抗转化生长因子β_1对植入动物模型的瘢痕疙瘩的影响

目的　探讨抗转化生长因子 β1(anti-TGF - β1)在动物模型上对瘢痕疙瘩的影响。方法　将人体瘢痕疙瘩移植于裸鼠体内 ,用电镜及免疫组化技术观察抗转化生长因子 β1(anti-TGF - β1)对瘢痕疙瘩的影响。结果　抗转化生长因子 β1(anti-TGF - β1)能明显影响成纤维细胞的超微结构 ,抑制其胶原合成。胶原高表达率在实验组为 33.3% ,对照组为 88.9%。统计学分析 2组间有显著差异 (P <0 .0 1 )。结论　抗转化生长因子 β1(anti -TGF - β1)能中和TGF - β1促进成纤维细胞增殖和胶原合成的作用。提示抗转化生长因子β1可能为临床瘢痕的治疗提供新的途径     

几丁糖作用后不同来源成纤维细胞分泌功能的变化

目的 :探讨几丁糖对异常瘢痕成纤维细胞生物学活性的作用。　方法 :以瘢痕疙瘩及增生性瘢痕成纤维细胞为研究对象 ,正常皮肤成纤维细胞为对照 ,用组织块法进行不同标本成纤维细胞体外培养。分别用 3 H 脯氨酸掺入法检测几丁糖对不同来源成纤维细胞合成及分泌胶原功能的影响 ,定量酶联检测试剂盒测定转化生长因子 β1(TGF β1 )、成纤维细胞生长因子 AB(FGF AB)、白细胞介素 8(IL 8)等。　结果 :几丁糖对不同来源成纤维细胞分泌胶原、TGF β1 、FGF AB等的功能均呈剂量依赖性抑制 ,对IL 8则增加 ,且对各组的影响无显著差异 (P >0 .0 5 )。　结论 :几丁糖可以抑制瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞的胶原合成及分泌功能 ,有望在异常瘢痕的防治中发挥重要作用     

抗转化生长因子β_1(anti-TGF-β_1)对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的　探讨抗转化生长因子β1(anti-TGF - β1)对瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成的影响及意义。方法　用电镜观察anti-TGF - β1作用后瘢痕成纤维细胞的形态学变化 ,以及用MTT法和3 H -脯氨酸掺入等方法检测anti-TGF - β1对体外培养的瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原蛋白合成的影响。结果　anti -TGF - β1能明显影响成纤维细胞的超微结构 (细胞核、线粒体、粗面内质网等 )。anti -TGF - β1能抑制成纤维细胞的增殖和胶原蛋白的合成 (P <0 .0 1) ,在一定范围内 (10 μg/ml)呈剂量 -效应关系。抑制作用在 10 μg/ml时最大 ,抑制率达 72 %。结论　anti-TGF - β1能中和TGF - β1,促进成纤维细胞增殖和胶原合成的作用 ;提示anti-TGF - β1的应用可能为临床瘢痕的治疗提供新的途径。     

RNA干扰对人瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β1刺激结缔组织生长因子表达的影响

目的 体外构建结缔组织生长因子(CTGF)序列特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体,研究其对人瘢痕疙瘩成纤维细胞CTGF表达基因和蛋白的影响. 方法 体外构建CTGF序列特异性siRNA质粒表达载体,Dosper脂质体转染人瘢痕疙瘩成纤维细胞后.用10 ng/ml剂量的转化生长因子(TGF-β1)刺激细胞,采用RQ-PCR和Western blot观察CTGF mRNA和蛋白水平的变化.结果经TGF-β1刺激后,重组质粒组CTGF mRNA仅为止常表达的56.6%(P<0.05),CTGF蛋白仅为正常表达的基线水平(P<0.05). 结论 siRNA质粒表达载体可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞CTGF基因表达和蛋白分泌,即使在TGF-β1刺激条件下,其分泌功能仍明显受抑.     

