抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备及筛选

目的获得稳定、高效分泌抗氯霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法以CAP-HS-BSA免疫BALB/c小鼠,用细胞融合技术筛选抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞,体内诱生腹水法大量制备单抗。捕获ELISA法测定小鼠免疫球蛋白亚型,间接ELISA法测定腹水效价;用两步硫酸铵法和G蛋白亲和层析法来纯化腹水。结果成功建立了一株分泌抗CAP单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞4D10。经检测,其分泌的抗体亚类为IgG1,杂交瘤染色体数目90-110条,间接ELISA检测诱生小鼠腹水的抗体效价达1∶2.56×105,纯度达95%,该细胞连续培养生物学性状稳定。结论成功制备的抗氯霉素单克隆抗体4D10效价高、纯度高,为利用该单抗研制检测氯霉素残留试剂盒提供原材料。     

抗HBsAg单克隆抗体的制备与生物学特性的鉴定

目的:制备分泌抗HBV S蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并鉴定其特性,为建立快速诊断HBV感染的方法奠定基础.方法:以重组乙肝疫苗免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合建立了能稳定分泌抗HBsAg单抗的杂交瘤细胞株,利用间接ELISA技术和Western blot进行单抗特异性的鉴定,同时采用间接ELISA方法鉴定mAb的Ig亚类,检测mAb的效价及相对亲和力.结果:获得1株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞4D2,其抗体亚类为IgG1型,腹水效价为1:10(6),相对亲和力在10(5)以上.结论:成功地制备出抗HBV S蛋白的单克隆抗体,为建立快速特异检测HBV感染的实验方法提供了有力的工具.     

猪链球菌反应调节因子CovR单克隆抗体的制备与鉴定

目的CovR是一个全局性反应调控因子,对猪链球菌的致病性具有重要调控作用。文中制备抗2型猪链球菌（Streptococcus suis serotype2,S.suis2）反应调节因子CovR蛋白单克隆抗体（mAb）,以便对CovR的调控机制进行系统研究。方法以基因工程重组CovR蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫后的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选可稳定分泌抗CovR mAb的杂交瘤细胞株。通过间接ELISA法和Western blot鉴定抗CovR mAb的特异性后,制备小鼠腹水并测定单抗腹水的抗体效价。单抗分型ELISA鉴定抗CovR单克隆抗体IgG亚类。结果获得2株能稳定分泌抗CovR mAb的的杂交瘤细胞株1A4和4D7,其培养上清抗体效价分别为1∶800、1∶1600,其相应单抗腹水的抗体效价分别为1∶819200、1∶1638400。mAb 1A4和4D7IgG亚类分别为IgG2b、IgGl。结论成功制备了抗CovR mAb,为进一步研究CovR的调控机制奠定了基础。     

Monoclonal anti-idiotype antibody bearing the internal image of nasopharyngeal carcinoma associated antigen

目的　制备和鉴定具有鼻咽癌相关抗原内影像的抗独特型单克隆抗体 (Ab2 )。方法　用鼻咽癌单抗 (Ab1)免疫小鼠 ,免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2 / 0融合获得杂交瘤细胞系。用SandwichELISA和结合抑制试验筛选阳性克隆。为进一步证实Ab2是否具有鼻咽癌相关抗原的内影像 ,用Ab2免疫小鼠获得抗血清 ,以ELISA和竞争抑制试验检测Ab3。用迟发性变态反应和T细胞增殖试验检测Ab2诱导的细胞免疫反应。结果　选用两株抗鼻咽癌单抗FC2、HNL5 (Ab1)为免疫原 ,制备两株抗相应Ab1独特型的抗独特型抗体 2H4和5D3(Ab2 )。 2H4、5D3能分别与FC2、HNL5特异性结合 ,并能抑制相应Ab1与靶细胞HNE2的反应 ,诱导产生能与相应Ab1竞争结合靶抗原的抗抗独特型抗体 (Ab3)。并能诱发特异性迟发型超敏反应 (DTH)和细胞增殖反应。结论　抗独特型抗体 2H4、5D3具有鼻咽癌相关抗原的内影像 (Ab2 β) ,能模拟鼻咽癌相关抗原诱导体液和细胞免疫反应。     

抗PLC/PRF/5肝癌细胞单克隆抗体及其部分特性研究

本文采用杂交瘤技术获得了3株分泌抗PLC/PRF/5细胞的单克隆抗体杂交瘤细胞株,经间接ELISA和间接免疫荧光法检测证实,所分泌的抗体为抗PLC/PRF/5肝癌细胞的单抗,具有较好的细胞特异性。3株中2株属IgG_1亚美,1林分泌IgG_2a亚类抗体。     

