施万细胞移植对中脑损伤神经元修复的影响

背景：神经元的功能状态与机体的生命活动密切相关。神经元受损后生长相关蛋白-43(GAP-43)表达预示着神经元是否有再生。目的：探讨施万细胞移植对损伤的大鼠中脑神经元修复的影响。设计：随机对照实验研究。地点和对象：实验地点为北京市神经外科研究所；研究对象Wistar大鼠，雌雄不限，体质量(180&;#177;20)g,随机分为实验组和对照组，每组6只动物。干预：BrdU标记的新生大鼠施万细胞移植至电针损伤的大鼠中脑区域，不同时间处死动物，免疫组织化学方法观察BrdU和GAP-43的表达并通过图像分析系统处理实验结果。主要观察指标：移植的施万细胞在脑内的存活时间；损伤神经元的再生情况。结果：施万细胞移植后8个月仍可见BrdU阳性细胞，其数目增加15％，并主要向大脑皮质迁移；移植后1个月损伤的中脑神经元GAP-43的表达与对照组相比差异有显著性意义。结论：施万细胞移植可促进中脑损伤神经元的修复。     

施万细胞移植对电针损伤大鼠中脑新生髓鞘的影响

背景髓鞘的再生预示着损伤神经组织的修复状态. 目的观察施万细胞移植于电针损伤的中脑后是否有新生的髓鞘再生. 设计完全随机设计. 地点和对象实验地点为北京市神经外科研究所;研究对象为 Wistar大鼠,雌雄不限,体质量( 180± 20) g.随机分为单纯电针损伤组和施万细胞移植组,每组 18只动物. 干预新生大鼠坐骨神经施万细胞体外培养, 5溴-脱氧尿嘧啶( BrdU)标记后移植至电针损伤的大鼠中脑网状结构.免疫组织化学染色定位后行半薄切片天青-美蓝髓鞘染色,油镜下观察新生的髓鞘. 主要观察指标①移植的施万细胞在脑内的存活时间.②单纯电针损伤组和施万细胞移植组新生的髓鞘. 结果实验过程中单纯电针损伤组死亡 5只,施万细胞移植组死亡 6只,最终进入分析保持为每组 18只.施万细胞移植后 8个月仍可见 BrdU阳性细胞并主要向大脑皮质迁移;在损伤的脑干区域内 1个月就可见新生的髓鞘. 结论施万细胞移植可促进损伤的中枢神经系统再生.     

施万细胞移植对电针损伤大鼠中脑新生髓鞘的影响

背景：髓鞘的再生预示着损伤神经组织的修复状态。目的：观察施万细胞移植于电针损伤的中脑后是否有新生的髓鞘再生。设计：完全随机设计。地点和对象：实验地点为北京市神经外科研究所；研究对象为Wistar大鼠，雌雄不限，体质量(180&;#177;20)g。随机分为单纯电针损伤组和施万细胞移植组，每组18只动物。干预：新生大鼠坐骨神经施万细胞体外培养，5溴-脱氧尿嘧啶(BrdU)标记后移植至电针损伤的大鼠中脑网状结构。免疫组织化学染色定位后行半薄切片天青-美蓝髓鞘染色，油镜下观察新生的髓鞘。主要观察指标：①移植的施万细胞在脑内的存活时间。②单纯电针损伤组和施万细胞移植组新生的髓鞘。结果：实验过程中单纯电针损伤组死亡5只，施万细胞移植组死亡6只，最终进入分析保持为每组18只。施万细胞移植后8个月仍可见BrdU阳性细胞并主要向大脑皮质迁移；在损伤的脑干区域内1个月就可见新生的髓鞘。结论：施万细胞移植可促进损伤的中枢神经系统再生。     

大鼠脑出血移植施万细胞的实验研究

目的 探讨施万细胞（SCs）移植于大鼠脑出血部位对神经再生的影响。方法体外培养SCs，弘溴脱氧尿嘧啶（BrdU）标记后移植于脑出血模型大鼠的脑出血部位，不同时间处死动物，免疫组织化学双染检测BrdU／髓鞘碱性蛋白（MBP）和BrdU／/生长相关蛋白-43（GAP-43）的表达。结果SCs移植1周后至13周，脑内可见BrdU／MBP双染阳性细胞；移植后第12周可见BrdU和GAP-43阳性细胞，海马部位GAP-43阳性细胞尤其多见。结论 移植的SCs参与髓鞘形成和神经再生。     

