Taurolidine 联合X射线对小鼠恶性黑色素瘤细胞周期进程的影响

目的：观察taurolidine联合X射线照射对小鼠恶性黑色素瘤（B16-4A5和B16-F10）细胞周期进程的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的发生机制。方法：选择B16-4A5和B16-F10细胞系按给药浓度随机分为4组,taurolidine剂量分别为0、25、50和100  μmol.L^-1,同时进行1、2和4 Gy X射线照射,采用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,Western blotting分析cyclin B、cdc2和caspase-3的表达。结果：与25  μmol.L^-1 taurolidine组比较, 50和100  μmol?L-1 taurolidine组诱导B16-4A5和B16-F10细胞发生_G0/_G1期阻滞,细胞数分别升高54.9%、73.7%和36.8%、55.5%（P＜0.05）; 50  μmol.L^-1 taurolidine联合2和4 Gy X射线照射组,细胞G2/M期阻滞消除,细胞数分别降低52.1%、44.2%和59.3%、52.7%（P＜0.05）。与对照组、单纯taurolidine组及单纯照射组比较,联合4 Gy X射线照射组cyclin B和cdc2的表达降低,caspase-3的表达升高（P＜0.05）。结论：taurolidine联合X射线照射可去除G2/M期阻滞,可选择地抑制肿瘤细胞cyclin B和cdc2的表达、增强caspase-3的表达,共同诱导细胞凋亡。     

流式细胞术分析不同剂量X射线对HL—60细胞周期的影响及其诱导的细胞凋亡

比较不同剂量X射线对HL－60细胞的影响,建立X射线诱导HL－60细胞凋亡的生物研究模型,探索细胞周期检测点对放射剂量的耐受性,采用对数生长期的HL－60细胞经2,5,10,15,20Gy的X射线照射后培养4h,用硫式细胞仪分析HL－60细胞周期的改变,结果发现,不同剂量X射线照射均可诱导HL－60细胞凋亡,凋亡率有随照射剂量增大而增高的趋势,经2,5Cy剂量照射的HL－60细胞主要表现为S期细胞的比例减少,G2／M期细胞的比例增多,经15,20Gy剂量照射的HL－60细胞主要表现为S期细胞和G2／M期细胞的比例均减少,结果显示,以X射线照射HL－60细胞可建立理想的射线诱导的细胞凋亡模型,小剂量照射和大剂量照射可能引起不同时相的细胞发生凋亡,提示细胞对放射剂量的反应性与细胞周期检测之间存在一定的关系。     

电离辐射对Jurkat T细胞周期进程的影响

目的：探讨电离辐射诱导Jurkat T细胞损伤过程中细胞周期进程的变化规律。方法：采用流式细胞术 (FCM) 检测低剂量（0.075 Gy）和较大剂量（0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy）X射线照射后Jurkat T细胞周期进程变化的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果：时间-效应关系研究发现,2.0 Gy X射线照射后Jurkat T细胞相继发生S期延迟和G₂期阻滞,S期细胞百分率于照射后立即增加(P<0.001),而G₂+M期细胞百分率照射后8 h开始显著增加（P<0.001）。剂量-效应关系研究发现,75 mGy低剂量X射线照射即可诱导Jurkat T细胞发生S期延迟（P<0.001）和G₂期阻滞（P<0.05）;0.5~6.0 Gy较大剂量X射线照射后,Jurkat T细胞发生S期延迟和G₂期阻滞。与假照组相比较,G₀/G₁期细胞百分率显著降低（P<0.001）,在0.5~6.0 Gy内具有剂量依赖性,而S期和G₂+M期细胞百分率显著升高（P<0.05或P<0.001）。结论：X射线照射可以改变Jurkat T细胞周期进程,诱导其相继发生S期延迟和G₂期阻滞,在0.5~6.0 Gy内具有剂量依赖性。     

