人β-防御素-2基因5′-端转录调控区DNA片段的克隆及序列初步分析

人 β-防御素 (hBD)主要由上皮细胞生成 ,包括hBD - 1、hBD - 2等亚类 ,是皮肤、粘膜免疫的重要分子。其中hBD - 2是富含半胱氨酸阳离子的由 4 1个氨基酸组成的低分子抗菌肽。通常hBD - 2在健康组织中为低水平表达 ,但当皮肤、肺、气道组织有病菌入侵时可诱导hBD - 2的大量表达。对牛气道防御素 (TAP)受LPS刺激诱导表达的转录机制的研究表明NF -κB和NF -IL6共同调控TAP基因的转录。本研究将人 β -防御素 - 2基因上游序列输入Matinspector软件 ,应用Matinspector软件于转录因子数据库 (http ://tansfac gbf de/TRANSFAC)中…     

女性生殖道人β-防御素基因的表达

目的旨在调查人β-防御素hBD基因在女性生殖道各段组织及妊娠相关组织的表达,探讨内源性抗菌肽在女性生殖道粘膜天然抵抗致病微生物侵袭机制中的作用.方法采用逆转录多聚酶链反应法(RT-PCR)检测了正常女性生殖道各段组织及怀孕妇女生殖道相关组织中hBD-1、hBD-2的表达情况,以β-actin为阳性对照.结果结果显示正常女性阴道、子宫颈、子宫内膜、输卵管、卵巢等5个组织中均发现有hBD-1mRNA的表达,除阴道外其余组织也有hBD-2mRNA的表达.绒毛膜、羊膜、绒毛、胎盘、脐带等5个妊娠相关组织中,hBD-1mRNA在除羊膜外的各组织中均有表达,而hBD-2mRNA则在胎盘、绒毛膜及绒毛组织中表达.结论hBD在正常妇女生殖道及妊娠相关组织中广泛表达,提示其在维持正常妇女及孕妇生殖道内环境稳定、宿主天然抗感染机制中可能起着重要的作用.     

双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素2(hBD-2)mRNA的表达

目的 :检测双歧杆菌对人肠腺上皮细胞 β 防御素 2基因的激活作用及其活性组分。方法 :应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法和Northern杂交检测HT 2 9细胞hBD 2mRNA的表达 ;采用超声破碎细胞、超速离心、蛋白萃取等方法分离双歧杆菌胞壁蛋白质成份。结果 :RT PCR和Northern杂交分析显示 ,在正常培养条件下HT 2 9细胞无可见的hBD 2mRNA表达信号 ,但在双歧杆菌菌体、细胞壁和胞壁蛋白刺激下均检测出显著的hBD 2mRNA表达。结论双歧杆菌能诱导人肠腺上皮细胞hBD 2基因的表达 ,双歧杆菌胞壁蛋白可能是其诱导作用的活性组分。双…     

hBD1稳定表达细胞株的建立及其表达产物对多重耐药菌的活性检测

目的 构建人β防御素1( hBD1)稳定表达细胞株并检测其对多种多重耐药菌的抗菌活性.方法 将重组质粒pCMV-hBD1通过阳离子脂质体转染于非洲绿猴SV40转化的肾细胞(COS-7细胞),经过G418压力筛选后获得单克隆细胞株;提取细胞总RNA,用RT-PCR检测目的基因在转录水平的表达;收集细胞培养上清液,用Western blot检测hBD1基因蛋白的表达;将含有表达产物hBD1的细胞培养上清液分别同各耐药菌液混合,37℃孵育不同时间后涂布于LB平板,以各实验组和对照组的菌落数的比值作为该耐药菌的存活率.结果 经过G418压力筛选所得到的稳定表达细胞株,在转录水平和蛋白水平均检测到目的基因hBD1的表达,在表达产物hBD1的作用下,多重耐药鲍氏不动杆菌、多重耐药大肠埃希菌存活率和多重耐药肺炎克雷伯杆菌的存活率可以分别降至9%、22%和50%,多重耐药嗜麦芽窄食单胞菌的存活率同对照组没有明显差异.结论 成功获得hBD1稳定表达细胞株,目的基因hBD1的表达产物对多种多重耐药菌均具有抗菌活性.     

