rhIL-1β及TGF-β对髁状突软骨细胞增殖影响的研究

目的 :探讨rhIL 1β及TGF β对髁状突软骨细胞增殖的影响。 方法 :以酶消化法获得兔髁状突软骨细胞。用MTT法及PCNA免疫组化染色检测不同浓度rhIL 1β及TGF β对体外培养的兔髁状突软骨细胞增殖的影响。结果 :MTT检测 ,rhIL 1β( 10、2 0ng/ml)处理软骨细胞 4 8h后 ,可明显抑制软骨细胞增殖 ,经统计学检验 ,处理 3～ 6d有显著性差异 (P <0 .0 1,t检验 ) ;加入TGF β( 10、2 0ng/ml)可明显拮抗rhIL 1β对软骨细胞增殖的抑制作用 ,并且浓度愈高对rhIL 1β的抑制作用愈强。PCNA检测 ,rhIL 1β处理软骨细胞后PCNA阳性细胞率降低 ,随rhIL 1β的刺激浓度增加 ,阳性率明显降低 ;加入外源性TGF β可以使PCNA的阳性率提高。 结论 :rhIL 1β对髁状突软骨细胞增殖具有抑制作用 ,外源性TGF β对该作用具有明显的拮抗效应     

体外rhIL—1β诱导髁状突软骨细胞HSP70的表达及其意义

目的 明确热休克蛋白70（HSP70）在人重组白细胞介素－1（rhIL-1β）刺激下对下颌骨髁状突软骨细胞的保护作用。方法 通过原代细胞培养获得兔髁状突软骨细胞,在生长良好的第三代软骨细胞中分别加入不同浓度的rhIL-1β,并利用原位杂交及免疫组织化学技术检测rhIL-1β处理软骨细胞后HSP70的表达变化。结果 正常髁状突软骨细胞胞浆内有HSP70蛋白弱表达,rhIL-1β（10ng/ml）作用12h后HSP70出现表达升高,部分细胞核内也可见表达,48h后信号开始减弱。HSP70mRNA的表达与蛋白表达基本一致。结论 一定浓度的rhIL-1β刺激髁状突软骨细胞可诱导HSP70的转录及蛋白合成,提示HSP70可能在骨关节炎症损伤中对软骨细胞起到保护作用。     

TGF-β及HSP70在rhIL-1β介导的TMJ髁状突软骨炎症损伤中的作用

目的 探讨TGF－β及HSP70在人重组白细胞介素－1（rhIL-1β）介导颞颌关节炎症损伤中的作用。方法 SD大鼠颞下颌关节腔内反复多次注射rhIL-1β，建立颞凳关节炎症损伤模型，利用免疫组织化学检测髁状突软骨炎症损伤过程中TGF－β及HSP70的表达变化。结果 注射后1－3d，实验侧髁状突软骨全层均可见TGF－β阳性软骨细胞，以增殖层阳性表达最明显，7d除髁状突软骨增殖层表达仍较强，前肥厚层TGF－β表达开始减弱，30d髁状突软骨全层TGF－β表达与对照侧相近。HSP70的表达与TGF－β具有相似的特点，注射后1－3d，实验侧髁状突软骨浅层HSP70的表达明显增强，7d后表达逐渐减弱，15d后HSP70表达与对照侧相近。结论 在rhIL-1β介导的髁状突软骨关节炎症损伤中，早期TGF－β与HSP70的表达增强，提示TGF－β及HSP70可能参与了软骨炎症损伤的修复过程。     

静张应力与TGF-β_1对大鼠髁突软骨细胞增殖效应调节初步研究

目的：探讨转化生长因子-β(TGF-β1)在静张应力环境下对髁突软骨细胞增殖效应的影响。方法：（1）将传代培养至第4代大鼠下颌髁突软骨细胞在12孔培养板上培养，采用流式细胞仪测定加入不同浓度TGF-β1（0.1、1、10ng/ml）0.6、12、18、24h后，对髁突软骨细胞增殖活性（PI值）的影响。（2）将第4代大鼠下颌髁突软骨细胞增殖活性（PI值）的影响。结果：不同浓度TGF-β1（0.1、1、10ng/ml）在模拟生理环境下以剂量依赖型的方式整体促进了髁突软骨细胞增殖效应，对髁突软骨细胞的增殖活性调节作用主要在12、18h段，增殖峰值在18h左右；在5kPa静张应力联合TGF-β1刺激下培养较TGF-β1的单独效应具有更强的促髁突软骨细胞增殖作用。结论：静张应力联合TGF-β1可以调节髁突软骨细胞的增殖活性。     

