补骨脂素对A375细胞黑素合成及ER/MAPK信号通路调控机制探讨

目的:探讨补骨脂素对A375细胞黑素含量、酪氨酸酶活性的影响及作用机制。方法:以密度2×105个/孔的细胞数接种于6孔板中,将细胞分为空白组、雌二醇组、补骨脂素组、补骨脂素+雌激素受体(ER)阻断剂组(ICI182780)(浓度分别为1×10-3,1,1μmol·L~(-1))。采用Na OH裂解法、多巴醌氧化法检测黑素含量及酪氨酸酶活性;蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法测定ER/丝裂原激活的蛋白激酶(ER/MAPK)通路中关键蛋白激酶p38,c-Jun氨基末端激酶(JNK),细胞外信号调节激酶2(ERK2)和小眼畸形相关转录因子(MITF),多巴氧化法检测酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)的蛋白含量及相应mRNA表达。结果:与空白组比较,补骨脂素组对A375细胞中的黑素合成及TYR活性具有显著抑制作用(P0.01),对A375细胞中雌激素受体β(ERβ)蛋白的表达具有明显的抑制作用(P0.05),对p38 MAPK,ERK2,JNK的蛋白表达极显著的抑制作用(P0.01),对MITF,TYR,TRP-1,TRP-2的蛋白表达极显著的抑制作用(P0.01),对ERK2,p38 MAPK,MITF,TRP-1 mRNA表达显著被抑制(P0.01);与补骨脂素组比较,ICI182780能够逆转ERβ,ERK,MITF,TYR,TRP-1的蛋白表达(P0.01)及p38MAPK,JNK,TRP-2的蛋白表达(P0.05),同时能显著阻断补骨脂素对ERK2,p38MAPK,MITF,TRP-1 mRNA表达作用(P0.01)。结论:补骨脂素通过ER/MAPK信号通路下调MITF和TYR,TRP-1,TRP-2的表达量,从而减少黑素合成。     

蒺藜皂苷对人黑素瘤A375细胞酪氨酸酶和小眼相关转录因子表达的影响

目的:在前期研究的基础上,以蒺藜皂苷为研究对象,考察其对A375细胞酪氨酸酶活性、TYR和MITF mRNA的表达的影响。方法:采用不同浓度的蒺藜皂苷作用于A375细胞48 h后,应用左旋多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,荧光定量PCR法检测A375细胞TYR和MITF mRNA的表达情况。结果:应用蒺藜皂苷处理后,酪氨酸酶活性均有不同程度的增加,当达到100μg/m L和200μg/m L时,有统计学差异。TYR和MITF mRNA的表达明显增强(P0.05)。结论:蒺藜皂苷可能通过增强A375细胞TYR和MITF mRNA的表达,以提高酪氨酸酶活性,促进黑素合成,从而为蒺藜皂苷的开发与应用奠定基础。     

不同质量分数高良姜素对人黑色素瘤A375细胞黑素合成及相关基因表达的影响

目的研究不同质量分数高良姜素对人黑色素瘤A375细胞黑素合成及酪氨酸酶基因(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)、酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)mRNA和蛋白表达的影响。方法采用MTT法测定细胞增殖,左旋多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,NaOH裂解法测定黑素合成,采用RT-PCR法、Western-blotting法检测A375细胞中TYR、TRP-1、TRP-2mRNA和蛋白表达。结果 90%高良姜素浓度为1.0～10.0μmol/L对A375细胞具有显著的促增殖作用(P<0.01),而在浓度为20.0μmol/L时,无促A375细胞增殖作用(P>0.05),浓度为0.5～20.0μmol/L均能促进酪氨酸酶活性的升高(P<0.05、0.01),浓度为1.0～20μmol/L具有显著促进黑素升高的作用(P<0.05、0.01),且随着浓度的增加呈增强趋势;99%高良姜素浓度在0.5～20.0μmol/L具有显著促进A375细胞增殖和酪氨酸酶活性升高作用(P<0.01),而对黑素合成无促进作用(P>0.05)。90%高良姜素对TYR、TRP-1 mRNA表达基本无影响,1.0μmol/L时上调TRP-2 mRNA表达(P<0.05);99%高良姜素能上调TYR、TRP-1及TRP-2 mRNA表达;二者均促进TYR蛋白表达,但对TRP-1及TRP-2蛋白表达基本无影响。结论 99%高良姜素能够促进A375细胞增殖及酪氨酸酶活性升高,可能是通过上调TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA表达和TYR蛋白表达实现的;而90%高良姜素能够显著促进细胞增殖、酪氨酸酶活性升高及黑素增加,表明90%高良姜素能够促进黑素的合成,但不是通过调节TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA表达,可能是通过促进TYR蛋白表达实现的。     

