C-reactive protein products generated by neutrophil elastase promote neutrophil apoptosis

BACKGROUND: C-reactive protein (CRP), a prototypical acute phase protein, is increased as much as 1000-fold during acute inflammation, suggesting its biological role in that process. CRP can be modified at sites of inflammation where proteases have been released by neutrophils migrating to tissues. In this study, we investigated whether native CRP and neutrophil elastase-digested products of CRP modulate the rate of neutrophil apoptosis. METHODS: Neutrophils were isolated from venous blood of healthy volunteers and incubated with either native CRP (1, 10, or 30 microg/mL) or CRP digested with neutrophil elastase (1 U/mL). After 6 and 24 h of incubation, neutrophils were harvested and examined for apoptosis under light microscopy. RESULTS: We found that CRP degradation products generated by neutrophil elastase, but not native CRP, promoted neutrophil apoptosis and cell death. The rate of apoptosis was not affected by the addition of elastase that was not incubated with CRP. CONCLUSIONS: These results suggest that CRP degradation products generated by neutrophil elastase promote neutrophil apoptosis. Cleavage of CRP by neutrophil elastase may offer protection from inflammatory injury.     

白细胞介素-17对中性粒细胞凋亡的影响

目的:研究白细胞介素(interleukin,IL)-17对中性粒细胞凋亡的影响并探讨其可能的内在机制.方法:分离培养健康人外周血中性粒细胞,分别加入IL-17、热灭活IL-17(X-IL-17)和地塞米松,并设立对照组.通过形态学观察和DNA片段化的检测分析凋亡情况;利用免疫细胞化学方法检测中性粒细胞Bax蛋白的表达.结果:培养中对照组中性粒细胞呈现出凋亡极具特征性的形态学改变;随时间延长,凋亡指数(apoptosis index,AI)呈上升趋势,0 h为(1.54±0.08)%,12 h为(11.48±1.80)%(与0 h比较,P＜0.05),24 h为(34.19±1.92)%(与0 h比较,P＜0.01).在50μg/L质量浓度时IL-17促进中性粒细胞凋亡,0,12,24h的AI分别为(1.43±0.17)%(与对照组0 h比较,P＞0.05),(20.47±6.22)%(与对照组12 h比较,P＜0.01)和(40.74±3.48)%(与对照组24 h比较,P＜0.05);而IL-17在质量浓度为5μg/L和0.5μg/L浓度时可抑制凋亡,24 h的AI分别为(14.24±4.26)%和(19.86±4.39)%,与对照组24 h比较,P均＜0.01.50μg/L X-IL-17组24h的AI为(33.22±1.61)%(与对照组24h比较,P＞0.05).中性粒细胞凋亡的同时伴有DNA的片段化.免疫化学染色显示同期中性粒细胞Bax蛋白表达量与AI呈强正相关(r=0.932,P＜0.01).结论:体外IL-17对中性粒细胞的凋亡有调节作用,在较高浓度下加速凋亡,在较低浓度下延缓凋亡.IL-17对Bax蛋白表达的调控可能是其内在机制之一.     

磷脂酶A2激活介导中性粒细胞凋亡

探讨磷脂酶A2 (PLA2 )活性的变化对中性粒细胞凋亡的影响。方法 :采用光镜、电镜、DNA电泳和FACS等方法 ,分析了磷脂酶A2 内外源性激活剂和抑制剂对大鼠中性粒细胞凋亡的影响。结果 :脂多糖 (LPS1μg/ml)和钙离子载体 (A2 31871μmol/L)等PLA2 激动剂分别在共同培养 6h和 12h之内促进中性粒细胞凋亡 ,而PLA2 阻断剂 4 溴苯甲酰溴甲烷 (p BPB 0 .0 1～ 1mmol/L)可明显减弱上述激动剂的促凋亡作用。但另一种PLA2 非特异性抑制剂氯喹和血小板激活因子受体拮抗剂SR2 74 17A则无上述相同的作用。结论 :结果表明PLA2 激活可促进中性粒细胞凋亡过程 ,但该过程可能同PLA2 的代谢产物血小板激活因子的直接作用无关。     