Hel紊乱对猴髁突软骨中的TGF—β1分布的影响

目的：探讨渐进性咬合紊乱所致猴颞下颌关节退形性变中，髁突软骨TGF－β1的分布变化特点及其意义。方法：2只青年恒河猴分成实验组和对照组。采用拔牙和固定矫治技术造成实验组后牙渐进性咬合紊乱。8月后，对髁突进行HE染色和TGF－β1免疫组化定量分析。结果：①实验组髁突前内侧出现明显的退性形变，与对照猴相比，其髁突各部位软骨厚度均变薄（P＜0．01），其中变化程度最大者为前部内份，其次是髁突前部中份和中部内份。②与对照猴相比，实验组髁突软骨各部位TGF－β1，TGF－β1可能参与了关节软骨的修复活动。     

TGF—β1在不同发育阶段胎儿髁突软骨中的表达

目的：研究β转化生长因子－1（TGF－β1）在胎儿髁突软骨中表达,探讨该因子在软骨发育中的作用。方法：30例13－33周胎儿分为A、B、C和D四组,应用HE染色和免疫组化S－P法观察髁突软骨TGF－β1的表达。结果：TGF－β1在所观察各组髁突软骨各层中均有表达,成软骨细胞 层表达最强,主要在胞浆。TGF－β1积分光密度在上、中、下三层之间 存在差异（P＜0．05）。平均灰度和平均光密度在不同胎龄组间存在差异（P＜0．05）。A组与B组、A组与C组、B组与D组、C组与D组之间有显著性差异。结论：在髁突软骨不同发育时间、不同分化阶段TGF－β1的表达水平不同。     

生长因子对人髁突软骨细胞DNA及胶原合成的影响

目的:研究胰岛素样生长因子(IGF-)、碱性成纤维样生长因子(bFGF)及转化生长因子-β1(TGF-β1)对人髁突软骨细胞增殖及代谢的调节作用。方法:采用体外细胞培养技术及同位素掺入法。结果:在0.4%新生小牛血清(NCS)条件下,bFGF对人髁突软骨细胞DNA合成有显著的促进作用,浓度在1ng/ml以上具显著性(P<0.05)。IGF-在10～100ng/ml呈剂量效应地促进3H-TdR的掺入,而TGF-β1无显著作用。bFGF在0.1～100ng/ml可显著促进人髁突软骨细胞3H-Proline掺入,最大效应剂量为10ng/ml(增加60%)。IGF-在10～100ng/ml能够明显促进细胞胶原合成,最大值在100ng/ml(增加98%)。TGF-β1在1～10ng/ml明显抑制3H-Proline掺入,最大抑制浓度为1ng/ml,抑制率约为24%。结论:生长因子可有效促进软骨细胞增殖及基质合成,为关节软骨损伤性疾患的治疗提供一种有效的途径     

静张应力与TGF-β_1对大鼠髁突软骨细胞增殖效应调节初步研究

目的　探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在静张应力环境下对髁突软骨细胞增殖效应的影响。方法　(1) 将传代培养至第4代大鼠下颌髁突软骨细胞在12孔培养板上培养,采用流式细胞仪测定加入不同浓度TGF-β1(0·1、1 、10 ng/ml) 0、6、12、18、24 h后,对髁突软骨细胞增殖活性(PI值)的影响。(2)将第4代大鼠下颌髁突软骨细胞在细胞膜式张应力施加装置上培养,检测不同浓度TGF-β1及5 kPa静张应力联合应用0、6、12 h后,对髁突软骨细胞增殖活性 (PI值)的影响。结果　不同浓度TGF-β1(0·1、1、10 ng/ml)在模拟生理环境下以剂量依赖型的方式整体促进了髁突软骨细胞增殖效应,对髁突软骨细胞的增殖活性调节作用主要在12~18 h段,增殖峰值在18 h左右;在5 kPa静张应力联合TGF-β1刺激下培养较TGF-β1的单独效应具有更强的促髁突软骨细胞增殖作用。结论　静张应力联合TGF-β1可以调节髁突软骨细胞的增殖活性。     

