鞘内注射m-AIP对坐骨神经结扎大鼠疼痛感觉分辨和情绪体验的影响

目的 观察鞘内注射钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ特异性抑制剂m-AIP对坐骨神经结扎大鼠疼痛感觉分辨和情绪体验的影响.方法 SD雄性大鼠18只按随机数字表法分为3组(每组n=6):假手术对照Sham组(S组)、坐骨神经结扎模型对照Control组(C组)、m-AIP组.C组和m-AIP组制备坐骨神经慢性挤压伤(CCI)模型,S组仅显露坐骨神经不结扎.术后7dS组和C组鞘内注射0.9％NaCl20μl,m-AIP组鞘内注射溶于0.9％ NaCl的m-AIP 0.5 nmol/20μl.各组于给药后1.5h行反映痛情绪的大鼠位置逃避实验(Place escape/avoidance paradigm,PEAP),给药前及给药后2h、4h、8h检测大鼠的热缩足反射潜伏期(Paw withdrawal thermal latency,PWTL)和机械性缩足反射阈值(Paw withdrawal mechanical threshold,PWMT).结果 鞘内给予m-AIP 0.5 nmol能够改善大鼠痛行为反应,减少位置逃避行为.给药后2h、4hm-AIP组PWTL[(11.45±2.04)s,(10.26±1.48)s],PWMT[(21.15±4.32)g,(20.45 ±4.09)g]比C组PWTL[(9.63±1.65)s,(9.30±0.73)s],PWMT[(13.87±2.36)g,(14.80±3.12)g]升高,差异有统计学意义(P＜0.05).给药前及给药后8h m-AIP组PWTL,PWMT与C组PWTL,PWMT相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CaMKⅡ在坐骨神经痛的感觉分辨和情绪体验中起重要作用,鞘内注射m-AIP能够改善CCI大鼠痛行为和痛相关负性情绪.     

艾芬地尔重复鞘内注射对骨癌痛模型小鼠痛行为的影响

目的 观察艾芬地尔重复鞘内注射对小鼠骨癌痛的影响.方法 96只雄性C3H/HeJ小鼠随机分为肿瘤给药组(T组)、肿瘤对照组(C组)和假手术组(S组).将含2 ×105个纤维肉瘤NCTC2472细胞的最小必需培养基(α-MEM)注射到小鼠右侧股骨远端骨髓腔内,制作骨癌痛模型.假手术组注入不含肿瘤细胞的α-MEM.T组在术后第14天开始,鞘内注射艾芬地尔5μl(10μg),每天1次,连续3天.C组和S组在相同时间点分别给予相同体积的溶媒.各组于接种前l天,接种后第3天、第5天、第7天、第10天、第14天、第17天、第19天和第23天检测痛行为学指标,包括小鼠的自发抬足次数、机械性缩足反射阈值(PWMT)和热缩足反射潜伏期(PWTL).按照分组在相应时间点处死小鼠,用Western-blotting方法检测脊髓腰膨大NR2B蛋白表达水平.结果 肿瘤细胞接种后第14天,和S组及术前基础值相比,T组小鼠自发性抬足[ (12.88 ±1.64)次]显著增加,PWMT(0.39 ±0.17)g和PWTL( 11.59±1.67)s明显下降(P＜0.05).脊髓NR2B蛋白(2.12 ±0.13)显著增加(P＜0.05).肿瘤细胞接种后第17天,第19天,第23天,和第14天及C组相比,T组自发性抬足[(5.13±1.38)次,(4.70±1.58)次,(5.64±1.17)次]明显减少,PWMT[ (1.10 ±0.65)g,(0.95 ±0.56) g,(1.05 ±0.26)g]和PWTL[ (15.17±1.27)s,(15.93 ±2.18)s,(16.28±1.48)s]显著增加(P＜0.05).脊髓NR2B蛋白[(1.42±0.17),(1.67±0.53),(1.14±0.79)]显著减少(P＜0.05).结论 重复鞘内注射艾芬地尔能显著改善骨癌痛小鼠的痛行为,降低脊髓NR2B蛋白.     