全身炎性反应综合征时中性粒细胞凋亡的异常

[目的]研究中性粒细胞即多形核白细胞(polymorphonuclear neutrophil,PMN)凋亡的异常在全身炎性反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)中的意义。[方法]SIRS患者8例(均为急性胰腺炎患者)为SIRS组,正常人6例为对照组。采用流式细胞仪和TUNEL方法定量检测外周血PMN的凋亡情况,采用ELISA法检测血清IL-6、IL-8的水平。[结果]流式细胞仪检测:SIRS组外周血PMN的细胞凋亡率为(42±8)%,低于对照组的(63±9)%,P<0.05;TUNEL法检测:SIRS组外周血PMN的凋亡指数(apoptosis index,AI)为25±7,低于对照组的37±10,P<0.005。SIRS组外周血血清IL-6水平为(8.2±2.2)pg/mL,高于对照组的(2.1±1.3)pg/mL,P<0.001;SIRS组外周血血清IL-8的水平为(38±12)pg/mL,高于对照组的(12±4)pg/mL,P<0.001。[结论]SIRS患者存在PMN的凋亡延迟,其在SIRS的发生、发展中有着重要的意义。     

The effect of the anaesthetic agent isoflurane on the rate of neutrophil apoptosisin vitro

Background  

Volatile anaesthetic agents influence neutrophil function, and potentially, the inflammatory response to surgery.     

原花青素对前列腺癌LNCaP细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究原花青素对人雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP细胞增殖和凋亡的影响.方法 体外培养的LNCaP细胞株与100、200、300 μg/ml的原花青素共孵育,分别在24、48和72 h时观察细胞形态学变化,MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡情况.结果 原花青素可引起LNCaP细胞形态较明显改变.不同浓度(100、200、300 μg/ml)原花青素对LNCaP细胞作用的细胞增殖抑制率分别为27.1%、72.1%和86.4%.流式细胞术检测表明原花青素可诱导LNCaP细胞凋亡,300μg/ml原花青素处理72 h引起36.5%的凋亡率.这3种作用均随原花青素浓度和作用时间的延长而增强.结论 原花青素可在体外抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,并促进其凋亡.     

热应激反应对中性粒细胞凋亡及呼吸爆发功能的影响

目的观察体外诱导热应激反应对中性粒细胞凋亡及呼吸爆发功能的影响。方法18例健康者中性粒细胞每例随机分为三份。其中1份作为对照组,其余2份分别应用热休克或氯化镉诱导热应激反应后与培养液共同孵育,并分别作为热休克组和氯化镉组。于热应激反应诱导后0、2、3、4、6 h,运用PCR技术和流式细胞仪分别测定各组中性粒细胞热休克蛋白(HSP70)的表达及呼吸爆发功能;于热应激反应后24 h,应用荧光染色法和流式细胞仪DNA倍体分析法观察、检测细胞凋亡情况。结果热休克组和氯化镉组热应激诱导后各时段中性粒细胞HSP70表达及24 h的细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.01);热休克组和氯化镉组热应激诱导后4 h和6 h时,中性粒细胞活性氧生成明显低于对照组(P<0.01)。结论热应激反应促进中性粒细胞凋亡并减少活性氧释放。提示热应激反应可能参与机体的抗炎作用机制。     

乳铁蛋白抗菌肽抑制胃癌细胞增殖诱导其凋亡的体外研究

目的 探讨乳铁蛋白抗菌肽(LfcinB)对人胃癌细胞株MGC803细胞增殖和细胞凋亡的影响.方法 用CCK-8法测定不同浓度LfcinB对胃癌细胞株MGC803 24、48和72 h细胞增殖影响.用流式细胞术检测胃癌MGC803细胞凋亡的变化.用RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3 mRNA的变化情况.用Western blot检测MGC803细胞中的Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达.结果 LfcinB对胃癌细胞株MGC803的增殖具有抑制作用,促进胃癌细胞株MGC803细胞凋亡,并且具有时间和剂量依赖性(P<0.05,P<0.01);LfcinB能显著抑制胃癌细胞株MGC803 bcl-2 mRNA表达,同时促进bax和caspase-3 mRNA表达,并且随着LfcinB浓度的增高相关基因下降或上升越明显(P<0.05,P<0.01);Western blot结果也显示,LfcinB能抑制Bcl-2蛋白表达,促进Caspase-3和Bax蛋白表达,其变化规律与mRNA相同(P<0.05,P<0.01).结论 LfcinB通过调控相关基因,抑制胃癌细胞MGC803增殖,并诱导其细胞凋亡.     