施万细胞长期植入中枢神经系统后存活及迁移的实验研究

目的 观察施万细胞长期移植人中枢神经系统后是否存活。方法 取大鼠施万细胞体外培养，一部分经弘溴脱氧尿嘧啶（BrdU）标记后移植至电针损伤的大鼠中脑网状结构，另一部分经Hoechst33342标记后置于PLGA支架内再移植至大鼠全横断脊髓损伤处，分别于移植后的8个月和11个月处死动物，行BrdU免疫组织化学染色及荧光显微镜观察。结果 施万细胞移植人脑内8个月后仍可见较多BrdU阳性细胞，褐色椭圆形，并向大脑皮层迁移；移植于脊髓11个月后荧光湿微镜下可见许多Hoechst33342阳性细胞，发蓝色荧光，形态不规则，在PLGA支架内及其头、尾端脊髓实质内都可见到。结论 施万细胞移植人中枢神经系统后可长期存活，并向远端迁移。     

移植坐骨神经大鼠相应背根神经节中生长相关蛋白43的表达

背景:周围神经移植后,相应的背根神经节感觉神经元胞体内生长相关蛋白43(GAP-43)表达的时程与规律尚未明确.目的:观察大鼠坐骨神经移植术后GAP-43在相应背根神经节中的表达变化.方法:取健康成年雄性Wistar大鼠,随机分为2组,对照组行假手术组:实验组行坐骨神经移植,分别于术后3 d,1,2,4,6,8周6个时间点处死后取其手术侧L4~L5背根神经节,应用Fn-PCR和Westem Blot技术检测GAP-43 mRNA及其蛋白表达.结果与结论:对照组大鼠背根神经节中GAP-43 mRNA表达量较低,且随时间无明显改变;实验组术后1周时GAP-43 mRNA在相应背根神经节中即有表达增强,2周时达到高峰,6~8周表达逐渐减弱.两组大鼠背根神经节中GAP-43蛋白与GAP-43mRNA表达的变化规律相同.结果表明神经损伤后相应神经元的再生能力存在损伤反应性变化.     

大鼠脑缺血/再灌注损伤后神经再生与Nogo-A蛋白、GAP-43基因表达的关系

目的:探讨大鼠脑缺血/再灌注损伤后神经轴突生长抑制因子(Nogo-A)蛋白及生长相关蛋白-43(GAP-43)基因参与神经再生的表达机制。方法:成年健康雄性Wistar大鼠162只,随机分为TUNEL组、Nogo-A组和GAP-43组各54只,各组按照实验要求再随机分为假手术组(A)大鼠6只和缺血1h再灌注(B)大鼠48只,B根据再灌注后2、6及12h,1、2、3、7和14d各6只,采用改良线栓法成功制备各组中B大鼠脑中动脉闭塞再灌注模型(MCAO),利用免疫组织化学方法检测神经细胞凋亡、Nogo-A蛋白和GAP-43基因在海马、皮质和纹状体区的表达并观察脑缺血半影区神经元再生以及梗死灶修复的动态变化。结果:3组中A大鼠在海马、皮质和纹状体区仅见少量凋亡神经细胞以及Nogo-A蛋白和GAP-43基因表达。B大鼠造模成功后2h点阳性细胞表达均开始增加,3d时凋亡细胞、Nogo-A蛋白和GAP-43基因表达达高峰;14d时凋亡细胞呈显著降低,Nogo-A蛋白表达降至最低水平,而14d时GAP-43基因呈较低表达(均P0.05)。结论:Nogo-A蛋白表达对神经元轴突再生具有抑制作用;而GAP-43基因表达能够促进神经可塑性再生。     

吡哆醇诱导性大鼠感觉神经元病的神经再生微环境

目的 观察吡哆醇诱导的感觉神经元病大鼠在坐骨神经挤压伤后神经再生相关蛋白的表达水平,探讨神经元分子微环境变化对神经再生修复的重要意义.方法 制作吡哆醇诱导的感觉神经元病模型,在此基础上制作双侧坐骨神经挤压伤模型.观察神经挤压损伤后7、14、21和28 d大鼠的背根神经节TUNEL标记阳性细胞百分比变化;利用蛋白印迹技术,观察神经再生相关蛋白(GAP-43)和神经生长因子受体(trk A)表达水平变化.结果 背根神经节细胞早期有较多的TUNEL标记细胞,但21～28 d由于大部分细胞变性坏死,TUNEL标记细胞反而减少.背根神经节细胞GAP-43和trk A蛋白有一定水平的表达,但总体水平低于单纯坐骨神经损伤时.结论 中毒造成的感觉神经节病变危及神经元的生存,导致基因表达体系不完整,使损伤神经的再生修复能力下降.     