鞘内注射MrgC抗体对电针干预CFA大鼠慢性炎性痛及脊髓背角NR1表达的影响

[目的]观察鞘内注射Mas-related G Protein-coupled C（MrgC）抗体对电针（Electroacupuncture,EA）干预完全福氏佐剂（Complete？Freund＇s？Adjuvant,CFA）所致大鼠慢性炎性痛及脊髓背角（Spinal dorsal horn,SDH）N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚基1（N-methyl-d-aspartate receptors1,NR1）表达的影响。[方法]SD雄性大鼠28只,脊髓鞘内插管成功后建立CFA模型,造模后随机分为生理盐水（Saline）组、MrgC抗体（MrgC Ab）组、MrgC Ab＋EA组和Saline＋EA组,每组7只。两EA干预组从造模24h后在患侧＂足三里＂和＂昆仑＂穴开始电针刺激,参数为2/100Hz、30min,1次/d,连续7d,其余各组均做相应固定处理。造模后7d,各组大鼠鞘内注射相应试剂。在造模前和造模后24h、6d、7d检测大鼠患足热缩退潜伏期（Thermal Paw Withdrawal Latency,T-PWL）。免疫组织化学法检测各组大鼠患侧SDH NR1的表达。[结果]（1）各组大鼠在CFA造模前和造模后24h时,T-PWL均无明显差异。第6d时,与Saline组相比,MrgC Ab＋EA组和Saline＋EA组大鼠患足T-PWL显著延长（P〈0.01）,MrgC Ab组大鼠患足T-PWL无统计学差异。第7d时,与Saline组相比,MrgC Ab组大鼠T-PWL明显缩短（P〈0.05）,而Saline＋EA组显著延长（P〈0.01）;与Saline＋EA组比较,MrgC Ab＋EA组大鼠T-PWL显著缩短（P〈0.05）。（2）与Saline组比较,MrgC Ab组SDH NR1表达量显著提高（P〈0.01）;EA干预后大鼠SDH NR1表达量显著降低（P〈0.01）,MrgC Ab＋EA组大鼠SDHNR1表达量也显著高于Saline＋EA组大鼠（P〈0.05）。[结论]鞘内注射MrgC抗体能显著拮抗电针对CFA诱导性慢性炎性痛的镇痛作用,电针镇痛效应可能与下调大鼠患侧脊髓背角NR1受体表达有关。     

鞘内注射赛庚啶缓解小鼠骨癌痛

目的: 观察鞘内注射SET domain containing lysine methyltransferase 7/9 (SET7/9)抑制剂赛庚啶对骨癌痛模型小鼠机械性痛觉过敏阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)及脊髓背角SET7/9表达的影响。方法: 选择88只雄性C3H/HeJ小鼠,体质量20～25 g。实验分为2部分：第1部分实验将小鼠随机均分为假手术组及骨癌痛组,每组8只,观察两组小鼠术前1 d及术后5、7、12、15 d PWMT的变化;采用蛋白质印迹法检测两组小鼠(n=4)术前1 d及术后15 d脊髓背角SET7/9的表达。第2部分实验将小鼠随机分为假手术组、骨癌痛组、骨癌痛+赛庚啶 10 nmol组、骨癌痛+赛庚啶 20 nmol组、骨癌痛+ SET7/9 0.2 μg组、骨癌痛+SET7/9 0.2 μg+赛庚啶20 nmol组及骨癌痛+氯苯那敏 200 μg组,每组8只;观察鞘内给药前(0 h)及鞘内给药后1、3、6 h 各组PWMT的变化;蛋白质印迹法测定骨癌痛组(n=4)及骨癌痛+赛庚啶 20 nmol组(n=4)鞘内给药前(0 h)及鞘内给药后6 h脊髓背角SET7/9的表达。结果： 与假手术组相比,骨癌痛组小鼠术后7～15 d PWMT显著降低(P <0.05或0.01),15 d脊髓背角SET7/9明显增加(P<0.01)。与骨癌痛组相比,骨癌痛+赛庚啶10 nmol组、骨癌痛+赛庚啶20 nmol组鞘内注射3 h后PWMT明显增加(P<0.05或0.01),骨癌痛+赛庚啶20 nmol组小鼠脊髓背角SET7/9表达明显降低(P<0.01)。 结论： 鞘内注射赛庚啶可明显提高15 d骨癌痛小鼠PWMT及降低骨癌痛小鼠脊髓背角SET7/9的表达;脊髓SET7/9可能参与小鼠骨癌痛的发展过程。     