热应激反应对中性粒细胞凋亡及呼吸爆发功能的影响

目的 观察体外诱导热应激反应对中性粒细胞凋亡及呼吸爆发功能的影响.方法 18例健康者中性粒细胞每例随机分为三份.其中1份作为对照组,其余2份分别应用热休克或氯化镉诱导热应激反应后与培养液共同孵育,并分别作为热休克组和氯化镉组.于热应激反应诱导后0、2、3、 4、6 h, 运用PCR技术和流式细胞仪分别测定各组中性粒细胞热休克蛋白(HSP70)的表达及呼吸爆发功能;于热应激反应后24 h,应用荧光染色法和流式细胞仪DNA倍体分析法观察、检测细胞凋亡情况.结果 热休克组和氯化镉组热应激诱导后各时段中性粒细胞HSP70表达及24 h的细胞凋亡率均明显高于对照组(P＜0.01);热休克组和氯化镉组热应激诱导后4 h和6 h时,中性粒细胞活性氧生成明显低于对照组(P＜0.01).结论 热应激反应促进中性粒细胞凋亡并减少活性氧释放.提示热应激反应可能参与机体的抗炎作用机制.     

中性粒细胞凋亡在烧伤兔急性肺损伤发病中的作用

目的:探讨中性粒细胞(PMN)凋亡在急性肺损伤(ALI)发病中的作用。方法:健康新西兰大白兔36只,随机分为对照组6只和烧伤组30只;烧伤组又随机分为5组,分别在烧伤后2、4、8、12、24 h 5个不同时间点处死动物,每次6只;共计6组,每组6只。观察烧伤组不同时间点兔肺组织病理,进行肺损伤评分,计算肺湿干重比(W/D),分离纯化肺泡灌洗液中的PMN,用流式细胞仪定量检测PMN凋亡和坏死细胞和呼吸爆发。结果:烧伤组各时相点均可见到肺泡腔及间质内白细胞渗出、浸润,肺泡腔内见渗出液,肺泡隔增厚,肺泡及间质充血,部分肺泡塌陷、不张,透明膜形成,且随时间延长病变加重,肺损伤的半定量评分增加(P0.01),尽管各时间点组间差异无统计学意义(P0.05),但与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05～P0.01)。烧伤组肺W/D也随时程延长而升高(P0.01),8 h后高于对照组(P0.01);兔烧伤后2～12 h,肺灌洗液中PMN凋亡率显著降低(P0.01);PMN坏死率在烧伤后2 h显著升高(P0.05),4 h达峰值(P0.01),8 h后下降至对照组水平(P0.05);烧伤组PMN的存活率均显著高于对照组(P0.01);PMN呼吸爆发在烧伤2 h后升高,8 h到达峰值(P0.01),后下降至对照组水平。结论:ALI兔PMN从血管游出到达肺组织,在肺泡中大量聚集,且凋亡途径发生障碍,致PMN持续处于活化状态,与ALI的发病相关。     

Modulation of Interleukin-15-induced Suppression of Human Neutrophil Apoptosis by TNFα

Human interleukin-15(IL-15) is a proinflammatory cytokine to suppress neutrophil apoptosis,which is a potential therapeutic agent.The modulatory effect of TNFα was investigated in IL-15-induced suppression of human neutrophil apoptosis.TNFα was shown to reverse the ability of IL-15 to delay neutrophil apoptosis within certain time course.Moreover,this reverse effect by TNFα might be associated with a reduction of the expression of the anti-apoptotic Bcl-Xl protein detected by Western blotting.It is concluded that TNFα can be used to modulate IL-15-induced suppression of neutrophil apoptosis within certain time course.     

热应激反应对IL-6所致中性粒细胞凋亡障碍的影响

目的观察体外诱导热应激反应对IL-6所致中性粒细胞凋亡障碍的影响。方法将14例健康人的中性粒细胞分成6份，其中1份作为对照组，其余5份应用热休克或氯化镉诱导热应激反应后与培养液或IL-6共同孵育，分为热休克组、氯化镉组、IL-6组、IL-6 热休克组及IL-6 氯化镉组。各组于热应激反应诱导后3、20h分别测定中性粒细胞热休克蛋白(HSP70)的表达及凋亡率。结果热休克与氯化镉均可诱导热应激反应，细胞内HSP70表达增加；热应激反应促进凋亡，IL-6导致中性粒细胞凋亡抑制，IL-6不影响热应激反应对中性粒细胞的促凋亡作用。结论热应激反应促进凋亡并可逆转IL-6对其凋亡的抑制作用，提示热应激反应可能参与机体的抗炎作用机制。     

