血管活性肠肽对LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞表达MMP-9的影响

目的：探讨血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide，VIP)对经脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞分泌和表达基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的影响。方法：采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）及明胶酶谱法（gelatin zymography），观察经LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞给予不同浓度的VIP（10-10～10-6mol/L）作用24h后MMP-9基因表达量和活性的变化。结果：(1)正常肺泡巨噬细胞仅分泌和表达少量的MMP-9，经不同浓度LPS（0.1～10mg/L）诱导后MMP-9活性和表达均明显高于未经LPS诱导的对照组（P<0.01）；(2)不同浓度VIP (10-10～10-6mol/L）的干预，均可下调LPS诱导的MMP-9的活性和表达（P<0.01）；(3)该作用可被蛋白激酶C和钙调蛋白的相应阻断剂H-7,W-7部分逆转（P<0.01）。结论：VIP能降低LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞MMP-9的表达及活性，其细胞内信号途径可能与蛋白激酶C和钙调蛋白有关，提示VIP在肺内炎症时可能具有保护性作用。     

姜黄素对人支气管上皮细胞MMP-9的影响

【】目的：观察姜黄素(curcumin, cur)对人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells, HBECs)MMP-9表达的影响。方法：体外培养人支气管上皮细胞,分为空白组、LPS组及姜黄素组,其中姜黄素组在相同浓度LPS刺激下又各分为5、10、20、40和80μmol／L 5个浓度组,作用4h后在显微镜下观察cur干预后细胞的形态变化,采用实时荧光定量PCR观察人支气管上皮细胞MMP-9 mRNA的表达变化。结果：显微镜下观察姜黄素干预后的细胞形态良好,细胞无明显损伤。实时PCR结果显示,空白组可见一定量MMP-9 mRNA表达,与空白组比较,LPS组的人支气管上皮细胞MMP-9 mRNA表达量明显增加,80μmol／L cur亦可增加MMP-9 mRNA的表达(p<0.05)。与LPS组比较,10μmol／L cur组人支气管上皮细胞的MMP-9 mRNA表达量显著下降(p<0.05),5μmol／L、20μmol／L、40μmol／L的cur对支气管上皮细胞MMP-9的mRNA表达无明显作用。结论：10μmol／L姜黄素可降低人支气管上皮细胞的MMP-9mRNA的表达。     

姜黄素对人支气管上皮细胞MMP-9表达的影响

目的观察姜黄素(Cur)对人支气管上皮细胞(HBECs)MMP-9表达的影响。方法体外培养人支气管上皮细胞,分为空白组、LPS组及LPS+姜黄素(Cur)组,其中LPS浓度为10μg/m L,姜黄素组在相同浓度LPS刺激下又各分为5、10、20、40和80μmol/L五个浓度组,作用4h后在显微镜下观察细胞形态变化,采用实时荧光定量PCR观察人支气管上皮细胞MMP-9 m RNA表达量。结果显微镜下观察姜黄素(Cur)干预后HBECs细胞形态良好,无明显损伤。RT-PCR结果显示,空白组可见一定量MMP-9 m RNA表达(1.00124±0.12918);与空白组比较,LPS组人支气管上皮细胞MMP-9 m RNA表达量明显增加[(1.75204±0.18837)比(1.00124±0.12918),P0.05],80μmol/L Cur组亦可增加MMP-9 m RNA表达[(1.99646±0.39105)比(1.00124±0.12918),P0.05]。与LPS组比较,10μmol/L Cur组人支气管上皮细胞MMP-9 m RNA表达量显著下降[(0.67958±0.17142)比(1.75204±0.18837),P0.05],5、20、40μmol/L Cur对支气管上皮细胞MMP-9m RNA表达无明显作用(P0.05)。结论 10μmol/L姜黄素(Cur)可降低人支气管上皮细胞MMP-9m RNA表达。     

