肾癌患者线粒体基因组D环区基因突变的研究

目的：通过检测肾癌基因组 D 环区体细胞突变及种系性变异情况,探讨其与肾癌发生的关系。方法选取肾癌患者20例,对其癌组织、癌旁组织及外周血细胞总 DNA进行 PCR扩增并测序,相关结果与线粒体文库中剑桥序列进行比对,综合分析基因突变类型。结果在20例肾癌患者各组织中,共有7例检出线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）的D-环区（displancement loop,D-Loop）存在突变,突变发生率为35%,涉及突变位点17个,其中4个属微卫星不稳定序列;20例患者中共发现9个基因库未记载的新的多态性变化。结论肾癌患者mtDNA的D环区具有高度多态性和高度突变率,该区的基因突变在肾癌的形成中可能发挥重要作用。     

卵巢肿瘤中线粒体DNA D-环区的突变

目的研究线粒体DNAD-环区在卵巢肿瘤中的突变情况。方法选择25例卵巢肿瘤组织及其邻近的正常组织,用PCR方法将线粒体DNAD-环区同时扩增测序。结果在25例卵巢肿瘤中有8例存在线粒体DNAD-环区突变,突变率为32%,突变位点26个。在26个突变位点中,19个突变位点存在于2例交界性肿瘤中,6个属于微卫星不稳定。25例肿瘤中有11个基因库未记载的新的多态性变化。结论线粒体DNAD-环区是一个具有高度多态性和突变性的区域,在卵巢肿瘤中突变率较高。     

乳腺癌中线粒体基因突变的研究进展

乳腺癌组织中mtDNA的突变：Tan等人使用时相温度凝胶电泳和直接DNA测序对19例病人的正常和肿瘤相对照检测突变。体细胞突变率为74％（14／19），大部分突变（81．5％）局限于D-loop区域。然而在16SrRNA，ND2，和ATPase6基因位点也可以检测到突变。另一项研究显示，对18例原发性乳腺癌病人行细针穿刺采样本和对应的白细胞一起进行分析。正如在前面的研究中所观察到的大部分病人检测到体细胞突变而且鉴定的大部分突变都是位于D-loop区域。     

基因芯片筛查糖尿病线粒体基因突变

目的建立一种快速、准确的高通量检测线粒体DNA突变的基因芯片技术,并探讨这些突变与糖尿病的关系。方法以尼龙膜为介质,通过紫外交联固定28个待测突变位点的野生型和突变型探针,并采用该基因芯片对200例2型糖尿病患者和210名健康对照的线粒体tRNA leu（UUR）基因及ND1基因进行筛查,DNA测序进一步确证突变位点,Mfold和Antheprot软件预测变异型基因及蛋白质二级结构。结果成功研制可检测28个突变位点的线粒体DNA芯片,在糖尿病组检出tRNA leu（UUR）基因13290C突变2例（1．0％）,ND1基因突变23例：G3316A突变6例（3．0％）、13394C突变5例（2．5％）、A4164G突变8例（4．0％）,T4216C突变2例（1．0％）,T3593C（0．5％）和A3606G突变各1例（0．5％）;对照组检出G3316A突变1例（0．5％）、A4164G突变5例（2．4％）。这些突变位点的测序结果与基因芯片检测结果一致。两组间仅13394C突变率差异有统计学意义（P=0．027）。G3316A突变导致丙氨酸→苏氨酸,13394C突变导致酪氨酸→组氨酸,13593C突变导致缬氨酸→丙氨酸,T4216C突变导致酪氨酸→组氨酸,A3606G和A4164G突变分别为亮氨酸和蛋氨酸的无意义突变,前4种突变型的ND1蛋白二级结构不同于野生型。结论线粒体DNA芯片是一种快速可靠的高通量基因突变检测方法,ND1基因13394C突变可能参与了线粒体基因缺陷型糖尿病的发病。     

中国保安族线粒体DNA D-环区遗传多态性的研究

目的：以遗传群体为对象，观察线粒体DNA的群体遗传特点，为研究西北少数民族的起源提供科学依据，并为法医学鉴定提供线粒体DNA序列多态性的基础数据。方法：应用PCR扩增产物直接测序法，对98例保安族无关个体线粒体DNA D-环区HVSⅠ进行测序分析。结果：在mtDNA高变区Ⅰ(HVSⅠ)16091～16418之间与Anderson序列比较共发现有66处碱基突变，62个单倍型，碱基突变的主要形式为碱基替代，其中转换87％，颠换11％，碱基插入1％，碱基缺失0．5％．保安族线粒体DNA HVS Ⅰ区基因差异度为0．9862，偶合概率为0.0237。结论：保安族与其他群体比较有其独特的线粒体DNA序列遗传特点，与亚洲其他人种及高加索人种有明显差异。保安族线粒体DNA序列多态性不仅有别于西方人种，也与其他东亚人种不同，线粒体DNA控制区HVS Ⅰ序列多态性可用于法医学个体识别及亲权鉴定。     

