骨骼肌卫星细胞的体外培养

目的:探讨GH,HGF,bFGF,TGF,IGF-Ⅰ等多种生长因子联合使用对体外培养人骨骼肌卫星细胞增殖能力的影响。方法:选取临床手术切取的儿童肌肉活检标本20例,实验分为4组:TGF+IGF-Ⅰ组(5例);bFGF+TGF-β组(5例);GH+HGF组(5例);GH,HGF,bFGF,TGF,IGF-Ⅰ组(5例)。进行体外骨骼肌卫星细胞的培养,然后在培养基中分别加GH,HGF,bFGF,TGF,IGF-Ⅰ等生长因子,采用MTT法测TGF+IGF-Ⅰ、bFGF+TGF-β、GH+HGF及GH,HGF,bFGF,TGF,IGF-Ⅰ对骨骼肌卫星细胞增殖的影响。结果:在体外培养过程中,GH,HGF,bFGF,TGF,IGF-Ⅰ联合使用促进骨骼肌卫星细胞增殖的作用明显高于TGF+IGF-Ⅰ组、bFGF+TGF-β组及GH+HGF组,差异有显著性(P<0.01);而TGF+IGF-Ⅰ组与bFGF+TGF-β组;TGF+IGF-Ⅰ组与GH+HGF;bFGF+TGF-β组与GH+HGF组骨骼肌卫星细胞的增殖能力比较,差异无显著性(P>0.05)。结论:TGF+IGF-Ⅰ组;bFGF+TGF-β组及GH+HGF组作用对体外培养大鼠骨骼肌卫星细胞有增殖作用,但其作用较弱,而GH,HGF,bFGF,TGF,IGF-Ⅰ联合使用对骨骼肌卫星细胞增殖作用明显。本实验为体外对骨骼肌卫星细胞的增殖能力提供了重要的实验依据。     

bFGF、TGF-β、NGF、IGF-I对大鼠巩膜成纤维细胞增殖影响实验研究

目的:该研究拟通过大鼠巩膜成纤维细胞(scleral fibroblasts,SF)体外培养的方法,观察不同浓度bFGF、TGF-β、NGF、IGF-I 4种细胞GF对体外培养大鼠SF增殖作用,探索大鼠SF在形觉剥夺性近视(FDM)形成过程中的作用。材料与方法:采取体外培养的方法,培养大鼠SF,应用不同浓度的bFGF、TGF-β、NGF、IGF-I干预SF后,采用MTT法测定各组细胞的增殖活性,采用流式细胞术测定各组SF的细胞周期。结果:(1)MTT检测结果表明,不同浓度4种GF刺激组的细胞增殖活性均显著高于空白健康血清对照组,有统计学意义(P0.05)。(2)流式细胞检测结果表明,与空白组比较,各浓度b-FGF、TGF-β、NGF刺激后,处于G1期细胞显著减少(P0.05),而G2、M期细胞显著增多(P0.05)。IGF-I各浓度刺激后,处于G1期细胞显著减少(P0.05),而S期细胞显著增多(P0.05)。结论:bFGF、TGF-β、NGF能够促进大鼠SF的增殖,并呈量效关系,驱动细胞进入在G2、M期;胰岛素样生长因子能够促进大鼠SF的增殖,并呈量效关系,驱动细胞进入S期。     

bFGF和TGF-β1对体外培养兔软骨细胞增殖的影响

目的：研究碱性成纤维细胞因子（bFGF）和转化生长因子β1（TGF-β1）在单一和联合应用时，对体外培养关节软骨细胞增殖的影响，初探符合组织工程需要的合适浓度的bFGF与TGF-β1的组合。方法：第四代幼兔关节软骨细胞，以bFGF（1，5，10ng／m1）或TG-β1（0．1、0．5、1．0ng／m1）及bFGF（10ng／m1）＋TGF-β1（1ng／m1）的单独和联合刺激组为实验组，以常规培养组为对照组，通过Cell Titer96AQueous单溶液细胞增殖分析法测定细胞增殖效应。结果：单独应用时，10ng／ml的bFGF和1ng/ml的TGF-β1。分别为各自最有效的促增殖浓度（P〈0．01）；以此浓度联合刺激条件下的细胞增殖活性与对照组及单因子浓度组相比，均有显著升高（P〈0．05）。结论：合适浓度的bFGF与TGF-β1联合使用，能有效促进体外培养软骨细胞的增殖，有助于组织工程种子细胞问题的解决。     