双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素2(hBD-2)mRNA的表达

目的 :检测双歧杆菌对人肠腺上皮细胞 β -防御素 - 2基因的激活作用及其活性组分。 方法 :应用逆转录聚合酶链反应(RT -PCR)法和Northern杂交检测HT - 2 9细胞hBD - 2mRNA的表达 ;采用超声破碎细胞、超速离心、蛋白萃取等方法分离双歧杆菌胞壁蛋白质成份。结果 :RT -PCR和Northern杂交分析显示 ,在正常培养条件下HT - 2 9细胞无可见的hBD - 2mRNA表达信号 ,但在双歧杆菌菌体、细胞壁和胞壁蛋白刺激下均检测出显著的hBD - 2mRNA表达。结论 :双歧杆菌能诱导人肠腺上皮细胞hBD - 2基因的表达 ,双歧杆菌胞壁蛋白可能是其诱导作用…     

脂质体介导人β防御素2基因转染膀胱上皮的实验研究

目的 探讨脂质体介导人β防御-2( humanβ-defensin 2,hBD2 )基因体内、外转染膀胱上皮细胞的可行性.方法 采用脂质体法体外转染人膀胱上皮细胞株T24及膀胱灌注大鼠体内转染,ELISA检测细胞上清及大鼠尿液中hBD2的表达;RT-PCR及Western印迹检测细胞及大鼠膀胱中hBD2的表达;组织免疫...     

人β防御素-2稳定表达细胞株的建立及其表达产物对耐药大肠埃希菌抗菌活性研究

目的建立稳定表达人β防御素2(hBD2)的COS-7细胞株,并检测其表达产物对耐药大肠埃希菌的抗菌活性。方法将重组hBD2真核表达载体pCMV-hBD2通过脂质体转染COS-7细胞,筛选稳定表达hBD2单克隆细胞株;经RT-PCR和Western blot检测稳定转染后目的基因在转录水平和蛋白水平的表达;用微量稀释法检测稳定转染后细胞培养上清液对耐药大肠埃希菌的抗菌作用。结果筛选出稳定表达hBD2的COS-7细胞株,检测到目的基因在转录水平和蛋白水平均有表达,且其表达产物使耐药大肠埃希菌存活率降至15%。结论建立了稳定表达hBD2的COS-7细胞株,其表达产物对耐药大肠埃希菌具有一定的抗菌活性。     

大肠杆菌感染对大鼠肺组织β-防御素-2基因表达的负相调节作用

目的:探讨细菌对大鼠β-防御素-2(rBD-2)基因的表达调控。方法:将大肠杆菌E.coliML-35p和绿脓杆菌ATCC27853大鼠气管内接种,于24h后提取肺组织RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和Northernblot检测大鼠β-防御素-2基因的表达变化。结果:气管内接种大肠杆菌24h后使大鼠肺组织β-防御素-2mRNA的表达受到显著抑制,绿脓杆菌对其基因的表达却没有抑制作用。结论:大肠杆菌感染可负相调节大鼠肺组织rBD-2mRNA的表达。     

抗菌肽hCAP-18/LL-375’非翻译区的分析

抗菌肽hCAP 18/LL 37在天然免疫中起重要作用,我们以前的工作发现,hCAP 18/LL 37mRNA在人白血病细胞系中广泛表达,但仅少数细胞系可检测到hCAP 18/LL 37蛋白表达。表明其表达调控主要在转录后水平[1] 。5’非翻译区(5’UTR )存在重要的翻译调控元件,如二级结构和上游开放阅读框对真核细胞翻译调控起重要作用[2 ] ,本文检测白血病细胞系中hCAP 18/LL 37基因5’UTR序列,探讨白血病细胞系是否因为5’UTR异常而引起其翻译阻滞。1　材料与方法1 1　细胞培养　人白血病细胞系Raji、NB4、HL 6 0、J6 1及U937均为我室液氮保存,按常…     

