三邻甲苯基磷酸酯对人成神经瘤SH-SY5Y细胞内PKC活性及转位的影响

目的研究三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)对人成神经瘤SH-SY5Y细胞蛋白激酶C(PKC)活性和转位的影响。方法以TOCP(0、0.25、0.5、1.0 mmol/L)对人成神经瘤细胞系SH-SY5Y细胞进行染毒,染毒时间为12、24和48 h,用PKC活性检测试剂盒检测PKC的活性,间接免疫荧光术检测PKC在细胞内的定位,荧光倒置显微镜观察结果。结果 1.0 mmol/L TOCP作用SH-SY5Y细胞24 h,PKC的活性最强,并能导致PKC由胞质向胞膜转位。结论 TOCP作用SH-SY5Y细胞后,能激活PKC,增加膜转位。     

三邻甲苯基磷酸酯对人成神经瘤SH-SY5Y细胞分化的影响

目的观察三邻甲苯基磷酸酯（Tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP）对人成神经瘤SH-SY5Y细胞形态分化的影响,为更全面的了解TOCP的毒性提供依据。方法选用人成神经瘤细胞SH-SY5Y为细胞模型,以全反式维甲酸（ATRA）为诱导分化工具药物,在诱导中以及诱导后以不同浓度TOCP作用,动态观察SH-SY5Y细胞形态学变化,台盼蓝拒染法检测死亡细胞百分比。结果 ATRA对SH-SY5Y细胞作用7 d可导致细胞出现长出较长突起的分化特征,在诱导分化过程中及诱导分化后以不同剂量TOCP作用于细胞,各剂量组与对照组相比,无论是突起长度还是分化细胞比例差异均有统计学意义（P〈0.05）,其中,0.6 mmol/L组抑制效果最强。结论 TOCP可抑制SH-SY5Y细胞的分化,并呈现一定时间和剂量依赖关系。     

氟对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬水平的影响

目的探讨氟对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬水平的影响。方法用不同浓度(20、40、60 mg/L)的氟化钠(Na F)染毒SH-SY5Y细胞24 h,采用透射电子显微镜观察细胞内自噬体超微结构;吖啶橙染色观察细胞内自噬囊泡的生成;Western blotting技术检测自噬延伸相关蛋白Atg5和LC3-II与自噬降解相关蛋白P62的表达水平。结果透射电子显微镜下可观察到细胞内自噬体结构,且随NaF剂量的增加自噬体数量明显减少;吖啶橙染色可见,与对照组相比,40和60 mg/L NaF染毒组自噬囊泡数量逐渐减少,尤以60 mg/L NaF染毒组减少最为明显;Western blotting检测发现,与对照组相比,Atg5和LC3-II的表达水平呈剂量依赖性降低,而P62的表达水平呈剂量依赖性升高,且差异具有统计学意义(P0.05)。结论氟可抑制SH-SY5Y细胞的自噬水平。     

锰化合物对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y脂质过氧化的作用

[目的 ]通过锰染毒神经母细胞瘤细胞 (SH SY5Y) ,观察脂质过氧化及其相关酶水平的改变 ,探讨锰对SH SY5Y的脂质过氧化及相关酶活性的影响 ,为进一步研究锰神经毒作用的机制提供科学依据。 [方法 ]采用浓度为 0 .2 5、0 .5 0、0 .75mmol/L的二价锰和三价锰 ,分别对体外培养的SH -SY5Y细胞染毒 2 4h ,测定超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽 (GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)和过氧化氢酶 (CAT)的活性。 [结果 ]二价锰和三价锰均可引起SOD、MDA、GSH、GSH Px和CAT活性的改变 ,其中SOD、GSH、GSH Px和CAT活性与对照组比较差异均有显著性 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,且存在剂量 效应关系。而MDA含量则较对照组升高 (P <0 .0 1) ,且随染毒浓度增高而上升。 [结论 ]一定浓度的锰化合物可使SH SY5Y细胞脂质过氧化反应增强 ,引起相关酶活性的改变。提示这种变化很可能是锰对神经细胞发挥毒作用的重要途径之一。     

