MTT法检测紫杉醇对兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的　研究紫杉醇 (Taxol)对体外培养的兔晶状体上皮细胞生长的影响。方法　取 2～ 3代对数生长期的兔晶状体上皮细胞 ,于 96孔板中培养 2 4 h后 ,用不同浓度的紫杉醇分别作用 2 4及 72 h,MTT比色测定法观察紫杉醇对兔晶状体上皮细胞增殖的影响。结果　我们发现 ,浓度为 0 .312 5 m g· L- 1的紫杉醇作用于培养的兔晶状体上皮细胞 2 4 h对其生长无明显的抑制 ,而作用 72 h则能抑制其生长。 2 4 h的半效抑制量 (ID50 )为 14 .6 81mg· L- 1 ,72 h的 ID50 为 4 .0 0 7mg· L- 1 ,紫杉醇还能抑制细胞贴壁。结论　紫杉醇对传代培养的兔晶状体上皮细胞增殖有明显的抑制作用 ,紫杉醇对预防后囊膜混浊的发生可能有一定作用     

维生素E琥珀酸酯对人晶状体上皮细胞增殖的影响

目的研究维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)对体外培养的人晶状体上皮细胞(HLECs)增殖的影响。方法人晶状体上皮细胞株HLECs-B3以VES刺激24h、48h、72h、96h,VES浓度为5μg/ml、10μg/ml和20μg/ml,用MTT比色法测定VES对细胞增殖的抑制作用;以流式细胞仪分析细胞周期。结果VES对人晶状体上皮细胞的增殖具有显著的抑制作用,表现为时间和剂量依赖关系。并且将细胞周期阻滞于G0/G1期。结论VES对体外培养的人晶状体上皮细胞的增殖具有抑制作用,为临床筛选防治后发性白内障的药物提供依据。     

环孢素A对晶状体上皮细胞的影响

目的 观察环孢素A（CsA)对体外培养的牛晶状体上皮细胞（BLEC）增殖的影响。方法 对培养牛晶状体上皮细胞采用^3H-TdR掺入法及MTT法，研究不同质量浓度CsA(1-16μg/ml)作用24h和72h对牛晶状体上皮细胞增殖有抑制作用。且呈剂量依赖性，24h50%抑制质量浓度（IC50）为10.37μg/ml，72hIC50为6.61μ/ml。CsA引起细胞形态学改变的主要特点是细胞胞浆内大量空泡形成，且随药物剂量增大，细胞形态改变越明显。结论 一定剂量的CsA可抑制体外培养的牛晶状体上皮细胞的增殖，为预防后囊混浊提供了新途径。     

双氯芬酸钠对角膜上皮细胞抑制作用的实验研究

目的探讨双氯芬酸钠对角膜上皮细胞体外增殖的抑制作用并初步探讨其机理.方法选用原代及传代兔角膜上皮细胞,实验组中加入含不同浓度双氯芬酸钠的培养液,对照组加入等量空白培养液,采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl thiazolium,MTT)比色法检测其对细胞增殖的抑制,光学显微镜和透射电子显微镜进行形态学观察.结果双氯芬酸钠浓度为27.27μg/ml～54.55 μg/ml时,作用24、48、72 h均明显抑制角膜上皮细胞的增殖(P＜0.01),并具有剂量依赖性.结论双氯芬酸钠对角膜上皮细胞的增殖具有明显抑制作用,呈现剂量-效应关系.双氯芬酸钠可能是通过诱导凋亡而发挥其抗增殖作用.     