哺乳动物抗菌肽:结构与功能及其基因表达调节

由动物和植物细胞产生的抗菌肽是天然免疫的重要介质。它们不仅具有直接杀灭微生物活性 ,还对机体的天然免疫和获得性免疫反应起调节作用。现就我们课题组近几年来对哺乳动物 (特别是人 )免疫细胞抗菌肽研究的主要进展综述如下。1　哺乳动物新的抗菌肽分子的探索　　现已从昆虫、被囊动物、鲎、蛙、鸟类、哺乳动物(包括人 )和植物中发现 40 0余种抗菌肽分子。但是对哺乳动物抗菌肽的研究集中于两类分子。一类叫做防御素 ,为 3～ 4kD的阳离子小肽 ,其分子的基本特征是由 6个半胱氨酸组成的链内二硫键和杀菌机制相关的双亲性分子结构。依据其…     

炎症反应相关基因诱导表达的信号转导及其负相调节

炎症反应相关基因属于快速反应基因类型。近年来我们课题组对炎症反应相关基因表达的正相与负相调节进行了一些研究。　　 1.上皮细胞抗菌肽基因的诱导表达及其信号转导 :热灭活BCG全菌体及其分子量范围为 18kD - 30kD的胞壁蛋白SephadexG - 15 0柱层析组分可刺激肺腺上皮细胞hBD - 1基因的表达 ,被刺激细胞培养上清的抗菌活性显著增强 ,CAT报告基因分析显示hBD - 1基因上游 - 314到 +5 4区域具有BCG诱导的转录活性 ,其中含有转录因子C/EBPβ、AP - 1、CP2结合位点 ;双歧杆菌胞壁和胞壁蛋白对肠上皮细胞抗菌肽基因表达的诱导作用…     

大肠杆菌感染对大鼠肺组织β—防御素—2基因表达的负相调节作用

目的：探讨细胞对大鼠β-防御素－2(rBD-2)基因的表达调控。方法：将大肠杆菌E.coli ML-35p和绿脓杆菌ATCC 27853大鼠气管内接种，于24h后提取肺组织RNA，用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）法和Northern blot检测大鼠β－防御素－2基因的表达变化。结果：气管内接种大肠杆菌24h后使大鼠肺组织β－防御素－2mRNA的表达受到显著抑制，绿脓脓杆菌对其基因的表达却没有抑制作用。结论：大肠杆菌感染可负相调节大鼠肺组织rBC-2 mRNA的表达。     

防御素研究进展

防御素是最近在动植物体内发现的一类阳离子抗菌肽 ,具有广谱的抗菌、抗病毒活性和非特异的细胞毒性作用 ,是先天性免疫系统的重要组成部分 ,而且把先天性免疫系统和获得性免疫系统联系起来。本文主要针对防御素的分布、基因定位、表达、生物学作用及其作用机制等进行阐述     

105 防御素研究进展

防御素是最近在动植物体内发现的一类阳离子抗菌肽，具有广谱的抗菌、抗病毒活性和非特异的细胞毒性作用，是先天性免疫系统的重要组成部分，而且把先天性免疫系统和获得性免疫系统联系起来。本文主要针对防御素的分布、基因定位、表达、生物学作用及其作用机制等进行阐述。     

皮肤抗菌肽的研究进展

抗菌肽是机体固有免疫的重要组成部分,人类皮肤抗菌肽主要包括cathelicidins家族和β-防御素家族,广泛表达于皮肤角质形成细胞及各种炎症细胞.皮肤抗菌肽除了直接杀菌作用外,还能调节免疫反应,促进伤口愈合和血管新生,其表达受到体内,体外多种因素的影响,与各种皮肤炎症性疾病发病密切相关,也可能在糖尿病创面愈合中发挥着重要作用.     

