siRNA阻断PPARγ基因表达预防酒精性股骨头坏死的实验研究

目的:观察靶向PPARγ基因siRNA腺病毒载体阻断酒精诱导兔骨髓基质细胞(MSCs)的成脂分化预防酒精性股骨头坏死(ONFH)的作用效果。方法:采用RNA干扰技术,构建重组PPARγ的siRNA腺病毒表达载体;将腺病毒载体感染家兔体外MSCs以及活体股骨头内MSCs,检测MSCs内PPARγmRNA及蛋白表达、甘油三酯、ALP活性和培养液骨钙素含量,并计数脂肪细胞;观察股骨头病理学变化。结果:干扰组体外MSCs内PPARγmRNA表达值、脂肪细胞数、甘油三酯、ALP活性值与骨钙素含量均接近正常,与模型组、感染空载体组、感染无关siRNA组间差异有统计学意义(P<0.05),与对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。活体实验干扰组股骨头内PPARγmRNA和蛋白均呈低表达、空骨陷窝计数、脂肪细胞及最大脂肪细胞平均直径未见明显增加,与正常对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:靶向PPARγ基因siR-NA腺病毒载体能够有效阻断酒精诱导的家兔体外MSCs及活体股骨头MSCs内PPARγ基因表达,阻止其成脂分化,预防酒精性ONFH的发生。     

葛根素预防酒精性股骨头坏死的实验研究

目的:从细胞学和动物学实验观察葛根素预防酒精性股骨头坏死的作用。方法:①细胞学实验:分离培养小鼠骨髓基质细胞,随机分为3组:A.模型组(给予酒精0.09mol/L处理细胞),B.实验组(酒精0.09mol/L和葛根素终浓度为0.01mg/ml),C.对照组(无酒精和葛根素)。苏丹Ⅲ染色,光镜下脂肪细胞计数;测定细胞内甘油三酯含量、碱性磷酸酶活性和细胞培养液中的骨钙素含量。10天后收集细胞,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,检测各组细胞中成脂转录因子PPARγ mRNA和成骨基因Osteocalcin mRNA的表达。②动物学实验:取4周龄健康昆明小白鼠300只,随机分为3组,A组:灌胃法给予烈性白酒(含乙醇46%)20mL/(kg.d),肌注Ns10ml/(kg.d);B组:同法给予等量白酒,肌注葛根素注射液0.5g/(kg.d);C组(对照组):同法给予普通饮用水20mL/(kg.d),肌注NS10ml/(kg.d)。于实验4、6、8、10个月分批处死动物,检测动物的血清学、肝脏和股骨头组织学、基因表达等变化。结果:(1)细胞学实验:上述处理细胞并培养21天后,实验组中脂肪细胞数量、细胞内甘油三酯含量均明显低于模型组(P<0.001),且与对照组差异不显著(P>0.05)。上述处理细胞并培养12天后实验组中细胞内碱性磷酸酶活性、细胞培养14天后培养液中骨钙素含量,均明显高于模型组(P<0.001),且与对照组差异不显著(P>0.05)。实验组和对照组细胞中PPARγmRNA的表达明显低于模型组(P<0.05),而对照组与实验组间的差异无显著性(P>0.05)。实验组和对照组细胞中OsteocalcinmRNA表达明显增高,分别是模型组的1.9倍和2.4倍(P<0.01),而实验组与对照组间的差异无显著性(P>0.05)。(2)动物学实验:实验6个月时:①3组血清CHO、TG、ALP分别为:(6.39±0.49)、(3.19±0.11)、(2.98±0.36)mmoL/L,(1.01±0.15)、(0.71±0.13)、(0.68±0.22)mmol/L,(161.6±32.44)、(196.5±31.52)、(203.4±22.83)IU。②A组出现脂肪肝,股骨头骨小梁变细稀疏,髓内造血组织减少,脂肪与空骨陷窝明显增多。B组股骨头内脂肪稍增加,空骨陷窝比正常C组少。3组最大脂肪细胞平均直径和空骨陷窝计数分别为(40.02±3.25)、(39.15±3.67)、(38.51±3.09)μm,(13.5±1.6)、(9.8±2.2)、(10.3±2.7)%。③A组中PPARγmRNA呈高表达,Osteocalcin mRNA呈低表达。B组和C组中PPARγ mRNA呈低表达,Osteocalcin mRNA呈高表达。始自6个月,A组各数据和B、C组间差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),B、C组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:葛根素能够对抗酒精的毒性作用,抑制酒精诱导骨髓基质细胞的成脂分化,维持其成骨分化,能够预防小鼠酒精性ONFH的发生。     