SIRT6通过TGF-β1/Smad信号通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、侵袭和胶原合成

目的 探讨沉默信息调节因子6(silent information regulator 6, SIRT6)对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、侵袭和胶原合成的调控作用和分子机制。方法 收集瘢痕疙瘩和正常皮肤样本，采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测SIRT6 mRNA表达水平，采用Western blot检测SIRT6蛋白表达水平。采取组织块贴壁法从瘢痕疙瘩组织中分离养成纤维细胞。构建SIRT6重组腺病毒(adenovirus, Ad),感染瘢痕疙瘩成纤维细胞实现SIRT6过表达。将瘢痕疙瘩成纤维细胞分为空白对照组、Ad-NC组和Ad-SIRT6组。采用RT-qPCR检测SIRT6 mRNA表达水平。采用Western blot检测SIRT6、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,ColⅠ)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和SMAD家族成员2/3(SMAD family member 2/3,Smad2/3)蛋白的表达水平。采用5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(5-ethynyl...     

α-促黑素细胞激素对瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌转化生长因子-β1的影响

目的：研究α-促黑素细胞激素(α-MSH)对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌转化生长因子-β1(TGF—β1)的影响，为研究瘢痕疙瘩的病因提供新的依据。方法：取人的瘢痕疙瘩组织，利用组织块培养法进行成纤维细胞原代培养，DMEM培养液传代、扩增培养，加入10^-6mmol／L浓度的α-MSH，应用ELISA方法检测其水平，分析α-MSH对人瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌TGF-β1的影响。结果：10^-6mmol／L浓度的α-MSH可明显促进瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β1的分泌。结论：一定剂量的α-MSH对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β1的分泌具有促进作用。     

γ-干扰素对成纤维细胞结缔组织生长因子mRNA水平的影响

目的:研究干扰素-γ(IFN-γ)对体外培养的成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达的影响,探讨IFN-γ治疗病理性瘢痕的可能机制.方法:体外培养正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的成纤维细胞.采用转化生长因子β1(TGF-β1),IFN-γ及二者联合作用于成纤维细胞,用实时定量PCR方法检测成纤维细胞CTGF的mRNA水平.结果:对正常成纤维细胞、增生性瘢痕成纤维细胞和瘢痕疙瘩成纤维细胞,TGF-β1均可以上调其CTGF的mRNA水平(P<0.01),分别提高43倍、22倍和56倍;IFN-γ单独作用可以降低CTGF的mRNA水平,但实验组与对照组的差别无统计学意义;而与TGF-β1联合应用时,IFN-γ可显著拮抗TGF-β1对CTGF的上调作用(P<0.01),分别下调了66%,71.4%和52.4%.结论:IFN-γ可以拮抗TGF-β1对CTGF mRNA的上调作用,这可能是IFN-γ治疗病理性瘢痕的重要机制.     

壳多糖对不同来源成纤维细胞生物学特性的影响

目的:探讨壳多糖对异常瘢痕成纤维细胞生物学活性的作用.方法:以瘢痕疙瘩及增生性瘢痕成纤维细胞为研究对象,正常皮肤成纤维细胞为对照,用含0、0.01%、0.02%、0.04%、0.08%、0.16%、0.24%、0.48%壳多糖培养液对不同来源成纤维细胞体外培养72 h.MTT法检测不同来源成纤维细胞生长增殖情况,24 h 3H-脯氨酸标记法检测胶原的相对量,定量酶联免疫试剂盒检测TGF-β1、b-FGF、IL-8含量,同时观察细胞形态的变化.结果:不同浓度壳多糖呈剂量依赖性抑制不同来源成纤维细胞增殖及胶原、TGF-β1、b-FGF的分泌,同时促进IL-8的分泌,且对异常瘢痕组织的作用明显强于正常皮肤(P<0.05,P<0.01), 而瘢痕疙瘩和增生性瘢痕组间无明显差异.不同来源成纤维细胞无明显形态结构区别.结论:壳多糖可以抑制瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞的生长、增殖、合成及分泌胶原功能,有望在异常瘢痕的防治中发挥重要作用.     