碱性成纤维细胞生长因子及维生素C对骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）及维生素C（Vc）两种影响因子单独或联合应用对骨髓间充质干细胞（BMSCs）体外生长及增殖的影响。方法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,分别用特定浓度的bFGF及Vc两种影响因子单独或联合应用,绘制细胞生长曲线,用四唑盐比色法（MTT）法、流式细胞仪及免疫组化染色法观察细胞的增殖及生长情况。结果细胞生长曲线、MTT法、流式细胞仪结果均显示第3～5天各组BMSCs增殖能力达高峰,其中Vc＋bFGF组增殖能力最强（P〈0.05）。第7天,对照组及单独应用bFGF和Vc组细胞增殖力均有所下降,仅Vc＋bFGF组细胞仍保持较强的增殖能力（P〈0.05）。结论bFGF和Vc均有促进体外培养的骨髓间充质干细胞增殖的作用,联合应用bFGF和Vc促增殖作用最强,可以作为体外扩增培养骨髓间充质干细胞的最佳培养条件。     

TGF-β1和BMP-2对终板软骨细胞增殖和糖胺多糖合成的影响

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和骨形态发生蛋白2(BMP-2)对体外培养大鼠终板软骨细胞增殖和合成糖胺多糖的影响。方法:取原代大鼠终板软骨细胞,体外培养传代至第二代,常规培养液培养组为对照组,培养液中加入TGF-β1及BMP-2作用于软骨细胞为实验组,观察细胞的生长情况,测定终板软骨细胞增殖和糖胺多糖(GAG)含量的变化,分析两种因子对软骨细胞增殖行为和合成糖胺多糖的影响。结果:单独应用TGF-β1与BMP-2刺激,终板软骨细胞增殖能力及糖胺多糖合成较对照组增高,而TGF-β1与BMP-2联合使用能够更加明显地促进终板软骨细胞增殖能力及糖胺多糖的合成。结论:一定浓度的TGF-β1与BMP-2联合使用,能有效促进体外培养的软骨细胞增殖和合成GAG基质的能力。     

bFGF和TGF-β_1对人牙龈成纤维细胞生物学作用的影响研究

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和转化生长因子-β(1TGF-β1)单独及联合应用时对人牙龈成纤维细胞(HGF)增殖及I型胶原的分泌和糖胺多糖(glycosaminoglycan,GAG)合成的影响。方法体外培养HGF,MTT法动态检测两种生长因子单独及联合作用后的增殖效应;羟脯氨酸试剂盒消化法及阿利新蓝法分别检测最佳增殖浓度时上清液中I型胶原及糖胺多糖含量。结果第3天开始bFGF和TGF-β1促进HGF增殖,第5天最显著(P0.05),bFGF和TGF-β1的浓度分别为10 ng/mL和1 ng/mL时增殖效应最佳,联合作用更显著(P0.05);最佳增殖浓度时TGF-β1促进I型胶原分泌,而bFGF起抑制作用(P0.05),联合应用时TGF-β1的促进作用占优势,但作用减弱(P0.05);最佳增殖浓度时bFGF和TGF-β1促进GAG合成(P0.05),联合应用时更显著(P0.05)。结论除bFGF单独作用时抑制I型胶原的合成外,bFGF和TGF-β1单独及联合应用时能促进HGF增殖和细胞外基质的合成。     

生长因子浓度和添加方式对兔间充质干细胞生长的影响

目的探讨不同浓度bFGF和TGF-β1、bFGF不同添加方式对间充质干细胞增殖的影响。方法取兔间充质干细胞(MSCs),梯度离心,分离培养。取第4代细胞,分别添加不同浓度bFGF(0、10、50、80、100ng/ml)及序贯或同时加入TGF-β1、bFGF。观察细胞形态变化,MTT法测定各组细胞吸光值。结果各组细胞形态无显著差异。高浓度bFGF及序贯加入TGF-β1、bFGF,吸光值测定高于其他各组(P<0.05)。结论bFGF浓度增加,促增殖作用加强。序贯添加TGF-β1、bFGF,小剂量可明显促进细胞增殖。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对大鼠肺成纤维细胞转化生长因子β_1信号通路的作用