鼠抗早孕因子单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备鼠抗早孕因子（EPF）单克隆抗体,纯化并进行鉴定。方法用重组EPF免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术获得抗EPF杂交瘤细胞株,注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水型单抗,Protein-G亲和层析纯化后,SDS-PAGE电泳鉴定其纯度,用间接ELISA法测抗体效价,ELISA相加试验测定抗原表位,用Western blotting鉴定其特异性,并进行类及亚类、细胞染色体核型分析。结果筛选出2株具有较高活性和良好稳定性的分泌抗EPF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其腹水的抗体效价均高于2×10^-5,2株单抗均为IgG类IgG1亚类,轻链类型均为κ,细胞核型分析符合杂交瘤细胞特征,特异性良好,2株单抗有不同的抗原表位。SDS-PAGE电泳显示纯化后抗体有较高的纯度,Western blotting表明其与EPF抗原有特异结合性。结论成功制备2株具有较高活性的鼠抗EPF单克隆抗体,为建立检测EPF方法奠定了良好的基础。     

重组人内抑素单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备抗重组人内抑素(ES)单克隆抗体(McAb)并进行鉴定。方法利用重组人ES为抗原,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫小鼠的脾细胞与同源小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,间接ELISA法对细胞培养上清进行筛检,对能稳定分泌抗重组人ES的细胞株,进行扩大培养。体内诱生法制备腹水并对其初步鉴定。结果获得3B4、1D10、1G5、2D10,4株能稳定分泌抗重组人ESMcAb的杂交瘤细胞株,并对3B4和1D10两株给予鉴定,其免疫亚型为IgG2a、IgG3。腹水ELISA效价为10-6、10-5。通过蛋白免疫印迹法和免疫组化证明抗体有特异性和敏感性。结论成功制备分泌抗重组人ES的杂交瘤细胞株,为研究人ES的表达及相关领域奠定了基础。     

甲型H1N1流感病毒单克隆抗体的制备及其功能研究

目的获得分泌特异性抗H1N1亚型（A/California/04/2009）猪流感病毒单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞并探索其分泌抗体的功能。方法以表达血凝素蛋白H1（A/California/04/2009）的DNA疫苗为免疫原,免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与NS1骨髓瘤细胞进行细胞融合,通过间接ELISA筛选分泌抗H1N1亚型（A/California/04/2009）抗体的杂交瘤细胞,进一步亚克隆筛选单一、稳定分泌其抗体的细胞株。结果获得能稳定分泌抗流感病毒血凝素H1亚型的单克隆抗体杂交瘤4株,分别命名为41H2、68E5、41E7和26D11。其中68E5、41E7和26D11为IgG1（K）,41H2为IgG2a（K）。运用Lenti-pseudovirus方法测试显示,26D11可识别结构性位点,具有H1N1（A/California/04/2009）专一性较强的中和能力,是中和性抗体。Western blot检测显示,41H2和41E7为阳性,识别线性位点。特异性实验表明,26D11只与H1（A/California/04/2009）亚型流感病毒发生特异性反应,而不与其他16个HA亚型流感病毒发生交叉反应,显示出良好的特异性。结论用单克隆抗体杂交瘤技术成功制备了甲型H1N1流感病毒的单克隆抗体。     

抗FLT3受体单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗FLT3受体的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以PET46-FLT3-His-tag表达蛋白作为免疫原免疫BALB／C小鼠,取其脾细胞与SP2／0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗FLT3受体的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA、Western blot、免疫组化对此抗体特性进行鉴定。结果筛选到两株能稳定分泌抗FLT3受体单克隆抗体的细胞株5F381181和D3H2C12,亚类鉴定两种单抗为IgG1,ELISA法测定两株细胞腹水抗体效价分别为1：409600和1：102400,抗体相对亲和力为7．85×10^6L／mol。Western blot显示抗体能特异识别免疫原。细胞免疫组化显示此单抗可以特异的识别急性髓系白血病病人骨髓中原始细胞表达的FLT3受体。结论成功制备抗FLT3受体单克隆抗体,为进-步研究其与白血病等血液疾病的关系奠定了基础。     