5-氟尿嘧啶对Jurkat和EL-4细胞周期解偶联的影响

目的：研究5-氟尿嘧啶（5-FU）不同剂量和给药后不同时间Jurkat和EL-4细胞周期解偶联的变化规律。方法：采用不同剂量（0、0.001、0.010、0.100和1.000 mg•L^-1）5-FU处理Jurkat和EL-4细胞,给药0、4、8、16、24和48 h后分别收集细胞,应用碘化丙啶（PI）荧光标记及流式细胞术（FCM）检测分析细胞倍体变化的剂量-效应和时间-效应规 律。结果：不同剂量5-FU给药后16 h,Jurkat细胞八倍体细胞百分率在0.001、0.010、0.100和 1.000 mg•L^-1各个剂量组均显著低于0 mg•L^-1组（P<0.01） ,无剂量依赖性;EL-4细胞八倍体细胞百分率在0.010 和 0.100 mg•L^-1组显著高于0 mg•L^-1组（P<0.05）。0.100 mg•L^-15-FU 给药后,Jurkat细胞八倍体细胞百分率在8、16和24 h显著低于相应对照组（P<0.01）,48 h显著高于相应对照组（P<0.01）;EL-4细胞八倍体细胞百分率在4、8和16 h显著高于相应对照组（P<0.05）,48 h显著低于相应对照组（P<0.01）。结论：5-FU可以诱导EL-4细胞发生细胞周期解偶联,而不能诱导Jurkat细胞发生细胞周期解偶联。     

冬凌草甲素上调PLK1对Jurkat细胞细胞周期的影响

目的·探索冬凌草甲素对Jurkat细胞增殖的抑制作用及其机制.方法·采用CCK-8法、流式细胞术、瑞士吉姆萨染色、蛋白质印迹法,检测冬凌草甲素处理后Jurkat细胞的增殖情况、细胞周期、凋亡情况及有丝分裂相关蛋白激酶表达情况.蛋白质印迹法检测冬凌草甲素处理后,Jurkat细胞中Polo样蛋白激酶1(Polo-like ...     

X射线诱导Raji细胞凋亡的实验研究

目的探讨X射线对人Burkkit淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖及凋亡的影响。方法用不同剂量X射线照射细胞,并在不同时间段用倒置显微镜观察照射后细胞的形态变化及生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期,并观察X射线对克隆形成的影响。结果 16Gy照射后48h对Raji细胞的抑制率(92.67±1.20)%最显著;8Gy照射后48h早期凋亡率(42.04±3.62)%最高;8Gy照射后24h细胞周期G2/M期细胞(57.86±3.31)%,明显大于正常对照组(14.54±2.32)%;8Gy照射后第7天无克隆形成,第14天克隆数为(5.33±2.40),明显小于正常对照组第7天(116.67±20.28)和第14天(263.33±20.27)。结论 X射线可抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡,照射后细胞周期阻滞在G2/M期,X射线8Gy照射后不能完全抑制Raji细胞的增殖。     

流式细胞术分析不同剂量X射线对HL-60细胞周期的影响及其诱导的细胞凋亡

比较不同剂量X射线对HL-60细胞的影响,建立X射线诱导HL-60细胞凋亡的生物研究模型,探索细胞周期检测点对放射剂量的耐受性.采用对数生长期的HL-60细胞经2,5,10,15,20Gy的X射线照射后培养4h,用流式细胞仪分析HL-60细胞周期的改变.结果发现,不同剂量X射线照射均可诱导HL-60细胞凋亡,凋亡率有随照射剂量增大而增高的趋势.经2,5Gy剂量照射的HL-60细胞主要表现为S期细胞的比例减少,G2/M期细胞的比例增多,经15,20Gy剂量照射的HL-60细胞主要表现为S期细胞和G2/M期细胞的比例均减少.结果显示,以X射线照射HL-60细胞可建立理想的射线诱导的细胞凋亡模型,小剂量照射和大剂量照射可能引起不同时相的细胞发生凋亡,提示细胞对放射剂量的反应性与细胞周期检测点之间存在一定的关系.     