姜黄素对鼻咽癌细胞RECK基因甲基化以及MMP-9表达与活性的影响

目的探讨姜黄素对鼻咽癌细胞回复引导半胱氨酸丰富蛋白含kazal基元（ RECK）基因甲基化以及基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响。方法体外培养鼻咽癌细胞系CNE-1,用1、10、30μmol/L姜黄素处理后,采用Western blot和实时定量PCR分别检测RECK、MMP-9蛋白和mRNA表达;高效液相色谱-电喷雾质谱检测RECK甲基化;MTT法检测CNE-1细胞的增殖。同时采用明胶酶谱实验观察姜黄素处理前后MMP-9酶活性变化。结果 CNE-1细胞未刺激时RECK表达水平较低,而经1--30μmol/L姜黄素处理后,能显著增强RECK蛋白和mRNA的表达。高效液相色谱-电喷雾质谱结果显示,30μmol/L姜黄素处理后,RECK启动子、全基因组以及细胞核内甲基化水平分别降低为（69.04±10.62）%、（61.13±7.08）%、2.80±1.32。同时,姜黄素能显著降低CNE-1细胞中MMP-9蛋白和mRNA表达以及MMP-9的酶活性。结论姜黄素可能通过能上调RECK基因表达,降低细胞内甲基化水平,从而抑制MMP-9的表达与活性而发挥对CNE-1细胞生长抑制作用。     

MMP-9在吸烟与戒烟大鼠支气管及肺血管的表达

目的 探讨香烟烟雾刺激对大鼠支气管与肺血管MMP-9表达的影响及二者相关性. 方法 32只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、小量吸烟组、大量吸烟组和戒烟组,每组8只.采用免疫组化与原位杂交法同时检测支气管及肺血管MMP-9蛋白与mRNA的表达水平. 结果与对照组比较,各吸烟组支气管上皮细胞与肺血管平滑肌细胞的MMP-9蛋白与mRNA表达均增强(P<0.05).戒烟组肺血管平滑肌的MMP-9蛋白与mRNA表达低于各吸烟组(P<0.05),而支气管上皮细胞的MMP-9蛋白与mRNA表达仅低于大量吸烟组(P<0.05),仍高于小量吸烟组与对照组(P<0.05),戒烟对支气管与肺血管的MMP-9表达影响不完全相同.支气管与肺血管的MMP-9蛋白、mRNA表达分别呈正相关(P<0.05). 结论 烟雾刺激可上调支气管上皮细胞、肺血管平滑肌细胞MMP-9的表达,参与支气管及血管的重构;戒烟可部分逆转上述过程.     

氯化高铁血红素对ADMA所致内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究氯化高铁血红素(Hemin)对非对称二甲基精氨酸(ADMA)诱导的血管内皮损伤的保护作用及其与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的关系.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),MTT法检测Hemin(5～20μmol/L)对ADMA(3～30μmol/L)诱导细胞损伤的影响,Westem blot法检测胞内MMP-9蛋白表达水平,RT-PCR技术评价MMP-9、iNOS及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)mRNA的表达量,ELISA法检测细胞上清波肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平变化.结果 ADMA(3～30 μ mol/L)能使细胞活性降低,其损伤呈剂量依赖性,10μmol/L的ADMA显著升高了MMP-9、iNOS、MCP-1和TNF-α的表达水平(P＜0.01).而10μmol/L的Hemin预处理能明显干预ADMA对细胞活性的影响,并能下调ADMA诱导的MMP-9、iNOS、MCP-1和TNF-α的表达,与对照组相比差异具有显著性(P＜0.01).结论 Hemin对ADMA所致内皮细胞损伤有保护作用,且与MMP-9和iNOS水平降低有密切关系.     