甲状腺乳头状癌中线粒体基因组D环区基因突变的研究

目的研究线粒体DNA（mtDNA）的D环区在甲状腺乳头状癌中的突变情况。方法提取71例甲状腺乳头状癌患者的癌组织、癌旁组织及外周血细胞总DNA,PCR扩增各样本mtDNAD环区,基因测序后与线粒体文库中的剑桥序列比对,分析突变类型。结果在71例甲状腺乳头状癌患者中检测到mtDNAD环区的突变率为23.9％（17/71）,其中9例携带mtDNAD环区点突变,且66.7%（6/9）为异质性突变;另外8例检出线粒体微卫星不稳性（mtMSI）。突变位点涉及两个高变区(HVR-I和HVR-II)以及线粒体转录因子1（mtTF1）结合位点。同时发现21个尚未报道的新的多态性位点。结论mtDNAD环区突变可能与甲状腺乳头状癌发生有关。     

大鼠乳腺肿瘤线粒体细胞色素b基因突变

目的 了解大鼠乳腺癌组织、癌旁组织和正常组织的线粒体细胞色素ｂ基因变异,６方法 提取细胞总ＤＮＡ,用ＰＣＲ法扩增细胞色素ｂ基因,产物用ＤＮＡ自动测序法进行序列分析。结果 癌组织发生了ｎｔ １４９３１Ｃ→Ｇ,ｎｔ１５００４Ｃ→Ｇ和ｎｔ １５４３５ Ｔ→Ｃ３处点突变。癌旁组织发生了ｎｔ１５４３６Ａ→Ｃ突变,正常组织没有突变。结论 大鼠乳腺癌组织和癌旁组织线粒体细胞色素ｂ基因存在突变。     

非综合征型耳聋线粒体基因突变的检测

目的：通过分析内蒙古鄂尔多斯市特殊教育学校非综合征型耳聋患者群体中mtDNA 12SrRNA A1555G突变,以探讨该群体与线粒体突变的关系。方法：对鄂尔多斯市特殊教育学校102名非综合征型耳聋患者进行耳聋病因问卷调查、纯音听阈测试、声导抗测试、提取外周血DNA,聚合酶链反应扩增mtDNA目的片段,对扩增片段进行限制性内切酶检测,对阳性标本进行DNA序列分析。结果：该校102名学生中,全部为感音性耳聋,其中54例使用过氨基糖苷类抗生素,7例（6.9%）存在线粒体基因A1555G位点突变。结论：该群体线粒体A1555G位点的突变率高于以往的报道,携带有该突变的个体对氨基糖苷类抗生素有高度易感性,该基因突变是感音神经性耳聋的原因之一。     

线粒体基因组不稳定性与肿瘤

基因组不稳定性(genome instability,GI)是肿瘤细胞的主要特征,它在肿瘤的发生和发展过程中起重要作用.GI可发生在不同水平,从单核苷酸、微卫星、基因、染色体结构性成分直至整条染色体,其主要表现为各种类型的异常改变:如单核苷酸突变、微卫星不稳定性、基因组拷贝数的改变和基因的扩增、重排、缺失等等.     

Mutations in the D-loop region of mitochondrial DNA in g astric cancer

Objective: To investigate the mutations in the D-loop region of mitochondrial DNA (mtDNA) in gastric cancer.Methods: The mtDNA of D-loop region was amplified by PCR and ,sequenced in 20 samples from gastric cancer tissue and adjacent normal membrane. Results: There were 7/20(35% ) mutations in the mtDNA of D-loop region in gastric cancer patients. There were four microsatellite instabilities among the 18 mutations. Nine new polymorphisms were identified in 20 patients. Conclusion: The mtDNA of D-loop region might be highly polymorphoric and the mutation rate is high in patients with gastric cancer.     

骨髓增生异常综合征患者线粒体DNA D-loop区突变研究

目的检测骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndrome, MDS）患者线粒体DNA D-loop区的突变。方法提取42例MDS患者骨髓以及口腔上皮组织的线粒体DNA,对线粒体DNA D-loop区两个高变区（HV1和HV2）进行PCR扩增,通过直接测序的方法对PCR产物的基因序列进行检测。结果在42例MDS患者中有6例患者出现突变,突变率为14.29%。突变位点19个,10个位于HV1区,9个在HV2区,其中包括5个微卫星不稳定,其余为A、G或者C、T之间的碱基置换。结论MDS存在线粒体DNA D-loop区的突变,可能在疾病的发生发展中起重要作用。     

