基于国家药品抽检的川牛膝质量问题及建议

目的 基于2022年国家药品抽检工作,分析市场上不同厂家川牛膝质量差异,分析问题并提出建议,为川牛膝的质量监管及标准提高提供依据。方法 针对所抽取川牛膝样品按照相应标准进行检测,出具检验报告书。针对检验中所发现的质量问题、标准问题及前期调研发现的相关问题进行有针对性的探索性研究,进行质量评价分析,发现问题,提出建议。结果 共抽取川牛膝样品334批。标准检验,2批样品性状不合格,存在用麻牛膝充当川牛膝使用的情况,同时发现标准收载含量测定方法过于复杂,且限度过低。探索性研究,27批川牛膝检出麻牛膝特有成分牛膝皂苷Ⅰ,7批超出规定限度,存在麻牛膝混用的情况;270批川牛膝检出植物生长调节剂(多效唑)。114批重金属及有害元素镉(Cd)检测超出限度。最后提升了川牛膝质量标准、建立了补充检验方法、提出风险警示。结论 通过此次全国抽检发现川牛膝饮片和标准中的相关问题,提示需完善标准并加强川牛膝的质量监管。     

川牛膝化学拆分组分的制备及其免疫调节作用

目的:制备川牛膝化学拆分组分,并研究川牛膝水煎液及其各化学拆分组分对免疫调节的影响。方法:采用水煎煮、醇沉、大孔吸附树脂柱色谱分离技术的联合应用,将川牛膝水煎液的化学成分拆分为成分之间互不交叉的以下几部分:多糖组分,20%乙醇洗脱组分,甾酮组分和脂肪油组分,对其进行化学特征研究并运用HPLC对各化学拆分组分进行互不交叉性研究。考察川牛膝水煎液及其各化学拆分组分对小鼠碳粒廓清指数和免疫器官的影响及对小鼠血清溶血素抗体生成的影响。结果:建立的川牛膝化学成分拆分方法可行、稳定且重复性好,能够实现全成分拆分,各拆分组分间化学成分基本无交叉;川牛膝具有一定的免疫增强作用。结论:发挥免疫增强作用的药效物质基础为多糖组分和甾酮组分。     

川牛膝耐寒性筛选及其耐寒生理特性的研究

目的:探索川牛膝幼苗抗寒机理,为川牛膝品种选育和抗逆栽培提供理论基础。方法:以川牛膝主产区收集的川牛膝种子生长至5对生叶的幼苗为试验材料,通过低温胁迫,测定形态指标和生理指标,用隶属函数法和低温变异指数对川牛膝进行耐寒性筛选与评价。结果:可溶性糖、脯氨酸、可溶性蛋白、鲜重、株高可作为川牛膝幼苗耐寒性的评价指标;宝兴县崇兴村的红牛膝、宝兴县崇兴村的白牛膝、汉源县的白牛膝耐寒性较强。结论:不同产地川牛膝耐寒性不同,耐寒性与川牛膝幼苗体内的渗透调节物质成正相关。     

川牛膝多糖的研究概况

川牛膝,为著名川产道地药材,多糖类化合物是其药效物质基础之一。现代药理实验表明,川牛膝多糖具有多方面的药理作用,尤其在提高机体免疫方面相对显著。检索近几年相关文献,对国内外川牛膝多糖的研究进行整理,现从川牛膝多糖提取方法、分离纯化方法、含量测定、结构研究、药理活性等方面作系统总结,为后续川牛膝多糖的深入研究提供有益借鉴。     

基于遥感与GIS的四川省川牛膝资源适宜性分布研究

目的对川产道地药材川牛膝资源的适宜性进行评价,为中药资源监测提供参考。方法本实验以四川省为例,利用遥感和地理信息系统(GIS)技术,结合适宜川牛膝生长的生态环境因子,采用层次分析法和空间分析法,从地形、气候、土壤、植被4个方面对川牛膝适宜性分布进行研究,按照不同指标因子分等,得到四川省川牛膝适宜区分等图,并结合野外实测进行验证,对道地药材川牛膝进行研究。结果四川省的川牛膝资源主要适宜分布在乐山、雅安、凉山彝族自治州、宜宾等19个市、州,共包含91个县区,适宜性分布总面积约为3 633.52 km2,占四川省总面积的0.76%。根据相关数据、文献资料记载和野外调查研究可以得出,通过遥感与GIS技术分析所得适宜性结果与川牛膝资源实际分布范围基本吻合。结论利用遥感与GIS技术能够准确、快速地对中药材进行适宜性分析,该方法具有可行性,可为全面调查川牛膝资源和其他中药材资源的分布、保护以及合理开发利用提供数据支持与科学依据。     