HIV-1抑制蛋白N-SRCR单克隆抗体的制备与鉴定

目的唾液凝集素（salivary agglutinin,SAG）的主要结构域蛋白N—SRCR能够抑制HIV-1感染细胞。为了对N—SRCR和HIV-1病毒的作用机制进行系统研究,文中诱导制备并分离了抗N-SRCR蛋白的单克隆抗体（mAb）。方法以CHO细胞表达的纯化蛋白N-SRCR免疫4周龄BALB／c小鼠,末次加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0-Ag-14融合,应用间接ELISA筛选分泌N—SRCR抗体的阳性杂交瘤细胞。用HiTrapProteinG柱纯化IgG抗体,SDS—PAGE检测纯化效果,间接ELISA确定效价,Western blot鉴定抗体特异性。结果获得1株稳定分泌抗N—SRCR蛋白的杂交瘤细胞株,命名为1D6。SDS-PAGE结果显示IgG抗体纯度较高,ELISA测定1D6抗体效价大于100×2^5。结论成功制备了抗N-SRCR的单克隆抗体,为进一步研究N—SRCR的生物学功能以及SRCR结构域与HIV-1囊膜蛋白gp120的相互作用提供了实验材料。     

Preparation and Identification of Rat Monoclonal Anti-idiotope Antibody to the Antibody against Erythrocytic Stages of Plasmodium Falciparum

A hybridoma cell line secreting monoclonal antibody to idiotope of the monoclonalantibody 94D1 specific for asexual erythrocytic stages of Plasmodium falciparum was established byfusion of SP2/0 mouse myeloma cells with spleen cells of Wistar rats immunized with monoclonalIgG of 94D1 purified from ascitic fluid of BALB/C mouse by affinity chromatography on ProteinA- Sepharose CL- 4B. Specificity of the anti - idiotope antibody (anti - Id), 41RF5, was deter-mined with indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The results showedthat 41RF5 reacted only with 94D1 IgG2b, not with normal mouse IgG and other seven mousemonoclonal antibodies - five specific for erythrocytic stages of P. falciparum, one for erythrocyticstages of P. inui, and one for Dengue fever virus type III, which indicates that 41RF5 does recognizespecifically the idiotope of 94D1 monoclonal antibody. In 41RF5 heterohybrid culture supernatant,anti-Id titre measured by ELISA was above 1:1 280. Up to the present, the heterohybrid cell linehas been cultured stably for 16 months.     

5株抗恶性疟McAb的免疫荧光特性及其靶抗原鉴定

本文观察了5株抗恶性疟McAb的免疫荧光特性,并对其抗原进行了鉴定。结果表明5株McAb主要与恶性疟原虫红内期发育晚期虫体的表面膜抗原发生免疫反应,免疫荧光图象为明亮的点状、均匀片状和蜂窝状。它们在对靶抗原的识别上与免疫荧光的特点呈现一致性,主要能识别恶性疟原虫红内期发育晚期虫体的~(125)Ⅰ-表面标记抗原,其中McAbs 93A_3、94B_5、92D_4和93D_4主要识别分子量为125、115、83、74和67KDa的表面抗原,而McAb94D_1则主要识别分子量为200和19KDa的抗原。     

Studies on monoclonal anti-idiotypic antibodies to human B cell leukemia

Murine immunocytoma cell line, NS-1, was fused with spleen cells of Balb/C mice which had been stimulated by tolerogenic disaggregated human gamma globulin and immunized by purified serum IgM from the patient with chronic B cell leukemia (B-CLL). 10 hybridoma cell lines secreting monoclonal anti-idiotype (anti-Id) antibodies to human CLL were obtained. The McAbs were subclasses belonging to IgM and of IgG mouse. Specificity and biologic characters of the monoclonal anti-Id antibodies from culture fluid or ascites were assayed by ELISA, indirect mixed ELISA sandwich, ELISA inhibition, immunofluorescence (IF) and IF inhibition. The study also proved that monoclonal anti-Id antibodies could react with homologous IgM, but not with Ig from normal donors or a panel of patients with myeloma. The results of IF and IF inhibition assay showed that monoclonal anti-Id antibodies were bound to lymphocytes of patient with B-CLL. Their reactivity was inhibited by homologous IgM, but not by lymphocytes of patients with ALL or lymphoma. Monoclonal anti-Id antibodies were heterogenous reactive patterns with cell lines in vitro.     

