ＧＤＦ１５在大鼠早期肝癌和人小肝癌组织中的表达

目的:针对前期应用基因芯片(Affymatix Rat 230.2.0)筛选出的大鼠早期肝癌中高表达的人同源基因GDF15(GrowthDifferentiation Factor 15),进一步在人小肝癌组织中检测其表达水平以探讨其作为人小肝癌候选诊断标志物的价值.方法:应用RT-PCR检测GDF15在大鼠早期肝癌结节中的表达以对芯片结果进行初步验证;进一步采用RT-PCR、实时荧光定量PCR对GDF15在随机配对的正常肝脏组织(n=10)与小肝癌n=10)中基因转录水平半定量和定量检测,同时用免疫组化鉴定其在正常肝脏组织n=10),癌旁组织n=26),小肝癌n=12)及大肝癌(n=14)中蛋白水平的表达.结果:GDF15在大鼠早期肝癌结节中较正常组织表达显著上调(P＜0.05),与芯片结果一致.在人小肝癌,其转录及蛋白水平的表达均明显高于正常肝脏组织(P＜0.05).免疫组化结果显示12例小肝癌中10例表达强阳性,其在细胞中的表达定位于细胞浆与细胞外基质.结论:分泌性蛋白GDF15在人小肝癌组织中高表达,提示其具有潜在的小肝癌筛选价值.     

MACC1在肝细胞癌中的表达与临床意义

目的 探讨肝细胞癌组织结肠癌转移相关基因1 (metastasis-associated in colon cancer 1,MACC1)的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化测定108例病理确诊肝细胞癌患者的肝癌组织和癌旁无瘤肝组织中的MACC1蛋白表达情况,实时荧光定量PCR检测30例肝癌组织、癌旁组织以及20例正常肝组织中MACC1 mRNA的表达,分析肝癌组织中MACC1的表达水平与临床病理因素及预后的关系.结果 免疫组化结果显示,肝癌组织中MACC1蛋白表达的阳性率为49.1％(53/108),高于癌旁肝组织34.2％(37/108,P=0.011);实时荧光定量PCR结果显示,MACC1 mRNA在肝癌组织中的表达高于癌旁肝组织及正常肝组织(P＜0.001).单因素方差分析表明肝癌组织中MACC1的表达与肿瘤大小、有无包膜及病理分型密切相关(P＜0.05).生存分析表明MACC1阳性患者的1年、3年和5年总体生存率分别为0.650、0.492和0.280,而MACC1阴性患者1年、3年和5年总体生存率分别0.799、0.684和0.566,差异有统计学意义(P=0.006).结论 肝癌组织中MACC1的表达与肝癌的恶性演变及患者的临床预后密切相关,MACC1有望成为判断肝癌患者临床预后的重要分子,且有可能成为肝癌分子靶向治疗的新靶点.     

实时荧光定量PCR检测原发性肝癌中CDK4基因的表达

目的：应用实时荧光定量PCR法检测原发性肝细胞癌中CDK4基因的表达。方法：提取手术切除人肝癌和癌旁组织总RNA并逆转录为cDNA。应用实时荧光定量PCR法观察人肝细胞癌组织及癌旁组织中cDK4的表达水平。结果：20例肝细胞癌标本中有18例肿瘤组织中CDK4基因表达明显高于癌旁肝组织，其中7例高出4倍以上。结论：实时荧光定量PCR可以准确定量测定基因的表达；CDK4基因在肝细胞癌的发生、发展中可能起重要作用。     

Biological function of a novel gene overexpressed in human hepatocellular carcinoma

Objective To clone the full-length of a differentially expressed cDNA fragment, LC27, and study its biological function tentatively. Methods Northern blot was used to analyze the expression pattern of LC27 in hepatocellular carcinoma, matched nontumor liver tissues, fetal liver and normal adult liver tissues, as well as BEL-7402 hepatocellular carcinoma cell line ESTs splicing and 5’ rapid amplification of cDNA ends (5’ RACE) were used to clone the full-length of LC27 cDNA.An antisense oligodeoxynucleotide approach was used to investigate the biological role of the gene in the proliferation of BEL-7402 cells. Results A 2186 bp novel cDNA with an open reading frame encoding a 283 amino acid protein was cloned.Analysis of the deduced amino acid sequence indicated that it is 38% (88/229) identical to human Golgi 4-transmembrane spanning transporter MTP.The gene and the encoded protein was termed hepatocellular carcinoma overexpressed transmembrane protein (hotp) and HOTP, respectively.Hotp mRNA was almost undetectable in normal adult liver and fetal liver tissues.However, it was significantly up-regulated in hepatocellular carcinoma and some matched nontumor liver tissues, as well as BEL-7402 cells.The proliferation of BEL-7402 cells was suppressed by an antisense oligodeoxynucleotide against hotp mRNA at a concentration of 50 μg/ml. Conclusion HOTP may be an integral membrane transporter protein.The overexpression of the gene in hepatocellular carcinoma may play an important role in hepatocarcinogenesis and disease progression.     