补骨脂素对A375细胞黑素合成及相关细胞信号通路调控的研究

目的 研究补骨脂素对A375细胞黑素合成的影响以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的作用。方法 将补骨脂素作用于A375细胞,采用MTT法检测细胞活性;NaOH裂解法检测黑素量;多巴氧化法检测酪氨酸酶（TYR）活性;RT-PCR法测定TYR、酪氨酸酶相关蛋白-1和酪氨酸酶相关蛋白-2（TRP-1、TRP-2）以及ERK1、ERK2、JNK2这3个MAPK信号通路关键蛋白激酶的mRNA表达。结果 补骨脂素在安全剂量下可显著抑制A375细胞黑素合成及TYR活性,1 μmol·L-1补骨脂素能明显下调A375细胞TYR、TRP-1、TRP-2以及ERK1、ERK2、JNK2 mRNA表达。结论 推测补骨脂素通过抑制ERK1、ERK2、JNK2的表达来抑制TYR活性和/或下调TYR、TRP-1及TRP-2 mRNA表达,抑制A375细胞的黑素合成。     

染料木素对A375细胞黑素合成及相关细胞信号通路调控作用的初步探讨

目的:研究染料木素对A375细胞黑素合成的影响,并探讨MAPK信号通路与此作用的相关性。方法:以人黑素瘤细胞A375为研究对象,将不同浓度的染料木素作用于A375细胞48 h,另设空白组,采用MTT法检测细胞活性;Na OH裂解法检测黑素量;多巴氧化法检测酪氨酸酶(TYR)活性;RT-PCR法测定酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)和酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)以及MAPK信号通路关键胞外信号调节激酶1(ERK1),ERK2,c-Jun氨基末端激酶2(JNK2)mRNA的表达。结果:与空白组比较,染料木素在安全剂量(10-1,10-2,10-3μmol·L-1)下均可明显抑制A375细胞黑素合成及TYR活性(P0.01),1μmol·L-1染料木素明显下调A375细胞TYR,TRP-2,TRP-1(P0.05,P0.01)mRNA表达,以及ERK1,ERK2,JNK2(P0.05,P0.01)mRNA表达。结论:染料木素可通过抑制TYR活性和/或下调TYR,TRP-1及TRP-2 mRNA表达,抑制A375细胞的黑素合成,此作用与抑制ERK1,ERK2,JNK2的表达有关。     

小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关基因表达的影响

目的:研究不同浓度小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关酶酪氨酸酶(tyrosinase,TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(tyrosinase related protein-1,TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(tyrosinase related protein-2,TRP-2)mRNA表达的影响。方法:采用CCK8检测细胞活力,选取小柴胡汤低、中、高质量浓度分别为0.1,1,2.5 g·L-1用于实验,逆转录-聚合酶链式反应(RTPCR)法检测B16细胞中TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA的表达。结果:与正常组比较,随着浓度的增加,小柴胡汤水煎液能够显著下调细胞TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA的表达(P0.05,P0.01)。结论:小柴胡汤对黑素合成的抑制作用除了通过直接抑制TYR活性外,还可通过下调酪氨酸酶家族其他成员TRP-1,TRP-2的基因表达、蛋白合成3方面实现其抑制黑素生成的作用,提示小柴胡汤对黑素生成的抑制可通过对酶蛋白转录后调节途径来实现。     

山茱萸提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型中TYR及其相关蛋白mRNA表达的影响

目的:研究山茱萸提取物对黑素瘤细胞A375与角质形成细胞HaCaT共培养模型酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)和酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)mRNA表达的影响。方法:以1∶2的比例构建的A375细胞与HaCat细胞共培养模型,将质量浓度为1.0,0.5 g·L-1的山茱萸提取物作用48 h,RT-PCR法检测药物对共培养模型中A375细胞TYR,TRP-1和TRP-2 mRNA表达。结果:与阴性对照组相比,山茱萸提取物1.0,0.5 g·L-1组TYR,TRP-1及TRP-2 mRNA表达量显著下调(P<0.01),mRNA下调率分别为36.07%,62.34%,44.69%和24.10%,53.00%,16.11%。结论:山茱萸提取物可能通过下调TYR,TRP-1和TRP-2 mRNA的表达而降低人黑素瘤细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性。     