牛膝及川牛膝配方颗粒位点特异性PCR鉴别研究

为建立一种稳定准确鉴定牛膝和川牛膝配方颗粒的方法。该文使用位点特异性PCR技术,根据牛膝和川牛膝ITS序列的SNP位点设计特异性鉴别引物,经过优化DNA提取方法后,使用牛膝特异性引物进行扩增,牛膝基原植物和牛膝配方颗粒均可扩增出187 bp特异性条带,川牛膝及混伪品无条带;使用川牛膝特异性引物进行扩增,川牛膝基原植物和川牛膝配方颗粒均可扩增出162 bp特异性条带。并利用所建立的方法对不同生产企业的牛膝和川牛膝配方颗粒进行鉴别,可以充分弥补传统鉴别方法的局限性。     

川产道地药材川牛膝产地变迁探讨

以川产道地药材川牛膝Cyathulae Radix为分析对象,对其道地产地变化原因进行探讨。川牛膝为著名川产道地药材之一,传统道地产区为四川天全,目前主产区变为宝兴、金口河、兴隆、红椿、恩施等地。通过查询资料,实地走访川牛膝的主产地,调查产地资源、环境、栽培现状,从自然环境、人工干预、经济效益3个方面分析川牛膝主产地发生变化的原因,为川牛膝资源持续利用,道地药材持续发展提供参考。     

川牛膝的品质研究

目的　研究川牛膝及含川牛膝中成药的质量分析与评价的新方法。方法　采用硅胶柱色谱进行分离 ,理化性质及光谱特征确定结构。结果　从川牛膝乙醇提取物中分离并鉴定了 3个化合物 :β-谷甾醇 ,杯苋甾酮 ,羟基杯苋甾酮。以杯苋甾酮为指标成分 ,对 2 2个川牛膝样品及含川牛膝的中成药进行了薄层定性和HPL C定量测定 ,从而确定其内在质量。结论　此法简单 ,易行 ,可用作川牛膝的质量控制指标     

HPLC特征指纹图谱结合化学计量学比较不同生长年限川牛膝化学成分差异

目的采用HPLC特征指纹图谱结合化学计量学方法比较1～6年生川牛膝的的化学成分特征差异。方法采用HPLC法测定1～6年生川牛膝的色谱图,建立6×54峰面积数据矩阵并进行特征峰差异分析,运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)对样品进行相似度分析,运用SPSS 22.0软件进行聚类分析和主成分分析。结果特征峰差异分析得出,1年生川牛膝在4个色谱峰处和6年生川牛膝在5个色谱峰处表现出组分专属性差异,1年生样品在4个色谱峰处峰面积明显高于其他年限样品,表现出较大的组分累积量差异。相似度分析得出3、4、5年生川牛膝相似度均大于0.98,1、2、6年生川牛膝相似度均小于0.85,聚类分析的树状图和主成分分析的得分三维图均将3、4、5年生川牛膝样品聚为一类。结论不同生长年限川牛膝间化学组分存有一定的差异,其中3、4、5年生川牛膝化学组分趋于一致,为川牛膝采收时期提供科学的参考依据。     

川牛膝炮制前后阿魏酸含量比较

目的对酒制前后川牛膝中阿魏酸含量进行比较,研究炮制对川牛膝中阿魏酸含量的影响。方法采用酒炙法对川牛膝进行炮制,HPLC法测定川牛膝中阿魏酸的含量。结果 HPLC法测定阿魏酸在2.368μg～7.104μg范围内线性关系良好,回归方程为:y=1×10-6x-0.1658,r2=0.9999。回收率为98.53%,RSD=1.00%(n=5)。生品中阿魏酸含量在0.59～0.73之间,制品中阿魏酸含量在0.62～0.85之间。结论酒制后川牛膝中阿魏酸含量略微升高。     