热应激反应对IL-6所致中性粒细胞凋亡障碍的影响

目的观察体外诱导热应激反应对IL-6所致中性粒细胞凋亡障碍的影响.方法将14例健康人的中性粒细胞分成6份,其中1份作为对照组,其余5份应用热休克或氯化镉诱导热应激反应后与培养液或IL-6共同孵育,分为热休克组、氯化镉组、IL-6组、IL-6+热休克组及IL-6+氯化镉组.各组于热应激反应诱导后3、20 h分别测定中性粒细胞热休克蛋白(HSP70)的表达及凋亡率.结果热休克与氯化镉均可诱导热应激反应,细胞内HSP70表达增加;热应激反应促进凋亡,IL-6导致中性粒细胞凋亡抑制,IL-6不影响热应激反应对中性粒细胞的促凋亡作用.结论热应激反应促进凋亡并可逆转IL-6对其凋亡的抑制作用,提示热应激反应可能参与机体的抗炎作用机制.     

龟版有效成分抗无血清损伤表皮干细胞凋亡的研究

目的：探讨龟版有效成分对无血清培养所致的表皮干细胞（epidermal stemcell,ESC）凋亡的药效作用和可能机制。方法：分离培养孕龄2周的Sprague-Dawley胎鼠背部皮肤制备ESC,分为正常组、模型对照组和龟版有效成分各组。采用含龟版有效成分的无血清达尔伯克改良伊格尔培养基培养24、48和72h后,用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（3-（4,5-di methylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyltetrazoliumbromide,MTT）法检测ESC的活力,筛选药物最佳作用时间;ESC用各药物培养48h后,异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V和碘化丙锭双标后用流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）和Bcl-2蛋白的表达水平。结果：MTT检测结果表明,在24、48和72h时各有效成分组ESC活力较模型对照组增强（P〈0.01）,且作用48h时乙酸乙酯部位提取物组ESC活力高于十八酸乙酯、十四酸甾醇酯、4-甾酮各组（P〈0.05,P〈0.01）。作用48h时,乙酸乙酯部位提取物抗凋亡效果最强,4-甾酮抗凋亡效果最弱。蛋白免疫印迹结果表明,乙酸乙酯部位提取物、十八酸乙酯、十四酸甾醇酯、4-甾酮均能显著上调Bcl-2和下调caspase-3的表达,有抗凋亡作用。结论：乙酸乙酯部位提取物有较强的抗ESC凋亡作用,优于它的各组分单独作用,调控Bcl-2与caspase-3之间的表达平衡可能是其抗ESC凋亡的机制之一。     

红细胞沉降率和中性粒细胞淋巴细胞比值对系统性红斑狼疮诊断价值的探讨

目的 分析研究系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者的红细胞沉降率(ESR)和中性粒细胞淋巴细胞比值(NLR)水平,探讨ESR和NLR在SLE患者中的临床作用.方法 选取2016年3月至2019年3月在本院接受治疗的110例系统性红斑狼疮疾病(SLE组)患者作为研究对象,...     

溃疡性结肠炎患者外周血中性粒细胞凋亡与细胞因子、粘附分子水平的关系

目的 :观察溃疡性结肠炎患者 PMN凋亡的变化 ,探讨细胞因子对 PMN凋亡的影响。方法 :检测 2 8例 UC病人外周血 PMN凋亡和细胞因子及粘附分子水平。结果 :活动期 UC患者 PMN凋亡率明显低于健康人对照组和缓解期 UC患者。缓解期 UC患者 PMN凋亡率与对照组无差别。不同病情活动期 UC患者 PMN凋亡有显著性差异。活动期 UC患者外周血中 IL - 8、IL- 6、TNF-α、NO、P- sel、ICAM- 1水平均高于对照组和缓解组 ,且与 PMN凋亡呈负相关 ,与病情呈正相关。缓解组患者 IL- 8、IL- 6、TNF- α、NO、P- sel和 ICAM- 1与对照组无显著性差异。结论 :UC患者 PMN凋亡延迟 ,且与病情及疗效密切相关。各种炎性细胞因子产生过多、各种免疫细胞粘附分子表达上调可能是导致 PMN凋亡延迟的重要机制。适度调控 PMN凋亡 ,有可能会成为治疗 UC的有效途径。     