酒精对骨髓多能干细胞PPARγ及骨钙素mRNA表达的影响

目的 :观察酒精对骨髓多能干细胞 (D1细胞 )成脂转录因子 (PPARγ)mRNA和成骨基因骨钙素mRNA表达的影响。方法 :以不同浓度 (0 (对照组 ) ,0 .0 9,0 .15 ,0 .2 1mol/L)酒精处理D1细胞 14d ,苏丹ⅠV染色 ,采用计算机图像分析软件确定脂肪细胞百分比 ,采用RT PCR技术检测细胞中PPARγ及骨钙素mRNA表达。结果 :对照组脂肪细胞生成很少 ,酒精处理组脂肪细胞生成显著增多 ,脂肪细胞百分比随酒精浓度增大而增多 (P <0 .0 0 1)。各组与对照组PPARγmRNA表达差异无统计学意义。 0 .0 9,0 .15 ,0 .2 1mol/L酒精组骨钙素mRNA表达降低 ,分别比对照组减少 38%、4 3%和 5 4 % (P <0 .0 0 1)。结论 :酒精能够导致骨髓多能干细胞大量分化为脂肪细胞 ,可能是酒精在脂肪酸旁路代谢下游所起的作用 ,这可能与酒精性骨坏死的发生机制有关。     

成骨生长肽对成骨细胞样细胞的分化和成骨作用

目的"研究成骨生长肽(OGP)对大鼠成骨细胞样细胞的分化和成骨作用.方法"大鼠颅盖骨成骨细胞样细胞体外培养分实验组与对照组,实验组加OGP,分别测定细胞的Ⅰ型胶原mRNA和骨钙素mRNA表达、胶原和钙含量;测定细胞和培养液的碱性磷酸酶活性和骨钙素含量. 结果"实验组细胞的Ⅰ型胶原mRNA和骨钙素mRNA均高度表达,对照组相对较低;实验组细胞的胶原和钙含量、细胞和培养液的碱性磷酸酶活性和骨钙素含量均显著地高于对照组(P＜0.05,P＜0.001). 结论"OGP能上调成骨细胞样细胞的Ⅰ型胶原mRNA和骨钙素mRNA表达,增加细胞的胶原合成、分泌和钙盐沉积,由此促进成骨.     

辛伐他汀抑制乙醇诱导骨髓基质细胞成脂分化的实验研究初步报告

目的观察辛伐他汀抑制乙醇诱导骨髓基质细胞成脂分化的作用，探讨辛伐他汀治疗酒精性骨坏死的可能性。方法分离培养SD大白鼠骨髓基质细胞，随机分为三组：模型组：实验周期的前半程以含终浓度0．09mol／L乙醇的培养液培养，后半程停用乙醇；实验组：实验周期的前半程以含终浓度0．09mol／L乙醇的培养液培养，后半程停用乙醇，改以含终浓度1×10^-7mol／L辛伐他汀的培养液培养；对照组：全程以不加乙醇和辛伐他汀的培养液培养。镜下观察细胞变化，测定细胞培养液中骨钙素含量、细胞内ALP活性及甘油三酯含量。结果按上述处理细胞并培养14d后，实验组中细胞内碱性磷酸酶活性、培养液中骨钙素含量均高于模型组（P〈0．05），与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。上述处理细胞并培养21d后，实验组中脂肪细胞数量、细胞内甘油三酯含量均低于模型组（P〈0．05），与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论可以认为辛伐他汀能抑制乙醇诱导骨髓基质细胞分化为脂肪细胞，促进成骨分化，可能有治疗酒精性骨坏死的作用。     