抗TG独特型抗体对小鼠脾细胞抗体分泌的免疫调节

用鼠抗人甲状腺球蛋白(TG)单克隆抗体(18A_1,IgG_1)免疫家兔,抗血清流穿正常小鼠 Ig 与无关单抗(MIg-Lp-1-32)亲和层析柱,吸除抗同种型、同种异型抗体。经 ELISA 竞争抑制、中和抑制试验证明制备出抗 TG 独特型抗体(ATG-Ab_2)。ATG-Ab_2与 TG 免疫小鼠的脾细胞体外作用18h,能特异地抑制小鼠脾细胞分泌抗 TG,而对经 Fn 免疫的小鼠脾细胞分泌抗 Fn 无影响,表明其具有下调节免疫的作用。     

分泌抗活化小鼠T细胞抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用Con A活化的小鼠脾脏细胞免疫同品系动物(BALB/c鼠),取免疫鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,选择了一株有分泌抗活化小鼠T细胞抗原抗体的杂交瘤细胞,经有限稀释法连续4次克隆化。采用ELISA法分析,初步证实该杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体(McAb)与Con A 活化的小鼠脾细胞的结合反应明显高于与未经活化的其他细胞(胸腺细胞、肠系膜淋巴结细胞、脾细胞)的反应。用琼脂双扩散法证明该MeAb属于小鼠IgG类。     

抗人子宫颈癌单克隆抗体的制备及其特征的初步研究

应用单克隆抗体技术制备具有未经纯化的肿瘤细胞抗原中某种特异或相对特异抗原的单克隆抗体,这对肿瘤免疫的理论研究和实际应用均有重要意义。关于人宫颈癌单克隆抗体国外已有报道并已有人—人细胞融合产生的抗宫颈癌单克隆抗体,但国内尚无报道.本研究以人子宫颈癌细胞株CC-801为抗原免疫小鼠,制备出抗人子宫颈癌杂交瘤细胞株CEB9,并对其分泌的单克隆抗体进行了初步的鉴定.     

Identification of Target Antigens of Asexual Blood Stages of Plasmodium falciparum

Seven monoclonal antibodies (McAbs) specific for Plasmodium falciparum (Pf), humanimmune sera of three individuals, two adults and one child, living in a malaria endemic area inHainan Island of China and immune sera of BALB/c mice immunized with the erythrocytic stages ofPF were used to identify the target antigens of asexual blood stages of Pf. The ~(125)I-labeled surfaceantigens with apparent molecular weights of 125, 115, 83, 74 and 67 KDa were mainly recognizedby McAbs 93A3, 94B5, 92D4 and 93D4, but the ~(125)I-labeled surface antigens of 200 and 19 KDawere recognized by McAb 94Dl alone. In addition, the ~(35)S-methionine- labeled target antigens of183, 125, 83 and 55 KDa were also recognized by McAbs 93A3, 94B5 and 94C3. The McAb21E3 against the culture supernatant antigen of Pf only recognized the antigen of 125 KDa labeledwith ~(15)S-methionine. The human immune sera from the adulst living in a malaria endemic area andmouse immune sera not only immunoprecipitated the target antigens which were recognized by theMcAbs but also immunoprecipitated the polypeptides of 140, 100 and some lower - molecularweight. But these target antigens recognized by McAbs, adult immune sera of and mouse immunesera could not be immunoprecipitated by human immune serum of the child with a primary infec-tion. With the antigen competition assay, the unlabeled antigens of Pf could strongly inhibit the im-mune reaction between the McAbs and the ~(125)I-labeled antigens of Pf. It suggested that the antigensrecognized by McAbs and polyvalent immune sera were specific target antigens.     

抗人TPO单克隆抗体的制备

目的：制备抗人血小板生成素（hTPO）单克隆抗体，用于建立ELISA方法和检测TPO的表达。方法：用基因重组的hTPO免疫Balb／c小鼠，常规法做细胞融合，用ELISA法筛选出阳性杂交瘤细胞株。结果：获得一杂交瘤细胞株（46-6），其免疫球蛋白亚类为IgG1经ELISA和免疫印迹技术证明，此单抗能特异识别TPO。结论：46－6单克隆抗体（McAb）特异性强。用其建立的夹心ELISA检测TPO的方法线性好，灵敏度可达50ng／L。     

抗HLA-B27单克隆抗体的制备鉴定及初步应用

目的：制备HLA－B27单克隆抗体。方法：用HLA－B27抗原免疫小鼠，取脾细胞与骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤细胞，用ELISA法筛选分泌该单抗的细胞株。结果：建立了分泌该单抗的细胞系3B3和4F2，抗体均为IgG2b,3B3细胞分泌的单抗只与B27反应，而4F2细胞分泌的单抗与B7有交叉反应。结论：建立了高特异性分泌抗B27单抗的细胞株，具有潜在的应用价值。