白血病线粒体DNA突变的研究

目的：研究mtDNA突变与白血病发生、发展的关系。方法：测定26例成人白血病患者的骨髓和口腔上皮正常组织的mtDNA基因组全序列。结果：发现26例白血病病人中11例有突变(42．3％),突变类型均为碱基替代突变,其中3例突变位于Cytb基因(其中有1个是异质性突变),2例位于D—loop,其他6例分别位于复合物Ⅰ(ND1、ND2、ND4、ND5、ND6)基因和12sRNA基因。结论：线粒体突变特别是在基因Cytb的突变可能在白血病的发生发展过程中起重要作用。     

慢性肾功能衰竭患者线粒体基因组D-loop区突变研究

目的通过研究慢性肾功能衰竭（CRF）患者及家系成员中线粒体D-loop区的基因变异情况,探讨其与CRF发病之间可能的联系。方法收集42例CRF患者（CRF组）和95名家系成员（UAPM组）,以及随机选取的122例正常人（对照组）的外周血,提取线粒体DNA,通过PCR扩增D-loop区并对产物纯化,然后进行基因测序来检测线粒体基因组D-Loop区域基因变异情况,并进行比较,分析该区域基因变异与CRF发病的可能相关性。结果通过与对照组及标准序列比较,共发现79个核苷酸改变,3个高频变异位点,其中总的碱基突变率在CRF组及UAPM组明显增加,两组与对照组碱基变异率差异均有统计学意义（均P＜0.01）。CRF组及UAPM组在D310区线粒体微卫星不稳定（mtMSl）及碱基变异率与对照组比较差异均有统计学意义（均P＜0.01）。结论线粒体基因组D-Loop区突变可能与CRF的发生、发展有一定的关系。     

实验用藏猪和巴马小型猪线粒体DNA控制区碱基序列比较

目的：分析比较实验用藏猪和巴马小型猪线粒体DNA控制区D．100p区碱基序列的差异,探讨小型猪的遗传标记。方法：提取59头藏猪和16头巴马小型猪血液基因组DNA,设计特异引物扩增mtDNAD．100p,从凝胶中纯化后直接测序,进行比较。结果：2种小型猪mtDNAD-loop都存在串连重复序列区和非重复序列区（5’端和3’端）;重复序列区处于中间位置,藏猪有2种类型（A型和B型）,巴马小型猪只有1种类型（A型）;藏猪D—loop5’端（704bp）发现有20个变异位点,其中有3个主要的转换位点：305,500,691,巴马小型猪未发现多态位点,与藏猪以及其他猪相比,巴马小型猪D．100p5’端在180、404位有2个碱基差异。结论：藏猪mtDNA D-100p区碱基序列存在2种类型（A型和B型）;巴马小型猪mtDNAD—loop区碱基序列多态性较低,有2个遗传标记位点。     

Single nucleotide polymorphisms in the D-loop region of mitochondrial DNA and age-at-onset of patients with chronic kidney disease

Background The mitochondrial displacement loop （D-loop） accumulates mutations and single nucleotide polymorphisms （SNPs） at a higher frequency than other regions of mitochondrial DNA （mtDNA）.We previously identified disease riskassociated SNPs in the D-loop of chronic kidney disease （CKD） patients; in this study,we investigated the association of age-at-onset and D-loop SNPs in CKD patients.Methods The D-loop region of mtDNA was sequenced in 119 CKD patients attending the Fourth Hospital of Hebei Medical University between 2002 and 2008.The age-at-onset curve of the CKD patients was calculated using the KaplanMeier method at each SNP site,and compared using the log-rank test.Results The mean age of 119 CKD patients was （55.6±14.2） years,and 56.3% were males.The mean estimated glomerular filtration rate （eGFR） was （81.2±12.4） ml·min^-1·1.73 m^-2,with 79.8% （n=95） of patients having an eGFR 〈60 ml·min^-1·1.73 m^-2.All participants had an eGFR 〉30 ml·min^-1·1.73 m^-2.The age-at-onset for CKD patients who smoked was significantly lower than that of non-smoking CKD patients.The SNP sites of nucleotides 150C/T were identified for their association with age-at-onset using the log-rank test.The age-at-onset of patients with the minor allele T genotype was significantly lower than that of patients with the C genotype at the 150 SNP site （P=0.010）.Conclusions Genetic polymorphisms in the D-loop appear to be predictive markers for age-at-onset in CKD patients.Accordingly,the analysis of genetic polymorphisms in the mitochondrial D-loop may help identify CKD patient subgroups at high risk of early onset disease.     

食管癌组织中线粒体DNA突变检测

目的：检测食管癌组织中线粒体DNA(mtDNA)的突变。方法：提取8例食管癌组织的mtDNA；PCR扩增mtDNA的控制区，纯化PCR产物、与T载体连接，转化人肠杆菌，筛选出阳性克隆，用引物T7／SP6做PCR鉴定后测序，与GenRank序列对比。结果：8例标奉mtDNA的控制区共有36个位点发生突变，其中转换32个，颠换4个；同义突变13个，错义突变23个。结论：mtDNA突变很可能在食管癌的发生中发挥一定作用。