葛根素抑制酒精导致细胞成脂分化研究的初步报告

目的探讨葛根素对酒精诱导人骨髓间充质细胞（MSCs）成脂分化的抑制作用。方法采用梯度离心法分离、培养人MSCs。取传代细胞,随机分为三组：对照组、模型组（酒精组）和实验组（酒精＋葛根素）。检测细胞内碱性磷酸酶（AIP）活性;油红“0”染色,脂肪细胞计数。结果分组干预10d,模型组细胞内ALP活性[（27±10）U／100mg蛋白]明显降低,显著低于实验组[（40±10）U／100mg蛋白]和对照组[（39±9）U／100mg蛋白],P〈0．05。实验组细胞内AIJP活性,与对照组比较差异无统计学意义,P〉0.05。干预21d,模型组脂肪细胞最多,实验组较模型组明显减少（P〈0．05）,对照组几乎无脂肪细胞出现。结论葛根素能抑制酒精诱导成人MSCs向脂肪细胞分化,保持其成骨分化能力。     

辛伐他汀对酒精诱导大鼠骨髓基质细胞成脂及成骨基因表达的影响

目的观察辛伐他汀对酒精诱导大鼠骨髓基质细胞成脂及成骨基因改变的影响,探讨辛伐他汀治疗酒精性骨坏死的可能性。方法分离培养SD大白鼠骨髓基质细胞（MSCs）,随机分为三组：模型组：第1周以含终浓度0．09mol／L酒精的培养液培养,第2周停用酒精,实验组：第1周以含终浓度0．09mol／L酒精的培养液培养,第2周停用酒精,改以含终浓度1×10^-7mol／L辛伐他汀的培养液培养;对照组：全程以不加酒精和辛伐他汀的培养液培养。于实验第14天时收集细胞,以RT—PCR检测细胞中过氧化物酶体增殖子激活受体-γ（PPARγ）mRNA和骨钙素（OC）mRNA的表达。实验数据以均数±标准差（x^-±S）表示,采用SPSS10．0软件进行统计学分析,多组间比较采用单因素方差分析,样本均数间的两两比较采用LSD—t检验,检验水准仪=0．05。结果与对照组比较,模型组细胞PPARγmRNA表达水平明显升高（P〈0．05）,实验组细胞PPARγmRNA表达水平稍高（P〉0．05）;与对照组比较,模型组OCmRNA表达水平明显降低（P〈0．05）,实验组OCmRNA表达水平稍低（P〉0．05）。结论辛伐他汀能抑制酒精诱导MSCs成脂基因表达,对抗或解除酒精对MSCs的成骨分化的抑制而增加成骨基因表达,可能有治疗酒精性骨坏死的作用。     

雌二醇对骨髓基质细胞核结合因子以基因表达的影响

目的 :研究骨髓基质细胞 (MSCs)在向成骨细胞(OB)分化的条件培养体系中 ,17β 雌二醇 (E2 )对其核结合因子α1(corebindingfactorα1,Cbfα1)基因表达的影响 ,探讨E2对OB生成的作用及绝经后高转换骨代谢的可能机制 .方法 :取自 3mo龄雌性SD大鼠MSCs在生长培养基中传代后 ,用1,2 5 (OH) 2 D3 和地塞米松 (DEX)诱导MSCs向OB分化 .应用半定量RT PCR技术 ,观察不同浓度E2 对MSCs分化过程中Cbfα1mRNA表达的影响 ;以α 磷酸奈酚为底物 ,测定细胞碱性磷酸酶 (ALP)的活性 ;VanGieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量 .结果 :E2 能明显抑制MSCs分化过程中Cbfα1mR NA的表达 ,从 (2 3.4± 1.8) %降至 (15 .8± 1.5 ) %和 (5 .8± 0 .8) % (P <0 .0 5 ) ;细胞ALP活性随E2 浓度增加而降低 ,从(70 6± 37)nkat·g-1(protein)降至 (6 3± 5 )nkat·g-1(P <0 .0 5 ) .E2 降低细胞Ⅰ型胶原的合成 ,用VanGieson染色细胞 ,随着E2 浓度的增加 ,胞质染色由鲜红、淡红到黄色 .结论 :E2能明显抑制MSCs分化过程中Cbfα1mRNA的表达 ,减少OB的生成 .     

