三种大鼠骨髓间充质干细胞双向电泳样品制备方法的比较***

背景：骨髓间充质干细胞双向电泳样品制备方法很多,但目前尚未有统一标准。 目的：通过对比确定合适的大鼠骨髓间充质干细胞双向电泳样品制备方法。 方法：充分裂解体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞,所得蛋白样品分为3组：未进一步处理组、丙酮沉淀法处理组、2-D clear-up kit处理组,Bradford法测定蛋白质浓度后分别进行双向电泳,对比分析3组所得电泳图谱。 结果与结论：2-D Clean-up kit处理组所得双向电泳图谱在背景,图像清晰度,分辨率,重复性上比丙酮沉淀法处理组和未进一步处理组要好,说明经2-D Clean-up kit处理的样品制备方法更适合用于大鼠骨髓间充质干细胞双向电泳样品的制备。      

中国对虾肝胰腺蛋白质组学双向电泳技术体系的建立

建立中国对虾肝胰腺蛋白质组学双向电泳技术体系。利用双向电泳技术,以中国对虾肝胰腺为研究对象,通过离心等手段提取蛋白,双向电泳分离,硝酸银染色,进行图谱分析。结果表明:从双向电泳图谱上获得蛋白质斑点。验证了用双向电泳技术研究对虾免疫及其他生理现象的可行性。通过建立中国对虾蛋白质组学双向电泳技术体系,可极大拓宽对虾免疫生理研究的途径,从蛋白质水平探讨对虾发病机制,寻找有效药物靶点,为生物信息学分析奠定了基础,提供了理论依据。     

突触蛋白质组学分析中双向电泳技术的优化

背景：双向电泳是突触蛋白质组学分析中最流行最通用的蛋白质分离方法之一。但文献中突触蛋白双向电泳对线性固相pH梯度(immobilized pH gradients,IPG)胶条和十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electroph-oresis,SDS-PAGE)浓度的选择很多,尚未见统一标准。 目的：对突触蛋白双向电泳的IPG胶条和SDS-PAGE凝胶浓度进行优化,以获得高质量的突触蛋白双向电泳图谱。 方法：以大鼠海马突触蛋白为试材,比较pH 5.0-8.0与pH 3.0-10.0线性IPG胶条,线性与非线性pH 3.0-10.0 IPG胶条,以及单一浓度10%与12% SDS-PAGE对双向电泳的影响。此外,还使用计算机检索了1989至2013年中国知网及PubMed数据库中关于突触蛋白双向电泳的文献,对文献中选择的IPG胶条、SDS-PAGE凝胶浓度进行了统计和评价,并总结了突触蛋白在不同pH值IPG胶条和不同浓度SDS-PAGE凝胶的双向电泳图谱上的分布特征。 结果与结论：结果表明,使用pH 3.0-10.0的非线性胶条及单一浓度10% SDS-PAGE凝胶进行突触蛋白双向电泳较为适宜,电泳图谱质量好,实验操作便利;同时还推荐合并使用pH 4.0-7.0和pH 6.0-11.0的IPG胶条,以及线性梯度浓度9%-16% SDS-PAGE凝胶,也适用于突触蛋白双向电泳分析。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

霍乱弧菌菌体蛋白双向电泳技术的建立

目的建立霍乱弧菌全菌体蛋白的双向电泳技术，获得分辨度高、重复性好的双向电泳图谱。方法利用适当的裂解液处理霍乱弧菌，提取全菌蛋白；采用pH梯度等电聚焦对全菌蛋白进行双向电泳；考马斯亮蓝染色后获得的双向电泳图谱，并利用ImageMaster 2D Elite5．0图象分析软件进行分析，所得的数据用SPSS15．0进行统计分析。结果得到了（1081±16）个蛋白斑点，蛋白主要集中在pI4．24～7．20之间，重复胶的匹配点数为（1057±28），匹配率为97．85％。结论建立了霍乱弧菌全菌双向电泳分析方法，2-DE图谱中蛋白位点的分辨率和重复性非常高，获得了较为理想、清晰的双向电泳图谱，为进一步研究其蛋白质组学奠定了基础。     

系统性红斑狼疮患者血清蛋白质组学研究

目的 运用蛋白质组学的方法,分析正常人及SLE患者血清蛋白质的差异表达,寻找与SLE疾病发病机制相关的蛋白质.方法 分别收集健康人及SLE患者血清各9例,同组血清等量混合,用试剂盒除去血清中的白蛋白和免疫球蛋白,再经除盐浓缩后,将血清样品采用固相pH梯度（IPG）双向凝胶电泳（2-DE）分离正常人及SLE患者血清的总蛋白质.凝胶经考马斯亮蓝染色显色后,利用Analysis2d软件对获得的蛋白图谱进行分析,寻找差异表达的蛋白质,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）进行鉴定,分析差异蛋白点.结果 对照组凝胶共检出蛋白点648个,患者组检出639个.对照组凝胶蛋白点匹配率84.5％,患者组凝胶蛋白点匹配率82.5％.通过比较分析,差异表达蛋白质点数为92个,有52个蛋白点在SLE患者组表达上调,40个表达下调,有14个点的表达水平在组间差异有统计学意义,质谱鉴定共鉴定5个蛋白质.通过文献研究显示,我们鉴定的部分蛋白在SLE的发病机制中起潜在的作用.结论 在SLE患者血清中存在着差异血清蛋白质,这些蛋白质可能是SLE发病的内在因素,并且在SLE的疾病发展过程中发挥重要作用,可能作为新的血清标志物和潜在的自身抗原.     