双氯芬酸钠抑制兔后囊膜混浊的实验研究

目的 探讨双氯芬酸钠抑制兔后囊膜混浊(posterior capsule opacification,PCO)的安全性和有效性.方法 20只大耳白兔(40眼)随机分为空白对照组(A组),1 g·L-1双氯芬酸钠滴眼液组(B组),1g·L-1、5 g·L-1、10g· L-1双氯芬酸钠灌注液组(分别为C、D、E组),双眼均行透明晶状体囊外摘出术,B组术后使用1g·L-1双氯芬酸钠滴眼液滴眼,术中不进行双氯芬酸钠滴眼液前房灌注;C、D、E组术中分别使用1g·L-1、5g·L-1、10g· L-1双氯芬酸钠滴眼液前房灌注,术后使用1g·L-1双氯芬酸钠滴眼液滴眼.术后1周观察角膜及前房反应;1个月后用裂隙灯及检眼镜检查后囊膜情况,进行PCO分级;术后1个月,HE染色观察后囊膜病理改变情况,并用免疫组织化学SABC法检测后囊膜增殖的晶状体上皮细胞PCNA表达情况.结果 A、B组术后1周左右开始形成PCO并逐渐加重,1个月后出现明显PCO,C、D、E组PCO出现方式与A组相同,但出现时间晚、程度较轻.术后1个月A、B组PCO程度较C、D、E组重,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);A、B组之间和C、D、E组之间差异均无统计学意义(均为P＞0.05).术后1个月,各组后囊膜晶状体上皮细胞均有PCNA阳性表达,且PCNA阳性细胞数随药物浓度的提高而减少,分别为15.63±1.92、12.87±1.81、8.63±0.92、5.50±1.31、2.00±0.76.与A组相比,B、C、D、E组术后后囊膜PCNA阳性细胞数明显减少,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);B、C、D、E组间PCNA阳性上皮细胞数差异有显著统计学意义(P＜0.01).结论 术中双氯芬酸钠滴眼液前房灌注联合术后双氯芬酸钠滴眼液滴眼可有效延缓PCO的发生,对眼前段无明显毒性作用.     

阿霉素、5-Fu、三尖杉酯碱及去炎松对体外培养的人视网膜色素上皮细胞的抑制

应用3H-胸腺嘧啶核苷（3H－TdR）掺入及液体闪烁测量技术，观察不同浓度的阿霉素，5-氟尿嘧啶（5－Fu）、三尖杉酯碱及去炎松对体外培养的人视网膜色素上皮细胞（RPE）增殖的抑制作用。结果；阿霉素在2～32ng／ml时，对RPE细胞抑制率为85～77.2％，ID50为12ng／ml；5－Fu在0.2～3．2μg／ml时，对RPE细胞抑制率为14．5～81．7％，ID50为0．6μg／ml；三尖杉酯碱在2．5～40ng／ml时，抑制率为18．5～94．1％，ID50为4.5ng／ml；去炎松在200～350μg／ml时对RPE细胞抑制率为37．9～53．5％，ID50为340μg／ml。结论：阿霉素、5－Fu、三尖杉酯碱及去炎松能有效地抑制RPE细胞的增殖。     

体外模拟牛眼晶状体后囊膜混浊及普拉洛芬眼液对其细胞融合影响的实验研究

目的探讨晶状体后囊膜上晶状体上皮细胞的增生分化规律和普拉洛芬滴眼液对晶状体后囊膜混浊（PCO）的抑制作用.方法将牛后囊膜晶状体上皮细胞面朝上平铺于25 ml培养瓶底部,分别加入含0%、10%、20%胎牛血清的DMEM培养液培养1～5周,计数后囊膜晶状体上皮细胞覆盖率,并用Giemsa染色和扫描电镜观察其形态.同时用相当于普拉洛芬滴眼液滴眼后4 h在房水中的浓度（0.23 mg/L）作用于组织培养模型,与对照组比较,观察其对后囊膜晶状体上皮细胞融合时间的影响.结果赤道部的晶状体上皮细胞向晶状体后囊膜增生、迁徙,晶状体后囊膜形成明显的混浊和皱缩;后囊膜晶状体上皮细胞融合天数随血清浓度的升高而缩短;浓度为0.23 mg/L的普拉洛芬对后囊膜晶状体上皮细胞的融合有明显抑制作用.讨论体外模拟PCO的组织培养是研究后发性白内障的有效方法.普拉洛芬是一种安全、有效降低PCO发生率的药物,可作为白内障术后的常规用药.     