腺病毒介导CNTF基因转染嗅鞘细胞移植对视神经损伤大鼠GAP-43表达影响

目的:通过检测大鼠视神经损伤后生长相关蛋白(GAP-43)的表达变化观察腺病毒介导睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)基因转染的嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)移植对颅内段视神经损伤后神经纤维长距离再生的促进作用。方法:建立额下显微外科入路大鼠颅内段视神经损伤动物模型并分组,构建腺病毒介导CNTF基因转染的嗅鞘细胞并移植入动物眼玻璃体内,检测GAP-43表达的积分光密度值。结果:成功培养分离出稳定分泌腺病毒介导CNTF基因的嗅鞘细胞,CNTF治疗组和OECs-CNTF治疗组GAP-43表达较损伤对照组显著增加(P<0.01),OECs(嗅鞘细胞)-CNTF组较单纯CNTF治疗组G AP-43表达明显增加,两组间差异明显(P<0.05)。结论:腺病毒介导CNTF转染嗅鞘细胞移植对大鼠颅内段视神经损伤后神经纤维长距离再生具有明显的促进作用。     

骨髓间充质干细胞静脉移植对脊髓损伤大鼠生长相关蛋白-43表达的影响

目的观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)静脉移植对脊髓损伤(SCI)大鼠生长相关蛋白(GAP)-43基因及蛋白表达的影响,探讨BMSCs静脉移植治疗SCI的作用机制。方法采用SCI打击器建立大鼠T11脊髓撞击损伤模型,造模成功后,将大鼠随机分为对照组(n=18)和观察组(n=18)。SCI后1周,对照组大鼠自尾静脉注射无血清的DMEM/F12培养液0.1 ml,观察组大鼠自尾静脉注射BMSCs悬液0.1 ml。SCI后1、2、4、8周,两组大鼠均进行BBB后肢运动功能评分;SCI后2、4、8周,采用RT-PCR检测GAP-43 m RNA的表达,采用免疫组化染色检测GAP-43蛋白的表达。结果与对照组比较,观察组SCI后2、4、8周BBB评分显著升高(P0.001),GAP-43阳性表达显著增强(P0.001),GAP-43 m RNA的相对表达量升高(P0.05)。结论 BMSCs移植能增强SCI大鼠GAP-43在基因及蛋白水平的表达,从而促进SCI的再生修复。     

人神经生长因子基因修饰的许旺细胞治疗脊髓损伤的实验研究

目的:观察神经生长因子(nerve growth factor,NGF)基因修饰的许旺细胞(Schwann cells,SCs)对大鼠脊髓损伤后运动功能恢复及GAP-43的表达情况,探讨其对脊髓损伤修复的作用机制.方法:清洁级SD大鼠52只,随机分为EGFP-N1-NGF转染许旺移植组16只(A组),许旺细胞移植组16只(B组),PBS对照组12只(C组)和假手术组8只(D组),用改良Allen法制造大鼠脊髓损伤模型.分别于术后7,14,21,28 d用BBB评分法观察动物行为学的变化,用肌电图检测动物中枢传导速度和波幅;然后处死动物,取损伤区1 cm范围脊髓节段,常规石蜡包埋,组织切片,GAP-43免疫组织染色观察脊髓损伤的组织学变化.结果:BBB评分结果D组＞A组＞B组＞C组;肌电图检测结果显示中枢传导速度A、B、C组间差别有统计学意义P＜0.05,D组明显高于其它三组;GAP-43免疫组化检测结果提示A＞B＞C组,D组仅有少量表达.结论:本研究证实NGF基因修饰的许旺细胞能够促进脊髓损伤的恢复,可能是促进神经轴突的生长有关.     

