血管内皮生长因子-C反义多肽对人骨肉瘤细胞生物学行为影响的研究

目的检测血管内皮生长因子-C（VEGF—C）反义多肽对人骨肉瘤细胞的生物学活性的影响，探讨VEGF—C反义多肽用于骨肉瘤基因治疗的可行性。方法制备靶向VEGF—C的反义多肽，通过与骨肉瘤细胞株共培养，噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖抑制率，人工基底膜侵袭实验检测细胞侵袭能力；构建骨肉瘤细胞裸鼠皮下移植瘤模型，瘤体内注射VEGF—C反义多肽，观察其对骨肉瘤细胞的抑制作用；Western Blot检测VEGF—C在瘤组织的表达情况；免疫组织化学分析肿瘤组织VEGFR-3阳性脉管密度。结果VEGF—C反义多肽具有较强的生物学活性，对骨肉瘤细胞具有明显的增殖抑制作用，其抑增殖效应呈时间和浓度依赖性；瘤组织内给予VEGF—C反义多肽后，Western blot分析VEGF—C在瘤组织中的表达降低，肿瘤生长受制，抑瘤率为52％（P〈0．05）；免疫组化分析VEGF—C反义多肽可抑制肿瘤组织VEGFR-3阳性脉管形成。结论VEGF—C具有良好的生物学活性，可通过抑制骨肉瘤细胞的增殖、侵袭转移能力及肿瘤组织VEGFR-3阳性脉管形成而发挥抗骨肉瘤作用。     

聚酰胺-胺型树枝状高聚合物介导Survivin反义寡核苷酸抑制人肝癌裸鼠移植瘤生长的作用

背景：采用反义寡核苷酸等治疗方法可以抑制凋亡抑制因子Survivin的表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡。目前使用Survivin治疗恶性肿瘤仍存在基因载体转染效率低下、不能长期稳定表达、易被酶降解等难题。目的：观察聚酰胺-胺型树枝状高聚合物（polyamidoamine,PAMAM）脂质体介导Survivin-反义寡核苷酸对人肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用。方法：以人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠皮下注射建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,将PAMAM脂质体和PAMAM分别与Survivin-反义寡核苷酸混合得到载反义基因转染复合物。测定复合物的zeta电位及包封率。将两种载基因复合物注射道裸鼠移植瘤体内,观察两组移植瘤大小,检测移植瘤组织中survivin基因的表达。结果与结论：PAMAM脂质体-survivin-反义寡核苷酸复合物的zeta电位高于PAMAM-survivin-反义寡核苷酸复合物（P〈0.05）,基因包封率两组比较差异无显著性意义（P〉0.05）。PAMAM脂质体-survivin-反义寡核苷酸复合物治疗组裸鼠移植瘤质量及survivin蛋白表达低于PAMAM-survivin-反义寡核苷酸复合物组（P〈0.05）。提示PAMAM脂质体能将Survivin-反义寡核苷酸高效递送到人肝癌移植瘤细胞,降低survivin蛋白的表达,诱导移植瘤细胞凋亡。     

DADS对人宫颈癌细胞生长及VEGF蛋白表达的影响

【目的】探讨二烯丙基二硫（DADS）对人宫颈癌Hela细胞生长及血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达的影响。【方法】体外培养人宫颈癌Hela细胞,采用MTT比色法测定DADS对Hela细胞增殖活性的影响;裸鼠皮下注入人宫颈癌Hela细胞建立人宫颈癌裸鼠并种移植模型,观察腹腔注射DADS对宫颈癌移植瘤在Balb／c-nu裸鼠体内生长情况的影响,HE染色后进一步观察DADS对移植瘤组织形态的改变,SP免疫组织化学法观察移植瘤细胞VEGF蛋白酌表迭情况。【结果】DADS对人宫颈癌Hela细胞增殖有一定抑制作用,并呈浓度依赖性,以DADS60mg／L高剂量药物组抑制活性最强;腹腔注射DADS剂量为50mg／kg、100mg／kg和200mg／kg时,细胞增殖抑制率分别为28．1％、38．6%、55．3％,瘤重抑制率分别是35．9％,49．9％,55．4％;HE染色结果示DADS具有杀伤人宫颈癌裸鼠移植瘤细胞作用;SP免疫组织化学法示DADS下调移植瘤细胞VEGF表达。[结论]DADS具有抑制人宫颈癌细胞的生长作用,此作用可能与下调移植瘤细胞VEGF表达有关。     