低剂量辐射诱导EL-4淋巴瘤细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的时间效应

目的：研究低剂量辐射诱导EL-4淋巴瘤细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的时间效应，以揭示低剂量辐射生物效应及其诱导适应性反应的可能机制。方法：实验分D2组（攻击剂量）、D1（诱导剂量）+ D2组和假照组。用X射线照射离体EL-4淋巴瘤细胞，其D1为75 mGy（剂量率12.5 mGy•min^-1），D2为1.5 Gy（剂量率287 mGy•min^-1），D1和D2间隔为3~60 h。通过流式细胞仪检测其细胞凋亡和细胞周期进程的变化。结果：当D1和D2间隔为3~24 h时，D1+D2组细胞凋亡百分数明显低于D2组（P<0.05或P<0.01），G₀/G₁期细胞百分数不同程度低于D2组，而S期细胞百分数明显高于D2组（P<0.05）。结论：75 mGy（12.5 mGy•min^-1）照射后3~24 h，进行1.5 Gy（287 mGy•min^-1）照射，可诱导体外EL-4淋巴瘤细胞凋亡和细胞周期进程的适应性反应。     

低剂量辐射诱导EL-4淋巴瘤细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的剂量率效应

目的：观察低剂量辐射诱导EL-4淋巴瘤细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的剂量率效应,以揭示低剂量辐射生物效应及其诱导适应性反应的可能机制。方法：实验分D2组（攻击剂量）、D1（诱导剂量）+ D2组和假照组。用X射线照射离体EL-4淋巴瘤细胞,其D1为75 mGy（剂量率6.25~200.00 mGy•min^-1）,D2为1.5 Gy（剂量率287 mGy/min）,D1和D2间隔6 h。通过流式细胞仪检测其细胞凋亡和细胞周期进程的变化。结果：当D1剂量率为6.25~50.00 mGy,D1 + D2组细胞凋亡百分数明显低于D2组（P<0.05）G₀/G₁期细胞百分数明显低于D2组（P<0.01）,而S期细胞百分数不同程度高于D2组。结论：D1为75 mGy（剂量率6.25~50.00 mGy•min^-1）,D2为1.5 Gy（剂量率287 mGy•min^-1）、D1和D2间隔6 h,可诱导体外EL-4淋巴瘤细胞凋亡和细胞周期进程的适应性反应。     

γ—射线诱发人淋巴细胞微核形成与细胞周期关系的初步研究

本研究用γ－射线诱发人外周血淋巴细胞微核，使用细胞周期控制、ＢｒｄＵ免疫荧光染色、松胞素阻滞胞质分裂等技术，研究淋巴细胞微核形成与细胞周期的定量关系。     

电离辐射和5-氟尿嘧啶对EL-4细胞周期的解偶联作用

目的：研究电离辐射和5-氟尿嘧啶（5-FU）对EL-4细胞周期解偶联的时间-效应关系和剂量-效应关系。方法：取指数生长期EL-4细胞,采用不同照射剂量（0、1.0、2.0和4.0 Gy）电离辐射和不同浓度5-FU（0、0.001、0.010、0.100和1.000 mg•L^-1）处理EL-4细胞,于0、4、8、16、24和48 h后分别收集细胞,碘化丙啶（PI）荧光标记及流式细胞术（FCM）检测细胞倍体变化。结果：与假照组比较,2.0 Gy X射线照射后,EL-4细胞二倍体细胞百分率在照射后8~24 h显著增加（P<0.05或P<0.01）,48 h恢复至正常水平;四倍体细胞百分率在照射后8~48 h显著降低（P<0.05或P<0.01）;八倍体细胞百分率在照射后16~24 h显著降低（P<0.05）。1.0~4.0 Gy X射线照射后16 h,与假照组比较,二倍体细胞百分率剂量依赖性增加（P<0.05或P<0.01）,四倍体细胞百分率呈剂量依赖性下降（P<0.01）,八倍体细胞百分率变化不显著。0.100 mg•L^-1 5-FU 给药后,与0 mg•L^-1组比较,EL-4细胞二倍体细胞百分率在给药后16~48 h显著降低（P<0.01）;四倍体细胞百分率在给药后8~24 h显著增加（P<0.05 或 P<0.01）,48 h回降;八倍体细胞百分率在给药后4~16 h显著增加（P<0.05）。不同剂量5-FU给药后16 h,与0 mg•L^-1组比较,EL-4细胞二倍体细胞百分率显著降低（P<0.05或P<0.01）,四倍体细胞百分率显著增加（P<0.05或P<0.01）,二者变化在0.001~1.000 mg•L^-1剂量范围内呈剂量依赖性;八倍体细胞百分率仅在0.010和0.100 mg•L^-1组显著增加（P<0.05或P<0.01）。结论：1.0~4.0　Gy电离辐射无诱导EL-4细胞发生细胞周期解偶联作用,0.010~0.100 mg•L^-1 5-FU可以诱导EL-4细胞发生细胞周期解偶联。     