不同价态锰对SH-SY5Y细胞凋亡作用的影响

[目的] 探讨不同价态锰对SH-SY5Y细胞凋亡的作用.[方法] 采用流式细胞技术和透射电镜技术,选用多巴胺能神经细胞SH-SY5Y细胞作为体外测试体系,观察Mn2+和Mn3+(0.5～2 mmol/L)对细胞凋亡的诱导作用及对多巴胺(DA)含量的影响.[结果] Mn2+与细胞作用48和72 h后,可见明显的凋亡峰;而Mn3+作用24 h后,便可出现明显的凋亡峰.电镜下可观察到细胞质空泡化,胞浆内质网扩张;Mn3+对细胞结构的破坏程度较Mn2+的大.Mn3+,Mn2+均可降低SH-SY5Y细胞的DA含量,Mn3+组降低的程度更为明显.[结论] Mn3+对SH-SY5Y细胞的毒性高于Mn2+.     

氟对SH-SY5Y细胞活性氧水平和线粒体融合影响

目的观察氟对人脑神经母细胞瘤细胞株（SH-SY5Y细胞）体外培养细胞活性氧水平和线粒体融合的影响。方法在SH-SY5Y细胞中加入0.4、4 mmol/L NaF,孵育6、12、24和48 h;利用MitoTracker和ROS荧光染色试剂盒对线粒体和氧自由基进行染色。结果NaF作用6、12、24、48 h时,与对照组比较,0.4、4 mmol/L氟处理组SH-SY5Y细胞内ROS染色强阳性细胞计数[分别为（15.1±1.4）、（12.8±2.5）、（22.6±2.4）、（30±3.1）和（32.5±1.9）、（38.1±2.2）、（69.3±3.1）、（84.3±3.5）个/100细胞]和Ⅱ型线粒体细胞计数[分别为（13±1.4）、（15±1.7）、（22.9±1.9）、（23.7±1.6）和（15.2±2.3）、（23.8±1.8）、（29.1±4）、（47.7±3.3）个/100细胞]明显升高（P<0.05）。结论摄入过量的氟导致SH-SY5Y细胞氧自由基水平升高,线粒体呈分裂状,呈时间和剂量效应关系。     

LBH589对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖和凋亡影响的研究

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖和凋亡的作用。方法将25、50、100nmol/L不同浓度的LBH589处理SH-SY5Y细胞24h后,通过WesternBlot法检测组蛋白H4乙酰化水平,进一步用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测SH-SY5Y细胞增殖能力;用流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和凋亡。结果 LBH589处理SH-SY5Y细胞后,组蛋白H4的乙酰化水平增强;LBH589呈浓度依赖性抑制SH-SY5Y细胞增殖,增加G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例,增加AnnexinV阳性细胞百分数。结论 LBH589可增强组蛋白H4乙酰化水平,对SH-SY5Y细胞具有抑制增殖、G1期阻滞以及促凋亡作用,对人神经母细胞瘤有潜在治疗价值。     

骨化三醇对AlCl3染毒的SH-SY5Y细胞凋亡的影响

目的探讨不同浓度的骨化三醇(calcitriol,CAT)对AlCl₃染毒的SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法 11mmol/L AlCl₃染毒SH-SY5Y细胞构建AD细胞模型,设立对照组、AlCl₃组(11mmol/L)、CAT低、中、高剂量干预组(1.0×10^-10、1.0×10^-9、1.0×10^-8mol/L CAT+11mmol/L AlCl₃)。吉姆萨染色法观察CAT对AlCl₃染毒的SH-SY5Y细胞的形态学改变;荧光染料Hoechst33258、AO/EB染色后于荧光显微镜下观察各组细胞核的变化。结果吉姆萨染色结果显示,AlCl₃组细胞不规则,染色质皱缩,部分细胞核裂解;Hoechst33258染色结果表明,AlCl₃组细胞染色质凝集,体积缩小;AO/EB染色结果可见,AlCl₃组细胞染色质固缩并呈橘红色。与AlCl₃     