蛋白质组学及其在疾病研究中的应用

生命的表现形式最终是由蛋白质决定的。因此，对蛋白质组的研究具有很现实的意义。从研究之初至今，研究技术不断提高，涉及面日益广泛，其应用价值越来越大。本着重从技术及应用的角度，追踪最新的研究进展，对蛋白质组学及其在疾病研究中的应用作一的概述。     

双向电泳在疾病研究中的应用

生命的表现形式最终是由蛋白质决定的。因此,对蛋白质组的研究具有很现实的意义。双向电泳(2-DE)技术作为蛋白质组学研究的一项核心技术,主要用于细胞、组织以及其他样本蛋白质提取物的分析。近年来,2-DE结合质谱(MS)技术被广泛用于差异蛋白的鉴定、疾病标志物的筛选、药物靶标的确定等,目前已经成为蛋白质组学研究的支撑技术,以其高通量、高分辨率和重复性被广泛应用到各个领域,特别是生物医学的研究中。本文就近年2-DE技术的应用进展,尤其在生物医学方面的贡献做一综述。     

蛋白质组学在肿瘤研究中的应用

肿瘤是机体正常细胞在多因素、多基因作用下，经过多个步骤发生转化，失去原有的生长分化调节而异常增生的结果。因此，肿瘤细胞与其起源的正常细胞相比，蛋白质既有相同也有不同点。应用蛋白质组学研究技术可以比较患有同一肿瘤的不同个体的肿瘤组织(或细胞)之间，或者同一个体肿瘤细胞与正常起源细胞之间蛋白质在表达数量、表达位置和修饰状态上的差异，可以发现肿瘤发生过程中蛋白质变化的规律，筛选和确定肿瘤特异性标记物，对肿瘤发病机制的探讨以及在其诊断和有效治疗均具有重要的意义.     

无细胞肾小球扫描电镜样品的制备

应用扫描电镜可以观察肾小球的三维结构,从而弥补了透射电镜仅能观察二维结构及视野过小的不足。可是,普通扫描电镜的观察仅限于足细胞和内皮细胞表面的改变,要在扫描电镜下观察基底膜的改变,必须将细胞成分除去,使基底膜暴露出     

蛋白质组学及其在疾病研究中的应用

生命的表现形式最终是由蛋白质决定的。因此 ,对蛋白质组的研究具有很现实的意义。从研究之初至今 ,研究技术不断提高 ,涉及面日益广泛 ,其应用价值越来越大。本文着重从技术及应用的角度 ,追踪最新的研究进展 ,对蛋白质组学及其在疾病研究中的应用作一的概述     

Microscale Purification Systems for Biological Sample Preparation

This work is focused on the development of miniaturized instrumentation formats for integrated biochemical and biological sample preparation. In particular, the paper is focused on microfluidic systems for the purification of cells, uncoated nano particles, and surface coated nano particles. Microfluidic systems will be described for purifying cells from whole blood, sorting of blood cells based on their electrophysiological characteristics, and separating and purifying the components of a blood cell homogenate. Additionally, the microscale sample preparation systems will be shown to be effective in purifying complex samples of nano particles based on the particles physical size and effective electrical charge. The microsystems will be demonstrated for the purification of samples containing polystyrene nano particles with multiple diameters as well as for samples containing a mixture of uncoated and surface coated nano particles. The formats discussed in this work include the micro-electrophysiological characterization (-EPC) system; the micro-thermal field flow fractionation (-TFFF) system; and the micro-electrical field flow fractionation (-EFFF) system. The microscale cellular electrophysiological characterization system is used for cell sorting and selection. The cell sorting and selection is accomplished using impedance spectroscopy on single cells. The system has been shown to be effective in sorting blood cells by cell type (i.e., red, white) and by sub populations (e.g., viable leukocytes, non viable leukocytes). The -TFFF system is a chromatographic separation technique for fractionating particle samples based on the heat capacity, thermal conductivity and physical size of the particles. The -EFFF system fractionates particle samples based on the physical size and zeta potential (effective electrical charge) of the particles within the sample. The electrical and thermal FFF systems are capable of separating particle samples with constituents in the diameter range from approximately 1 nm to 1 m. The separation and purification of a variety of nano particles will be demonstrated in the field flow fractionation systems including cells, cellular sub-components, uncoated polystyrene nano particles, and protein coated (Protein A) polystyrene nano particles.     

