环氧树脂连续半薄切片制备技术

在制备超薄切片之前,有些生物样品需要制作半薄切片,在光镜下确定所要观察的结构,并在环氧树脂包埋块上对此结构进行准确的定位,避免盲目的超薄切片,从而提高电镜的观察效率。用环氧树脂包埋的生物样品,如果采用适宜的染色方法对半薄切片进行染色,在光镜下观察,可获得比石蜡切片保存的更多的结构     

有关制作半薄切片捞片的改进

在制作电镜的超薄切片前,可用超薄切片机先切数片1μm～2μm 厚的半薄切片进行染色,在光镜下观察以确定方向和部位,同时对特殊细胞观察的筛选更为需要。从而提高所要观察以超薄切片上组织和细胞的准确性。并且半薄切片用甲苯胺     

电镜半薄切片染色液的改良及应用

电镜是观察组织细胞超微结构的一种手段。但由于切片太小，有时难于观察到目标结构，为此需大量制备样品造成工作量大且消耗多。为使超薄切片能精确地切到目标部位，在行超薄切片前要做半薄切片进行定位。一般是在超薄切片机上切取数张1—2μm厚的切片进行染色观察。半薄切片的染色常规方法有：甲苯胺兰染色法、天青Ⅱ美兰染色法、H-E染色法和Giemsa染色法等，无论哪种方法都需预先做脱树脂处理，     

用树脂包埋块行半薄切片甲苯胺蓝染色显示肥大细胞

经石蜡包埋的组织,用甲苯胺蓝染色显示肥大细胞的方法已得到了广泛的应用。作者用电镜制样过程中的树脂包埋块,行半薄切片,用甲苯胺蓝染色,光镜观察也能显示肥大细胞的特殊形态。另用石蜡切片,甲苯胺蓝染色光镜观察以及电镜观察证实了树脂包埋、半薄切片的观察结果。 材料及方法 取自外科手术切除的组织,     

电镜半薄切片H-E快速染色方法

为了避免超薄切片的盲目性,对于一些较复杂的组织,在进行超薄切片之前,最好做半薄切片,经染色、光镜检查,可精确地选择预检部位,提高观察效率。临床外检和穿刺得到的标本,通常很小,又做石 蜡又做电镜,不仅烦锁,有时也不允许。一般的半薄切片染色,只能用于定位,并不能用于诊断,而且染色时间长,要经过几种试剂和加热等处理,操作复杂,效果并不令人满意。我们在我校病理教研室工作的     

半薄切片制作技术的几点改进

环氧树脂半薄切片在形态学研究中应用较多,是介于超微结构观察和常规光镜观察之间的制样手段,也是电镜超薄切片定位的必要手段。由于其厚度比石蜡切片薄,清晰度、分辨率均优于石蜡切片,已广泛应用于光电镜定位、对照观察,甚至可代替石蜡切片。但在半薄切片制作技术中还存在一些尚待改进的问题。如切片染色,以往常用的方法有甲苯胺蓝法、H.E法等,前者一般采用水溶液,通常不易着色;后者步骤较复杂,耗时较长,且难以着色。我们对甲苯胺蓝法(单色染色)及Sata变法(多色染色)做了一些改进,得到了较为满意的效果。困扰半薄切片的另一问题是脱片,常致制样失败。以往大多采用甘油蛋白作贴片剂,效果不甚理想。也曾采用涂布树脂包埋剂防止脱片,但操作较麻烦。我们从免疫细胞化学中受到启示,改用明胶-硫酸铬钾液作为半薄切片粘贴剂。方法简便易行,效果也好,在大量的半薄切片染色中,极少发现脱片。……     

自制半薄切片调温烤片装置介绍

半薄切片(厚切片)有助于超薄切片的定位,以及光镜与电镜观察的密切结合,是应用电镜技术进行生物医学研究的手段之一。半薄切片制片过程中,在载玻片上展片与贴片及切片染色,是该技术的重要步骤。按传统的方法,展片时用酒精灯火焰加热,温度不易控制,且成批制片费时。贴片则是在玻片上涂蛋白甘油,长期保存易生霉,或置50～70℃烤箱中数小时,因空气导热慢,耗时较多,而染色通过火焰加热,易沸腾造成过染或沉淀。因此,我室用自动恒温电熨斗试制了一种半薄切片调温烤片装置(易制作、成     