血管紧张素Ⅱ参与肾小管上皮细胞转分化的实验研究

目的:本文通过观察血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)影响肾小管上皮细胞转分化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)的作用,以及和转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)作用的关系,探讨Ang Ⅱ参与肾小管间质纤维化的作用机制.方法:以人肾小管上皮细胞株(human kidney cell)HKC细胞为研究对象,采用蛋白印迹等方法,观察Ang Ⅱ(10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L),及其与TGF-β1共同作用对该细胞表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的影响.明胶酶谱法检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9(MMP-2和MMP-9)的变化,Boyden小室检测HKC细胞的迁移能力.结果:①单独应用Ang Ⅱ不能够造成HKC细胞E-cadherin表达的变化,也不能诱导α-SMA表达,但是却能上调FN的表达;②与TGF-β1共同作用时能够加强TGF-β1影响E-cadherin,α-SMA和FN表达的作用;③Ang Ⅱ能够增加HKC生成MMP-2和MMP-9;④Ang Ⅱ能够(10-7和10-6 mol/L)增加HKC细胞迁移至Boyden小室膜下侧面的数目.结论:①Ang Ⅱ可以参与EMT过程,但不是导致EMT的关键因素;②Ang Ⅱ能够以协同的方式参与TGF-β1导致的EMT,可能以此方式加重肾小管间质的纤维化.     

EFFECTS OF VEGF SUPPRESSION BY SIRNA ON THE EXPRESSION OF MMP-2, MMP-9 AND TIMP-1 IN HUMAN TONGUE SQUAMOUS CELL CAICINOMA

目的:探讨小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)抑制人舌癌Tca8113细胞血管内皮生长因子 (vascular endothelial growth factor,VEGF)表达对移植瘤基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-2、MMP-9及基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,TIMP-1)蛋白表达的影响.方法:以稳定转染携带针对VEGF的siRNA真核表达载体的人舌癌Tca8113细胞(VEGF-siRNA1、VEGF-siRNA2)为实验组,以转染空载体的人舌癌Tca8113细胞及未转染的人舌癌Tca8113细胞为实验对照组和空白对照组,将各组细胞分别接种于裸鼠皮下,用明胶酶谱实验及蛋白免疫印迹法分别测定各组移植瘤TIMP-2、TIMP-9及TIMP-1的蛋白表达.结果:各组明胶酶谱实验结果均有较明显MMP-9蛋白表达,活性MMP-9蛋白含量较少,MMP-2蛋白表达量明显少于MMP-9蛋白表达,而活性MMP-2几乎完全没有可见条带出现.各组中MMP-2、MMP-9及活性-MMP-9条带酶量差异均尚不具统计学意义(P＞0.05).以scion图像分析系统分别读取各样本TIMP-1条带灰度值及β-actin条带灰度值,各组中TIMP-1蛋白相对含量差异亦无统计学意义(P＞0.05).结论:以siRNA干扰人舌癌Tca8113细胞VEGF基因,可明显抑制肿瘤内VEGF的蛋白表达,但是对MMP-2、MMP-9及TIMP-1蛋白的表达无明显影响.     

siRNA抑制人舌癌细胞VEGF表达对MMP-2、MMP-9及TIMP-1蛋白表达的影响

目的:探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制人舌癌Tca8113细胞血管内皮生长因子(vascular endo-thelial growth factor,VEGF)表达对移植瘤基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-2、MMP-9及基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,TIMP-1)蛋白表达的影响。方法:以稳定转染携带针对VEGF的siRNA真核表达载体的人舌癌Tca8113细胞(VEGF-siRNA1、VEGF-siRNA2)为实验组,以转染空载体的人舌癌Tca8113细胞及未转染的人舌癌Tca8113细胞为实验对照组和空白对照组,将各组细胞分别接种于裸鼠皮下,用明胶酶谱实验及蛋白免疫印迹法分别测定各组移植瘤TIMP-2、TIMP-9及TIMP-1的蛋白表达。结果:各组明胶酶谱实验结果均有较明显MMP-9蛋白表达,活性MMP-9蛋白含量较少,MMP-2蛋白表达量明显少于MMP-9蛋白表达,而活性MMP-2几乎完全没有可见条带出现。各组中MMP-2、MMP-9及活性-MMP-9条带酶量差异均尚不具统计学意义(P>0.05)。以scion图像分析系统分别读取各样本TIMP-1条带灰度值及β-actin条带灰度值,各组中TIMP-1蛋白相对含量差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论:以siRNA干扰人舌癌Tca8113细胞VEGF基因,可明显抑制肿瘤内VEGF的蛋白表达,但是对MMP-2、MMP-9及TIMP-1蛋白的表达无明显影响。     