大鼠脊髓小胶质细胞细胞外信号调节蛋白激酶5/核因子κB信号通路在神经病理性疼痛中的作用

目的探讨脊髓细胞外信号调节蛋白激酶5(ERK5)信号通路在炎性痛中的作用。方法 24只Sprague-Dawley大鼠随机分入两组,脊神经结扎(SNL)组大鼠行L5SNL建立神经病理性疼痛模型,假手术(Sham)组大鼠仅暴露脊神经不结扎,观察两组大鼠脊髓磷酸化ERK5(p-ERK5)的表达情况。另取大鼠随机分别鞘内注射ERK5反义寡核苷酸(AS组)、ERK5错义寡核苷酸(MM组)和0.9%氯化钠溶液(NS组),观察对SNL术后大鼠机械缩足反射阈值(PWMT)、热缩足反射潜伏期(PWTL)及核因子κB(NF-κB)的影响。结果术后1、3d,SNL组的p-ERK5阳性细胞数量均显著高于术前(P值均<0.05),Sham组的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。术前AS组、MM组、NS组间大鼠脊髓NF-κB含量、PWTL、PWMT的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。SNL术后1dAS组大鼠脊髓NF-κB含量显著低于NS组、MM组(P值均<0.05),但3组均显著高于同组术前(P值均<0.05)。SNL术后1、3d3组的PWTL和PWMT均显著低于同组术前(P值均<0.05),AS组均显著高于MM组同时间点(P值均<0.05)。结论脊髓小胶质细胞ERK5参与了神经病理性疼痛的信号转导过程,其部分作用是通过激活转录因子NF-κB实现的。     

大麻素受体-1拮抗剂抑制炎性痛大鼠的吗啡耐受效应

目的观察吗啡对炎性痛治疗时产生耐受效应的模型大鼠脊髓背角大麻素受体-1(CB1)蛋白表达变化,探讨CB1受体拮抗剂(AM251)对炎性痛大鼠吗啡耐受效应的干预作用。方法 40只成功行鞘内置管术的成年雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分入对照组、0.9%氯化钠溶液+完全弗氏佐剂(CFA)组、吗啡+CFA组、吗啡+AM251+CFA组,每组10只。对照组大鼠于右后足底皮下注射0.9%氯化钠溶液100μL,其余3组大鼠于右后足底皮下注射CFA100μL,建立CFA模型。于置管后第8天(CFA模型建立后第4天),对照组和0.9%氯化钠溶液+CFA组予0.9%氯化钠溶液10μL;吗啡+CFA组鞘内予吗啡10μg/10μL;吗啡+AM251+CFA组鞘内联合予吗啡10μg+AM2515nmol,共10μL。连续给药7d。于置管后第15天(CFA模型建立后给药第8天)将大鼠处死。采用热刺激缩足潜伏期(PWTL)评价痛行为学,采用免疫蛋白印迹法测定大鼠L2至L4脊髓背角组织中CB1的表达。结果 0.9%氯化钠溶液+CFA组、吗啡+CFA组和吗啡+AM251+CFA组CFA模型建立后鞘内给药前的PWTL值均较同组CFA模型建立前显著降低(P值均<0.001)。0.9%氯化钠溶液+CFA组CFA模型建立后鞘内给药第1、3、5、7天的PWTL值的差异无统计学意义(P值均>0.05);吗啡+CFA组在CFA模型建立后鞘内给药第1、3、5天的PWTL值显著高于0.9%氯化钠溶液+CFA组同时间点(P值均<0.001),且呈逐渐下降趋势,到CFA模型建立后鞘内给药第7天与0.9%氯化钠溶液+CFA组的差异无统计学意义(P>0.05)。吗啡+AM251+CFA组在CFA模型建立后鞘内给药第1、3、5、7天的PWTL值仍维持在较高水平,但各时间点间的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。CFA模型建立后鞘内给药第7天,在吗啡+CFA组大鼠脊髓背角中的CB1相对表达量显著高于对照组同时间点(P<0.001)及0.9%氯化钠溶液+CFA组同时间点(P<0.05)。结论 CB1拮抗剂AM251可抑制吗啡耐受形成。     