FADD在L-OHP抑制裸鼠人结肠癌皮下移植瘤生长中的表达

[目的]探讨Fas相关死亡结构域蛋白（Fas associated protein with death domain,FADD）在奥沙利铂（L—OHP）抑制裸鼠人结肠癌皮下移植瘤生长中的表达及其可能机制。【方法】建立BALB／C-nu／nu裸鼠SW480人结肠癌皮下移植瘤模型,L-OHP行瘤体内注射,与氟尿嘧啶治疗进行对比。观察各组肿瘤瘤重和体积变化,计算抑瘤率。采用HE染色和TUNEL法检测瘤体组织肿瘤细胞凋亡情况,Western-blotting检测FADD蛋白表达情况。【结果】L-OHP和氟尿嘧啶均能显著抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,且L-OHP对移植瘤的抑制作用和L-OHP组肿瘤细胞凋亡率明显强于（高于）氟尿嘧啶和5-Fu组,差异有统计学意义（P〈0．05）。TUNEL法观察到棕褐色的阳性肿瘤凋亡细胞,Western-blotting结果显示FADD蛋白表达增加。[结论]L-OHP通过诱导SW480细胞凋亡从而抑制裸鼠人结肠癌皮下移植瘤,其作用机制可能与激活凋亡死亡受体途径、FADD表达上调有关。     

dFMAChR抑制荷人宫颈癌裸鼠移植瘤生长的机制研究

目的：研究6,8-二-三氟甲基-7-乙酰氧基白杨素（dFMAChR）抑制荷人宫颈癌裸鼠移植瘤生长的可能机制。方法：建立人宫颈癌裸鼠移植瘤模型,通过免疫组织化学SP染色法观察dFMAChR对人宫颈癌移植瘤组织血管内皮生长因子（VEGF）、细胞增殖核抗原（PCNA）表达的影响。结果：免疫组织化学检测发现dFMAChR抑制人宫颈癌移植瘤组织VEGF和PCNA的表达,且呈剂量依赖性。结论：dFAMChR能有效抑制人宫颈癌裸鼠移植瘤细胞PCNA和VEGF蛋白表达,这可能是dFMAChR抑制人宫颈癌裸鼠移植瘤生长的分子机制之一。     

多西环素对大肠癌裸鼠移植瘤的影响

目的观察金属蛋白酶组织抑制剂（多西环素）对大肠癌裸鼠皮下移植瘤的影响，为大肠癌的治疗寻求一个新的可能治疗途径。方法将10只BALB／C（nu／nu）裸鼠随机分为对照组和实验组，每组5只，将人大肠癌细胞系LoVo细胞种植入裸鼠皮下，建立裸鼠皮下人大肠癌移植瘤模型。对照组应用生理盐水瘤内多点直接注射；实验组应用多西环素瘤内多点直接注射。记录2组裸鼠肿瘤大小，观察肿瘤生长曲线，计算生长抑瘤率。结果第26天肿瘤体积大小和肿瘤生长抑制率：实验组分别为（889．8±80．8）mm^3和49．7％，对照组分别为（1755．8±203．8）mm^3和0，2组比较，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论多西环素可以抑制大肠癌裸鼠皮下移植瘤的生长，有可能腐用于大肠痛的治疗。     

矢车菊素-3-葡萄糖苷在体内外抑制肺癌生长中的作用

目的 探讨矢车菊素-3-葡萄糖苷(C3G)对体内外肺癌生长的影响及其机制.方法 不同浓 度C3G 作用于人肺癌细胞株H1299 后,MTT 法检测细胞增殖;荧光显微镜下观察细胞形态学变化;Western blotting 检测肺癌细胞中X 连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和Smac 蛋白表达;建立起裸鼠肺癌皮下移植模型,观察 C3G 对裸鼠肺癌皮下移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67、XIAP 和Smac 的阳性表达.结果与对照组比较,C3G 可呈浓度依赖性抑制体外H1299 细胞生长,并明显诱导细胞凋亡;C3G 可分别下 调和上调肺癌细胞中XIAP 和Smac 的表达;C3G 可显著抑制裸鼠肺癌皮下移植瘤生长;C3G 可明显降低裸鼠 皮下肿瘤组织中Ki-67 和XIAP 的阳性表达,上调Smac 的表达.结论 C3G 可显著抑制体内外肺癌生长,该 作用可能通过抑制XIAP 和上调Smac 蛋白表达而实现.     