转化生长因子-β1通过活化ERK途径和上调Ets-1蛋白刺激基质金属蛋白酶-9产生

目的　探讨转化生长因子 -β1(TGF -β1)调节基质金属蛋白酶- 9(MMP -9)生成的分子机理。方法　选用小鼠肾小球足突细胞系,以细胞因子TGF -β1为刺激物,建立炎症细胞模型,分别应用明胶酶谱法和逆转录 PCR方法观察TGF -β1刺激细胞后培养上清MMP- 9活性及细胞MMP- 9mRNA变化;应用Western蛋白印迹检测TGF β1调节MMP-9中对ERK信号途径和转录因子Ets 1蛋白的影响。结果　对照组细胞上清有微弱MMP- 9活性, TGF β1刺激细胞 24h后培养上清MMP 9活性较对照组明显升高 (P<0 01),并呈TGF -β1刺激剂量依赖趋势; TGF- β1刺激 6h细胞MMP 9mRNA较对照组明显增加 (P<0 01),并且维持高水平至 24h;TGF- β1刺激细胞 4h转录因子Ets- 1蛋白增加(P<0 01),持续高水平至 24h。TGF- β1可以刺激细胞ERK-1 /2活化; ERK-1 /2活化阻断剂PD98059预处理细胞,可以阻断TGF β1刺激引起的Ets 1蛋白、MMP -9活性、MMP -9mRNA增加的效应。结论　以上结果提示TGF β1是通过活化细胞内ERK信号途径和上调转录因子Ets -1蛋白刺激足突细胞MMP- 9mRNA表达,继而蛋白活性增加。     

通过共培养观察醛固酮活化后的肾小管上皮细胞对肾脏成纤维细胞的作用

目的探讨被醛固酮(ALDO)活化的人近端肾小管上皮细胞系(HKC)对人肾间质成纤维细胞(hRIFs)合成Ⅰ型胶原(ColⅠ)的影响。方法利用体外细胞培养及共培养技术进行如下试验。(1)用不同浓度及不同作用时间的外源性ALDO刺激HKC,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)及酶联免疫吸附(ELISA)方法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA及蛋白质表达。(2)用不同浓度及不同作用时间的安体舒通与内皮素-1(ET-1)共同刺激HKC,同上检测TGF-β1mRNA及蛋白质表达。(3)用外源性ALDO活化的HKC与hRIFs共培养(培养液中加或不加抗TGF-β1抗体),ELISA方法检测hRIFs的ColⅠ合成量。结果(1)外源性ALDO使TGF-β1表达呈剂量依赖及时间依赖性增加。1×10-9及1×10-7mol/LALDO刺激组TGF-β1表达量显著高于0mol/LALDO组(P<0.05或0.01);10-7mol/LALDO刺激不同时间后,TGF-β1表达量显著高于0h组(P<0.05或0.01)。(2)安体舒通使TGF-β1表达呈剂量及时间依赖性减少。10-9、10-7mol/L安体舒通组TGF-β1表达量显著低于0mol/L安体舒通组(P<0.05或P<0.01)。10-9mol/LET-1加10-7mol/L安体舒通与单用10-9mol/LET-1刺激不同时间后,两组间TGF-β1表达,差异有显著意义(P<0.05或0.01)。(3)10-7mol/LALDO刺激HKC12h活化细胞后,再与hRIFs共培养48h,hRIFs对ColⅠ的合成量显著增多(P<0.01);1.0、2.0μg/ml抗TGF-β1抗体能部分抑制此反应(P<0.05)。结论外源性ALDO能使HKC合成TGF-β1增加;内皮素刺激HKC产生的内源性ALDO能促进其自身合成TGF-β1;被ALDO活化的HKC能通过“传话”作用促进hRIFs合成Col-1,该作用部分为TGF-β1介导。     