转染人转化生长因子-β3基因对瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响

目的 观察转染人转化生长因子-β3(hTGF-β3)基因对瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响。方法 通过脂质体介导的方法，将人表皮细胞生长因子基因真核表达质粒(pBK-CMV)-TGF-β3质粒转染体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞，采用RT—PCR法检测TGF-β3mRNA的表达，放射免疫(RIA)法测定细胞培养上清液中Ⅰ型和Ⅲ型前胶原的浓度。结果 构建的TGF-β3质粒可成功转染成纤维细胞，并增强Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达，下调Ⅰ／Ⅲ型胶原比值。结论 转染hTGF-β3基因可调节瘢痕成纤维细胞的生物学活性。     

转化生长因子β3对人增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的:探讨重组人转化生长因子β3(rhTGFβ3)在伤口愈合及瘢痕形成中的作用机制.方法:取体外培养的人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞(normal skin fibroblast,NSFb;hypertrophic scar fibroblast,HSFb),应用不同浓度rhTGFβ3,通过放射免疫和Northern bloting杂交方法观察NSFb和HSFb Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及转录水平mRNA表达的变化.结果:(1)人正常皮肤和瘢痕组织成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原有明显的不同表达;(2)与对照组相比,实验组(分别加rhTGFβ3,终浓度为1、5、10ng*L-1)Ⅰ、Ⅲ前胶原合成明显增加(P<0.001),Ⅰ/Ⅲ前胶原的比例变小;(3)实验组rhTGFβ3对NSFb和HSFb生物学作用的影响呈明显的量效关系.结论:rhTGFβ3可有效提高成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成和Ⅰ、Ⅲ型构成比中Ⅲ型胶原的相对含量,其对加速创面愈合及减少瘢痕形成可能具有重要作用.     

RNAi技术阻抑CTGF对瘢痕疙瘩形成影响的体外研究

目的 用RNA干扰（RNAi）技术探讨结缔组织生长因子（CTGF）对瘢痕疙瘩中胶原代谢的影响.方法 采用RNAi技术,将针对人CTGF基因设计合成的3对特异性小干扰RNA（siRNA）-CTGF分别转染体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFB）,通过逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测转染后瘢痕疙瘩组织中CTGF表达量的变化及胶原含量的变化,并与对照组比较.结果 第3对（C3）siRNA-CTGF转染人KFB后CTGF的基因表达及胶原蛋白表达水平显著受抑,其抑制率分别为86.8%及65.6%.结论 质粒siRNA-CTGF转染人KFB后有效沉默CTGF的表达进而使胶原合成降低,CTGF对瘢痕疙瘩形成过程中胶原蛋白的合成有促进作用.     

三羟基异黄酮对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及侵袭作用的影响

目的 观察5,7,4'-三羟基异黄酮(Genistein)对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞生长及侵袭作用的影响,探讨其抗纤维化作用的机制.方法 以25、50、100μmol/L浓度Genistein处理体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,MTT法检测细胞增殖活性,3H-脯氨酸掺入法检测细胞胶原合成,Transwell小室趋化运动模型检测细胞侵袭能力.结果 Genistein作用后,瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及胶原合成作用降低,细胞的侵袭能力显著下降.随着药物浓度增加,对细胞的这种抑制作用也增强.结论 Genistein具有体外抗瘢痕疙瘩成纤维细胞纤维化与侵袭的作用,可成为治疗病理性瘢痕及纤维化疾病的有效药物.     

转化生长因子-β1对大鼠肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原表达的影响

目的观察转化生长因子-β1(TGF-β1)对大鼠肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原和TGF-β表达的影响.方法应用Northern印迹杂交和免疫细胞化学法.结果经TGF-β1作用后,肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA及其蛋白的表达增强,也可见TGF-β的mRNA杂交信号和其蛋白的阳性反应.结论 TGF-β1能够促进大鼠肺成纤维细胞合成Ⅰ、Ⅲ型前胶原;TGF-β能促进肺成纤维细胞自身合成TGF-β.认为肺成纤维细胞自分泌TGF-β是肺纤维化进行性进展的重要原因之一.     