BAY11-7082抑制人卵巢癌裸鼠移植瘤生长及其机制

目的 初步探讨IκBα磷酸化抑制剂BAY11-7082对人卵巢癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响。方法 建立人卵巢癌细胞系COC1裸鼠皮下移植瘤模型,腹腔注射BAY11-7082,测量移植瘤的质量,并用TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡情况。同时应用免疫组化染色,检测瘤组织内的NF-κB p65、血管内皮生长因子（VEGF）和FⅧ蛋白表达,并计数微血管密度（MVD）。结果 BAY11-7082组移植瘤质量显著低于阴性对照组（P〈0.05）,抑制率为47.60%;BAY11-7082组AI值高于对照组（P〈0.05）;PI值小于对照组（P〈0.05）,BAY11-7082组NF-κB p65、VEGF与MVD均显著低于对照组（P〈0.05）。结论 BAY11-7082可能通过降低VEGF表达,抑制卵巢癌COC1裸鼠移植瘤生长。     

超声微泡介导血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制裸鼠膀胱肿瘤

目的 探讨利用超声辐照微泡造影剂介导血管内皮生长因子(VEGF)-反义寡核苷酸(ASODN)对人膀胱癌裸鼠移植瘤的抑制效应. 方法 建立人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤模型后,将24只成瘤裸鼠随机分为4组:UM+ASODN组每只裸鼠尾静脉注射微泡造影剂与VEGF-ASODN混合物,并对移植瘤体用超声波进行辐照;脂质体+ASODN组每只裸鼠尾静脉注射VEGF-ASODN与脂质体混合物;UM组每只裸鼠尾静脉注射微泡造影剂并以同样的条件进行体外超声辐照;单纯对照组每只裸鼠尾静脉注射生理盐水,各组处理每隔2 d进行一次,共计5次.观察裸鼠移植瘤生长情况,免疫组化SP法测Ki67、CD34、VEGF的表达,计算微血管密度、细胞增殖指数,TUNEL法测细胞凋亡指数. 结果 UM+ASODN组裸鼠皮下肿瘤生长速度较对照组明显减慢,肿瘤组织VEGF的表达及微血管密度较对照组降低(P＜0.05);与对照组相比,UM+ASODN组肿瘤细胞的凋亡增加(P＜0.01),而细胞增殖减少(P＜0.05). 结论 超声微泡介导的VEGF-ASODN转染能有效抑制膀胱癌裸鼠皮下移植瘤.     

沉默ATF5对卵巢癌裸鼠成瘤的影响

目的研究沉默人转录激活因子5（ATF5）后对卵巢癌SKOV-3细胞体外增殖、凋亡及体内成瘤的影响,探讨人类卵巢癌基因治疗的新途径。方法将慢病毒携带的小干扰RNA感染卵巢癌SKOV-3细胞（实验组）,空载体转染的卵巢癌SKOV-3细胞（空载体对照组）和卵巢癌SKOV-3细胞（空白对照组）进行对照,对比观察细胞的生长状态;MTT法检测细胞的增殖生长情况;罗氏凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况;分别于裸鼠皮下接种3组卵巢癌SKOV-3细胞,观察各组裸鼠的存活状态、种植瘤生长情况;RT-PCR检测瘤组织中ATF5mRNA的表达;Western-Blot方法检测瘤组织中ATF5蛋白的表达;苏木素-伊红染色（HE染色）观察瘤组织生物学形态变化。结果经转染ATF5基因的小干扰RNA后,在相同培养时间内3组细胞的增殖和生物学形态没有明显差异,但实验组细胞凋亡数量较其他两组明显增多。皮下接种成瘤后,3组裸鼠的成瘤率没有明显区别,实验组与空载体对照组和空白对照组相比,肿瘤成瘤时间晚,生长缓慢;移植瘤ATF5mRNA表达及蛋白表达降低;细胞分裂象明显减少,凋亡现象明显。结论沉默ATF5对人上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤生长有抑制作用,这可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点。     