硝呋齐特对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨硝呋齐特对甲状腺乳头状癌细胞BCPAP和TPC-1的增殖、迁移及侵袭的影响。方法 用不同浓度（0、1.25、2.5、5、10、20 μmol/L）硝呋齐特处理BCPAP和TPC-1细胞,采用MTT法和克隆形成实验观察硝呋齐特对细胞增殖的影响;采用Hoechst 33258染色及流式分选技术观察对细胞凋亡的影响;通过Western blot法检测硝呋齐特处理后BCPAP细胞凋亡相关蛋白及迁移侵袭相关蛋白的表达情况;采用Transwell小室观察细胞迁移和侵袭能力。结果 硝呋齐特0、1.25、2.5 μmol/L处理BCPAP细胞,0、1.25 μmol/L处理TPC-1细胞,24、48、72 h后细胞增殖力均未受到明显抑制（ P>0.05）;硝呋齐特5、10、20 μmol/L处理BCPAP细胞,10、20 μmol/L处理TPC-1细胞,24、48、72 h后细胞增殖力均受到明显抑制（ P<0.05）,且随浓度增加和时间延长其抑制作用逐渐增强;此外,2.5、5 μmol/L硝呋齐特对TPC-1细胞的增殖抑制作用分别从72 h和48 h起效（ P<0.05）。暴露于10 μmol/L硝呋齐特10 d后,BCPAP和TPC-1细胞的克隆形成均受到抑制（ P<0.05）。10 μmol/L硝呋齐特处理48 h后,BCPAP和TPC-1细胞均出现细胞核改变,凋亡小体出现;流式分析显示BCPAP及TPC-1凋亡细胞增加（ P<0.05）。10 μmol/L硝呋齐特处理BCPAP细胞48 h,促凋亡蛋白CC-3、Bax的表达增加（ P<0.05）,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少（ P<0.05）;促迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9的表达减少（ P<0.05）,MMPs家族抑制剂——金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）-2表达增加（ P<0.05）。10 μmol/L硝呋齐特处理BCPAP和TPC-1细胞48 h,BCPAP细胞及TPC-1细胞迁移率与侵袭率均下降（ P<0.05）。结论 硝呋齐特于体外抑制人甲状腺癌细胞系BCPAP和TPC-1的增殖,通过上调CC-3和Bax蛋白的表达诱导细胞凋亡,通过降低MMP-2和MMP-9蛋白的表达阻断细胞的迁移与侵袭。     

去甲肾上腺素诱导人巨噬细胞MMP-9的表达及机制

目的观察去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)预处理人巨噬细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及其致动脉粥样硬化机制。方法体外培养的U937巨噬细胞,以10-10、10-9、10-8、10-7mol/L NE分别刺激细胞0、1、3、6、12、24 h。RT-PCR法测细胞MMP-9 mRNA水平,Western blot法检测细胞MMP-9蛋白表达,ELISA法测细胞培养液上清中MMP-9蛋白水平的表达。预先加入抗氧化剂NAC(10 mmol/L)和NAD(P)H氧化酶抑制剂DPI(10-5mol/L)孵育1 h后再用不同浓度的NE分别刺激细胞24 h,用荧光探针法检测细胞内ROS的生成;用RT-PCR及ELISA法检测细胞MMP-9mRNA和蛋白的表达。结果 NE浓度时间依赖性地增加巨噬细胞MMP-9 mRNA(10-7mol/L NE为对照组的4.65倍,P<0.01)及蛋白(10-7mol/L NE为对照组的4.14倍,P<0.01)表达;随着NE浓度的升高,ROS的生成分别为对照组的2.18、3.22、3.64、4.50倍(P<0.01)。NAC和DPI都一定程度地抑制了MMP-9 mRNA[DPI组为NE组的0.752倍(P<0.05),NAC组为NE组的0.500倍(P<0.01)]和蛋白(DPI组为NE组的0.698倍,NAC组为NE组的0.671倍,均P<0.05)的表达。结论 NE浓度和时间依赖性地诱导人巨噬细胞U937 MMP-9的表达,通过NAD(P)H氧化酶介导的ROS通路而促进炎症反应,促进AS的发生、发展。     

