供体Treg细胞对小鼠异基因骨髓移植后GVHD和GVL效应的影响

本研究探讨供体CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg cells)输注对异基因骨髓移植(allo-BMT)后小鼠移植物抗宿主病(GVHD)及移植物抗GVL)效应的影响。建立BALB/c→C57BL/6小鼠EL4白血病骨髓移植模型,体外磁珠分离纯化供鼠CD4+CD25+T细胞,在骨髓移植的同时分别予尾静脉输注CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25-T细胞。以移植后生存期、GVHD临床评分、组织病理形态等为观察指标并进行组间比较。结果显示:白血病对照组小鼠平均生存时间为(17.9±0.7)天,均存在白血病细胞浸润;移植对照组及效应T细胞组平均生存时间为(23.2±1.6)天和(22.3±1.9)天,肝脏、皮肤和小肠病理切片显示均存在GVHD病理改变;Treg细胞组小鼠平均生存时间为(47.3±6.5)天,70%的受鼠获得长期存活,病理显示无GVHD及白血病细胞浸润,其GVHD评分较移植对照组及效应T细胞组明显降低(p0.05)。结论:在小鼠allo-BMT中联合输注供体CD4+CD25+T细胞可减少及减轻GVHD,并保留GVL效应。     

Th2细胞移植减低异基因骨髓移植后移植物抗宿主病的实验研究

免疫抑制剂和Ｔ细胞去除虽然可以明显降低移植物抗宿主病 (ＧＶＨＤ)的发生 ,但存在继发感染、白血病和其它恶性肿瘤高复发的问题。如何改良Ｔ细胞 ,提高异基因骨髓移植(ａｌｌｏ ＢＭＴ)效果成为引人注目的问题。我们采用体外诱导的Ｔｈ2细胞进行ａｌｌｏ ＢＭＴ ,探讨该种Ｔ细胞对ＧＶＨＤ发生的调控作用。材料和方法1　材料　Ｃ5 7ＢＬ/ 6鼠 (Ｈ 2ｂ ,8周 ,雄性 )、ＢＡＣ鼠 (ＢＡＬＢ/ｃ×Ｃ5 7ＢＬ/ 6 ,Ｈ 2ｂ×ｄ ,Ｆ1,10周 ,雌性 )由第一军医大学清洁动物实验部提供。ＲＰＭＩ 16 40培养基为Ｇｉｂｃｏ公司产品 ,鼠白细胞介素 4(ｍＩ…     

异基因造血干细胞移植中杀伤细胞抑制性受体(KIR)在GVHD和GVL 发生中的作用

杀伤细胞抑制性受体(KIR)属于免疫球蛋白超家族成员Ⅰ型跨膜蛋白分子，主要表达于人NK细胞和某些T淋巴细胞。它们的配体为HLA Ⅰ类分子。当KIR所识别的MHC配体缺失时，即表现为对靶细胞的杀伤作用(所谓丢失自我“missing-self”机制)。已证实，)NK细胞和T细胞的KIR分子与靶细胞的MHC分子特异性的识别机制参与移植物抗宿主病(GVHD)的发生并且影响移植物抗白血病(GVL)作用。KIR的存在可能是免疫活性细胞不攻击自身组织的主要机制。KIR基因家族及其配体HLA-C分子均具有基因多态性，因此在HLA相合和不全相合的异基因造血干细胞移植中，供受者KIR基因表达的差异在一定程度上影响移植效果。本文主要就KIR如何影响异基因造血干细胞移植后GVHD和GVL进行综述。     

DLI对GVHD和GVL的效应作用及其机制

异基因造血干细胞是治疗恶性血液系统疾病最有效手段,增强移植物抗白血病效应的同时抑制移植物抗宿主病是临床研究的热点。供者淋巴细胞输注可起到提高GVL效应和推迟GVHD发生时间的作用,本文就DLI对GVHD和GVL效应的作用作一综述。     

分离GVL和GVHD的研究进展

造血干细胞移植中,如何增强移植物抗白血病效应同时抑制移植物抗宿主病是亟待解决的问题,本文从肿瘤细胞表面抗原、供者淋巴细胞输注、细胞因子、非清髓性骨髓移植、自然杀伤细胞、封闭共刺激信号及转基因技术等七个方面综述了这一领域的研究进展.     