三羟基苯甲酸纯化物及其化合物对Jurkat细胞周期进程及凋亡的影响

目的： 研究不同浓度菱角三羟基苯甲酸（TBA）纯化物及其化合物对人 T淋巴细胞白血病Jurkat细胞周期进程及凋亡的影响,并探讨2种不同来源TBA对肿瘤生长抑制的可能机制。方法： 2种不同来源TBA分别作用于对数生长期的Jurkat 细胞,每种TBA分为5组（0、3.125、6.250、12.500和25.000 mg/L）,作用于Jurkat 细胞30 h后,经流式细胞仪分别检测不同浓度菱角TBA纯化物及其化合物处理的Jurkat 细胞周期各时相及其凋亡率变化。 结果： Jurkat细胞分别经过不同浓度菱角TBA纯化物处理后,细胞凋亡率明显高于0 mg/L组（P<0.05或P<0.01）;与对照组比较,3.125 mg/L组变化无差异;6.250、12.500和25.000 mg?L-1组变化有差异（P<0.05或P<0.01）。Jurkat细胞分别经过不同浓度TBA化合物处理后,与对照组比较,细胞凋亡率在3.125 mg?L-1组时即存在差异（P<0.05）,随其剂量增加而增加（P<0.05 或P<0.01),各用药组间变化无差异。经TBA纯化物作用后,G1期细胞百分数明显高于对照组（P<0.01）,并随TBA剂量增加而增加,在6.250 ~ 25.000 mg/L浓度下S期细胞百分数明显低于对照组（P<0.05或P<0.01）,G2期无显著变化。经TBA化合物作用后在6.250 ~ 25.000 mg/L浓度下G1期百分数明显高于对照组（P<0.05 或P<0.01）,S期细胞百分数明显低于对照组（P<0.05 ）,G2期无显著变化。各用药组间变化无差异。结论： 2种不同来源TBA均能够诱导细胞凋亡;均能够阻止人 T淋巴细胞白血病细胞的 G1期细胞向S期进程,其抑制作用可能通过G0/G1期阻滞引起。     

丝裂霉素对小鼠淋巴瘤EL-4细胞P21蛋白表达的影响

目的：探讨丝裂霉素（MMC）对小鼠淋巴瘤EL-4细胞P21蛋白表达的影响。 方法：采用免疫荧光染色及流式细胞术检测P21蛋白表达的时程和量效改变。 结果：时程实验研究证实,给予2 mg•L^-1 MMC处理后,EL-4细胞中P21蛋白表达在2～48 h 明显高于对照组（P<0.05, P<0.01）。量效实验结果证实,给予1、2和4 mg•L^-1 MMC处理后24 h,P21蛋白表达与对照组相比明显增高（P<0.01）。结论：MMC能诱导P21蛋白表达增高,并存在时间和剂量依赖关系。     