白桦脂醇对A375细胞黑素合成及相关细胞信号通路调控机制的研究

目的:探讨白桦脂醇治疗黄褐斑的内在作用机制。方法:选择对数生长期的A375细胞,培养24 h,弃掉液体,然后分组并加入不同浓度药液200μL,组别设定为空白组、雌二醇组(1×10~(-3)μmol·L~(-1)浓度的雌二醇)和白桦脂醇组(设定浓度的白桦脂醇),每组均设置6个复孔。用白桦脂醇干预A375细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;Na OH裂解法检测黑素量;多巴氧化法检测酪氨酸酶(TYR)活性;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测TYR,酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)和酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)的表达,及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号通路中关键蛋白激酶ERK1,ERK2,JNK2的mRNA表达。结果:与空白组比较,白桦脂醇在1,1×10~(-1),1×10~(-2),1×10~(-3)μmol·L~(-1)剂量下可明显抑制A375细胞黑素合成及TYR活性,1μmol·L~(-1)白桦脂醇可明显下调A375细胞TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA表达,以及ERK1,ERK2,JNK2 mRNA表达(P0.05,P0.01)。结论:白桦脂醇可能是通过抑制TYR活性和/或下调TYR,TRP-1及TRP-2 mRNA表达,抑制了A375细胞中黑素的合成,并且这种作用与抑制ERK1,ERK2,JNK2的基因表达有关。     

补骨脂素对A375细胞黑素合成的影响及p38-MAPK信号通路调控机制的研究

目的:研究补骨脂素对黑素合成中关键限速酶、MAPK信号通路的调控作用机制。方法:通过NaOH裂解法、多巴醌氧化法测得黑素含量及酪氨酸酶活性,使用蛋白免疫印迹法(Western Blot)和实时荧光PCR法测MAPK通路中关键蛋白激酶和MITF、TYPE、TRP-1、TRP-2、p38、P-p38及加入p38信号通路阻断剂后上述蛋白及p38、MITF、TRP-1 mRNA的表达。结果:补骨脂素具有类雌激素样作用,其与空白对照组比较能抑制细胞黑色素含量和酪氨酸酶活性,显著降低MITF、TYRE、TRP-1、TRP-2、p38、P-p38蛋白表达及p38、MITF、TRP-1 mRNA的表达(P0.01)。而p38信号通路阻断剂(SB203580)的加入反转了补骨脂的抑制作用。结论:补骨脂素可通过p38-MAPK信号通路抑制A375细胞黑素生成。     

欧前胡素治疗黄褐斑作用机理研究

目的:研究欧前胡素对人黑素瘤细胞(A375细胞)合成黑素的影响,探讨白芷主要成分欧前胡素对黄褐斑治疗作用机理。方法:试验分为空白对照组、雌二醇阳性对照组和欧前胡素浓度为1、10、20、40、60、80μmol·L~(-1)给药组,用上述各组处理A375细胞,用MTT法、Na OH裂解法、多巴氧化法和RT-PCR法检测A375细胞活性、黑素含量、酪氨酸酶(TYR)活性、酪氨酸酶相关蛋白-1、2(TRP-1、TRP-2)、MAPK通路细胞外信号调节酶1、2(ERK1、ERK2)以及氨基末端激酶2(JNK2)的信使RNA表达。结果:阳性对照组对A375活性无影响(P0.05);欧前胡素浓度在40μmol·L~(-1)以上时,可导致A375细胞大量凋亡(P0.01);浓度在1~20μmol·L~(-1)时,对A375细胞黑素合成及TYR活性有明显抑制作用(P0.05或P0.01),浓度为20μmol·L~(-1)的欧前胡素对A375细胞TYR、TRP-1、TRP-2、ERK1、ERK2及JNK2的mRNA表达具有显著抑制作用(P0.05或P0.01)。结论:欧前胡素可通过抑制A375细胞中TYR活性或阻断黑素合成信号的传导,治疗或预防黄褐斑。     

珍珠水解液的美白作用机理研究

目的:通过人的黑色素细胞实验研究珍珠水解液的美白作用机理。方法:NaOH法测定黑色素细胞黑色素含量,实时荧光定量PCR法(RT-PCR)测定珍珠水解液对影响黑色素合成的相关基因酪氨酸酶基因(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1)及影响黑色素转运的相关基因小眼畸形相关转录因子(MITF)。结果:浓度为0.25%、0.5%、0.75%的珍珠水解液可以抑制黑色素细胞的黑色素合成,3种浓度下的珍珠水解液均可抑制相关基因TRP1mRNA的表达,0.25%浓度下可抑制TYR、TRP1及MITF的mRNA的表达。结论 :珍珠水解液主要通过抑制黑色素合成过程中TRP1 mRNA的表达,从而抑制黑色素合成而发挥美白功效。     