鞘内注射米诺环素抑制脊髓小胶质细胞激活减轻炎性痛觉过敏

目的 观察米诺环素鞘内注射对佐剂性炎性痛的作用。方法 大鼠鞘内注射生理盐水和米诺环素30min后右侧踝关节皮下注射完全弗氏佐剂（CFA）,观察注射CFA后1、3、7、14d的热刺激回缩潜伏期（PWTL）的变化及脊髓小胶质细胞标志物OX-42的表达。结果 CFA致炎后同侧后肢PTWL缩短,米诺环素鞘内注射抑制PTWL缩短;米诺环素鞘内注射可减少CFA致炎后脊髓OX-42的表达。结论 米诺环素鞘内注射可抑制脊髓小胶质细胞的激活,减轻炎性热痛觉过敏。     

神经营养素-3预治疗对鼠重复鞘内注入罗哌卡因毒性的影响

目的:探讨神经营养素-3(NT-3)预治疗对鼠重复鞘内注入罗哌卡因毒性的影响.方法:144只SD雄性大鼠鞘内置管成功后随机分成4组,每组36只.分别给予鞘内注射生理盐水,0.5％罗哌卡因,1％罗哌卡因以及1％罗哌卡因+NT-3各12h,每次间隔1.5 h.观察1,3,5,7,14,28 d时大鼠行为学,运动功能,机械痛阈(PWMT)和热痛阈(PWTL),病理组织学损伤评分的改变.结果:与生理盐水组和0.5％罗哌卡因组比较,1％罗哌卡因组1,3,5 d PWMT和PWTL显著增高,病理组织学损伤评分1,3,5,7,14d显著增高(P＜0.05);与1％罗哌卡因+NT-3组比较,1％罗哌卡因组1,3,5 d PWMT和PWTL显著增高,病理组织学损伤评分5,7,14d显著增高(P＜0.05).结论:NT-3预治疗对鼠重复鞘内注入1％罗哌卡因脊髓神经毒性具有明显保护作用.     