反义miR-21对荷人宫颈鳞癌裸鼠移植瘤生长和凋亡的影响

目的 构建荷人宫颈鳞癌裸鼠移植瘤模型,探讨干扰miR-21 表达对移植瘤生长、凋亡的影 响.方法 将人工合成的反义寡核苷酸ASODN(AS-miR-21)转染SiHa 细胞(抑制组),同时设阴性对照组和 空白对照组,对数生长期的SiHa 细胞分别接种于裸鼠皮下,绘制肿瘤生长曲线并计算肿瘤生长率.当肿瘤 体积达0.2 cm3 时采用AS-miR-21 多点瘤周注射,观察其对移植瘤的影响.应用免疫组化技术、荧光TUNEL 检测移植瘤细胞增殖活性和凋亡情况.结果 (1)成功构建人宫颈鳞癌裸鼠皮下移植瘤模型,抑制组、阴性 对照组及空白对照组成瘤率分别为37.5%、75.0%、100.0%,瘤体平均体积为(732.80 ±56.32 ) mm3 、(1228.46 ±78.53)mm3 、(1301.26 ±80.63)mm3,平均生长率为18.32%、30.71%和32.53%,瘤重为(0.73 ± 0.05)g、(1.26 ±0.12)g 和(1.35 ±0.25)g,抑制组与阴性、空白对照组比较差异均有统计学意义(P <0.05); (2)免疫组化显示抑制组裸鼠瘤体Ki67 表达显著下降;荧光TUNEL 凋亡检测显示抑制组裸鼠肿瘤细胞凋亡 率明显增多;(3)注射治疗剂量AS-miR-21 两周后观察肿瘤组织局部坏死严重,胞核裂解、消失,凋亡明显增 加.结论 AS-miR-21 可下调裸鼠人宫颈鳞癌移植瘤中miR-21 的表达,抑制移植瘤生长和促进其凋亡.     

三阴性乳腺癌中VEGF-C表达与淋巴管密度的相关性研究

目的 研究三阴性(雌激素受体、孕激素受体、人表皮生长因子受体2均阴性)乳腺癌淋巴管内皮生长因子(VEGF-C)表达情况和与淋巴管密度的关系.方法 105例乳腺癌标本.其中三阴性乳腺癌42例,非三阴性乳腺癌标本63例,应用免疫组化方法检测标本的VEGF-C表达情况及应用D2-40标记检测淋巴管密度.结果 VEGF-C在三阴性乳腺癌高表达64.2%,与淋巴结有无转移、淋巴管密度、肿瘤大小、临床分期相关(P<0.05),而与年龄、病理类型无关(P<0.05);VEGF-C在三阴性和非三阴性乳腺癌表达分别为64.2%和33.3%,差异有显著性(P<0.05).结论 VEGF-C在三阴性乳腺癌中高表达与淋巴管生成和肿瘤演进相关.     

吡柔比星联合内皮抑素对治疗人乳腺癌裸鼠移植瘤的研究

[目的]探讨内皮抑素（E S ）联合吡柔比星对人乳腺癌裸鼠移植瘤的肿瘤生长及新生血管生成的抑制作用。[方法]构建裸鼠乳腺癌模型,将裸鼠40只,随机分成4组,每组10只。对照组（A组）：肿瘤对侧背部皮下注射1＆#215;106/0．1 m L正常人成纤维细胞;ES组（B组）：肿瘤对侧背部皮下注射1＆#215;106/0．1 m L转染了ES的人成纤维细胞。吡柔比星组（C组）：尾静脉注射吡柔比星5 mg/kg ,每周1次,共4周,ES＋吡柔比星组（D组）：肿瘤对侧背部皮下注射1＆#215;106/0．1 m L转染了 ES的人成纤维细胞。尾静脉注射吡柔比星5 mg/kg ,每周1次,共4周。ELISA方法检测血清血管内皮生长因子（VEGF）,肿瘤组织病理切片观察微血管密度（M VD ）。[结果]B、C ,D三组抑瘤率分别为61．96％,27．33％和75．16％,D组抑瘤率明显高于其它两组,D组VEGF、MVD与其他各组比较明显减低,且差异有显著性（ P＜0．05）。[结论]ES联合吡柔比星能明显抑制人乳腺癌裸鼠移植瘤生长及新生血管生成,且两者联用具有协同作用。     

血管紧张素Ⅱ受体1在人胃癌细胞中的表达及其拮抗剂对胃癌荷瘤裸鼠生长的抑制作用

目的：检测血管紧张素Ⅱ受体1（AT1R）在人胃癌细胞株中的表达及其拮抗剂对人胃癌荷瘤裸鼠生长的抑制作用。方法：采用实时定量PCR和蛋白印迹分析法检测AT1R在胃癌细胞株中的表达。建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,分别以2mg/kg和5mg/kgTCV-116（AT1R拮抗剂）每日给荷瘤裸鼠灌胃,观察肿瘤体积的变化并绘制肿瘤生长曲线;以免疫组织化学染色观察胃癌裸鼠移植瘤的微血管密度（MVD）和血管内皮生长因子（VEGF）表达。结果：AT1R在人胃癌细胞株中有较高水平的表达。经TCV-116处理的胃癌荷瘤裸鼠移植瘤体积较对照组显著减小,且TCV-116处理组的MVD和VEGF表达水平也较对照组显著降低。结论：选择性AT1R拮抗剂对人胃癌裸鼠移植瘤的生长具抑制作用,其可能是通过抑制肿瘤血管生成的途径产生抑制作用;故阻断血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）可能是治疗胃癌的一种新方法。     