白桦脂醇通过ER/MAPK信号通路对A375细胞黑素合成及机制

目的:研究植物雌激素成分白桦脂醇及加入受体阻断剂(ICI182780)后对A375细胞的黑素合成及机制的影响。方法:将1μmol·L~(-1)白桦脂醇作用于A375黑素细胞,实验分为空白组(DMEM完全培养液),雌二醇组(1×10~(-3)μmol·L~(-1)),白桦脂醇组(1μmol·L~(-1)),白桦脂醇+ICI182780组(1μmol·L~(-1)+1μmol·L~(-1))。用Na OH裂解法检测黑素含量、蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)测定雌激素受体/丝裂原激活的蛋白激酶(ER/MAPK)通路中关键蛋白激酶p38 MAPK,ERβ,c-Jun氨基末端激酶(JNK),细胞外信号调节激酶2(ERK2)和小眼畸形相关转录因子(MITF),酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)的蛋白及其mRNA表达。结果:与空白组比较,白桦脂醇组和白桦脂醇+ICI182780组对A375细胞黑素合成有显著抑制作用(P0.01);1μmol·L~(-1)的白桦脂醇对A375细胞中上述蛋白表达有不同程度的抑制作用(P0.05,P0.01),对ERK2,MITF,TRP-1 mRNA的表达也有不同程度的抑制作用(P0.05,P0.01)。与白桦脂醇组比较,ICI182780可以逆转白桦脂醇对A375细胞黑素合成的抑制作用(P0.01);ICI182780可以逆转白桦脂醇对A375细胞中上述蛋白表达的抑制作用及对ERK2,MITF,TRP-1 mRNA的表达的抑制作用(P0.05,P0.01)。结论:白桦脂醇能够通过ER/MAPK信号通路下调MITF,TYR,TRP-1及TRP-2蛋白表达量,从而减少黑素合成。     

黄芩素对A375细胞黑素合成的抑制作用及相关细胞信号通路调控的初步研究

目的研究黄芩素对体外培养的A375细胞黑素合成的影响及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路与该作用的相关性。方法用黄芩素处理A375细胞,采用四甲基噻唑蓝(MTT)法测定A375细胞的活性,Na OH法测定黑素量,多巴氧化法测定酪氨酸酶(TYR)活性,RT-PCR法测定TYR、酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)和TRP-2以及MAPK信号通路关键蛋白激酶ERK1、ERK2、JNK2的m RNA表达。结果 0.1~0.001μmol/L的黄芩素可明显抑制A375细胞黑素合成及TYR活性,0.1μmol/L黄芩素明显下调A375细胞TYR、TRP-1、TRP-2 m RNA表达,以及ERK1、ERK2、JNK2 m RNA表达。结论黄芩素具有抑制A375细胞的黑素合成的作用,其机制可能与抑制TYR活性和/或下调TYR、TRP-1及TRP-2 m RNA表达,以及抑制ERK1、ERK2、JNK2的表达有关。     

白桦脂醇对A375细胞黑素合成及p38-MAPK信号通路调控机制的研究

目的:研究植物雌激素成分白桦脂醇对黑素合成中关键限速酶、MAPK信号通路调控作用。方法:使用NaOH裂解法、多巴醌氧化法检测黑素含量及酪氨酸酶活性,Western blot和PCR法测定MAPK通路中关键蛋白激酶和TYP、TRP-1、TRP-2、MITF、p38、p-p38蛋白含量及mRNA表达;加入p38信号通路阻断剂(SB203580)之后,测定上述蛋白和mRNA表达。结果:白桦脂醇对A375细胞黑素含量和酪氨酸酶活性有抑制作用(P0.05或P0.01),SB203580(10μmol/L)能阻断白桦脂醇对A375细胞黑素含量和酪氨酸酶活性抑制作用;白桦脂醇对A375细胞中上述蛋白及mRNA表达有抑制作用(P0.05或P0.01),加入SB203580后,阻断p38-MAPK信号通路,白桦脂醇以上作用受到显著抑制(P0.05或P0.01)。结论:表明白桦脂醇通过MAPK信号通路中的p38-MAPK信号通路抑制A375细胞黑素合成。     

酪醇和胡椒碱对小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及c-KIT、TRP-2蛋白表达的促进作用