目的:研究丹参酮ⅡA磺酸钠注射液(STS)对大鼠肺成纤维细胞转化生长因子β1(TGF-β1)Smad信号通路的影响,探讨STS抑制肺成纤维细胞(LFB)增殖、转化的可能机制。方法:体外分离培养大鼠肺成纤维细胞,实验分为3组:①空白对照组;②TGF-β1刺激组;③联合处理组:STS+TGF-β1刺激组,培养48h,待细胞生长同步化后,用MTT法检测丹参酮ⅡA对肺成纤维细胞增殖的影响,用RT-PCR法分析丹参酮ⅡA磺酸钠和TGF-β1作用后肺成纤维细胞Smad3、Smad7 mRNA表达水平的变化,以及对Ⅰ型胶原mRNA的影响。结果:丹参酮ⅡA磺酸钠在80-640mg/L浓度范围对5μg/L TGF-β1刺激的肺成纤维细胞增殖均具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性(P<0.05);丹参酮ⅡA磺酸钠在浓度160mg/L时能明显下调TGF-β1刺激的肺成纤维细胞内Smad3 mRNA、Smad3/Smad7 mRNA及Ⅰ型胶原mRNA的表达(P<0.05),并能上调Smad7 mRNA表达(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA磺酸钠能抑制LFB的增殖、转化及胶原的合成,机制可能是丹参酮ⅡA磺酸钠下调了大鼠TGF-β1 Smad信号通道的Smad3/Smad7水平,从而抑制LFB的增殖、转化。     

血小板衍生生长因子-BB和转化生长因子-β对人牙周膜细胞增殖的影响

目的探讨血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)和转化生长因子-β(TGF-β)对人牙周膜(PDL)细胞增殖的影响。方法体外培养人PDL细胞,与不同浓度的PDGF-BB、TGF-β或PDGF-BB+TGF-β作用,用噻唑盐(MTT)法观察PDL细胞增殖的情况。结果PDGF-BB和TGF-β均明显促进PDL细胞增殖,在1～50ng/ml和5d范围内,呈浓度-时间依赖关系,PDGF-BB最佳效应时间为3d,最佳效应浓度为10ng/ml,其增殖比对照组增加了256.1%(P<0.001),TGF-β最佳效应时间为4d,最佳效应浓度为5ng/ml,比对照组增加了187.7%(P<0.01),在时间上TGF-β的促增殖作用晚于PDGF-BB。PDGF-BB与TGF-β联合应用时,二者有协同作用,可非常显著地促进PDL细胞增殖,其最大效应作用发生在用药后3d,此时与对照组相比增加了326.9%(P<0.001)。结论PDGF-BB、TGF-β可促进人PDL细胞的增殖,二者联合应用有协同效应。     

黄芪对腹膜间皮细胞致纤维化细胞生长因子分泌与表达的影响

目的：了解黄芪注射液对体外培养的人腹膜间皮细胞转化生长因子-β1（TGF-β1）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）分泌及其mRNA表达的影响.方法：取择期手术患者的网膜间皮细胞进行体外培养传代,第三代细胞用于实验,待细胞同步后分为五组（对照组、腹膜透析组、黄芪1组、2组和3组）观察.单四唑（MTI）法检测各组间皮细胞的增殖活性.用ELISA法检测细胞上清液中TGF-β1和bFGF的含量,并进行比较.采用逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）法检测两种细胞因子mRNA表达情况并进行比较.结果：腹膜间皮细胞在PDS干预下还原能力明显下降,A值显著低于对照组和黄芪组（P＜0.05）;分泌TGF-β1和bFGF明显增加,与对照组比较,P＜0.05.腹膜间皮细胞经含不同浓度黄芪注射液的PDS干预后,TGF-β1和bFGF分泌与PDS组比较显著下降（P＜0.05）,黄芪2组和3组显著低于黄芪1组（P＜0.05）,黄芪3组和2组间比较无显著差异（P＞0.05）.腹膜间皮细胞在PDS干预下TGF-β1和bFGF mRNA表达明显升高,分别比对照组上升62.43%和37.68%.黄芪组TGF-β1和bFGF mRNA表达显著低于PDS组（P＜0.05）;黄芪2组和3组表达显著低于黄芪1组（P＜0.05）,黄芪3组和2组间比较无显著差异.结论：黄芪注射液具有抑制PDS导致的腹膜间皮细胞TGF-β1和bFGF过度分泌和表达的作用.     