抑制Smac基因表达对胰腺癌裸鼠移植瘤生长影响的研究

[目的]探讨Smac基因对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.[方法]于裸鼠腋下接种200 μL 107/mL的PANC-1细胞悬液,建立人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,将其分为三组：注射PBS液（A组）、转染空载体（B组）、转染Smac基因（C组）,比较三组移植瘤的大小、移植瘤细胞的凋亡率,移植瘤中Smac蛋白表达和微血管密度（MVD）.[结果]与A、B组比较,C组裸鼠移植瘤体积、质量和MVD显著减小;移植瘤细胞的凋亡指数和Smac蛋白的表达率均明显增高,其差异均有统计学意义（P〈0.05）.[结论]脂质体转染Smac基因能抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长,可能与该基因诱导胰腺癌细胞凋亡和抑制肿瘤血管形成有关.     

两种方法建立人胃癌裸鼠移植瘤模型的比较

目的采用两种不同方法建立人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型。方法人胃癌细胞悬液直接注射法:将处于对数生长期的人胃癌细胞悬液接种于裸鼠皮下;胃癌裸鼠瘤转瘤法:将胃癌细胞悬液接种入裸鼠,待肿瘤生长直径在8 mm左右时,处死裸鼠并取其肿瘤组织边缘新鲜的组织,接种于裸鼠皮下,形成皮下移植瘤。观察并比较两种方法所建立的模型肿瘤移植成功率及瘤体生长速度,实验结束后MSP法检测移植瘤组织中Reprimo基因的甲基化水平并采用免疫组织化学法检测移植瘤的Ki-67和CD31分子表达。结果细胞悬液直接注射组的瘤体成瘤速度较瘤转瘤组慢(P<0.05);瘤转瘤组的Reprimo基因甲基化水平及Ki-67和CD31的表达均高于细胞悬液直接注射组(P<0.05)。结论胃癌裸鼠皮下瘤转瘤法的瘤体生长状况优于胃癌细胞悬液直接注射法。     

丙酮酸乙酯对严重联合免疫缺陷小鼠原位移植胃癌转移的抑制作用

目的 探讨丙酮酸乙酯(EP)对严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠原位移植胃癌生长及其肝转移的抑制作用及分子机制.方法 用SGC-7901人胃癌组织原位移植SCID小鼠建立胃癌肝转移模型.术后1周,动物分别腹腔注射不同浓度的EP,3周后取出胃癌和转移肝组织,检测胃癌组织体积、重量及其转移肝结节数量;实时定量PCR和免疫组化法检测不同组中高迁移率族蛋白B-1(HMGB1)、受体糖基化终产物受体(RAGE)、NF-κB、血管内皮生长因子(VEGF)及膜1型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)的表达水平.结果 与对照组比较,EP治疗组的胃癌组织重量、大小及其转移肝结节数量明显减少(P均<0.01).并且EP抑制胃癌及转移肝组织中HMGB1、RAGE、VEGF及MT1-MMP的表达,但对NF-κB表达无明显影响.结论 EP可能通过下调HMGB1-RAGE通路抑制SCID小鼠原位移植胃癌生长及其肝转移,对癌症可能具有治疗作用.     

血管紧张素（1-7）抑制血管生成的机制

脚剖嚣张索（1-7）[angiotensin-（1-7）,Ang-（1-7）]是朦．血割酬黜（renin．angiotensinsystem,R．AS）中新近发现的一种内源性七肽氨基酸肽类激素,通过与血管紧张素Ⅱ（angioteminII,AngII）生理功能相互拮抗,使体内的血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）,胎盘生长因子（Placentalgrowthfactor,PLGF）和环氧化酶．2（cyclooxygenase-2,COX-2）等明显下调,抑制肿瘤血管的增生以及癌细胞的生长,从而防止肿瘤在体内的发生、发展和转移。本文综述了血管紧张素（1—7）抑制肿瘤血管增生和肿瘤生长等方面作用的研究以及与I临床癌症试验相关的研究进展,有望为肿瘤的预防和治疗等研究提供新的方向。