脊髓哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路参与大鼠外周神经损伤诱发的痛觉过敏

目的：探讨哺乳动物雷帕霉素(rapamycin,RAPA)靶蛋白(mammalian target of RAPA,mTOR)信号通路是否通过激活脊髓背角星形胶质细胞参与外周神经损伤诱发的大鼠痛觉过敏。方法：取健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠30只,随机分为6组(n=5)：1 d组(D1组)、4 d组(D4组)、7 d组(D7组)、14 d组(D14组)、正常组、假手术组。其中 D1,D4,D7,D14组建立坐骨神经慢性压榨损伤(chronic constriction injury,CCI)模型,Normal组不做处理,Sham 组仅暴露坐骨神经。于CCI术后第1,4,7,14天分别测定各组大鼠左后肢机械缩足阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和热缩足潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL)。D1,D4,D7,D14组分别于CCI术后第1,4,7,14天,假手术组和正常组于相应第14天采集腰段脊髓。采用免疫组织化学法观察mTOR在大鼠脊髓的分布,采用real-time PCR和蛋白质印迹法检测CCI大鼠腰段脊髓mTOR mRNA和蛋白的表达。另取雄性SD大鼠30只,完 成鞘内置管后,随机分为6组(n=5)：空白组、CCI组、早给药组(CCI+early RAPA组)、早溶剂组[CCI+early二甲基亚砜 (dimethylsulfoxide,DMSO)组]、晚给药组(CCI+later RAPA组)、晚溶剂组(CCI+later DMSO组)。空白组不建立CCI模型也不给药;CCI组建立左后肢CCI模型;CCI+early RAPA组于CCI术后4 h开始鞘内注射1% RAPA 10 μL,连续给药3 d;CCI+early DMSO组于CCI术后4 h开始鞘内注射同浓度等体积溶剂4% DMSO 10 μL作为对照;CCI+later RAPA组于CCI术后第7天开始鞘内注射1% RAPA 10 μL,连续给药3 d;CCI+later DMSO组于CCI术后第7天开始鞘内注射同浓度等体积溶 剂DMSO10 μL作为对照。各组于鞘内置管前后以及CCI术后隔天测定痛阈。于CCI术后第14天取腰段脊髓,免疫组织 化学检测脊髓背角胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达。结果：mTOR免疫组织化学阳性颗粒广泛分布于正常脊髓神经元胞浆中;D14组大鼠术后第1,4,7,14天的PWMT与其基础值比较明显降低,术后第4,7,14天的PWTL与其基础值比较明显降低(P<0.05或P<0.01);与正常组比较,CCI组(D1,D4,D7和D14组)大鼠腰段脊髓mTOR的mRNA和蛋白表达显著增加(P<0.05或P<0.01);与CCI+early DMSO组相同时间点比较,CCI+early RAPA组 CCI术后第4,6,8,10,12,14天的PWMT和PWTL均升高(P<0.05或P<0.01);与CCI+later DMSO组相同时间点比较, CCI+later RAPA组CCI术后第8,10,12,14天的PWMT和PWTL均升高(P<0.05或P<0.01);CCI+early RAPA组与CCI+early DMSO组、CCI+later RAPA组与CCI+later DMSO组相比较, CCI大鼠术侧腰段脊髓背角GFAP免疫组织化学阳性面积与吸光度值均下降(均P<0.05或P<0.01)。结论：脊髓mTOR信号通路可能通过脊髓背角星形胶质细胞活化参与外周神经损伤诱发的痛觉过敏。     

鞘内注射GDNF对神经病理性疼痛大鼠的影响及可能机制

目的评价鞘内注射胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对神经病理性疼痛大鼠行为学的影响,以及脊髓背角C—Jun氨基末端蛋白激酶（JNK）和细胞外调节蛋白激酶（ERK）蛋白表达的影响。方法取鞘内置管成功的健康雄性sD大鼠120只,随机分为对照组（C组）、假手术组（S组）、神经病理性疼痛组（P组）和GDNF治疗组（G组）,每组30只。P组和G组采用结扎大鼠右侧坐骨神经建立坐骨神经慢性压迫损伤（chronicconstric—tioninjury,CCI）模型。C组不给予任何处理;S组只暴露坐骨神经,但不结扎;P组鞘内注射生理盐水10叫,隔日1次,连续14天;G组鞘内注射GDNF2I,zg,用生理盐水稀释至10μl,隔日1次,连续14天。各组大鼠分别于处理前及处理后3、7、14天测定热刺激缩足反射潜伏期（pawwithdrawthermallatency,PWTL）和机械刺激缩足反射阂值（pawwithdrawalmechanicalthreshold,PWMT）,然后每组取10只大鼠处死,取L4-6脊髓背角,采用Westernblot法测定磷酸化JNK（P—JNK）蛋白和磷酸化ERK（P—ERK）蛋白的表达水平。结果与C组比较,P组和G组PWTL和PWMT均缩短,脊髓背角P—JNK蛋白和P—ERK蛋白表达上调（P〈0．05）;与P组比较,G组PWTL和PWTL均延长,脊髓背角P—JNK蛋白和P—ERK蛋白表达下调（P〈0．05）。结论鞘内注射GDNF可以通过抑制脊髓背角P—JNK蛋白及P—ERK蛋白的表达减轻大鼠神经病理性疼痛。     