分离GVL和GVHD的研究进展

造血干细胞移植中，如何增强移植物抗白血病效应同时抑制移植物抗宿主病是亟待解决的问题，本文从肿瘤细胞表面抗原、供者淋巴细胞输注、细胞因子、非清髓性骨髓移植、自然杀伤细胞、封闭共刺激信号及转基因技术等七个方面综述了这一领域的研究进展。     

Ly49A转基因小鼠脾细胞对半相合异基因骨髓移植后GVHD和GVL的作用

目的　观察Ly4 9A基因转染的C5 7BL 6小鼠脾细胞对半相合异基因骨髓移植 (allo BMT)后移植物抗宿主病 (GVHD)和移植物抗白血病效应 (GVL)的影响。方法　经由逆转录病毒介导将Ly4 9A基因转染至C5 7BL 6小鼠的脾细胞 ;流式细胞仪检测Ly4 9A受体在转染后脾细胞上的表达率 ;以亲代C5 7BL 6H 2 b 小鼠为供者 ,以接种EL96 11红白血病细胞的 (BALB c×C5 7BL 6 )F1H 2 d b(CB6F1)小鼠为受者 ,预处理条件为全身照射 (TBI,6 0 Co照射 10 .5Gy) ,进行脾细胞混合骨髓细胞移植 ,建立半相合异基因急性GVHD模型并在该模型基础上观察Ly4 9A基因转染的脾细胞对GVHD和GVL的作用。结果　Ly4 9A基因转染的C5 7BL 6小鼠的脾细胞 2 4h后蛋白表达率为 (42 .2 0± 4 .87) % ,空载体转染组为(18.6 7± 2 4 8) % ,未转染对照组为 (18.73± 3.82 ) % ,在半相合异基因移植中 (C5 7BL 6 H 2b →CB6F1H 2d b) ,未进行移植的单纯照射组生存期为 (7.80± 3.36 )d ;环磷酰胺治疗组生存期为 (2 1.70±2 87)d ;脾细胞混合骨髓细胞移植组生存期为 (2 9.4 0± 6 .4 3)d ;空载体转染的脾细胞混合骨髓细胞移植组生存期为 (2 9.10± 7.39)d ;Ly4 9A转染的脾细胞混合骨髓细胞移植组生存期为 (45 .0 0± 12 .38)d ,较上述各组生存期明显延长 (P     

异基因造血干细胞移植中NK细胞的作用

摘要异基因造血干细胞移植后，供者细胞可产生强大而持久的免疫治疗功效，其中异源反应性NK细胞活性是T细胞异源反应活性以外的，具有显著抗肿瘤／白血病活性的自然免疫现象，并逐渐受到人们的重视。已证实，NK细胞通过其受体与靶细胞MHC分子特异性的识别机制参与移植物抗白血病（GVL）作用并影响移植物抗宿主病（GVHD）的发生。异基因造血干细胞移植后异源反应性NK细胞输注已从动物实验逐渐应用于临床。本文就NK细胞异源反应性及其在异基因造血干细胞移植中的作用进行综述。     

混合骨髓移植——协调GVHD与GVL的移植新策略

移植物抗宿主病(GVHD)与移植物抗白血病(GVL)本质上都是异基因淋巴细胞针对受者MHC的以细胞免疫反应为主的排斥反应。由于存在不依赖GVHD的GVL,以及正常组织对损伤的代偿修复能力,如果把GVHD控制在一定程度之内,就可以保留GVL作用。在异基因移植物中加入同基因成分进行混合移植,为协调GVHD与GVL提示了一种新的移植策略。异基因淋巴细胞是GVL所必需的效应细胞,同基因淋巴细胞可以通过对后者的抑制减轻GVHD的同时保留GVL。GVHD与GVL的平衡可以通过改变同基因与异基因淋巴细胞的比例而实现。临床混合骨髓移植已取得初步成效。     