多溴联苯醚对SH-SY5Y细胞氧化应激及凋亡的影响

目的观察2,2’,4,4’-四溴联苯醚(PBDE-47)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株氧化应激和凋亡的影响及活性氧在细胞凋亡中的作用。方法实验共分4组,PDDE-47终浓度为0、2、4、8μg/ml,分别作为对照组,低、中、高剂量组。用2、4、8μg/ml PBDE-47对培养的SH-SY5Y细胞染毒,24 h后检测细胞存活率、活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量及凋亡率。结果与对照组比较,低剂量组细胞存活率略有上升,中、高剂量组细胞存活率明显降低,差异有统计学意义(P相似文献   

不同价态锰对SH—SY5Y细胞凋亡作用的影响

[目的 ]探讨不同价态锰对SH SY5Y细胞凋亡的作用。 [方法 ]采用流式细胞技术和透射电镜技术 ,选用多巴胺能神经细胞SH SY5Y细胞作为体外测试体系 ,观察Mn2 和Mn3 ( 0 5～ 2mmol/L)对细胞凋亡的诱导作用及对多巴胺 (DA)含量的影响。[结果 ]Mn2 与细胞作用 48和 72h后 ,可见明显的凋亡峰 ;而Mn3 作用 2 4h后 ,便可出现明显的凋亡峰。电镜下可观察到细胞质空泡化 ,胞浆内质网扩张 ;Mn3 对细胞结构的破坏程度较Mn2 的大。Mn3 ,Mn2 均可降低SH SY5Y细胞的DA含量 ,Mn3 组降低的程度更为明显。 [结论 ]Mn3 对SH SY5Y细胞的毒性高于Mn2 。     

Nrf 2信号通路在铅致SH-SY5Y细胞氧化应激中作用

目的 研究神经细胞内核因子E 2相关因子2(Nrf 2)信号通路是否对铅暴露所致的氧化应激产生应答及其可能机制。方法 用低、中、高剂量(5、25、125μmol/L)的醋酸铅溶液对人神经母细胞瘤SH-SY 5 Y细胞染毒,用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)探针检测染毒2 h后细胞活性氧(ROS)水平,染毒24 h后用二硫基双硝基苯甲酸(DTNB)比色法检测还原性谷胱甘肽(GSH)水平,western blot法检测蛋白激酶C-δ(PKC-δ)、酪氨酸激酶2(CKⅡ)以及胞浆和胞核中Nrf 2蛋白的表达水平。结果 随着染毒剂量增加,低、中、高剂量组ROS含量依次为(559.17±54.56)、(585.50±36.41)、(621.00±29.96),与对照组(533.50±46.47)比较,中、高剂量组含量明显升高(P<0.05);GSH含量依次为(165.39±17.37)、(140.92±14.77)、(84.03±10.31),与对照组(222.10±14.91)比较,低、中、高剂量组含量均明显降低(P<0.01);与对照组比较,低、中、高剂量组胞浆Nrf 2相对灰度值为(0.38±0.09)、(0.27±0.09)、(0.25±0.11),胞浆Nrf 2表达均明显降低(P<0.05);低、中、高剂量组胞核Nrf 2相对灰度值为(1.38±0.50)、(1.55±0.49)、(2.79±1.56),仅高剂量组胞核Nrf 2蛋白表达明显增高(P<0.05)。低、中、高剂量组PKC-δ相对灰度值为(1.84±0.46)、(2.55±0.36)、(2.38±0.77),与对照组比较均明显升高(P<0.05);低、中、高剂量组CKⅡ相对灰度值为(1.28±0.32)、(1.34±0.21)、(1.52±0.42),与对照组比较仅高剂量组表达明显升高(P<0.05)。结论 铅致神经细胞氧化损伤的同时激活胞浆中Nrf 2转移入核内,进而发挥氧化应答,PKC-δ、CKⅡ在铅致Nrf 2激活过程中具有一定作用。     