目的:研究酪醇和胡椒碱对小鼠B16黑素瘤细胞干细胞因子受体(c-KIT)、酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)蛋白表达的影响,探讨其影响B16黑素瘤细胞生物学活性的分子机制.方法:采用MTT法测定细胞增殖,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素含量,免疫组化法检测c-KIT和TRP-2蛋白的表达.结果:浓度为25μg/ml的酪醇作用后,B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性、黑素合成能力均增强(P<0.05),c-KIT和TRP-2蛋白表达量分别比空白对照组增加9.50%(P<0.05)和9.16%(P<0.01);浓度为12.5μg/ml的胡椒碱对B16黑素瘤细胞增殖(P<0.05)、酪氨酸酶活性(P<0.01)、黑素合成(P<0.05)均有促进作用,c-KIT和TRP-2蛋白表达量分别比空白对照组增加8.81%和10.58%(P<0.05).结论:酪醇和胡椒碱均能促进小鼠B16黑素瘤细胞的黑素合成,胡椒碱具有促进细胞增殖作用,其部分机制可能是通过上调酪氨酸酶活性和c-KIT、TRP-2蛋白表达而发挥作用.     

补骨脂酚对人A375细胞黑素生成及MAPK信号通路干预作用研究

目的探讨补骨脂酚抑制A375细胞的黑素合成效果及对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的干预作用。方法体外培养A375细胞,经不同浓度的补骨脂酚(100μmol/L、10μmol/L、1μmol/L、10~(-1)μmol/L、10~(-2)μmol/L、10~(-3)μmol/L)干预后,采用MTT法和多巴氧化法检测细胞增殖率和酪氨酸酶(TYR)活性;氢氧化钠裂解法检测黑素含量的变化;RT-PCR法测定酪氨酸酶及相关蛋白(TRP-1、TRP-2)和MAPK通路相关蛋白激酶JNK2、ERK1、ERK2 mRNA的表达量。结果与空白组比较,补骨脂酚(10~(-1)μmol/L、10~(-2)μmol/L、10~(-3)μmol/L)对黑素合成率和TYR活性均明显降低(P0.05,P0.01),补骨脂酚(10~(-1)μmol/L)对TYR、TRP-1、TRP-2、JNK2、ERK1、ERK2的mRNA基因表达量均显著抑制(P0.05,P0.01)。结论补骨脂酚对A375细胞黑素合成及TYR活性有抑制作用,其变化可能是通过下调TYR、TRP-1、TRP-2、JNK2、ERK1、ERK2的mRNA基因表达量来实现的。     

山茱萸水提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的:考察山茱萸水提取物对体外构建的人黑素瘤细胞(A375)与角质形成细胞(Hacat)单层混合共培养模型黑素合成的影响。方法:将山茱萸水提取物制备成含生药0.75～12 g.L-15个质量浓度,细胞给药,通过MTT法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定给药前后A375细胞与Hacat细胞共培养模型的细胞活力、黑素含量和酪氨酸酶活性。结果:与空白对照组相比,6,3,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系的细胞增殖率影响不大,对共培养体系黑素生成均有显著差异(P<0.01),对共培养体系酪氨酸酶活性有差异(P<0.05或P<0.01);与阳性对照药物熊果苷相比,6,3 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成有显著差异(P<0.01),作用强于熊果苷,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成无差异;与阳性对照药物熊果苷相比,6,3,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系酪氨酸酶活性无差异。结论:山茱萸水提取物能够通过抑制酪氨酸酶活性来抑制A375细胞和Hacat细胞共培养体系的黑素合成,为临床使用山茱萸治疗黄褐斑提供了实验依据。     

补骨脂二氢黄酮甲醚对A375细胞黑素合成的影响

目的:研究补骨脂中植物雌激素成分补骨脂二氢黄酮甲醚对人黑素瘤细胞(A375细胞)黑素合成的影响。方法:将补骨脂二氢黄酮甲醚作用于A375细胞,采用MTT法、NaOH裂解法、多巴氧化法检测细胞增殖率、黑素合成量和酪氨酸酶(TYR)活性;用RT-PCR法测定控制黑素合成的关键酶TYR、TRP-1和TRP-2 mRNA表达。结果:100μmol/L、10μmol/L的补骨脂二氢黄酮甲醚显著抑制A375细胞增殖(P0.05),对细胞有毒性作用;1μmol/L、10~(-1)μmol/L、10~(-2)μmol/L的补骨脂二氢黄酮甲醚对细胞增殖无明显影响(P0.05),1μmol/L的补骨脂二氢黄酮甲醚对黑素合成有极显著的抑制作用(P0.01)。1μmol/L补骨脂二氢黄酮甲醚对TYR活性有极显著的抑制作用(P0.01)。浓度为1μmol/L的补骨脂二氢黄酮甲醚可抑制TRP-1/2和TYRmRNA的表达(P0.05)。结论:补骨脂二氢黄酮甲醚能够抑制A375细胞黑素合成,推测其机制为抑制TYR的活性和基因表达。