骨髓间充质干细胞对异基因骨髓移植后aGVHD和GVL的影响

为了观察骨髓间充质干细胞(BMMSC)对异基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)和移植物抗白血病(GVL)效应的影响，以急性淋巴细胞白血病(ALL)小鼠为动物模型，对其进行allo-BMT的同时，静脉输注体外培养的供鼠BMMSC，同时设立单纯allo—BMT对照组。记录受鼠存活时间；观察受鼠发生aGVHD一般反应及病理学变化；用流式细胞术检测受鼠CD4^ 、CD8^ T细胞亚群的差异；采用性染色体检查检测嵌合状况。结果显示：BMMSC推迟aGVHD发生的时间；降低CD4^ T细胞的同时增加CD8^ T细胞的数量；明显延长受鼠allo—BMIT后的生存时间。结论：BMMSC与allo-BMT联合进行具有一定的GVL效应；BMMSC能抑制allo—BMT后aGVHD的发生，但同时具有一定的GVL效应。     

非清髓造血干细胞移植后致敏供者淋巴细胞输注对嵌合状态及GVHD影响的实验研究

本研究目的是探讨经受者皮肤致敏后的异基因供者淋巴细胞输注(DLI)是否能在促进形成完全供者嵌合(CC)的同时减轻移植物抗宿主病(GVHD)。以C57BL/6小鼠(H-2b,B6)为受者,于第0天接受60Coγ线全身照射(TBI),总剂量为5.5Gy,照射当天移植经粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员后的BALB/c小鼠(H-2d,BA)外周血干细胞(2×107个),移植后第2天腹腔注射环磷酰胺200mg/kg,并分别于移植后第28天输注致敏/未致敏的供者淋巴细胞2×106。结果显示,致敏后DLI的受鼠(黑色)无1例出现GVHD,60天时转变为完全供者嵌合,表型明显呈现为供鼠(白色)特征,CD4+/CD8+T淋巴细胞比值在DLI后早期下降,半月后有所升高,但仍低于正常水平;未致敏的DLI受鼠出现不同程度的GVHD,嵌合率稍有上升,仍表现为混合嵌合体(MC),CD4+/CD8+比值在DLI后早期升高,后期降至正常水平。结论:经受者皮肤致敏后的DLI在诱导CC的同时降低GVHD发病率,CD4+/CD8+比值与GVHD发病率间具有良好的相关性。     

PTD-mFoxp3融合蛋白对异基因骨髓移植后移植物抗宿主病的影响

本研究探讨静脉输注PTD—mFoxp3融合蛋白对同种异基因骨髓移植后移植物抗宿主病的影响。10周龄C57BL／6小鼠为受体并随机分为A、B、c3组,每组10只,移植当天（第0天）接受直线加速器x射线6．0Gy全身照射,4-6h内输注供体BALB／c鼠全骨髓细胞3×10^7＋脾细胞1．5×10^7个。A组于移植前2d和移植后0、1、3、5、7、9、11、13d间断多次输入生理盐水,B组输入mFoxp3蛋白,c组输注等量PTD．mFoxp3融合蛋白。移植后每天观察受体有无移植物抗宿主病的表现;取受体肝脏、空肠上端组织做病理学检查,判断组织损伤及淋巴细胞浸润程度;用ELISA法检测受体外周血中炎性因子IL-2及INF．1浓度;流式细胞术测定长期存活受体外周血供体细胞的比例。结果表明,照射后60d内A、B和c组受体平均生存期分别为（32．95±5．48）d、（38．00±5．45）d和（55．30±3．15）d;病理组织学观察示,A组和B组的小肠及肝脏发生明显的损伤,符合GVHD的表现,c组的病理损伤较轻;酶联免疫吸附测定表明,c组IL-2及IFN-γ浓度明显低于A和B组;长期存活的受体形成了稳定的嵌合体状态,移植后60dA、B、C组活存动物供体细胞比例分别为（79．46±1．80）％、（79．13±2．23）％和（85．92±2．82）％。结论：PTD-mFoxp3融合蛋白可有效降低同种异基因骨髓移植后移植物抗宿主病的发生,并减轻其临床表现,降低死亡率。     