Schwann细胞移植对电针损伤大鼠中脑新生髓鞘的影响

目的观察Schwann细胞移植于电针损伤的中脑后是否有新生的髓鞘。方法新生大鼠坐骨神经Schwann细胞体外培养 ,5溴 脱氧尿嘧啶 (BrdU)标记后移植至电针损伤的大鼠中脑网状结构。免疫组织化学染色定位后行半薄切片 ,天青 美蓝髓鞘染色 ,油镜下观察新生的髓鞘。结果Schwann细胞移植后 8个月仍可见BrdU阳性细胞 ,并主要向大脑皮层迁移 ;在损伤的脑干区域内 ,移植后 1个月就可见新生的髓鞘。结论Schwann细胞移植可促进损伤的中枢神经系统再生     

MSCs移植并GS对大鼠脊髓损伤后期修复的影响

目的观察骨髓间充质干细胞（MSCs）移植联合应用促细胞生长物质（GS）对脊髓损伤后期大鼠运动功能修复的影响。方法应用全骨髓法分离培养MSCs,10 mg/L的BrdU标记细胞核。将成年雄性Wistar大鼠36只,以改良Allen打击法制备T10脊髓损伤模型,制模后2周随机分为MSCs＋GS组、MSCs组与对照组,每组12只,伤后2周各组损伤处分别注入MSCs＋GS、单纯MSCs、培养液。分别于伤后1、2、3、4、5、6周进行BBB评分;损伤后6周处死大鼠,取损伤段脊髓及其上下各1 cm组织,行苏木精-伊红染色及SABC免疫组织化学方法染色,观察损伤脊髓组织病理变化和BrdU阳性细胞及GAP-43的相对表达。结果制模后1~2周3组大鼠后肢运动功能BBB评分未见明显差异（F=0.322、0.044,P〉0.05）,3~6周MSCs＋GS组大鼠后肢运动功能BBB评分较MSCs组和对照组高（F=13.729~97.187,P〈0.05）;MSCs＋GS组大鼠脊髓损伤中心及头、尾端均可见BrdU染色阳性细胞。同时,MSCs＋GS组及MSCs组损伤节段脊髓内GAP-43的表达面积明显多于对照组,MSCs＋GS组多于MSCs组。结论 MSCs移植联合GS促进大鼠损伤脊髓结构和功能恢复的效果明显优于单纯细胞移植,两者联用具有协同效应。     

高压氧联合骨髓间充质干细胞移植修复缺氧缺血性脑损伤

背景:单纯骨髓间充质干细胞移植对脑梗死组织的修复作用并不理想,需要结合药物及生物工程材料等手段进行综合治疗。目的:验证高压氧结合骨髓间充质干细胞移植修复大鼠缺氧缺血性脑损伤的效果。方法:体外培养大鼠骨髓间充质干细胞。应用线栓法建立大脑中动脉阻塞大鼠模型,按随机区组法分为3组,即对照组、骨髓间充质干细胞移植组及高压氧+骨髓间充质干细胞移植组。静脉移植后24h,3d及伤后1,2周行Longa行为学评分,检测神经功能的损伤情况。移植2周后,应用RT-PCR法测定生长相关蛋白43mRNA的表达,并以BrdU免疫组化和苏木精-伊红染色行梗死处组织学检查以证实恢复程度。结果与结论:移植后1周,高压氧+骨髓间充质干细胞移植组大鼠神经功能障碍评分低于骨髓间充质干细胞移植组,骨髓间充质干细胞移植组低于对照组(P<0.05)。2周后脑梗死周围组织生长相关蛋白43mRNA的表达高压氧+骨髓间充质干细胞移植组高于骨髓间充质干细胞移植组,骨髓间充质干细胞移植组高于对照组(P<0.05)。BrdU免疫组化和苏木精-伊红切片中的神经元数量高压氧+骨髓间充质干细胞移植组多于骨髓间充质干细胞移植组,骨髓间充质干细胞移植组多于对照组(P<0.05)。提示高压氧联合骨髓间充质干细胞静脉移植治疗大鼠缺氧缺血性脑损伤可明显改善大鼠的神经功能,效果优于单纯骨髓间充质干细胞移植。     

止颤汤干预神经干细胞移植帕金森病大鼠脑内多巴胺及其代谢产物的变化

背景:如何促进脑内多巴胺含量的增加以及减少多巴胺的代谢,是治疗帕金森病的热点所在.目的:从多巴胺代谢途径角度观察止颤汤对神经干细胞移植帕金森病大鼠的脑黑质中多巴胺及其代谢产物含量的变化.方法:以大鼠脑立体定位和1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶建立帕金森病大鼠模型.应用高效液相色谱法测定帕金森病大鼠中脑多巴胺及其代谢产物的含量.结果与结论:止颤汤可以提高神经干细胞移植后帕金森病大鼠中脑多巴胺及其代谢产物双羟苯乙酸的含量,但对代谢产物高香草酸无明显影响.通过促进帕金森病大鼠干细胞移植后神经干细胞的存活,使之定向分化为多巴胺能神经元并分泌多巴胺,同时抑制多巴胺分解达到治疗作用.     