柔红霉素诱导Jurkat细胞凋亡、抑制增殖与bcl-2、PCNA表达变化的关系

目的探讨柔红霉素（DNR）在体外诱导Jurkat细胞凋亡的情况并探讨其与细胞表达凋亡相关蛋白改变的关系。方法Annexin V／PI双标流式细胞仪（FCM）检测DNR诱导Jurkat细胞的凋亡作用,用免疫细胞化学观察相关蛋白表达水平的变化。结果当DNR为0．1～2．0μmol／L浓度范围时,作用一定时间后Jurkat细胞发生的凋亡率随药物浓度的增加与作用时间的延长而升高。但药物浓度超过2．0μmol／L,或2．0μmol／L作用48h后Jurkat细胞出现凋亡率下降,细胞大部分死亡。0．5μmol／L DNR作用于Jurkat细胞24h后,细胞中bcl-2、PCNA蛋白表达水平降低。结论一定浓度的DNR在体外可诱导Jurkat细胞凋亡,药物浓度达5．0μmol／L时细胞大部分死亡。本实验条件下DNR体外诱导Jurkat发生凋亡的机制可能是通过抑制bcl-2、PCNA蛋白的表达实现。     

参附注射液抑制大鼠缺血再灌注损伤期间心肌细胞凋亡的作用机制

目的探讨参附注射液抑制大鼠缺血再灌注损伤期间心肌细胞凋亡的作用机制。方法 28只SpragueDawley大鼠分为3组:假手术组(8只)、对照组(10只)和给药组(10只)。建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。分别采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法检测凋亡心肌细胞;免疫组织化学方法检测心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达;利用Affymetrix Rat 230A芯片进行差异基因表达分析,用Microarray Suite 5.0软件读取并进行数据处理。结果免疫组织化学:与假手术组比较,对照组凋亡细胞表达阳性率显著增加(P<0.001),给药组无显著变化(P>0.05);凋亡因子Bcl-2表达阳性率,对照组略有下降,但差异无统计学意义(P>0.05),给药组显著增加(P<0.01);凋亡因子Bax表达阳性率,对照组显著增加(P<0.001),给药组显著下降(P<0.05)。差异基因表达:给药组与对照组比较,上调表达细胞凋亡相关基因主要为金属硫蛋白基因,下调表达基因主要为蛋白激酶结合蛋白基因、肿瘤坏死因子亚家族基因和p75类凋亡基因。结论参附注射液在大鼠心肌缺血再灌注损伤期间,对心肌细胞的保护作用机制主要是通过抑制心肌细胞凋亡,调节与细胞凋亡相关基因的表达,减轻心肌细胞凋亡的发生,提高心肌细胞的防御能力等而起到保护心肌的作用。     

溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠中性粒细胞凋亡的影响及其机制

探讨溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜外周血中性粒细胞(PMN)的作用及其机制。采用5% 2,4,6三硝基苯磺酸100 mg/kg灌肠建立大鼠溃疡性结肠炎(UC)模型,动物分为模型组、治疗组（高、中、低剂量）和阳性对照组。第3天开始,除正常组外,各组分别按剂量给予生理盐水、美沙拉嗪(阳性对照)、溃结灵处理,至第10天后处死动物。肉眼结合显微镜观察结肠组织,进行形态学评分;采用流式细胞仪检测动物外周血PMN凋亡,ELISA法检测 IL-8、NO、ICAM-1水平。结果发现,中、高剂量(每日9.2、18.3 g/kg)溃结灵具有改善大鼠UC和提高外周血PMN凋亡率的效果(P<0.05);凋亡率随炎症好转有上升趋势并与溃结灵的使用剂量呈正相关;与模型组比较,溃结灵中、高剂量组和美沙拉嗪组均显著降低IL-8、NO和ICAM-1的水平(P<0.01),且IL-8、NO和ICAM-1水平降低与溃结灵剂量呈正相关;PMN凋亡率与IL-8、NO和ICAM-1相关系数分别为：-0.792 6、-0.705 1、-0.593 7。结果提示溃结灵对UC有明显治疗效果,并可能通过下调IL-8、NO、ICAM-1水平进而提高PMN凋亡率来发挥治疗作用。