异基因骨髓移植并发移植物抗宿主病小鼠体内IL-22的细胞来源

本研究探讨小鼠经异基因骨髓移植后发生移植物抗宿主病（GVHD）时体内IL-22的细胞来源。分别以C57BL／6和BALB／c小鼠为供受鼠,受鼠经致死剂量全身照射后输注供鼠骨髓和脾淋巴细胞悬液,建立GVHD模型。实验分为正常组（normal）、单纯照射组（TBI）、骨髓移植组（BMT）和骨髓联合脾细胞诱导GVHD组（BS）。ELISA法检测小鼠血浆中IL-22的水平;流式细胞术检测IL-22的细胞来源及所属亚群情况。结果表明,Bs组小鼠血浆中IL-22水平最高,与正常小鼠相比差异有统计学意义（P〈0．01）;BS组小鼠脾、淋巴结和外周血中淋巴细胞均可产生IL-22,且IL-22＋CD4＋T细胞百分率高于IL-22＋CD8＋T细胞;除Th22细胞外,Th1细胞和Th17细胞也是GVHD小鼠体内IL-22的细胞来源,但以Th22细胞分泌IL-22为主。结论：GVHD小鼠体内可产生高水平的IL-22,其主要来源于IFN-γ-IL-17-IL-22＋的Th22细胞。     

细胞因子在急性移植物抗宿主病中的作用

急性移植物抗宿主病（ａＧＶＨＤ）是异基因造血干细胞移植的主要发症,严重限制其应用。细胞因子网络在ａＧＶＨＤ的发病中起重要作用,其作用机制在小鼠模型中已经得到清楚的阐述,而类ａＧＶＨＤ的发病机制尚需进一步探讨。动态监测移植后血清细胞因子ｓＩＬ－２４,ＴＮＦ－α和ＩＦＮ－γ等的表达或检测移植前细胞因子的基因表达可以对ａＧＶＨＤ进行预测,从而有助于采取针一的预防措施。ＧＶＨＤ有移植物抗白血病作用（ＧＶＬ）。ＧＶＨＤ和ＧＶＬ是可分的,细胞因子ＩＬ－２,ＩＬ－１２,ＩＬ－１１,ＫＧＦ和Ｇ－ＣＳＦ有降低ＧＶＨＤ保存ＧＶＬ的作用。     

异基因造血干细胞移植后慢性移植物抗宿主病相关性肾病综合征

目的探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后慢性移植物抗宿主病(cGVHD)相关性肾病综合征(NS)的临床特点及治疗方法。方法对1例急性髓性白血病M2(AML-M2)的患者采用了改良的马利兰/环磷酰胺(Bu/Cy)预处理方案进行了allo-HSCT。移植后8月出现骨髓细胞学复发,给予化疗及两次供者淋巴细胞输注(DLI),回输的单个核细胞(MNC)数分别为6.80×107/kg和8.70×107/kg,第二次DLI后2月患者出现双下肢凹陷性水肿,呈进行性加重,同时伴有口干、眼干的症状,查ALT 263U/L,AST 89U/L,黄疸指数正常,肾功能正常,24h尿蛋白定量4.4g,24h尿白蛋白定量4.15g,血清白蛋白为27.4g/L,胆固醇总量为7.48mmol/L,甘油三酯为3.6mmol/L。抗核抗体(ANA)1:1000,颗粒型,抗U1RNP抗体弱阳性。考虑为cGVHD相关的NS。予硫唑嘌呤、环孢素A和泼尼松治疗,同时给予补充白蛋白、利尿等。结果患者于治疗2月后尿蛋白逐渐转阴,口干、眼干的症状改善,24h尿蛋白定量下降至0.15g,24h尿白蛋白定量下降至0.13g,血清白蛋白上升至38.5g/L,血脂正常,ANA滴度下降至1:100,抗U1RNP抗体转阴。随访到目前移植后22月,第二次DLI后11月,患者尿蛋白持续阴性,骨髓处于持续完全缓解状态,仍在继续随访中。结论cGVHD相关的NS,应尽量行肾组织活检,取得其病理诊断,以便进行相应的治疗。     