生长素对川牛膝侧根发育及基因IAA14表达的影响

目的:探索生长素IAA对川牛膝Cyathula officinalis Kuan侧根发育和基因IAA14表达的影响。方法:以道地产区乐山金口河3年生川牛膝的种子为材料,在含有不同浓度IAA的MS培养基中培育得到川牛膝幼苗,对其进行根显微结构分析、侧根参数和基因IAA14表达量的考察。结果:川牛膝侧根的起始部分同大多数双子叶植物一样,侧根原基起始于正对木质部的中柱鞘细胞;IAA在一定范围内对川牛膝侧根的发生具有一定的促进作用,且同时下调基因IAA14表达量;平均侧根密度最大值出现在1.83×10~(-5)mg/mL的IAA施加浓度,此时基因IAA14表达量也最低。结论:川牛膝侧根起始于正对木质部的中柱鞘细胞,IAA通过实时调节侧根发育相关基因IAA14在一定范围内促进川牛膝侧根的发育。     

基于RAPD标记的SCAR分子标记技术鉴定川牛膝及其混淆品

目的:基于RAPD标记开发SCAR标记,为川牛膝及其混淆品鉴定提供有效方法。方法:建立了收集于四川天全、宝兴、会理、金口河等地的19个牛膝种群(包括川牛膝及其混淆品红牛膝、怀牛膝)的RAPD指纹图谱,从中找到能有效区分上述材料的多态性谱带F300,F500进行克隆与测序;根据测序结果设计2对特异引物对19份材料进行PCR扩增。结果:引物SC-320能稳定地区分川牛膝与怀牛膝,引物SC-495则能稳定地区分川牛膝与红牛膝,2对引物结合能快速准确地鉴定川牛膝、红牛膝和怀牛膝。结论:建立了鉴定川牛膝及其混淆品的SCAR标记技术体系.     

川牛膝薄层色谱鉴别方法的优化研究北大核心

目的:建立中药材川牛膝薄层色谱鉴别的新方法,为川牛膝的鉴别提供更优方案。方法:对川牛膝及其常见混伪品麻牛膝、杂牛膝、牛膝的薄层色谱条件进行考察,筛选并确定最优条件。结果:从供试品溶液制备、展开剂组成等方面进行了优化,并分别考察了影响薄层色谱效果的温度、湿度、稳定性、专属性等多个因素,建立了一种薄层特征明显、可有效地区别川牛膝及其混伪品的薄层色谱鉴别方法。结论:该方法操作简便,成本低,定性特征明显,重复性好,适用于川牛膝药材的薄层色谱鉴别,且比现有的药典方法效果更佳。     

天全川牛膝生产现状调查

川牛膝 Cyathula officinalis Kuan.为四川著名道地栽培药材之一,具有逐瘀通经、通利关节、利尿通淋等功能,现代药理表明川牛膝所含的川牛膝多糖还具有抗肿瘤的作用。四川雅安市天全县是牛膝的主产区,故称天全川牛膝。天全牛膝栽培历史悠久,早在清朝咸丰八年《天全州志》中就有记载。大全牛膝以其品质好、质量优而驰名中外。为此,笔者专门对该产区进行了生产现状调查。     

川牛膝种子萌发特性的研究

目的:研究川牛膝种子的最佳发芽条件,为生产中川牛膝种子的检验及播种提供试验依据。方法:采用传统的官能鉴定法,即火试法测定川牛膝种子的生活力;通过温度处理、机械处理及超声处理几种不同方法对川牛膝种子进行发芽前处理,在室温下采用光照与黑暗两种条件下发芽,测定其发芽开始时间、发芽率及发芽势。结果:发芽前高温处理(35℃)可使发芽开始时间提前;发芽前低温(4℃)处理、高温处理(35℃)、机械处理及超声处理均可显著提高川牛膝种子在光照条件下的发芽率与发芽势。结论:传统的火试法能较准确地反映川牛膝种子的生活力;温度处理、机械处理及超声处理均可促进川牛膝种子的萌发;生产上低温贮藏并在播种前机械处理,即适当搓揉可提高川牛膝种子的发芽率。     