肝癌内高表达新基因的部分cDNA克隆

目的寻找人肝癌相关的基因。方法应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术，对表达序列标记（ＥｘｐｒｅｓｓｅｄＳｅ－ｑｕｅｎｃｅｔａｇｓ，ＥＳＴ）基因克隆进行筛选，以得到的基因片段为探针，筛选人胎肝ｃＤＮＡ文库。结果得到一个在肝癌内高表达的ＥＳＴ基因片段。进一步筛选人胎肝ｃＤＮＡ文库，得到一命名为ＦＬ６的ｃＤ－ＮＡ克隆，核苷酸序列测定表明，ＦＬ６长度为１４６４个碱基，检索最新版本ＧｅｎｅＤａｔａｂａｓｅｓ（ＥＭＢＬ９６．６），未发现同源基因。实验结果还显示该基因在胎儿各组织内有不同的表达特性。结论该基因可能与细胞的增殖、癌变过程相关。     

肝癌相关基因HCCA2的克隆及其与肝癌的相关性研究

目的　研究和克隆新的肝癌相关基因,探索肝癌发生的分子基础。方法　采用mRNA差异显示技术,分析肝细胞癌和癌旁组织间基因的差异表达情况,获得差异表达基因片断。用此基因片断作为探针,通过筛选胎盘cDNA文库,以获得该基因cDNA全长,并用Northern印迹杂交的方法,分析所获得的新基因在43对肝细胞癌、对应癌旁组织中的差异表达和在正常组织中的分布。结果　克隆了一个新的肝癌相关基因HCCA2的全长cDNA,其在人体正常组织中分布较为广泛,在正常肝组织中不表达。该基因在43对肝癌组织中表达的阳性率是79%(34/43)。它的表达与肝癌包膜的完整性、Ki-67蛋白的表达相关（P<0.01）。结论　肝癌差异表达新基因HCCA2可能与肝癌细胞的浸润和增殖能力有关。     

上皮钙粘蛋白、α-和β-连环蛋白在肝癌组织中的表达

目的　观察细胞粘附与信号转导分子E -Cadherin ,α-actenin和 β-catenin在正常肝组织、肝癌旁肝硬化组织和肝癌组织中的表达和胞内分布变化 ,以探讨肝癌发生、发展的机制。方法　应用免疫组织化学法 (链霉抗生物素 -过氧化物酶显色 )对正常肝组织、癌旁肝硬化组织和肝癌组织进行染色。结果　 2例正常肝组织中表现为上述分子在胞膜表达 ,胞浆不表达。 1 7例癌旁肝硬化组织中上述分子出现胞膜表达增强 ,胞浆也出现表达。 1 7例肝癌组织中上述分子表现为胞膜表达减弱或消失 ,胞浆表达增强 ,且表达的细胞稀少和分布不均。结论　肝癌细胞内粘附和信号转导分子E-Cadherin ,α -catenin和 β-catenin发生转位或再分布现象 ,提示癌细胞在一定程度上丧失粘附和信号转导功能     

RT—PCR技术检测原发上皮性卵巢癌MDR1基因表达

目的建立适于临床检测原发上皮性卵巢癌ＭＤＲ１ｍＲＮＡ表达方法。方法应用半定量ＲＴ－ＰＣＲ技术对３７例原发上皮性卵巢癌、１０例正常卵巢和２０例外周血新鲜标本ＭＤＲ１基因进行了检测。结果原发上皮性卵巢癌标本中ＭＤＲ１基因阳性表达率为３０％,而正常卵巢和外周血标本则无ＭＤＲ１基因表达。结论ＲＴ－ＰＣＲ技术检测原发上皮性卵巢癌ＭＤＲ１基因表达具有灵敏度高、相对定量和结果可靠的优点,适于临床应用。     

人原发性肝癌胰岛素样生长因子2基因的印迹状态

目的研究人原发性肝癌中胰岛素样生长因子2(insulin like growth factor Ⅱ,IGF2)基因印迹状态,为进一步研究肝癌发生机理提供线索。方法用限制性片段长度多态性检测IGF2基因杂合状态,用逆转录-酶联聚合反应半定量检测IGF2基因在肝癌及癌旁组织中的表达,分析IGF2印迹状态、表达量与人原发性肝癌的关系。结果55．6％(10／18)的肝癌组织存在IGF2基因印迹的重新获得,与之相对的远癌组织有60％(6／10)也发生了IGF2基因印迹的重新获得。50％(9／18)的癌组织IGF2基因过度表达,但表达量与基因印迹的改变没有显著相关性。结论IGF2基因印迹的重新获得可能参与了肝癌的发生。     

转铁蛋白受体基因表达及其抗体诊断肝癌的研究

目的：研究肝癌转铁蛋白受体（ＴｆＲ）的基因表达及其单克隆抗体免疫诊断肝癌的价值。方法对２０例肝癌手术标本包括癌巢组织、癌旁组织及周围正常组织进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析,了解三种组织ＴｆＲ ｍＲＮＡ表达情况;通过间接免疫荧光及免疫组织化学ＡＢＣ法了解肝癌细胞和正常肝细胞膜上ＴｆＲ的表达情况。结果ＴｆＲｍＲＮＡ表达癌组织最高,癌旁组织次之,周围正常组织最低,后两者间无显著差异,肝癌细胞膜转铁蛋