塞来昔布对急性白血病原代细胞增殖及血管新生的影响

目的探讨塞来昔布对急性白血病原代细胞增殖的影响。方法采用MTT法检测塞来昔布对急性白血病原代细胞的增殖抑制作用,采用免疫组化法检测塞来昔布作用急性白血病原代细胞后血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子-β(TGF-β)的表达情况。结果塞来昔布能显著抑制急性白血病原代细胞的增殖,免疫组化结果可见实验组VEGF、bFGF的阳性率较对照组均显著降低;但TGF-β阳性率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论塞来昔布能有效抑制急性白血病原代细胞分泌VEGF、bFGF,抑制白血病原代细胞的生长和增殖,其机制可能与抑制白血病血管新生有关。     

大鼠骨骼肌卫星细胞体外培养生长和成肌特性

目的建立大鼠骨骼肌卫星细胞分离和纯化方法,并观察骨骼肌卫星细胞的体外增殖和成肌特性。方法采用改良两步酶消化法结合差速贴壁技术,获得高纯度的骨骼肌卫星细胞。免疫组化染色鉴定体外培养的骨骼肌卫星细胞;MTT法检测体外培养骨骼肌卫星细胞的生长情况;倒置显微镜观察不同培养条件下骨骼肌卫星细胞的分化特性。结果获取的骨骼肌卫星细胞纯度高,细胞中肌源性标志中间丝蛋白desm in呈强阳性表达。体外培养时,骨骼肌卫星细胞有1~2 d的潜伏期,5~6 d进入平台期。细胞汇合至60%~70%或降低培养基血清浓度时,开始相互融合形成肌管细胞。结论酶两步消化法和差速贴壁技术是一种简便易行、获得较高纯度的骨骼肌卫星细胞的方法。骨骼肌卫星细胞体外培养时无需特殊诱导即可相互融合,形成具有骨骼肌收缩特性的肌管细胞。     

成年大鼠骨骼肌卫星细胞原代培养及鉴定

目的：探讨骨骼肌卫星细胞体外培养，鉴定的方法。方法：采用I型胶原酶和胰蛋白酶两步消化法分离大鼠骨骼肌卫星细胞，经差速贴壁法纯化后，在培养液中进行培养，观察不同血清浓度下，卫星细胞生长融合的情况，倒置显微镜观察细胞形态，利用结蛋白免疫细胞化学染色方法鉴定肌卫星细胞。结果：细胞经过两步消化和差速贴壁后，纯度在90%以上，在生长培基中，细胞分裂增生；在融合培基中，细胞发生融合，形成肌管。结论：成年大鼠肌卫星细胞在不同的培养条件下可增生或分化，结蛋白免疫细胞化学染色可以早期鉴定骨骼肌卫星细胞。     

IGF-1, bFGF EXPRESSION AND VASCULAR REGENERATION IN ACUTE INFARCTED CANINE MYOCARDIUM AFTER AUTOLOGUS SKELETAL MUSCLE SATELLITE CELL IMPLANTATION

Objective To study the cell growth factor secretion and vascular regeneration in acute in-farcted myocardium after autologous skeletal muscle satellite cell implantation. Methods Autologous skeletal muscle satellite cells from adult mongrel canine were implanted into the acute myocardial infarct site via the ligated left anterior descending (LAD) artery. Specimens were harvested at 2, 4 , 8 weeks after implantation for the expression of insulin-like growth factor-1 (IGF-1), basic fibroblast growth factor ( bFGF) and the vascular density. Results The expression of IGF-1, bFGF and the vascular density in skeletal muscle satellite cell implant group were higher than that in the control group. Conclusion The skeletal muscle satellite cells, after being implanted into the acute myocardial infarction, not only showed myocardial regeneration, but also showed the ability to secrete the cell factors, hence representing a positive effect on the regeneration of the infarcted myocardium.     

钙库操纵的钙内流在转化生长因子-β1促进气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的:探讨钙库操纵的钙内流(SOCE)在转化生长因子-β1(TGF-β1)促进气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖中的作用.方法:体外培养大鼠ASMCs,以Fluo-3/AM为细胞内钙离子浓度示踪剂,观察ASMCs在TGF-β1作用后,细胞内基础钙离子浓度、钙释放和SOCE的变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量比色法测定TG...     