树指包埋组织块半薄切片HE染色技术的改进

近年来,在临床诊断和科研工作中,在电镜超薄切片技术前制作半薄切片已成为常规。但树脂包埋组织块的半薄切片用HE染液染色时常难使组织着色,一般认为这是由于染液不易透过交联的疏水树脂所致。因而染色前需脱去树脂包埋剂,这常易损伤组织。目前国内外报道的很多染色方法中,则多用软化剂将色理剂软化后再进行染色,以使水溶性染液能渗入组织切片内,达到组织着色的目的,但有的程     

石蜡半薄切片制作透射电镜的方法

[目的]介绍石蜡半薄切片转制透射电镜的制样方法。[方法]对石蜡半薄切片进行脱蜡、水化、锇酸固定、缓冲液漂洗、梯度酒精脱水、环氧树脂包埋、超薄切片机切片、透射电镜下观察。[结果]组织细胞的超微结构保存完好,足以满足病理诊断之用。[结论]用石蜡半薄切片转制电镜比用石蜡组织块转制电镜方法简单,快速易行。     

利用超薄切片机制作半薄切片技术

近年来,由于半薄切片机的问世,为电镜工作者制作半薄切片进行定向选择,克服超薄切片的盲目性和电镜视野的局限性,创造了良好条件。但是,国内目前所使用的半薄切片机仍靠进口,价格昂贵。而定位部分的照明光源又不能达到满意效果,对定向选择带来一定困难,操作麻烦,花时间多。两年来,我室利用超薄切片机制作半薄切片,对心肌、肾等组织进行定向选择,省时省力,并获得了满意的效果。现将具体操作步骤介绍如下:     

大鼠睾丸间质细胞中结晶紫染色法半薄切片技术应用

随着科学技术的不断提高,半薄切片技术在生物医学形态学领域方面的应用也越来越广泛,它的应用弥补了常规组织学石蜡切片较厚,细胞成份重叠,难以分辨细胞的细微结构、细胞成份的破坏以及固有结构的丧失等缺点,尽可能保持材料的结构和某些化学成分生活时的状态。结合用电子显微镜样品制备方法,进行材料的定位,光镜电镜的对比观察以及用电镜包埋法对大白鼠的睾丸间质细胞进行研究。     

电镜样品平板包埋方法的改进

在制作电镜标本时,常遇到一些需要准确定位才能达到实验目的的样品,如某些脑神经核团、胰腺中的胰岛、某些特殊细胞等.以往经常规电镜样品包埋半薄切片,甲苯胺蓝染色,光镜选区,有时不能奏效,且浪费时间、材料.使用厚切片平板定位包埋,可明显提高工作效率和准确性.但平板包埋需要硅化玻璃,有时因缺少有关药品,无法制备硅化玻璃,不能完成包埋工作.为此,我们使用投影仪胶片或其它包装用透明、挺括的塑料薄膜代替硅化玻璃,取得较好的效果.     

电镜技术在病理学诊断中的应用

为摸索出适合临床超微结构病理诊断的电镜技术 ,更好地发挥其对疾病诊断的作用 ,现根据多年工作积累并结合临床实际 ,介绍本实验室在疾病诊断中电镜技术的应用情况。1　几种常用电镜技术1.1　常规电镜技术　标本经固定后用 microslicer切片以增加样品量 ,取其中一部分 (其余切片继续保存 )做快速常规包埋、定位及超薄切片 ,用透射电镜观察 ,整个过程 2～ 3d。有些特殊结构在器官组织中分布很少 ,而对于疾病诊断又很有意义。本室的方法是先切大量半薄切片 ,在光镜下先找到这些特殊结构 (必要时可用美蓝染色 ) ,然后再做原位包埋、超薄切片 ,…     

半薄切片技术

半薄切片(semithin section)又称厚切片(thick section).是相对于电镜的超薄切片(Ultrathin section)而讲的。半薄切片厚度是0.5～2μ,介于光镜石蜡切片(7μ)和电镜超薄切片(0.07μ)之间。半薄切片的制法是按电镜常规制备的树脂包埋组织块,在超薄切片机或经     