人呼吸道合胞病毒北京地区A亚型ON1基因型地方株感染A549细胞转录组学分析

目的应用转录组测序方法, 分析北京地区人呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)A亚型优势流行基因型ON1地方株感染A549细胞后差异表达基因, 为RSV防治提供潜在靶点。方法选用已经过全基因组测序确定为RSV A亚型ON1基因型的地方株(61397-ON1)感染A549细胞, 提取总mRNA, 通过转录组测序筛选出与未感染的A549细胞为对照的差异表达基因, 对其进行GO分析、KEGG通路分析, 同时随机选择6个差异表达倍数大于2倍的基因进行qRT-PCR验证。结果以未感染的A549细胞为对照, 筛选出1 632个差异表达基因, 其中807个基因表达上调, 825个基因表达下调。差异基因主要参与细胞因子反应以及MAPK级联反应正向调控等免疫应答相关生物过程, 并在MAPK信号通路、NOD样受体信号通路、p53信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路及NF-κB信号通路发生了富集。选择的6个差异表达基因qRT-PCR验证结果与转录组数据趋势一致。结论 RSV A亚型ON1基因型毒株感染A549细胞后的差异表达基因主要参与细胞因子应答及免疫相...     

防御素研究进展

防御素是最近在动植物体内发现的一类阳离子抗菌肽，具有广谱的抗菌、抗病毒活性和非特异的细胞毒性作用，是先天性免疫系统的重要组成部分，而且把先天性免疫系统和获得性免疫系统联系起来。本文主要针对防御素的分布、基因定位、表达、生物学作用及其作用机制等进行阐述。     

卡介苗增强人肺腺上皮细胞β-防御素-1基因的转录

目的 :检测卡介苗 (BCG)胞壁蛋白对人 β 防御素 1 (hBD 1 )基因表达的影响 ,并初步分析该基因 5′ 端旁侧区中的BCG作用元件。方法 :经SephadexG 1 5 0层析柱分离得到BCG细胞壁蛋白组份。用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)和Northern杂交分析法检测hBD 1mRNA在肺腺上皮细胞的表达。一系列逐渐缩短的hBD 1基因 5′ 端序列被连接入无启动子的pCATBasic质粒 ,构建了CAT报告质粒。ELISA法检测报告基因表达。结果 :热灭活的BCG全菌( 5 0mg/L)及分子量在 1 8kDa～ 30kDa的胞壁蛋白组份 ( 3mg/L)刺激SPC A 1细胞 8h后 ,hB…     

人体β-防御素hBD-3的cDNA克隆与鉴定

防御素是一类具有广谱抗微生物活性的小分子多肽,具有抗菌、抗病毒及杀伤肿瘤细胞的多功能效应,其效能强大,且至今尚未发现病菌株对它产生耐药性,有关防御素的基础和临床前应用研究已成为生物医学研究领域的热点之一,深受医学界、药学界瞩目,尤其引人注目的是新近发现的β-防御素.已发现3种人体β-防御素,hBD-1是Bensch等[1]于1995年从肾衰患者血透析液中分离获得的;hBD-2是Harder等[2] 于1997年从银屑病患者病损上皮中分离获得的; 2001年,Harder等[3]又从人体鳞癣皮肤中分离获得hBD-3.有关hBD-1 和hBD-2基因的克隆、表达及其调控已有许多研究报道[4],为开发新一类抗菌药物奠定了一定基础.hBD-3的发现为人体防御素的基础和应用研究注入了新的活力,进一步深入研究人体β-防御素hBD-3基因的表达及其调控机制,建立高效表达具有广谱抗菌活性的人体防御素的生物工程新方法、新技术具有极其重要的意义.本研究利用RT-PCR技术,成功克隆了hBD-3的cDNA片段.     

大肠杆菌对大鼠肺组织β-防御素-2基因表达的抑制

目的：探讨细菌对大鼠β-防御素-2(rBD-2)基因的表达调控。方法：将大肠杆菌E．coliML-35和绿脓杆菌27853大鼠气管内接种,于24小时后提取肺组织RNA,用RT-PCR法检验大鼠β-防御素-2基因的表达情况。结果：气管内接种大肠杆菌使大鼠肺组织β-防御素-2mRNA的表达受抑制。结论：大肠杆菌及其产物直接或通过炎症细胞因子间接抑制rBD-2mRNA的表达。