靶向5-氟尿嘧啶纳米微球对体外培养的人晶状体上皮细胞作用的研究

目的评价靶向人晶状体上皮细胞免疫载药纳米微球HILE6-PLA（5-FU）-NP的免疫学特征及体外对靶细胞的特异性结合和杀伤作用.方法采用碳二亚胺法将5-氟尿嘧啶（5-FU）聚乳酸纳米微球PLA（5-FU）-NP与抗人晶状体上皮细胞单克隆抗体HILE6连接,制备免疫载药纳米微球.测定其中5-FU与HILE6物质的量之比;ELISA法检测连接后单克隆抗体HILE6的活性变化.设免疫纳米微球组、HILE6与载药纳米微球混合组、载药纳米微球组、空白对照组,MTT法检测对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用.间接免疫荧光法观察单克隆抗体HILE6、免疫纳米微球和载药纳米微球对兔晶状体上皮细胞的附着、内化过程.结果免疫纳米微球中5-FU与HILE6物质的量之比约为1809：1,单克隆抗体HILE6保留免疫活性可达原抗体的84%.免疫纳米微球对晶状体上皮细胞作用2 h的半数抑制剂量IC50为5.0μg/ml,抑制作用较载药纳米微球组、单克隆抗体与微球混合组有明显提高.免疫纳米微球在30 min内可识别并附着于兔晶状体上皮细胞;2 h进入细胞质均匀分布;4 h后集中于细胞核区.结论免疫纳米微球HILE6-PLA（5-FU）-NP可携带大量药物,保持特异的免疫活性,在体外识别并进入晶状体上皮细胞有效抑制其增殖.     

硝普钠对牛晶状体上皮细胞生长的抑制作用

目的 探讨硝普钠对体外培养的牛晶状体上皮细胞生长的影响,为后囊混浊的药物预防提供新线索。方法传代培养的晶状体上皮细胞经硝普钠处理后,观察细胞生长情况,并采用MTT法测定硝普钠对其增殖的影响。结果 硝普钠对晶状体上皮细胞的增殖有明显的抑制作用。硝普钠浓度在2.0 mmol/L以下时,作用12 h,其抑制作用呈剂量依赖性(P<0.05);当硝普钠浓度为1.0 mmol/L时,作用 24 h内呈时间依赖性(P<0.01)。ON清除剂N-乙酰半胱氨酸能明显清除硝普钠的抑制效应。 结论 硝普钠能抑制晶状体上皮细胞的生长,其抑制效应主要是通过ON发挥作用的。     

5-Fu纳米毫微粒的制备及体外对晶状体上皮细胞增生的抑制作用

目的制备5氟尿嘧啶(5fluorouracil,5Fu)聚乳酸纳米毫微粒并观察其表征及体外对兔晶状体上皮细胞的抑制作用。方法采用复乳法制备5Fu聚乳酸纳米毫微粒,观察毫微粒的大小、表面形态和结构,毫微粒载药率和体外药物释放曲线。取传3代晶状体上皮细胞进行对比试验,设5Fu纳米毫微粒、5Fu原药、空载纳米毫微粒组、空白对照组。设0.5～62.5mg·L-14个剂量组,作用24h、72h、120h、168h后光镜下观察细胞性状,MTT法检测抑制作用。结果(1)制备的5Fu纳米毫微粒平均粒径(191.000±0.202)nm;载药率为8.1%;首日药物突释率为38.3%,缓释时间20d;(2)5Fu纳米毫微粒和5Fu原药对兔晶状体上皮细胞均有抑制作用,并随时间和剂量的增加而增加。空载聚乳酸纳米毫微粒对细胞无抑制作用;(3)作用初期各剂量组5Fu纳米毫微粒的抑制作用低于或等于原药,随时间延长分别在不同时间点超过原药,差异有显著性。结论5Fu聚乳酸纳米毫微粒性状稳定,可长期释放药物,有效抑制兔晶状体上皮细胞的增生,随时间延长作用明显高于原药,可以作为靶向缓释药物载体。     

Diclofenac sodium and cyclosporin A inhibit human lens epithelial cell proliferation in culture