Wnt3a信号通路通过JMJD6的表观遗传修饰参与神经病理性疼痛

目的：探讨Wnt3a通过Jumonji C结构域6( Jumonji C domain 6,JMJD6)的表观遗传修饰在神经病理性疼痛 中发挥作用的机制。方法：将SD大鼠分为4组：Sham组,慢性缩窄性损伤(chronic constriction injury,CCI)组,CCI+阴性慢病毒表达载体(LV-NC)组;CCI+慢病毒过表达载体(LV-JMJD6)组。构建SD大鼠坐骨神经CCI模型和JMJD6慢病毒 表达载体。CCI术后第3天通过鞘内导管给药,按照分组分别给予生理盐水和含慢病毒的试剂(病毒滴度1×108 TU/mL) 各20 μL。监测大鼠的机械缩足阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和热缩足潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL),并运用蛋白质印迹法检测脊髓水平Wnt3a及NR2B蛋白的表达变化,免疫共沉淀检测JMJD6与Wnt3a之间是否存在直接相互作用。结果：与Sham组相比,CCI术后各组大鼠的PWMT明显降低和PWTL明显缩短(P<0.05)。与CCI组和CCI+LV-NC组相比,CCI+LV-JMJD6组的PWMT在术后第10和14天明显升高,PWTL在术后第14 天明显延长(P<0.05)。CCI术后第14天,CCI组及CCI+LV-NC组Wnt3a和NR2B蛋白表达水平较Sham组明显升高,鞘内注 射慢病毒载体后, CCI+LV-JMJD6组的Wnt3a和NR2B蛋白表达水平较CCI+LV-NC组降低(P<0.05)。免疫共沉淀结果显示Wnt3a与JMJD6之间无直接相互作用。结论：Wnt3a参与调节神经病理性疼痛,其作用可能与JMJD6的表观遗传修饰相关,两者可能通过间接相互作用进行调节。     

鞘内注射单羧酸转运蛋白抑制剂α-氰基-4-羟基肉桂酸缓解大鼠神经病理性疼痛

目的 观察鞘内注射4-CIN对坐骨神经慢性缩窄性损伤（CCI）大鼠神经病理性疼痛的影响.方法 18只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组（n=6）：假手术组（S组）、CCI组（C0组）及4-CIN组（C1组）.C0组与C1组建立CCI动物模型,S组仅分离而不结扎坐骨神经.术后第2天,C1组鞘内注射溶解于10％二甲基亚砜（DMSO） 10μl中的4-CIN（α-cyano-4-hydroxy-cinnamate）100 μmol,C0组仅鞘内注射DMSO10μl.各组在术前1d、术后第1,3,7,10,14天（T0-5）测定大鼠机械缩足反应阈值（PWMT）和热缩足反应潜伏期（PWTL）.结果 各组术前PWMT和PWTL差异无统计学意义（P＞0.05）.与S组相比,C0组在T1-5时PWMT[（11.71±2.81）g,（9.76±1.00）g,（8.22±1.33）g,（6.50± 1.48）g,（4.67± 1.03）g]、PWTL[（11.36±2.18）s,（11.60±2.54）s,（8.54±1.42）s,（7.59±1.00）s,（6.88±0.42）s]均出现明显降低（P＜0.05）,而C1组在给药后T2-5时与S组无明显差异（P＞0.05）.结论 鞘内注射4-CIN可缓解CCI所致的慢性神经病理性疼痛.     