自体脾组织移植神经再生中生长相关蛋白mRNA的表达

背景严重脾破裂患者可通过自体脾组织大网膜内移植挽救脾脏的功能,移植脾组织是否受神经调控目前尚不清楚.生长相关蛋白(growthassociated protein,GAP-43)是一种神经系统特异性蛋白质,通过检测移植脾组织内GAP-43以了解其神经再生情况.目的研究自体脾组织移植术后不同时相再生脾组织中GAP-43mRNA的表达,揭示GAP-43+神经在自体移植脾组织中的再生规律.设计随机对照实验. 单位一所大学的外科应用解剖与手术学教研室.材料实验于2002-09/2003-07在第三军医大学外科应用解剖与手术学教研室进行.选用Wistar大鼠120只,随机分为实验组和假手术组(对照组)制作动物模型.术后两组动物在同等条件下饲养,分别于15,30,60,90,120,180 d,取脾组织进行观察.方法采用Tripure试剂按常规方法提取组织中总RNA.采用M-MLV反转录试剂盒将总RNA反转录cDNA.凝胶图像分析定量测定GAP-43mRNA.主要观察指标①反转录-聚合酶链反应检测结果.②图像分析结果.结果脾组织移植手术后30 d,自体移植脾组织中出现GAP-43 mRNA;手术后90 d达到高峰;手术后120～180 d,移植脾组织中GAP-43mRNA逐渐接近正常脾组织.结论GAP-43 mRNA在自体移植脾组织中有表达,提示移植脾组织中有神经纤维的再生.     

许旺细胞源神经营养因子对脊髓背根节感觉神经元的保护作用

背景:许旺细胞源神经营养因子是从许旺细胞胞浆中分离纯化出的一种活性蛋白质,能明显的维持脊髓前角运动神经元的存活和促进周围神经的再生。目的:观察许旺细胞源神经营养因子对周围神经高位损伤所致脊髓背根节感觉神经元死亡的保护作用。设计:随机对照动物实验。单位:深圳市第二人民医院。材料:选用清洁级出生3周SD幼鼠30只,雌雄不拘。随机分为营养因子组和生理盐水对照组,各15只。两组动物均以左侧为正常侧,右侧为损伤侧。方法:实验于2003-05/2003-07在中山大学医学院实验动物中心完成。①两组大鼠均建立L4,5神经根高位离断动物模型,并将近侧神经残端与硅胶管吻接。根据分组,胶管内分别注入许旺细胞源神经营养因子(60mg/L)或生理盐水各20μL,凡士林封固硅胶管两端。②术后4周处死动物取材,观察损伤神经根背根节感觉神经元的存活率和形态学变化。主要观察指标:①两组鼠损伤侧坐骨神经再生情况大体观察。②两组鼠背根节神经元存活情况。③背根节神经元形态学变化。结果:30只鼠全部进入结果分析。①两组鼠坐骨神经再生情况大体观察:营养因子组神经新生轴突沿硅胶管生长,长度达1cm;对照组新生轴突较细少,长度约0.8cm。②两组鼠背根节神经元存活情况:营养因子组背根节内有少量纤维组织增生,神经元丢失不明显,存活率是91.8%,对照组背根节内纤维组织增生明显,神经元大量丢失,存活率是58.6%,营养因子组神经元存活率较对照组高33.2%(P<0.01)。③背根节神经元形态学变化:对照组背根节神经元的直径和面积显著低于营养因子组和正常侧犤(21.8±1.4)μm,(373.1±50.9)μm2比(24.8±1.1)μm,(482.8±42.2)μm2和(24.5±1.3)μm,(471.5±51.4)μm2,P<0.01犦,而营养因子组神经元直径和面积与正常侧相比差异无显著性(P>0.05)。结论:许旺细胞源神经营养因子对受损的背根节感觉神经元有明显的神经营养活性。