EL一4细胞凋亡与细胞周期的辐射效应

采用流式细胞术（ＦＣＭ）研究了０．５、１、２、４ＧｙＸ射线照射后，小鼠淋巴瘤细胞ＥＬ一４的凋亡与细胞周期的剂量效应关系。结果表明：以上剂量照射后２４ｈ，Ｇ１期细胞呈剂量依赖性增加，出现明显的Ｇ１阻滞；而Ｓ期细胞则剂量依赖性减少；Ｇ２期出现明显的Ｇ２阻滞；细胞凋亡亦呈剂量依赖性增力。该结果提示：ＥＬ一４细胞经较高剂量ｘ射线照射后，出现明显的ＤＮＡ合成抑制和Ｇ２阻滞，致使ＥＬ一４细胞的有丝分裂延迟。统计分析表明：Ｇ１阻滞与细胞凋亡高度相关ｒ＝０．９１。     

稳定表达结核分枝杆菌38抗原的EL-4细胞株的建立及鉴定

将结核分枝杆菌的38抗原基因片段经PCR方法扩增并插入到pcDNA3真核表达载体中，通过脂质体转染EL-4细胞，经G418筛选，用RT-PCR方法和ELISA方法检测整合和表达情况。结果成功地构建了pcDNA3—38抗原重组质粒，转染细胞中可检测到38抗原的存在，PCR扩增也证实38抗原基因已稳定整合于EL-4细胞的染色体中。本实验为今后在小鼠体内检测结核DNA疫苗激发的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应奠定了基础。     

胆固醇缺乏对Jurkat细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨胆固缺乏时对Ｊｕｒｋａｔ细胞增殖功能及凋亡的影响。方法 用Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ抑制Ｊｕｒｋａｔ细胞内源性胆固醇的合成,以低浓度脂蛋白受体（ＬＤＬ－Ｒ）介导的低密谋脂蛋白（ＬＤＬ）内吞提供细胞外源性胆固醇,细胞处理１～３天后,用流式细胞仪分析各细胞周期相绫分布,并定量分析胆固醇缺乏对处理３天后细胞凋亡的影响。结果 Ｊｕｒｋａｔ经去脂血清培养基加Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ处理３天后,细胞受阻于Ｃｕ     

脂氧素A4对Jurkat T细胞游离钙浓度变化及增殖的影响

目的 研究脂氧素A4(LXA4)对Jurkat T细胞内游离钙离子浓度变化及细胞增殖的影响.方法 钙离子荧光探针Fluo-3/AM负载细胞后,用激光共聚焦扫描显微镜动态检测活细胞内游离钙离子浓度的变化;CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,并结合流式细胞仪进行细胞周期分析.结果 ①采用含钙细胞外液时,LXA4降低正常Jurkat T细胞内游离钙离子浓度,而用无钙细胞外液时,细胞内游离钙离子浓度下降不明显;②LXA4呈剂量依赖性抑制钙池操纵钙通道(SOC)激活剂thapsigargin(TG)引起的Jurkat T细胞内游离钙离子浓度的增高,100 nmol/L LXA4也能抑制抗CD3单抗(a-CD3)引起的细胞内钙离子浓度的增高,SOC阻滞剂2-Aminoethoxydiphenylborate(2-APB)能显著抑制TG引起的钙内流;③LXA4呈剂量依赖性抑制a-CD3和抗CD28单抗(a-CD28)诱导的Jurkat T细胞增殖,细胞周期分析发现LXA4阻止JurkatT细胞由G1期进入S期,降低S期细胞比例、细胞增殖指数(PI)和DNA含量.结论 LXA4可能通过抑制Jurkat T细胞钙池操纵的钙通道引起的胞质内游离钙浓度的升高而抑制其增殖.     

电离辐射对EL-4细胞倍增时间的影响

研究电离辐射对EL－4淋巴瘤细胞倍增时间的影响。方法：体外传代培养EL－4细胞并计数。按下式计算细胞倍增时间：TD＝0．693（T2-T1）／ln（N2／N1）。结果：0．1～4．0GyX射线单次照射使EL－4细胞倍增时间明显延长。0．05Gy低剂量预照射可明显缩短2．0Gy大剂量照射所致细胞倍增时间的延长。结论：0．1Gy以上剂量X射线使EL－4细胞倍增时间延长。0．05Gy预照射可诱导适应性反应。