rhIL-1α/rhTGF-β1诱导下大鼠髁突软骨细胞PRG4的表达

目的:观察rhTGF-β1对rhIL-1α作用下大鼠髁突软骨细胞蛋白多糖4(PRG4)表达的影响.方法:酶消化法获取髁突软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定.细胞上清液中加入10 ng/ml的rhIL-1α,48 h后加入10 ng/ml的rhTGF-β1.不同时间点应用RT-PCR检测PRG4 mRNA的表达情况,ELISA法检测PRG4蛋白的分泌变化.结果:加入rhIL-1α 24、48、72 h组的PRG4表达量与对照组均有统计学差异(P<0.05),且逐渐降低.48 h组再加入rh TGF-β1 24h后PRG4表达量与对照组无统计学差异(P>0.05),而48 h后与各组均有统计学差异(P<0.05),且最高.结论:rhTGF-β1可以上调髁突软骨细胞PRG4的表达,且可逆转IL-1α的下调作用.     

PTH对大鼠髁突发育影响的实验研究

目的：观察不同条件下、不同浓度的PTH对发育期大鼠髁突软骨细胞增殖功能和髁突发育的影响。方法：消化法培养大鼠髁突软骨细胞,PTH不同作用方式下MTT法检测细胞增殖能力。24只SD大鼠,分别在其发育期于左侧髁突关节腔内注射不同浓度（1μg/kg、5μg/kg、10μg/kg）PTH,待发育期结束后,处死,取双侧髁突,通过大体、组织学观察髁突生长情况。结果：低浓度间断PTH培养组的髁突软骨细胞增殖功能明显大于持续作用组和对照组,以含PTH0.001μg/mL培养液间断作用组的细胞增殖功能最强,而含PTH0.01μg/mL培养液持续作用组的细胞增殖最弱。注射PTH侧髁突体积均略大于未注射侧、对照组和空白组。苏木精-伊红染色见各组髁突表面基本完整、光滑,层次清晰。结论：小剂量间断的PTH作用对髁突软骨细胞的增殖有促进作用,局部注射PTH对髁突发育是否有促进或抑制作用有待进一步研究。     

生长激素、张应力对兔下颌髁突软骨细胞增殖活性及功能的影响

下颌髁突软骨在颅面的生长发育中起着重要作用。功能矫形治疗中 ,下颌髁突软骨的生长改建一直是国内外学者关注的焦点。大量体内实验证明 ,功能矫形前伸下颌后 ,颞下颌关节及下颌髁突周围组织结构的生物力学环境发生改变 ,生长期动物下颌髁突软骨内的激素和生长因子 (如雌激素、胰岛素、睾酮、甲状腺素、甲状旁腺素、IGF 1、TGF β,PGE2等 )的含量和分布发生改变 ,髁突软骨细胞增生 ,下颌骨生长 ,达到功能矫形治疗错畸形的目的。大鼠下颌髁突软骨细胞体外培养研究发现 ,静张应力、压应力、bFGF、IGF l、TGF β以及静张应力与TGF β联合作用 ,在一定的力值范围、一定的时间内可以促进髁突软骨的增殖活性 ,且静张应力联合TGF β共同作用时的促增殖效应比单独使用TGF β更强 ,但随作用时间延长 ,逐渐表现出抑制作用。而外源性生长激素 (GH)及张应力能否促进体外培养兔下颌髁突软骨细胞的增殖活性及分泌功能 ,生长激素与张应力联合应用是否具有协同促进作用 ,目前尚未见报道。本研究通过兔下颌髁突软骨细胞体外培养 ,采用四点弯曲细胞力学加载仪 ,对细胞施加不同浓度的外源性生长激素和张应力 ,使用流式细胞仪和免疫组织化学方法 ,探讨生长激素和张应力在不同时间段对下颌髁突软骨细胞增殖活性及分     