成骨生长肽对成骨细胞样细胞的分化和成骨作用

目的 研究成骨生长肽（ＯＧＰ）对大鼠成骨细胞样细胞的分化和成骨作用。方法 大鼠颅盖成骨细胞样细胞休外培养分实验组与对照组,实验组加ＯＧＰ,分别测定细胞的Ｉ型胶原ｍＲＮＡ和骨钙素ｍＲＮＡ表达、胶原和钙含量;测定细胞和培养液的碱性磷酸酶活性的骨钙素含量。结果 实验组细胞的Ｉ型胶原ｍＲＮＡ和骨钙素ｍＲＮＡ均高度表达,对照组相对较低;实验组细胞的胶原和钙含量、细胞和培养液的碱性磷酸酶活性和骨钙素含量均显著     

COA: siRNA靶向PPARγ基因重组腺病毒穿梭载体对激素诱导兔骨髓间充质干细胞成脂分化的抑制作用

背景：激素是诱发股骨头坏死（osteonecrosis of the femoral head,ONFH)的重要原因之一,可导致骨细胞内脂肪沉积而变性坏死从而抑制成骨分化及骨的形成。过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPARγ)是一种成脂转录因子,ONFH的发生与PPARγ在骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）的高表达有密切关系。BMSCs具有分化为成骨细胞与脂肪细胞的潜能,BMSCs内PPARγ高表达,则BMSCs分化为脂肪细胞。因此,通过RNA干扰（RNA interference,RNAi）调控PPARγ的表达可抑制BMSCs的脂肪分化,保持MSCs的成骨分化特性。 方法：取新西兰大白兔骨髓,制备兔BMSCs,并随机分6组。S1、S2、S3：干扰1、2、3组,Con：感染无关siRNA组,M：模型组,N：正常组。10-7mol/L地塞米松诱导和siRNA病毒载体感染细胞,倒置显微镜观察BMSCs的形态及生长情况,在第1d、3d、5d、7d时,检测各组BMSCs内PPARγ、osteocalcin和Runx2 mRNA及蛋白的表达。14d时,检测细胞内甘油三酯( triglyceride,TG )含量、细胞培养液中骨钙素(osteocalcin,OC)分泌量和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性。21d,苏丹Ⅲ染色BMSCs,并在显微镜下作脂肪细胞计数。 结果：M组和Con组中PPARγ mRNA及其蛋白表达、TG含量和脂肪细胞计数均明显高于N组(P <0.05),而Osteocalcin和Runx2 mRNA及其蛋白表达、培养液中OC含量和细胞内ALP活性明显低于N组(P <0.05)。S1、S2、S3组中PPARγ mRNA及其蛋白表达显著低于M组和Con组(P <0.05),接近N组 (P>0.05),其中S2组的干扰作用最强。 结论：siRNA靶向PPARγ基因腺病毒穿梭载体能够有效抑制激素诱导的BMSCs成脂分化,维持BMSCs成骨分化。     

Dexamethasone-induced adipogenesis in primary marrow stromal cell cultures: mechanism of steroid-induced osteonecrosis