对半薄切片苏木素伊红染色法的某些改良

半薄切片染色除可供光镜观察外,还可为超薄切片提供准确部位,以使电子显微镜检查有的放矢,对有关组织、细胞的超微结构进行详细观察。目前国内介绍的半薄切片H-E染色法,除操作较复杂费时外,其不足之处是:经较长时间的氢氧化钾纯酒精饱     

铁苏木素—伊红等几种半薄染色法的比较

在医学生物学电镜技术中,因树脂包埋块的非水溶性质,其半薄切片染色仍是一十分困难而重要的环节。迄为今止,仅单色染色解决较好,多色染色或特殊染色仍较困难。我们以本室常规的 Giemsa 单色染色为对照,选用 Weigert 铁苏木素—伊红、亚甲兰—碱性复红等多色染色法,对国产环氧树脂618包埋的各种组织进行了半薄切片染色,获得了较为满意的结果。我们体会到:Giemsa 染色简便、快速。各组织成分虽仅兰色即淡兰或深兰反应,但组织结构仍较清晰分明。本法对一般修块作选区定位基本满足要求,作为常规染色是可取的。Weigert 铁苏木素—伊红染色核质分明,类似石腊切片 HE 染色效果。本法的特点是:染色前须用饱和氢氧化钾脱树脂618和用双氧水氧化组织;室温下即能染色;酒精分化时间(1—2分钟)和伊红染色时间(5—10分钟),均较树脂812切片或石腊切片 HE 染色时间为长。本法虽较 Giemsa 染色法繁琐,但细微结构较 Giemsa 法为清,因此,对此需进一步研究,摄片与电镜照片对照的半薄片,拟用此法为宜。对于结缔组织较多、成份较复杂的切片,用亚甲兰—碱性复红浸染法(Jha 法改良法)染色,能获得较满意的对比染色:结缔组织为红或深红色,余为兰或淡兰色。本法也具快速、简便的特点。     

电镜细胞化学半薄切片的制作及观察

在电镜半薄切片标本上可以观察到细胞各部分的整体结构,也是电镜细胞化学研究手段之一。现将我们在制做及观察半薄切片的体会简介如下:     

大鼠乳腺肿瘤病理形态学观察

大鼠自发性乳腺肿瘤的国内报道较少,深入系统的病理形态学研究不足。作者对收集的28例Wistar系大鼠自发性乳腺肿瘤进行了病理形态学观察,以期为实验动物肿瘤病理学积累资料。材料与方法一、取材将具有胸、腹及腹股沟部皮下肿块的32只Wistar系大鼠处死,对肿块进行大体形态观察、称重及测量大小,采取疑为肿瘤的肿块,分别以10％甲醛及2％戊二醛固定。二、组织学观察将采取的肿块作石蜡切片,HE染色,光镜观察。三、超微结构观察将由组织学观察确定为乳腺肿瘤的材料经半薄切片、次甲基兰-天青Ⅱ染色定位后,作超薄切片,铅铀染色,H-300型电镜观察。     

石蜡组织块透射电镜标本快速包埋法

作者在石蜡组织块作成的电镜切片上,选择需作电镜观察的组织部位,从石蜡块上取下该组织部位,用1％四氧化锇-二甲苯混合液脱蜡再固定,环氧树脂618快速包埋,按电镜常规切片、染色,作成电镜观察用的切片,经电镜观察,效果较为满意,可达到电镜病理诊断要求。本法步骤简单易行,省时,全过程仅需两个半小时。     

介绍一种免疫电镜标本定位方法

免疫电镜标本制备方法有:组织块免疫染色法,冰冻切片免疫染色法,超薄冰冻切片法。其中以冰冻切片法最常用,免疫电镜成功与否受很多因素影响,标本块的定位十分重要。国外多用半簿切片定位,即先切一、二张0.5～2μ的大面积切片,在光学显微镜观察,找出免疫酶反应部位。然后将标本与切片对照,进行修块,再制超薄切片。最近我们开展对免疫电镜研究,发现用上法对冰冻切片免疫染色的电镜标本定位不