LC-MS/MS测定川牛膝中57种农药残留及风险评估

目的：采用液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）建立川牛膝中57种农药的测定方法,并采用此方法对348批川牛膝样品进行农药筛查。方法：样品经乙腈提取,分散固相萃取QuEChERS净化,采用LC-MS/MS进行测定,多反应监测模式采集数据,基质匹配外标法定量,采用点评估法对检出结果进行风险评估分析。结果：57种农药线性关系良好,r均大于0.996,57种农药的平均加样回收率为62.5%～113.3%,RSD%均小于10%。348批川牛膝中检出20种农药,其中有4种禁用农药（均未超出限量规定）、6种植物生长调节剂、10种常用农药;风险评估结果显示,川牛膝中农药残留风险较低,植物生长调节剂使用较普遍。结论：该方法简便、灵敏、准确,适用于川牛膝中多农药残留的快速筛查与检测,可为川牛膝的农药风险评估和规范化种植提供数据参考。     

川牛膝最佳采收期的实验研究

目的：确定川牛膝的最佳采收期。方法：采用折干率实验及单株重测定，研究不同生长期川牛膝的产量；采用分光光度法对不同生长期川牛膝中川牛膝多糖进行含量测定。结果与结论：从药材内在质量和产量两方面综合考虑，确定秋冬季即11月植株枯萎后为最佳采收期。     

道地药材之怀牛膝、川牛膝的本草考证

目的：考证怀牛膝、川牛膝的道地药材。方法：通过查阅怀牛膝、川牛膝的文献记载,考证怀牛膝、川牛膝的源流及分析历代医药学家对其功用、性状的描述。结果：历代本草文献所载的牛膝多指怀牛膝,并且自唐代始,大多以怀地产者为优;明清之后,始明确分怀牛膝、川牛膝,两者皆具有补益肝肾和行瘀达下的功效,但怀牛膝以行瘀达下为主,川牛膝以补益肝肾见长。结论：怀牛膝、川牛膝功用相似,但侧重点不同,临床使用应区别对待。     

川牛膝与麻牛膝的形态鉴别

目的鉴别川牛膝与麻牛膝形态特征。方法运用组织切片法和显微电镜观察法,对川牛膝“宝膝1号”与麻牛膝的组织形态进行比较、鉴别。结果川牛膝与麻牛膝在花序、茎、叶片和根部组织形态上有明显差异。川牛膝为主根系植物,茎中有4个维管束,表皮毛数量较多,叶片呈浅绿色,叶绿体发育正常;而麻牛膝为支根系植物,堇中有2个维管束,表皮毛数量较少。此外,麻牛膝叶片在高海拔地区呈深绿色且有大小不规则的黄色斑点,有嗜锇颗粒出现,然而低海拔地区的麻牛膝并无此现象。结论确定了川牛膝和麻牛膝的主要形态特征,并为川牛膝和麻牛膝的鉴别提供科学依据。     

川牛膝MSAP反应体系的优化及引物筛选

目的：首次对川产道地药材川牛膝表观遗传多样性进行研究,建立并优化川牛膝甲基化敏感扩增多态性技术（MSAP）最佳反应体系。方法：以川牛膝苗期叶片为材料,利用正交试验设计对川牛膝MSAP反应体系中预扩增和选择性扩增中关键影响因素进行考察,建立川牛膝MSAP反应最佳体系。结果：川牛膝MSAP最佳反应体系为：酶切体系（20 μL）,300 ng DNA、1.5 μL EcoRI、1.5 μL HpaII或1.5 μL MspI（HpaII）;连接体系（25 μL）：15 μL酶切产物、1 μL EcoRI adaptor、1 μL HpaII/MspI adaptor、0.2 μL T4连接酶;预扩增体系（25 μL）：连接产物1 μL、rTaq酶1 U、引物分别1.5 μL、dNTP 2 μL;选择性扩增体系（25 μL）：预扩产物稀释50倍、rTaq酶1 U、引物1.5 μL、dNTP 3 μL,并运用优化后的体系,最终从川牛膝MSAP的256对引物中筛选出有效引物6对。结论：优化后的体系保证了稳定的图谱、清晰的条带,筛选出的6对引物组合特异性好,能够用于后续川牛膝DNA甲基化相关实验研究,同时,为其他药用植物MSAP分析提供了参考。