Background In steroid-induced osteonecrosis, hypertrophy and hyperplasia of marrow fat cells and lipid deposition of osteocytes can be found in the femoral head. However, the precise reason is not clear yet. The aim of this study was to observe the effect of dexamethasone （Dex） on differentiation of marrow stromal cells （MSCs）, and to investigate the pathobiological mechanism of steroid-induced osteonecrosis. Methods MSCs in cultures were treated with increasing concentrations of Dex （0, 10^-9, 10^-8, 10^-7, and 10^-6 mol/L） continuously for 21 days. The cells, which were exposed to 0 mol/L （control） or 10^-7 mol/L Dex for 4-21 days, were then cultured for 21 days without Dex. MSCs were stained with Sudan Ⅲ. Number of adipocytes was counted under a light microscope. The activity of alkaline phosphatase （ALP） of MSCs treated with 0, 10^-8, 10-7, and 10^-6 mol/L Dex for 12 days, and that treated with 0 mol/L and 10^-7 mol/L Dex for 8, 10, or 12 days were determined. The levels of triglycerides, osteocalcin and cell proliferation of MSCs treated with 0 mol/L and 10^-7 mol/L Dex were detected. The mRNA expression levels of adipose-specific 422（aP2） gene and osteogenic gene type I collagen in MSCs treated with 0 mol/L and 10^-7 mol/L Dex for 6 days were analyzed by whole-cell dot-blot hybridization. Statistical analysis was performed using Student＇s t test and analysis of variance. P values less than 0.05 were considered significant statistically. Results The number of adipocytes in cultures increased with the duration of MSCs＇ exposure to Dex and the concentration of Dex. The level of ALP activity in the MSCs decreased with concentration of Dex. In the control group, it was 8.69 times of that in the 10^-7 mol/L Dex group on day 12 （t=20.51, P〈0.001）. The level of triglycerides in 10^-7 mol/L Dex group was 3.40 times of that in the control （t=11.00, P〈0.001）. The levels of cell proliferation and osteocalcin in the control were 1.54 and 2.42 times of that in the 10^-7 mol/L Dex group respectively. As compared to the control, the mRNA expression of adipose-specific 422（aP2） gene in 10^-7mol/L Dex group was significantly increased （t=36.48, P〈0.001）, and that of osteogenic gene type I collagen was decreased （t=42.07, P〈0.001）. Conclusions Dex can directly induce the differentiation of MSCs into a large number of adipocytes and inhibit their osteogenic differentiation, which provide a novel explanation for the pathologic changes of steroid-induced osteonecrosis.     

兔骨髓间充质干细胞的体外分离培养及鉴定

目的：观察兔骨髓间充质干细胞（BMSCs）生长特性及潜在分化潜能,为组织工程中种子细胞选择提供实验基础。方法：应用全骨髓贴壁法分离培养兔BMSCs,相差显微镜下观察其生长特点,应用流式细胞术对第三代细胞进行表面抗原鉴定。经成脂和成骨诱导液体外诱导兔BMSCs向脂肪细胞、成骨细胞分化,对诱导2周后的细胞进行油红O染色、茜素红染色、Van-kossa银染染色及碱性磷酸酶染色。结果：经流式细胞术鉴定,全骨髓贴壁法可获得兔BMSCs,第三代兔BMSCs生物特征基本一致并能诱导分化为脂肪细胞及成骨细胞,成脂诱导后油红O染色细胞内出现红色脂滴,成骨诱导后茜素红染色、Vankossa银染均可观察到矿化结节。碱性磷酸酶活性染色对照组呈弱阳性,诱导组呈强阳性。结论：全骨髓贴壁法是分离培养兔BM-SCs简便可行的方法。BMSCs来源丰富并有成脂及成骨潜能,是组织工程的优良种子细胞。     