肽类生长因子在血管瘤中的表达及其临床意义

目的 :了解肽类生长因子与血管瘤的关系。方法 :采用免疫组织化学方法 ,对 98例血管瘤和 3 2例血管畸形组织切片进行bFGF、bFGFR、TGF β和EGF表达的测定。 结果 :bFGF、bFGFR在血管瘤中高表达 ,而在血管畸形中低表达 (P <0 0 1) ;在血管瘤中bFGF、bFGFR的表达与其内皮细胞的增生程度有关 ,内皮细胞增生愈强 ,其bFGF、bFGFR表达愈高 (P <0 0 1)。bFGF和bFGFR呈正相关性 (P <0 0 5 ) ;TGF β和EGF在血管瘤及血管畸形中均未见表达。结论 :bFGF、bFGFR与血管瘤的增生及退化有关。     

芎芍胶囊对人脐静脉内皮细胞分泌血管新生因子的影响

目的探讨芎芍胶囊对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分泌血管新生因子影响的机制。方法采用血清药理学和体外干预培养HUVEC的方法,通过MTF法和酶联免疫吸附分析法观察芎芍胶囊低、中、高剂量对HUVEC的体外增殖和分泌Ang、Ang-2、VEGF、bFGF、EGF和TGF-β1的影响。结果芎芍胶囊各剂量组均有促HUVEC增殖的作用。低剂量组有促进HUVEC分泌Ang、Ang-2、EGF和VEGF的作用,而对bFGF、TGF-β1分泌的影响无明显差异;中剂量组有促进HUVEC分泌Ang、Ang-2、EGF和bFGF的作用,抑制TGF-β1的分泌,对VEGF的分泌无明显影响;高剂量组有促进HUVEC分泌Ang、EGF和bFGF的作用,并抑制VEGF与TGF-β1的分泌,而对Ang-2的影响无明显差异。结论芎芍胶囊能促进HUVEC的增殖,增加HUVEC分泌促血管新生因子和降低抑血管生成因子表达,且与剂量有一定的关系。     

bFGF转染自体骨骼肌卫星细胞对梗死心肌结构的影响

目的观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）转染自体骨骼肌干细胞缺血心肌内移植对心肌结构及骨骼肌卫星细胞转归的影响。方法取大白兔大腿肌,分离卫星细胞后培养、转染并用4’,6-二乙酰基-2-苯基吲哚（DAPI）标记。建立急性心肌梗死动物模型。将bFGF转染的卫星细胞注射在梗死灶周边心外膜下。4周后取出心脏,对缺血心肌结构及卫星细胞转归情况进行观察。结果移植的卫星细胞分化成为带有横纹的心肌样细胞;在卫星细胞移植区心肌细胞玻璃样变性较轻,肌纤维排列有序,微血管生长良好。结论bFGF转染自体骨骼肌卫星细胞在缺血心肌中可分化成心肌细胞样细胞,局部血液循环得到改善。     

联合移植修复长段骨缺损的实验研究

[目的 ]探讨肌肉瓣与骨髓加松质骨颗粒联合移植修复长段骨缺损中碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)及转化生长因子 (TGF β)的表达及修复机理 .[方法 ]在健康中国家兔双侧桡骨中段制作 2 0mm的长骨缺损模型 ,实验组行肌肉瓣与骨髓加松质骨颗粒联合移植 ,对照组单纯植入肌肉瓣 .不同时期进行各组家兔的组织学观察以及bFGF与TGF β多克隆抗体的免疫组织化学染色 .[结果 ]行移植术后 2 ,4 ,6 ,8周时实验组家兔软骨细胞、成骨细胞及骨细胞的bFGF及TGF β呈强阳性染色 .对照组家兔在移植修复 4周时肌肉组织间形成的软骨细胞中有少量软骨细胞呈阳性染色 ,6周及 8周骨缺损两端新生骨痂中部分骨细胞的bFGF及TGF β呈阳性染色 ,但阳性染色细胞数与实验组相比有显著性差异 .[结论 ]肌肉瓣与骨髓加松质骨颗粒联合移植早期在骨缺损局部中bFGF与TGF β的表达与分泌旺盛 ,促进诱导成骨 ,较快地修复长段骨的缺损 .