鞘氨醇激酶在人瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达及其作用

目的 探讨鞘氨醇激酶(SphK)1和SphK2在人瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达及其作用.方法 取12例瘢痕疙瘩患者手术切除的瘢痕疙瘩及其周围正常皮肤标本,原代组织块法培养成纤维细胞,分为正常皮肤组、瘢痕疙瘩组和瘢痕疙瘩加转化生长因子β1(TGF-β1)组(瘢痕疙瘩+TGF-β1组).用免疫荧光法观察各组细胞中SphK1和SphK2蛋白的分布;实时PCR法检测SphK1和SphK2 Mrna的表达;蛋白质印迹法检测SphK1和SphK2蛋白的表达.结果 Sphk1蛋白在3组成纤维细胞中均主要分布于细胞核;而Sphk2蛋白在细胞核和胞质中均有表达.瘢痕疙瘩组SphK1mRNA和蛋白表达(分别为0.0608±0.0190、0.8308±0.1093)明显高于正常皮肤组(分别为0.0383±0.0147、0.6800±0.1126,均P＜0.05),但明显低于瘢痕疙瘩+TGF-β1组[分别为0.0790±0.0280(P＜0.05)、1.4267±0.1938(P＜0.01)];SphK2 Mrna和蛋白在3组中的表达差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 SphK1在瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖过程中具有重要作用.TGF-β1可促进SphK1在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达,提示SphK1可能参与了TGF-β信号转导通路的调节.     

5-氮杂-2-脱氧胞苷对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的影响

目的:探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷对人瘢痕疙瘩成纤维细胞生长的抑制作用及对人瘢痕疙瘩成纤维细胞相关因子的影响。方法:收集人瘢痕疙瘩以及周围正常皮肤标本原代培养成纤维细胞,分为瘢痕疙瘩成纤维细胞5-氮杂-2-脱氧胞苷药物干预组、瘢痕疙瘩成纤维细胞对照组、正常皮肤成纤维细胞5-氮杂-2-脱氧胞苷药物干预组及正常皮肤成纤维细胞对照组4组,用RT-PCR检测各组转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA、Smad7mRNA的表达,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测各组细胞的周期及凋亡。结果:人瘢痕疙瘩成纤维细胞较正常皮肤成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高(P=0.001),Smad7mRNA表达降低(P=0.001),细胞周期停滞于G0/G1期(P=0.035)及细胞凋亡(P=0.006)比例降低;5-氮杂-2-脱氧胞苷干预人瘢痕疙瘩成纤维细胞后,TGF-β1mRNA表达降低(P=0.003),Smad7mRNA回升(P=0.000),FCM显示瘢痕疙瘩成纤维细胞停滞于G0/G1期比例增加(P=0.000)并且细胞凋亡率增加(P=0.047),而正常皮肤成纤维细胞组无明显变化(P均>0.05)。结论:甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷可影响瘢痕疙瘩形成相关因子的表达并且可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及促进其凋亡,而对正常皮肤的成纤维细胞无明显影响。瘢痕疙瘩的发病可能与相关基因甲基化有关,5-氮杂-2-脱氧胞苷可能成为瘢痕疙瘩治疗的新选择。     

转化生长因子β2对人增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的 :探讨重组人转化生长因子 β3 (rhTGFβ3 )在伤口愈合及瘢痕形成中的作用机制。方法 :取体外培养的人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞 (normalskinfibroblast,NSFb ;hypertrophicscarfibroblast ,HSFb) ,应用不同浓度rhTGFβ3 ,通过放射免疫和Northernbloting杂交方法观察NSFb和HSFbⅠ、Ⅲ型胶原蛋白及转录水平mRNA表达的变化。结果 :(1)人正常皮肤和瘢痕组织成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原有明显的不同表达 ;(2 )与对照组相比 ,实验组 (分别加rhTGFβ3 ,终浓度为 1、5、10ng·L-1)Ⅰ、Ⅲ前胶原合成明显增加 (P <0 .0 0 1) ,Ⅰ /Ⅲ前胶原的比例变小 ;(3 )实验组rhTGFβ3 对NSFb和HSFb生物学作用的影响呈明显的量效关系。结论 :rhTGFβ3 可有效提高成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成和Ⅰ、Ⅲ型构成比中Ⅲ型胶原的相对含量 ,其对加速创面愈合及减少瘢痕形成可能具有重要作用     