熊果酸对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型CAP表达的影响

目的：观察熊果酸对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖消耗、摄取及细胞分化的影响,并探讨其作用机制。方法：将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞,用高糖、高胰岛素联合诱导胰岛素抵抗模型。使用葡萄糖氧化酶法检测3T3-L1细胞葡萄糖消耗量,氚标葡萄糖法检测其葡萄糖摄取量,以评价模型建立情况。用四唑盐（methylthiazolyltetrazolium,MTT）比色法检测不同浓度熊果酸对3T3-L1脂肪细胞活力的影响以确定实验药物浓度。加入不同浓度熊果酸分组干预,用氚标葡萄糖法检测脂肪细胞葡萄糖摄取量;用油红O色法检测3T3-L1脂肪细胞分化情况;用实时荧光定量聚合酶链反应法、蛋白质印迹法分别观察熊果酸对3T3-L1细胞胰岛素抵抗模型细胞分化相关蛋白脂肪细胞脂类结合蛋白、基质金属蛋白酶1和原癌基因Cbl相关蛋白（c-Cbl-associatedprotein,CAP）表达的影响。结果：在成功建立胰岛素抵抗模型的基础上,使用MTT法检测细胞活力。确定熊果酸的作用浓度在4～20μmol／L。与模型组相比,低、高剂量熊果酸组（10、20μmol／L）及罗格列酮组（5μmol／L．）葡萄糖摄取均明显升高（P〈0．01）;低、高剂量熊果酸组3T3-L1脂肪细胞分化程度低于对照组和罗格列酮组。熊果酸可明显上调3T3-I,1细胞胰岛素抵抗模型CAPmRNA及蛋白的表达（P〈0．01）。结论：熊果酸改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型糖代谢的同时可抑制其分化,这一机制可能与熊果酸上调脂肪细胞CAP的表达有关。     

全骨髓培养法对大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定

目的探讨一种易操作、高效的分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的方法。方法采取全骨髓培养法分离和纯化大鼠MSCs,用显微镜观察细胞形态,用流式细胞仪检测mMSCs纯度和形态特征,观察MSCs在不同诱导条件下向成骨细胞及脂肪细胞分化的能力。结果全骨髓培养法培养的MSCs具有良好的贴壁性,形态均一,流式细胞仪检测:CD45、CD90分别为1.3%、98.6%。第3代MSCs经适当诱导后可向成骨细胞和脂肪细胞分化。结论全骨髓培养法从大鼠骨髓中分离培养出的MSCs纯度较高,稳定性好,且操作相对简便。     

PPARγ基因修饰对兔骨髓间充质干细胞成脂分化及ADRP、LPL表达的影响

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）基因转染对免骨髓间充质干细胞（MSCs）向脂肪细胞分化的影响,探讨PPARγ在脂肪细胞早期分化中可能的调控机制。方法原代培养新西兰大白兔MSCs,应用脂质体介导法将pEGFP-N1-PPARγ表达载体转入MSCs中,G418筛选。分成不诱导组、空转染诱导组及转染诱导组以成脂诱导剂诱导分化,每日观察细胞形态学变化,镜下计数并计算脂肪细胞分化率,采用RT-PCR方法检测脂肪分化相关蛋白（ADRP）、脂蛋白脂酶（LPL）mRNA表达,Western blot检测ADRP、LPL蛋白表达。结果不诱导组细胞内没有脂滴出现,空转染诱导组和转染诱导组部分细胞成功分化为脂肪细胞,转染诱导组分化率明显高于空转染诱导组（P〈0.05）;不诱导组ADRP、LPLmRNA及蛋白均不表达,转染诱导组ADRP、LPLmR-NA及蛋白表达水平显著高于空转染诱导组（P〈0.05）。结论PPAR-γ基因转染MSCs可促进其向脂肪细胞分化,增强其分化能力,可能与促进ADRP、LPL基因和蛋白的表达有关。     