Purpose: To investigate the effect of diclofenac sodium salt and cyclosporin A (CsA) on human lens epithelial cell (HLEC) growth in culture. Methods: Cultures of HLEC were obtained from anterior capsules from extracapsular cataract surgery. Third-passage cells were seeded in 96-well plates in 0.1 ml culture medium. Cytotoxicity was estimated by the tetrazolium test in confluent monolayers after 24 h exposure to a wide range of concentrations of diclofenac and CsA. The effect of subcytotoxic concentrations of diclofenac and CsA on HLEC proliferation in subconfluent cultures was evaluated after 24 and 72 h of exposure. To investigate the relationship between PGEZ synthesis and the inhibitory effect of these drugs, after 24 h of exposure to diclofenac and CsA the production of PGE₂ was measured by radioimmunoassay. We also tested the effect of exogenous PGE₂ addition to diclofenac 72-h-treated cultures. Results: Diclofenac and CsA (at concentrations 65 M and 2.5 M, respectively) inhibited the proliferation of subconfluent cultures of HLEC in a dose-dependent fashion. Diclofenac inhibits PGE₂ synthesis, while CsA at high doses stimulates PGE₂ synthesis of cultured HLEC. Exogenous PGE₂ addition reversed in part the inhibitory effect of diclofenac. Conclusions: Diclofenac and CsA at appropriate doses are effective in inhibiting cultured HLEC proliferation. This could be of interest to prevent posterior capsule opacification. Further in vivo experimental studies seem worthwhile.None of the authors have financial or proprietary interests in any of the products mentioned in this article     

柔红霉素对人晶体上皮细胞生长抑制和角膜内皮细胞毒性试验研究

目的：研究柔红霉素对体外培养人晶体上皮细胞增殖的抑制作用和对角膜内皮细胞的毒性，探索使用柔红霉素预防后发障的适宜浓度，方法：第三代人晶 皮细胞接种于24孔培养板内，24h后加入不同浓度柔红霉素作用10min后，吸出药物并冲洗后再培养48h，细胞计数，原代培养角加入膜内皮细胞，加入不同浓度柔红霉素作用10min，观察细胞生长形态学变化，结果：柔红霉素依浓度梯度抑制晶体上皮细胞增殖，其LD50为4．9ug/ml，10ug/ml以下浓度对角膜内皮细胞无损害，结论：柔红霉素有可能作为预防后发障的辅助药物之一，选择适宜浓度是防止其对其他组织产生毒性的关键。     

Effect of diclofenac on prevention of posterior capsule opacification in human eyes

BACKGROUND: Diclofenac sodium has been demonstrated to be effective in preventing proliferation of lens epithelial cells both in vitro and in animal studies. The effects of diclofenac sodium given during the hydrodissection stage of phacoemulsification surgery on posterior capsule opacification (PCO) were investigated. METHODS: Eleven patients undergoing phacoemulsification in both eyes were included. Patients with pseudoexfoliation, uveitis, and diabetes were excluded. Hydrodissection was done with only balanced salt solution in the first eyes. In the fellow eyes, 0.25 mg/mL diclofenac was given with hydrodissection. The same type of intraocular lens was implanted in both eyes of each patient. Follow-up was 21.8 (SD 3.5) months in the diclofenac group and 22.9 (3.7) months in the control group. PCO was evaluated clinically by dividing the posterior capsule into 24 zones. Mann-Whitney U test was used for statistical analysis. RESULTS: There were no statistically significant differences of age, diameter of capsulorhexis, pupillary width, visual acuity, intraocular pressure, or length of follow-up between groups. PCO score was 0.49 (SD 0.21) in eyes receiving diclofenac and 0.73 (0.23) in the contralateral fellow eyes. The difference was not statistically significant (p=0.053). INTERPRETATION: Diclofenac sodium given by hydrodissection in phacoemulsification decreased, but did not significantly prevent, the development of PCO.     

双氯芬酸钠水分离对晶状体上皮细胞融合的影响

目的研究双氯芬酸钠水分离及联合转核技术对残留后囊膜上的晶状体上皮细胞（LECs）融合的影响。方法将猪眼后囊膜LECs进行体外原代培养,分为对照组、加药组（双氯芬酸钠水分离）、加药转核组（双氯芬酸钠水分离联合核旋转）,观察LECs不同时期的增生、分化、融合情况及各组细胞的融合时间。结果加药组和加药转核组的细胞融合时间较对照组延长,差异有统计学意义（P〈0.01）,加药组的细胞出现核固缩现象,加药转核组残留细胞团明显减少。结论双氯芬酸钠水分离能延缓后发性白内障（PCO）的发生,双氯芬酸钠水分离联合转核能有效降低PCO的发生率。     

整合素β1介导的ERK/MAPK通道在人晶状体上皮细胞转分化中的作用

目的研究转化生长因子-β2(transforming growth factor β2,TGF-β2)对培养的人氉晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)整合素β1、磷酸化ERK(pERK)及F-actin表达的影响,探讨整合素β1介导的ERK/MAPK通路在HLEC转分化中的作用。方法体外培养的HLEC,加入不同浓度(0ng·L-1和10ng·L-1、33ng·L-1、100ng·L-1、333ng·L-1、1000ng·L-1)的TGF-β2处理不同时间(12h、24h、48h、72h),采用MTT法测定TGF-β2对HLEC增殖的影响,并确定最佳干涉浓度和时间用于后续实验。实验分2组,实验组用含最佳干涉浓度TGF-β2的培养基培养HLEC,对照组使用无血清培养基培养,于最佳干涉时间对2组细胞行免疫细胞化学染色检测HLEC中整合素β1、pERK及F-actin的表达,RT-PCR检测整合素β1、pERK及F-actin mRNA的表达。结果 TGF-β2抑制HLEC的增殖,呈浓度和时间依赖性,TGF-β2的最佳干涉终浓度为100ng·L-1,作用48h后达到最大抑制效果。TGF-β2增加HLEC整合素β1、pERK及F-actin的表达,相对表达量分别为0.116±0.031、0.123±0.028、0.140±0.033,均较对照组(0.045±0.011、0.025±0.009、0.079±0.024)明显升高(均为P<0.01)。RT-PCR结果显示,TGF-β2明显促进整合素β1mR-NA、pERK mRNA及F-actin mRNA的表达,相对表达量分别为0.658±0.146、0.582±0.171、0.760±0.193,较对照组(0.246±0.051、0.338±0.092、0.138±0.027)明显升高(均为P<0.01)。结论 TGF-β2抑制了HLEC的增殖,促进整合素β1、pERK及F-actin的表达,整合素β1介导的ERK/MAPK信号通路可能参与了HLEC转分化过程,导致后囊膜混浊。     

Inhibitory effect of diclofenac sodium on the proliferation of rabbit corneal epithelial cells in vitro

Purpose:To investigate the inhibitory effect of diclofenac sodium on rabbit corneal epithelial cells(RCECs)in vitro and explore its pharmacological mechanism.Methods: The fresh rabbit cornea was cultured to get the primary RCECs,and RCECs of passage 2 were used for the research.The cells were divided into experimental groups,the cells in which were incubated with different concentrations(18.18,27.27,36.36,45.45,54.55 μg/ml)of dielofenac sodium,and control group.The effect of diclofenac sodium on the proliferation of cells was measured by methyl thiazolyl thiazolium(MTT)assay 24,48 and 72 h after incubation.While the RCECs were divided into experimental groups,the cells in which were incubated with 9 and 12.5μg/ml diclofenac sodium,and control group.The cell cycle and apoptotic rate were observed by flow cytometer.Results:MIT assay showed that diclofenac sodium had obvious inhibitory effect on RCECs,and the inhibition rate was increasing along with the increase of the concentration of diclofenac sodium and the incubation time(P<0.05).Flow cytometer showed that after incubation with dielofenac sodium,the cells in G0/G1 phase were obviously increased,the apoptosis cusp and apoptotic rate were increased.Conclusion: Diclofenac sodium has obvious inhibitory effect on RCECs,which was dosage-dependent,and it may function by inducing cell apoptosis and ceasing cells cycles.     

碱性成纤维细胞生长因子对不同年龄白内障患者晶状体上皮细胞增殖的影响

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碱性成纤维细胞生长因子对人晶状体上皮细胞增殖及移行作用的影响

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对体外培养的人晶状体上皮细胞（HLEC）增殖及移行作用的影响.方法 在无血清培养液培养的HLEC中分别加入不同终浓度的bFCF（0.01、0.1、1、10及100 μg/L）,MTT法测定其促细胞增殖的情况;流式细胞仪分析细胞周期;HLEC损伤愈合模型,观察不同终浓度bFGF处理24 h后HLEC的移行情况.结果 bFGF浓度为0.1、1、10、100 μg/L时,其对HLEC细胞有明显的促增殖作用,与阴性对照组比较差异具有统计学意义（P〈0.01）,100 μg/L作用24 h增殖率最大,达112.78%,作用强度呈浓度时间依赖性.bFGF通过促进细胞周期变化,与阴性对照组比较差异具有统计学意义（P〈0.01）,G0/G1期细胞减少,S期和G2/M期细胞增多,通过促进HLEC由G0向G1的转化来促进细胞的增殖;bFGF浓度1、10、100 μg/L作用24 h.可明显促进HLEC的移行,其移行能力分别为27.21%、154.42%、和238.77%,与阴性对照组相比,差异有显著统计学意义（P〈0.01）.结论 bFGF可促进HLEC的增殖和移行,是HLEC强有力的有丝分裂原和促移行因子.     

转化生长因子-β、白细胞介素-1和碱性成纤维细胞生长因子对人晶状体上皮细胞的影响

目的:研究体外细胞培养中转化生长因子-β(transforma-tion growth factor beta,TGF-β)、白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对人晶状体上皮细胞(human lens epi-thelial cell,HLEC)的增生作用,对白内障术后晶状体后囊浑浊的预防提供依据。方法:首先进行人晶状体上皮细胞的原代培养,传代培养的晶状体上皮细胞分成各5个实验组,分别加入不同剂量的TGF-β、IL-1,设空白对照组,进行3H-TDR掺入实验,观察TGF-β、IL-1、bFGF对晶状体上皮细胞的作用。结果:TGF-β、IL-1、bFGF对在体外的HLEC增生均有促进作用,并随剂量增加而增强(P<0.05)。结论:TGF-β、IL-1、bFGF在白内障术后的后发性白内障的形成发展过程中起促进作用。     

疏水丙烯酸酯囊袋张力环的制作及其对晶状体上皮细胞生长和后囊膜混浊的抑制作用

目的研制以疏水丙烯酸为材料直角矩形设计的囊袋张力环(capsule tension ring,CTR),对其生物相容性进行鉴定,观察其在体外对人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)的生长抑制作用及在兔眼中抑制后囊膜混浊(posterior capsule opacification,PCO)的效果。方法将甲基丙烯酸苯乙酯和丙烯酸苯乙酯按一定比例聚合成疏水丙烯酸酯,进一步加工成直角矩形设计、闭合直径10.5mm、宽0.5mm、高0.2mm的开放式CTR,并对其进行细胞毒性试验、热原试验、眼刺激试验等生物相容性测试。取白内障术中前囊膜进行原代HLEC培养,将第2代细胞接种于CTR内进行细胞实验,观察其对细胞的移行作用。动物实验选用青紫兰兔,对照组4只仅接受白内障超声乳化吸出术;实验组4只接受白内障超声乳化同时植入CTR,观察术后炎症反应及前、后囊膜混浊情况。结果细胞毒性为1级,热原试验中试品个体升温均在0.6℃以下,且升温总值为0.1℃,眼刺激试验无异常,证明该材料有较好的生物相容性。体外细胞实验中,所有环均未见有细胞在环上生长或越过环向外生长。兔眼实验中,所有术眼术后均出现不同程度的前房渗出,1～2周基本吸收,术后1个月观察发现实验组兔眼的后囊膜均保持清晰,对照组兔眼的后囊膜出现不同程度的PCO。结论兔眼白内障术中植入疏水丙烯酸材料CTR可以降低PCO的发生。