瘢痕疙瘩组织中胶原合成情况的研究

目的 探讨瘢痕疙瘩中胶原过度积累的形成原因。方法 用透射电镜观察瘢痕疙瘩的超微结构。用ABC法免疫组化检测瘢痕疙瘩中新合成的胶原。用地高辛标记的人Ⅰ型前胶原al(Ⅰ）cDNA探针与从瘢痕疙瘩和正常皮肤组织中提取RNA进行斑点杂交。结果 在超微结构上,多数瘢痕疙瘩成纤维细胞拥有丰富的高度发达的粗面内质网。斑点杂交结果显示瘢痕疙瘩组织中Ⅰ型胶原mRNA水平升高。免疫组化染色显示瘢痕疙瘩中成纤维细胞有丰富的Ⅰ型前胶原表达。结论 在活跃增生的瘢痕疙瘩中,成纤维细胞胶原合成功能处于活化状态,胶原合成增加是瘢痕疙瘩中胶原过度积聚的重要原因。     

瘢痕疙瘩发生的肿瘤源性学说

瘢痕疙瘩是皮肤创伤异常修复的结果,虽然其发病机制仍然没有完全阐明,但已知与以下因素密切相关:(1)成纤维细胞、免疫细胞、角质形成细胞等细胞功能异常;(2)透明质酸、胶原、腱抗原蛋白等细胞外基质异常;(3)转化生长因子β(TGF-β)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等生长因子表达异常;(4)细胞凋亡异常;(5)免疫学异常;(6)性激素等内分泌异常;(7)遗传;(8)力学或机械因素;(9)曲安奈德、维A酸、放射等治疗因素.     

芦丁对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨芦丁对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖作用.方法 应用瘢痕疙瘩组织诱导成纤维细胞;芦丁分为0、50、100、200、300μmol/L等5个浓度梯度, 通过CCK-8及Ed U实验观察芦丁对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响, 通过Western blot检测芦丁对TGF-β/Smad信号通路的影响.结果 当浓度低于300μmol/L时, 芦丁对瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞增殖产生明显抑制作用 (P<0.01) , 并且呈剂量依赖性;Ed U实验结果显示, 瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞DNA合成受到芦丁的抑制作用;50、100、200μmol/L条件下, 芦丁可以明显地抑制瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞TGF-β1及Smad2的表达.结论 芦丁通过调控TGF-β/Smad信号通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖.     

转化生长因子β1噬菌体模拟肽抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的实验研究

目的 从噬菌体随机12肽库中筛选获得转化生长因子(TGF)β1噬菌体模拟肽,评估其抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用.方法 以人TGF-β1单克隆抗体为靶,生物淘选噬菌体模拟肽.噻唑蓝(MTT)比色法定量测定活细胞的数量.Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒和流式细胞仪检测对成纤维细胞的凋亡作用.免疫荧光测定检测模拟肽与成纤维细胞的亲和力.实时定量PCR分析方法检测成纤维细胞核因子κB(NF-κB),结缔组织生长因子(CTGF)的表达水平.结果 共获得10种噬菌体模拟肽,具有与TGF-β1、TGF-β2、TGF-β受体Ⅱ(TβRⅡ)、TGF-β诱导因子、NF-κB或细胞分裂原素活化蛋白激酶(MAPK)相似的序列.MTT比色测定结果显示4种(第7～10组)噬菌体模拟肽组能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖(P＜0.05).免疫荧光测定显示是噬菌体上的模拟肽,而不是噬菌体本身,能够与瘢痕疙瘩成纤维细胞相结合;凋亡实验显示这4种噬菌体模拟肽能够轻度促使瘢痕疙瘩成纤维细胞发生轻度的晚期凋亡;实时定量PCR的结果显示这4种噬菌体模拟肽NF-κB的表达降低,表达量分别是阴性对照组的0.28、0.26、0.46、0.30倍,4种噬菌体模拟肽CTGF的表达降低,表达量分别是阴性对照组的0.26、0.60、0.34、0.17倍.结论 噬菌体模拟肽可能是通过调节NF-κB及CTGF的表达,调节瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖.