst33258染色法和流式细胞仪检测神经元的凋亡;用比色法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)和caspase-3活性变化。结果与正常对照组相比,缺氧/复氧组神经元的细胞存活率显著下降,细胞凋亡率和caspase-3活性升高(均P<0.05);而HGF预处理12 h可显著逆转缺氧/复氧所致的细胞存活率降低、凋亡率增加、LDH活性上升、caspase-3活性升高的改变(均P<0.05),且这些效应与HGF剂量正相关。此外,HGF的抗凋亡效应可被PI3K/Akt通路抑制剂LY294002阻断。结论HGF减轻缺氧/复氧所诱导的神经元凋亡可能与其激活神经元的PI3K/Akt信号通路、减少caspase-3表达有关。     

烟碱拮抗秋水仙碱诱导的乳大鼠大脑皮质神经元凋亡

目的：探讨烟碱拮抗秋水仙碱诱导乳大鼠大脑皮质神经元凋亡的作用机制。方法: 培养Sprague-Dawley（SD）乳大鼠大脑皮层神经元，Hoechst33258核荧光染色进行凋亡率计数检测神经元凋亡, Akt（ser473）Western blotting分析试剂盒做激酶分析。结果: 0.1 μmol/L秋水仙碱可降低皮层神经元的存活率，诱导大鼠皮层神经元凋亡。但是，当10 μmol/Ｌ烟碱预孵2 h后再加入0.1 μmol/L秋水仙碱作用24 h, 烟碱可拮抗秋水仙碱的此种凋亡作用,将凋亡率从（62±1）％ 降低到 (38±2) ％,P<0.05。Akt（ser473）磷酸化在0.5 h时开始下降，于6 h时最低，仅为对照组的1/3。且Akt（ser473）磷酸化水平随时间（0.5、1、6、12和18 h）呈钟型性改变,分别是对照组的1.3、3.7、2.4、2.1和1.9倍,P<0.05。结论: 烟碱对大鼠皮质神经元凋亡的拮抗作用可能与其激活Akt有关。