高糖对人类肾小球系膜细胞PKC及MMPs/TIMPs的影响

目的：研究体外高糖环境下人类肾小球系膜细胞(NHMC)中PKC激活或使用PKC抑制剂干预后 MMP2,9/TIMP1,2的表达,探讨PKC与MMPs/TIMPs信号转导在糖尿病肾病发生发展中的作用。方法：将NHMC分4组： N组（对照组,5 mmol/L葡萄糖）;H组（高糖组,30 mmol/L葡萄糖）;P组（抑制剂组,30 mmol/L葡萄糖+10-5mol/L白屈菜红碱）;M组(甘露醇组,5 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)。分别于上述4种不同成分培养基中进行细胞培养,第24,48,72 h用MTT法测定NHMC增殖;并于培养后第24,48 h收集细胞,抽提mRNA及蛋白质,用ELISA方法测定胞膜、胞核蛋白质PKC活性。用RT-PCR和Western 印迹方法检测MMP2,9, TIMP1,2 mRNA和蛋白质的表达。结果：高糖组细胞膜和胞核部分的PKC活性较对照组明显升高(P＜0.01), MMP2,9, TIMP1,2 mRNA及蛋白质的表达较对照组明显上升(P＜0.01);而MMP-9/TIMP-1, MMP-2/TIMP-2比值较对照组明显下降(P＜0.05)。 高糖加PKC抑制剂白屈菜红碱后,MMP2,9, TIMP1 mRNA及蛋白质表达较对照组明显升高 (P＜0.01),但MMP9/TIMP1, MMP2/TIMP2比值较高糖组明显升高(分别P＜0.05,P<0.01)。PKC活性与MMP-2/TIMP-2及MMP-9/TIMP-1的蛋白质比值均呈负相关(分别r=-0.651,r=-0.702,均P＜0.05)。结论：高糖可刺激人类肾小球系膜细胞PKC活化,在DN中PKC活化与MMP2,9/TIMP1,2的表达水平有密切关系。     

环孢素A对肾小管上皮细胞MMP-2和 MMP-9表达和活性的影响

 【目的】 观察环孢素A(CSA)对近端肾小管上皮细胞基质金属蛋白酶-2和-9(MMP-2 和 MMP-9)表达和活性的影响&;#65377;【方法】 体外培养大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK52E细胞至完全融合时,分别给予不同浓度的CSA 0,0.42,0.84,4.2,8.4 μmoL/L,实验观察48 h和72 h&;#65377;收集培养液,用明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9活性&;#65377;提取总RNA,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测MMP-2和MMP-9的mRNA水平&;#65377; 【结果】 CSA刺激NRK52E细胞呈剂量依赖性抑制MMP-2活性和mRNA表达&;#65377;与对照组(CSA 0 μmoL/L)比较,CSA0.42,0.84,4.2,8.4 μmoL/L的MMP-2活性分别下降为27%,24%,11%,9%;差异均有统计学意义,P < 0.05&;#65377;CSA刺激NRK52E细胞增加MMP-9活性和mRNA表达&;#65377;与对照组比较,CSA 4.2 μmoL/L 刺激48 h MMP-9活性上调为438%,72 h上调为237%,差异均有统计学意义,P < 0.05&;#65377; 【结论】 CSA对肾小管上皮细胞MMP-2表达和活性呈剂量依赖性抑制,以及对MMP-9表达和活性的诱导作用可能与CSA所致肾小管间质损害相关&;#65377;     

TNF-α刺激人牙周膜细胞表达MMP-9的研究

  目的 研究TNF-α对hPDLCs表达MMP-9的影响。方法 分别以1、2、5ng/mL浓度的TNF-α刺激hPDLCs 24h,以及2ng/mL浓度的TNF-α刺激hPDLCs 6h、12h、24h、48h,应用ELISA法测定细胞上清液中MMP-9的表达水平。结果 随着TNF-α浓度增大和作用时间延长,hPDLCs表达MMP-9均增加。结论 TNF-α能够以时间和剂量依赖的方式增强hPDLCs表达MMP-9。     