霍乱弧菌O1群稻叶型流行株和非流行株的蛋白质谱特征分析

目的探讨霍乱弧菌01群稻叶型流行株和非流行株的蛋白表达的差异。方法利用裂解液处理霍乱弧菌,提取全菌蛋白;采用pH梯度等电聚焦对菌蛋白进行双向电泳;考马斯亮蓝染色后获得的双向电泳图谱,并利用ImageMaster2DElite5．0图象分析软件进行分析,找出差异蛋白;在此基础上,胰蛋白酶消化这些特殊差异蛋白,并进行质谱（MALDI-TOF—MS）分析。结果获得了（1081±16）个蛋白斑点,蛋白主要集中在pI4．00—7．20之间,重复胶的匹配点数为（1057±28）,匹配率为97．85％;发现了有明显差异的21个蛋白点,并进行了质谱鉴定。结论获得了霍乱弧菌01群稻叶型流行株和非流行株的差异表达蛋白。     

蛋白质组学研究技术及其联合应用

蛋白质组学是研究细胞、组织和器官内所有蛋白质的组成及其动态变化的科学,是在蛋白质水平上定量的、动态的、整体的研究生物体。目前蛋白质组学技术分为样品制备、分离和鉴定3个方面,其新技术主要有激光捕捉显微解剖法、离心超滤法、双向凝胶电泳、同位素亲和标签技术、色谱技术以及质谱技术等。然而,任何一种蛋白质组学研究技术都有其缺陷。因此多种技术的联合应用能使蛋白质组研究更精确和完整,是蛋白质组学的发展趋势。     

Development of Plastic Microfluidic Devices for Sample Preparation

Microfluidics technology shows excellent potential for applications in biotechnology, chemical sensing, and drug delivery. The use of microfluidics results in cycle time reduction, reagent cost and labor intensity savings due to the benefits of miniaturization, and functional integration. As a result, miniature DNA sample preparation and analytical devices may potentially become part of a point-of-care systems for rapid medical diagnoses. Similar diagnostic devices will benefit veterinary and food safety applications. In this paper, we discuss design, fabrication, and testing of plastic microfluidic devices for on-chip genetic sample preparation. These fabrication methods are being used to produce components of a complete genetic sample preparation micro-system. The detailed discussion on the development of micro-PCR (polymerase chain reaction) devices and bio-channel hybridization arrays is given. We also describe a path to further individual component integration.     

蛋白质组学研究方法及其在生物医学中的应用

蛋白质组学方法发展迅速，并日见成熟。蛋白芯片技术、双向电泳—质谱技术、多维液相色谱—质谱技术等，已被广泛应用于寻找疾病相关的差异表达蛋白质、疾病相关的生物标记分子以及药物靶点用于临床诊断、药物设计、以及疾病发病机理的研究等。本文对上述研究进展作了简要综述。     

小鼠胼胝体的蛋白组学研究(英文)

目的:探讨胼胝体内主要蛋白的构成。方法:通过二维电泳技术分离小鼠胼胝体的蛋白,用PDQuest软件对蛋白点进行分析,用串联飞行质谱仪对蛋白进行鉴定,并用Western Blot和免疫组织化学对鉴定的蛋白进行分析。结果:二维凝胶电泳显示在小鼠胼胝体有679个蛋白点。选取47个高丰度蛋白点进行质谱鉴定,鉴定为44种蛋白,它们分别为结构、代谢、信号转导、转运和应激蛋白。WesternBlot和免疫组织化学方法进一步证实了蛋白在胼胝体的表达和分布。结论:该结果为胼胝体主要蛋白的构成提供了资料。     

基于美国全国住院病人样本的心血管疾病研究进展

美国全国住院病人样本数据库是一个开放的住院患者数据库,我们检索和阅读了2000~2017年利用该数据库进行心肌梗死、心肌病、心力衰竭和先天性心脏病等心血管疾病的流行病学趋势及预后研究的文献,分别从对疾病的发病率、死亡率、住院率等指标进行综述,以望对国内利用类似大数据开展心血管疾病相关研究提供思路。     

A Modular Microfluidic System for Cell Pre-concentration and Genetic Sample Preparation

A modular system containing mixers, incubation unit, and cell capture unit has been developed using polymer microfluidic chips. A custom interfacing scheme has been used to assemble individual chips into the functional system. This system has been used to perform cell pre-concentration from a complex sample matrix allowing for carrying out assays on rare cell targets appearing in low concentrations in the analyzed sample. We demonstrate that 2 ml of the sample can be processed in a cell capture modular system with cell capture efficiency of 53 and 37% for PBS- and blood-based samples, respectively. We also show that these capture rates are strongly dependent on the effectiveness of pre-capture mixing between the cell containing sample and bead-antibody complexes.