IL一1及L-NMMA对兔髁状突软骨细胞NO生成和iNOS表达的影响

目的：观察白细胞介素-1(IL-1)和L-单甲基精氨酸（L-NMMA）对兔髁状突软骨细胞一氧化氮（NO）合成和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）基因表达的影响。方法：用硝酸还原酶法和RT-PCR反应分别检测软骨细胞培养上清液中NO浓度细胞内iNOSmRNA表达的变化。结果：单独使用IL-1，软骨细胞培养液中NO水平和iNOS表达水平显著升高，配伍加入L-NMMA能有效降低由于IL-1刺激引起的NO水平升高，但不能降低iNOS表达的升高幅度。结论：IL-1能显著增加体外培养的兔髁状突软骨细胞iNOS的表达而促进NO的生成，而L-NMMA对这种效应有明显抑制作用。     

下颌骨髁状突软骨发育中的细胞凋亡及增殖

目的：研究胎儿下颌骨髁状突软骨细胞凋亡及增殖情况。方法：32例胎儿下颌骨髁状软骨标本按胎龄分为两组：A组（13－22周）；B组（23－33周）。采用原位末端标记法（TUNEL）及免疫组织化学法观察胎儿髁状突软骨发育不同时中的细胞凋亡及PCNA的表达，并对表达结果作定量分析。结果：两胎龄组中均有PCNA及TUNEL阳性表。PCNA、TUNEL染色以增殖层阳性细胞率最大，其次为成软骨细胞层，肥大软骨细胞层最小，B组PCNA染色强于A组，A组TUNEL染色强于B超。A组TUNEL／PCNA大于B组，TUNEL／PCNA在肥大软骨细胞层大于成软骨细胞层，增殖层最大小。结论：细胞凋亡与细胞增殖在胎儿颗状突软发育中具有一定意义。     

软骨细胞增殖与凋亡在人重组白细胞介素-1β介导的颞下颌关节炎症损伤中的意义

目的:探讨细胞增殖与凋亡在人重组白细胞介素-1B介导的颞颌关节炎症损伤中的作用。方法:选用SD大鼠颞下颌关节腔内反复多次注射rhIL-1B,造成炎症损伤,利用免疫组织化学染色及原位末端标记法,观察炎症损伤过程中髁突软骨细胞增殖及凋亡的变化。结果:注射后1~30 d,实验侧髁突软骨增殖层PCNA阳性指数均较对照侧低,以1~7 d最明显;实验侧髁突软骨细胞凋亡数较对照侧多,主要分布于软骨增殖层及前肥厚层中,以1~7 d 最明显,15 d后凋亡细胞数明显减少,仅见个别凋亡细胞散在分布于软骨浅层。结论:rhIL-1B关节内注射不仅使髁突软骨细胞增殖受抑制,而且细胞凋亡也可能是rhIL-1B致关节损伤的途径之一,细胞增殖与凋亡协同参与了颞下颌关节炎症损伤的病理过程。     

雌激素及压力对髁突软骨细胞增殖与碱性磷酸酶活性联合效应的研究

目的:探讨雌激素及压力对髁突软骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性的联合刺激效应.方法:体外培养髁突软骨细胞分为对照、90kPa/1 h刺激、高、中、低浓度雌激素刺激及压力与各实验浓度雌激素联合刺激组,采用MTT法检测细胞增殖、酶动力学方法检测细胞ALP活性.结果:压力与雌激素都可促进MCCs的增殖与ALP活性,压力的存在并不影响外源性雌激素的促细胞增殖作用,但外源性雌激素可对压力的促增殖作用产生明显的抑制效应,双因素联合作用对ALP活性的促进作用最强.结论:雌激素与压力联合作用对髁突软骨细胞的增殖并不产生叠加效应,但对ALP活性显示出明显的叠加刺激效应.     

功能矫形前伸大鼠下颌后髁突软骨β转化生长因子-1(TGF-β_1)表达变化的研究

目的：检测快速生长期大鼠髁突软骨在功能矫形前伸下颌后β转化生长因子－１（ＴＧＦ－β１）分布的变化，探讨髁突软骨生长代谢的生长因子控制机理。方法：实验组戴模拟临床功能矫治器，引导大鼠下颌前伸，并在实验后不同时期处死大鼠，取下髁突，应用免疫组织化学方法探测ＴＧＦ－β１在髁突中的含量及分布。结果：髁突各层软骨细胞均有ＴＧＦ－β１的分布，以成熟层阳性强度最高；功能矫形前伸下颌后，髁突软骨细胞各层ＴＧＦ－β１的表达均增强。结论：ＴＧＦ－β１介导了功能矫形的机械刺激作用，使软骨细胞增生，分化功能增强，髁突软骨增生     