Coffee induces vascular endothelial growth factor (VEGF) expression in human neuroblastama SH-SY5Y cells

Recent evidence indicates that hypoxia-inducible vascular endothelial growth factor (VEGF) has neurotrophic and neuroprotective effects on neuronal and glial cells. On the other hand, recent epidemiological studies showed that daily coffee consumption has been associated with a lower risk of several neuronal disorders. Therefore, we investigated the effect of coffee on VEGF expression in human neuroblastoma SH-SY5Y cells. We found that even low concentration of coffee (<2%) strongly induced VEGF expression via an activation of HIF-1α. The activation of HIF-1α by coffee was attributed to the coffee-dependent inhibition of prolyl hydroxylation of HIF1α, which is essential for proteolytic degradation of HIF-1α. However, no inhibition was observed at the catalytic activity in vitro. Coffee component(s) responsible for the activation of HIF-1α was not major constituents such as caffeine, caffeic acid, chlorogenic acid, and trigonelline, but was found to emerge during roasting process. The active component(s) was extractable with ethyl acetate. Our results suggest that daily consumption of coffee may induce VEGF expression in neuronal cells. This might be related to protective effect of coffee on neural disorders such as Alzheimer's disease and Parkinson's disease.     

Amino acid substitution at position 464 in the haemagglutinin-neuraminidase protein of a mumps virus Urabe strain enhanced the virus growth in neuroblastoma SH-SY5Y cells

Mumps virus (MuV) infects various organs including central nervous system (CNS). However, the molecular basis of the neural cell specificity of MuV is not well understood. We found that the Hoshino vaccine strain rescued from cDNA replicated moderately in neuroblastoma SH-SY5Y cell line, while an Urabe strain (Ur89-250) isolated from a post-vaccination aseptic meningitis case replicated efficiently in the same cells. In order to examine the contribution of individual genes of Ur89-250 to the growth in SH-SY5Y cells, recombinant Hoshino vaccine strains in which each gene(s) was replaced with corresponding gene(s) of Ur89-250 were generated. A recombinant virus possessing the small hydrophobic and haemagglutinin-neuraminidase (HN) genes of Ur89-250 grew as efficiently in SH-SY5Y cells as Ur89-250. Further analysis indicated that an amino acid substitution at position 464 in the HN protein was most important for efficient growth. Thus, single amino acid substitution in the HN protein could affect neural cell specificity of mumps virus.     

2，2'，4，4'-四溴联苯醚对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞胞内游离钙离子浓度的影响

目的 研究2,2',4,4'-四溴联苯醚（2,2',4,4'-tetrabromodiphenyl ethers,PBDE-47）对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度的影响。方法 取对数生长期的SH-SY5Y细胞,分别染毒终浓度为0（溶剂对照）、1、5、10 μmol/L的PBDE-4...     