醛固酮对人肾小管上皮细胞MMP-1/TIMP-1基因表达和合成分泌纤维连接蛋白的影响

目的 探讨醛固酮(ALD)对人肾小管上皮细胞基质金属蛋白酶1(MMP-1)和金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)基因表达,以及合成分泌纤维连接蛋白(FN)的影响.方法 人肾小管上皮细胞(HK-2)培养于含5％ FCS的DMEM/F12培养液中,以不同浓度的ALD (10-11、10-10、10-9、10-8mol/L)刺激HK-2细胞48h后,应用半定量RT-PCR法检测细胞中MMP-1、TIMP-1和FN的基因表达,ELISA法测定培养上清液中纤维连接蛋白(FN)的含量.结果 ALD呈剂量依赖性地下调HK-2细胞中MMP-1的基因表达,上调TIMP-1和FN的基因表达,MMP-1/TIMP-1比值降低(P＜0.05).ALD呈剂量依赖性地增加培养上清液中FN的含量(P＜0.05).结论 ALD通过调控HK-2细胞中MMP-1和TIMP-1的基因表达,促进其合成分泌FN,导致肾间质纤维化的进展.     

机械压力敏感性通道蛋白表达水平与COPD患者气道重塑的关联性分析

目的: 探讨机械压力敏感性瞬时受体电位C1蛋白(TRPC1)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者支气管上皮细胞中的表达情况,阐述TRRC1蛋白参与COPD气道重塑的分子机制。方法: 选择欲行纤维支气管镜检查的患者64例作为非手术组,根据COPD诊治指南分为轻中度COPD患者(COPD组)40例和无气道慢性炎症性疾病患者(对照组)24例。分别检测第1秒用力呼气容积/用力肺活量(FEV₁/FVC)和其实测值占预计值百分比(FEV₁%pred);在纤维支气管镜引导下得到肺泡灌洗液(BALF),采用ELISA法测定BALF中TRPC1、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和转化生长因子-β₁(TGF-β₁)的表达水平;分析BALF中TRPC1表达量与FEV₁%pred、FEV₁/FVC、MMP-9及TGF-β₁表达水平的相关性。选取行肺叶切除术患者的肺组织标本17例作为手术组,其中COPD组8例和对照组(无慢性气道炎症性疾病)9例。高分辨CT下测量同一部位支气管重塑指标,测定壁厚与外径比率(TDR%)、气道壁面积占总横截面积比(WA%),对比气道结构变化。免疫组织化学法检测TRPC1蛋白在人支气管上皮细胞中的分布特点,采用Imagepro-plus 6.0软件比较COPD组与对照组气道上皮细胞中TRPC1蛋白的表达差异,Western blotting法测定TRPC1表达水平。分析气道支气管上皮细胞中TRPC1表达水平与TDR%和WA%的相关性。结果: 非手术组患者肺功能,与对照组比较,COPD组患者FEV1%pred和FEV1/FVC均下降(P<0.05),TRPC1、MMP-9和TGF-β₁表达水平升高(P<0.05)。偏相关分析,COPD组TRPC1表达水平与FEV₁%pred(r=-0.34,P=0.002)和FEV₁/FVC(r=-0.38,P=0.004)呈负相关关系,与MMP-9(r=0.36,P=0.004)和TGF-β₁(r=0.61,P=0.002)表达水平呈正相关关系。手术组组织标本中TRPC1蛋白主要分布于支气管上皮细胞腔内侧,表达于柱状细胞或杯状细胞胞浆内;其中COPD组累积光密度(IOD)/面积(area)比值高于对照组(P<0.05);Western blotting法检测,COPD组支气管黏膜上皮内TRPC1蛋白表达水平高于对照组(P<0.05)。偏相关分析,COPD组TRPC1表达水平与TDR%(r=0.59,P=0.002)和WA%(r=0.60,P=0.002)呈正相关关系。结论: COPD患者支气管黏膜上皮细胞中TRPC1被激活并高水平表达,并与肺功能受损程度、气道重塑相关因子表达水平呈正相关关系,说明感知压力的TRPC1通道可促进COPD的发生发展。