单倍体相合骨髓移植后CD4~+CD25~+ T细胞免疫恢复的临床研究

本研究探讨单倍体相合骨髓移植后CD4+CD25+T细胞免疫恢复及其与移植物抗宿主病(GVHD)和复发的关系。采集27例单倍体相合骨髓移植患者在移植后不同时间内的外周血标本,用流式细胞仪检测分析CD4+CD25+T细胞百分比和绝对数,同时比较该细胞亚群恢复与GVHD和白血病复发的关系。结果表明:经过G-CSF动员后供者外周血中CD4+CD25+细胞百分比明显增高(p0.05)。移植后30天CD4+CD25+细胞恢复到正常水平的20%,但在移植后3个月内恢复颇为缓慢,直到180天才恢复到正常水平的50%。CD4+CD25+细胞恢复与急性GVHD的发生无关,但是在慢性GVHD组CD4+CD25+显著增高。移植后1年内未发现复发与CD4+CD25+细胞绝对计数有关。结论:在骨髓移植后给予抗CD25抗体预防GVHD的治疗模式下,CD4+CD25+细胞恢复与急性GVHD的发生无关,但与慢性GVHD的发生似乎有关,而与白血病的复发的关系不明确。     

免疫活性细胞表达杀伤细胞抑制性受体与造血干细胞移植后移植物抗宿主病的关系

本研究的目的是探讨造血干细胞移植后杀伤细胞抑制性受体(KIR)CD158和CD94与GVHD发生的关系。用流式细胞术检测分析T淋巴细胞和NK细胞表达CD158a，CD158b和CD94表达状况，同时用PCR方法分析供受HLA—Cw配型，比较异基因外周血造血干细胞移植(allb-PBSCT)和脐血移植(UCBT)后该KIR分子变化和HLA—Cw相合或错配与GVHD发生的关系。结果表明：无论是PBSCT或是UCBT，移植后CD3^ CD158a^ 和CD3^ CD158b^ T细胞均增高并以CD8^ CD158b^ 细胞升高为主。发生急性与慢性GVHD组CD3^ CD158b^ 细胞均呈不同程度升高，在急性GVHD病例中升高最明显。急性GVHD期(即移植早期)KIR表达增高，慢性GVHD阶段(即移植后期)KIR呈减低趋势。CD94主要表达于CD3^ CD8^ T细胞，在UCBT或PBSCT后CD94在CD4^ T细胞和CD8^ T细胞均明显增高。5例HLA—Cw相合无1例发生重症GVHD；2例HLA—Cw不相合病例，有1例发生急重症GVHD，并死于间质性肺炎(IP)，另1例为AML(M5)，完全植入，无重度GVHD发生，但于53天后复发。4例相关相合移植中2例无急性GVHD，而无关相合4例均发生不同程度GVHD。结论：GVHD的发生与KIR表达有一定关系。CD158b分子可能是移植后早期T淋巴细胞活化的负调控分子。从T细胞表达KIR来理解GVHD发生机理，特别是与HLA-Cw特异性识别结合将有利于寻找一条新的特异性建立免疫耐受和减低GVHD的新策略。     

骨髓间充质干细胞在CD4+CD25+调节性T细胞减轻大鼠移植物抗宿主反应中的作用

本研究探讨间充质干细胞(MSC)对GVHD的作用及其机制.建立大鼠同种异体骨髓移植模型,同时输入供者的T淋巴细胞诱导出移植物抗宿主反应,联合或不联合移植供体来源的MSC,观察受鼠的GVHD的发生情况;利用双荧光标记抗体标记受鼠脾脏和胸腺单个淋巴细胞,通过流式细胞术分析CD4+CD25+调节性T细胞亚群比例的变化,分析MSC的作用机制.结果显示实验组的GVHD的发生程度减轻,存活率提高,而CD4/CD8比值在GVHD组出现不同程度的减少,CD4+CD25+调节性T细胞在实验组中的脾淋巴细胞和胸腺淋巴细胞的比例分别为31.55±7.58%、93.20±2.69%,在GVHD组中的比例分别为20.90±1.90%、57.17±6.79%,实验组中CD4+CD25+调节性T细胞比例比GVHD组中增多,具有显著性差异.结论MSC能有效抑制HSC移植后致死性GVHD的发生,提高生存率,同时MSC可能通过作用于体内调节性T淋巴细胞而间接发挥了抑制GVHD的作用.