7-硝基吲唑对氟致SH-SY5Y细胞凋亡及一氧化氮合成酶含量的影响

目的探讨神经元型一氧化氮合成酶(nNOS)抑制剂7-硝基吲唑(7-nitroindazole,7-NI)对氟致体外培养细胞生长、凋亡保护作用的机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,在培养液中加入不同浓度Na F(0、0.02、0.2、2.0、4.0 mmol/L),分别培养24、48、72 h,同时在各组细胞培养液中联合应用7-NI(10~(-4)、10~(-3)、10~(-2) mmol/L);于倒置显微镜下观察细胞生长,以CCK-8试剂盒方法检测细胞存活率,以比色法和硝酸还原酶法测定细胞培养液中NO含量及NOS活力,以流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果与对照组比较,氟浓度为0.2 mmol/L(低氟组)和2.0 mmol/L(高氟组)时,24、48、72 h后细胞存活率分别下降至(83.76±1.04)%,(70.27±1.20)%,(54.40±0.98)%和(52.17±1.07)%,(40.60±1.11)%,(29.50±1.40)%。10~(-4)mmol/L 7-NI可刺激细胞增殖,24 h细胞存活率为(105.96±3.44)%;10~(-3) mmol/L 7-NI处理细胞24 h后的细胞存活率为(100±2.30)%;10~(-2) mmol/L 7-NI可使细胞存活率下降,24 h细胞存活率为(88.64±4.75)%。10~(-4)、10~(-3)、10~(-2) mmol/L 7-NI处理细胞24 h后细胞培养液中NO含量、NOS活力均降低,分别为(1.156±0.356)、(0.958±0.074)、(0.672±0.188)μmol/L和(0.403±0.089)、(0.398±0.010)、(0.103±0.076)U/ml。高剂量(10~(-2) mmol/L)7-NI组的SH-SY5Y细胞凋亡指数升高至(8.7±2.3)%,高于对照组(P0.05);低剂量(10~(-4)、10~(-3) mmol/L)7-NI组的凋亡指数分别为(0.6±0.4)%和(1.0±0.2)%,与对照组差异无统计学意义(P0.05);低剂量7-NI组凋亡指数低于高剂量组,差异有统计学意义(P0.05)。染氟24、48、72 h后细胞培养液中NO含量及NOS活力升高,低氟组的NO含量、NOS活力分别为(3.074±0.160)、(5.604±1.374)、(10.173±1.307)μmol/L和(0.743±0.122)、(0.959±0.054)、(1.446±0.12)U/ml,高氟组分别为(8.974±0.919)、(14.729±1.241)、(20.976±0.712)μmol/L和(1.086±0.024)、(1.728±0.130)、(2.583±0.192)U/ml,高于对照组[(1.320±0.280)、(2.420±0.658)、(2.867±0.662)μmol/L,(0.452±0.012)、(0.517±0.072)、(0.607±0.013)U/ml],差异有统计学意义(P0.05)。与氟单独处理组相比,NaF联合应用7-NI后,各组NO含量及NOS活力均下降,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,氟可使SH-SY5Y细胞凋亡指数升高,差异有统计学意义(P0.01),并随着氟染毒剂量及时间的增加,细胞凋亡指数随之增加;联合应用7-NI后,各组细胞凋亡指数下降,差异有统计学意义(P0.01)。氟可使SH-SY5Y细胞数量减少,形态变为圆形、不规则形,细胞存活率降低;低剂量(10~(-4)、10~(-3) mmol/L)7-NI组在相同视野下细胞数增加,高剂量(10~(-2) mmol/L)7-NI组细胞数明显减少,大部分细胞呈圆形或不规则形。结论氟中毒所致细胞凋亡可能与NOS活力和NO含量升高有关,7-NI可降低细胞凋亡指数。     

氟中毒对神经母细胞瘤细胞株尼古丁受体蛋白和基因表达的影响

目的 观察氟中毒对神经细胞中尼古丁受体亚单位蛋白和基因表达水平的影响及氟中毒引起尼古丁受体功能改变的发生机制。方法 体外培养人脑神经母细胞瘤细胞,在培养液中加入不同浓度的氟化物或加入抗氧化剂,培养48h后测定细胞3-4,5-二甲基噻唑-2,5-二酚基四唑溴化物(MTT)和蛋白氧化水平;用蛋白印记方法测定α3和α7尼古丁受体亚单位蛋白水平;用逆转录-聚合酶链反应方法测定尼古丁受体亚单位mRNA水平。结果 经氟处理的神经细胞中MTT水平降低,高浓度氟组比对照组低49％;蛋白氧化水平升高,高浓度氟组比对照组高72％;高浓度氟组神经细胞中α3和α7尼古丁受体亚单位蛋白含量分别比对照组减少51％和47％,但mRNA表达水平未见改变;用抗氧化剂处理可减弱氟中毒对尼古丁受体的损害。结论 氟中毒可引起神经母细胞瘤细胞受损,降低尼古丁受体蛋白水平,其机制与该受体的基因表达水平无关,但与自由基的损害有关。