VEGF-165基因修饰的MSCs诱导分化后治疗兔股骨头缺血性坏死的实验研究

目的：探讨VEGF-165基因联合单纯骨髓间充质干细胞（marrow mesenchymal stemcells,MSCs）治疗激素性股骨头坏死的可行性。方法：1）体外分离、培养兔MSCs,纯化并鉴定兔MSCs;免疫荧光法检测细胞表面标志;传代培养后以1μgPeDNA3．1-hVEGF165：3μl阳离子脂质体Lipofectamine的比例转染,通过ELISA检测转染后细胞中外源性VEGF的表达。2）测定在正常条件培养和成骨备件培养下,转染后细胞上清中碱性磷酸酶、骨钙素的水平。3）实验动物连续三天大剂量（40mg／kg）臀部肌肉注射甲泼尼龙琥珀酸钠,通过MRI和组织病理学检查,建立动物模型。4）随机分成4组,每组14只。经皮穿刺于右侧股骨头,（1）生理盐水组,（2）单纯MSCs组,（3）hVEGF165基因转染MSCs组,（4）诱导分化后的hGVEF165基因转染MSCs组。8周后,组织病理学检查成骨和细胞成活情况。结果：1）hVEGF165基因转染的MSCs能成功分泌VEGF蛋白。2）成骨条件培养下,基因转染组细胞碱性磷酸酶和骨钙素的分泌量明显高于未转染组（P〈0．05）;而在正常条件培养下,基因转染组细胞碱性磷酸酶和骨钙素的表达分泌量较低。3）成功建立ANFH模型。4）组织学评分：生理盐水组1．8±0．72;单纯MSCs组8．54±0．37;hVEGF165基因转染MSCs组11．96±0．26;诱导分化后的hGVEF165基因转染MSCs组13．7±0．43,各组间差异有显著性（P〈0．05）。诱导分化转基因干细胞组与单纯干细胞组和生理盐水组之间差异非常显著（P〈0．01）。结论：诱导分化后的hVEGF165基因转染MSCs组成骨能力更好,修复股骨头缺血性坏死的能力也是最强。     

QY1骨髓多能间质干细胞系多向分化潜能的检测

目的:检测QY1骨髓间质干细胞系在体外向脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞、心肌细胞、血管内皮细胞和神经细胞分化的能力.方法:选用第5代QY1骨髓间质干细胞系,分别用成脂培养基、成软骨培养基、成骨培养基、5–氮胞苷、血管内皮生长因子、神经细胞培养液(诱导液1为10mmol/L β-巯基乙醇;诱导液2为2%二甲基亚砜和10-8mol/L地塞米松)对其进行定向诱导分化.采用染色法、免疫组化法、RT-PCR法鉴定分化后的细胞.结果:在成脂培养基培养21d左右出现大量含脂滴的脂肪细胞,苏丹III染色法检测脂肪细胞胞浆呈桔红色.在成软骨培养基培养21d左右有软骨结节形成,阿尔新蓝染色法将软骨结节染为深蓝色.在成骨培养基培养35d左右有凸出的骨结节形成,Von Kossa染色法显示有黑色矿化结节形成.在10μmol/L 5–氮胞苷诱导液中能出现自发性搏动的心肌细胞和肌管样结构,免疫组化法显示心肌特异性的表面抗体α-横纹肌肌动蛋白、心肌连接蛋白-43表达阳性,RT-PCR法检测有心肌特异性因子α-肌球蛋白重链表达.在含有50ng/mL血管内皮生长因子的诱导液中能出现呈直线排列的血管内皮细胞和血管内皮细胞网状结构,免疫组化法显示血管内皮特异性表面抗体CD31和VIII因子表达阳性.神经诱导液1处理组出现神经元,免疫组化法显示胶质纤维酸性蛋白表达阴性,神经元特异性核蛋白表达阳性;神经诱导液2处理组出现神经胶质细胞,免疫组化法显示胶质纤维酸性蛋白表达阳性,神经元特异性核蛋白表达阴性.结论:本研究证实QY1骨髓间质干细胞系细胞具有分化为脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞、心肌细胞、血管内皮细胞、神经元和神经胶质细胞的潜能,提示QY1骨髓间质干细胞系具有向多个胚层、7个方向分化的多向潜能.