TGF-β1影响钛表面成骨细胞增殖分化的体外研究

目的动态观测TGF—β1和钛片表面微形态对胎鼠成骨细胞增殖分化的影响以及两者之间的相关关系。方法将传代后的成骨细胞接种于不同处理（机械打磨、喷砂处理TPS）钛片表面，加入外源性TGF-β1（浓度为10ng／ml）后MTT法检测细胞增殖，并检测细胞内ALP和细胞外OC的合成分泌状况；设置玻片对照组。结果外源性TGF—β1后对各组钛片表面的成骨细胞增殖均有不同程度的抑制作用，细胞接种后期抑制作用更明显。细胞接种早期，ALP活性和OC分泌量各实验组和对照组与未加因子相比有明显增加（P〈0．05）。细胞接种后期，成骨细胞ALP合成在机械组与未加因子相比明显减少（P〈0.05），喷砂组和TPS组则仍然增加；OC分泌量在机械组和对照组变化不明显，而喷砂组和TPS组OC分泌与未加因子相比明显增加（P〈0．05）。结论浓度为10ng／ml的外源性TGF—β1对不同钛片表面成骨细胞增殖有一定抑制作用。外源性TGF-β1和粗糙钛片表面对成骨细胞分化有一定协同促进作用。     

雌激素浓度对大鼠髁突软骨细胞中雌激素受体表达的影响

目的:探索有利于原代髁突软骨细胞生长、促进Ⅱ型胶原蛋白(collagen type Ⅱ,Col Ⅱ)表达的有效雌激素浓度.方法:提取4周龄雌性SD大鼠髁突软骨细胞,进行髁突软骨细胞鉴定,并测定细胞生长曲线.应用不同浓度雌激素对软骨细胞进行处理后,CCK-8试剂盒对软骨细胞增殖进行测定,实时定量PCR(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)技术测定软骨细胞雌激素受体(ertrogen receptor,ER)α、β和Col ⅡmRNA和蛋白的表达量.结果:与对照组相比,10-9mol/L的雌激素对软骨细胞增殖和ERα表达的促进作用优于其他组(P＜0.05);10-7mol/L的雌激素对Col Ⅱ的促表达作用优于其他组(P＜0.05);而雌激素浓度的变化会对ERβ的表达产生抑制作用,10-10mol/L较其他组为显著(P＜0.05).结论:雌激素在一定浓度下可促进髁突软骨细胞增殖及ERα和Col Ⅱ表达,抑制ERβ的表达.     

功能矫形前伸大鼠下颌后髁突软骨β转化生长因子— …

检测快速生长期大鼠髁突软骨在功能矫形前伸下颌后β转化生长因子分布的变化，探讨髁突软骨生长代谢的生长因子控制机理。结论：ＴＧＦ－β１介导了功能矫形的机械刺激作用，使软骨细胞增生，分化功能增强，髁突软骨增生。     

转化生长因子β1对A系小鼠胚腭突细胞增殖代谢的影响

目的 研究不同剂量转化生长因子β1(TGFβ1)对A系小鼠胚腭突细胞增殖和DNA、蛋白质及PGE2合成的影响。方法 实验分为9组，每组设平行4孔(瓶)，每组分别加入TGFβ1使其终浓度为0．005ng／ml，0．01ng／ml，0．05ng／ml，0．1ng／ml，0.5ng／ml，1ng／ml，5ng／ml，10ng／ml，50ng／ml，每组均设空白对照，在实验后第1、3、5天分别检测细胞的OD值、DNA、蛋白质和PGE2的含量。结果 在高浓度血清条件下，TGFβ1可显著刺激腭突细胞的增殖，但在低浓度血清条件下，TGFβ1对A系小鼠胚腭突细胞具有双重效应，即在其0．005～0．01ng／ml时促进腭突细胞增殖，而随着TGFβ1浓度的增大，逐渐抑制腭突细胞的增殖。TGFβ1使腭突细胞PGE2及蛋白质合成增加。结论 TGFβ1对A系小鼠胚腭突细胞的增殖具有双重作用，可能是腭突正常发育的重要调节因子。