神经营养素-3预治疗对鼠重复鞘内注入罗哌卡因毒性的影响

目的：探讨神经营养素-3(NT-3)预治疗对鼠重复鞘内注入罗哌卡因毒性的影响。方法：144只SD雄性大鼠鞘内置管成功后随机分成4组,每组36只。分别给予鞘内注射生理盐水,0.5%罗哌卡因,1%罗哌卡因以及1%罗哌卡因+NT-3各12 h,每次间隔1.5 h。观察1,3,5,7,14,28 d时大鼠行为学,运动功能,机械痛阈(PWMT)和热痛阈(PWTL),病理组织学损伤评分的改变。结果：与生理盐水组和0.5%罗哌卡因组比较,1%罗哌卡因组1,3,5 d PWMT和PWTL显著增高,病理组织学损伤评分1,3,5,7,14 d显著增高(P<0.05);与1%罗哌卡因+NT-3组比较,1%罗哌卡因组1,3,5 d PWMT和PWTL显著增高,病理组织学损伤评分5,7,14 d显著增高(P<0.05)。结论：NT-3预治疗对鼠重复鞘内注入1%罗哌卡因脊髓神经毒性具有明显保护作用。     

艾芬地尔鞘内注射对骨癌痛模型小鼠痛行为的改善作用

目的 在小鼠骨癌痛模型上观察鞘内注射N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)拮抗剂艾芬地尔的镇痛效果.方法 将含2×105个纤维肉瘤细胞NCTC 2472的最小必需培养基(α-MEM)注射到C3H/HeJ小鼠右侧股骨远端骨髓腔,制作骨癌痛模型(T组).同时设假手术组(S组,n =10),注入不含肿瘤细胞的α-MEM.所有小鼠均于接种前1 d,接种后第3,5,7,10,14天检测痛行为学指标,包括自发性抬足次数、机械痛缩足阈值(PWMT)和热痛缩足潜伏期(PWTL).骨癌痛模型制作成功的T组小鼠在接种后第14天,进一步分为艾芬地尔 2.5 μg、5.0 μg、10.0 μg组(I1、I2、I3 组,n =10)和对照组(C组,n =10),I1～I3组鞘内注射相应剂量的艾芬地尔,C组及S组给予溶媒,注药体积均为5.0 μl,鞘内注射后2 h、12 h、24 h再进行行为学检测.结果 与S组[(2.44±0.79)次]和术前基础值[(2.20±0.85)次]相比,肿瘤细胞接种后第14天T组小鼠自发性抬足[(13.16±1.78)次]显著增多( P ＜0.05),PWMT[(0.47±0.19)g]较S组[(1.70±0.31)g]和基础值[(1.83±0.23)g]降低( P ＜0.05),PWTL[(10.01±1.42)s]较S组[(17.62±1.07)s]和基础值[(18.32±1.57)s]缩短( P ＜0.05);给药后2 h、12 h,与C组及14 d 给药前比较,I2和I3组自发性抬足次数减少( P ＜0.05),PWMT增高( P ＜0.05),PWTL延长( P ＜0.05),且I3组比I2组对痛行为学的改善更显著( P ＜0.05);I1组给药后痛行为学无明显变化( P ＞0.05).结论 鞘内注射艾芬地尔有效改善骨癌痛小鼠的痛行为学反应.     

鞘内注射大麻素受体2激动剂JWH015对骨癌痛小鼠痛行为的影响

目的 观察鞘内注射大麻素受体2(CB2)激动剂JWH015对骨癌痛小鼠痛行为的影响.方法 雄性C3H/HeN小鼠32只随机分为4组(n=8):空白组(C),假手术组(s),DMSO(D,二甲基亚砜)组和JWH015(J)组.D组和J组在小鼠右侧股骨远端骨髓腔接种溶于最小必需培养基(α-MEM)的NCTC2472谘骨性纤维肉瘤细胞,建立骨癌痛模型;s组接种不含细胞的α-MEM;c组不予任何处理.在接种肿瘤细胞后的第14天按照分组D组和J组分别鞘内注射DMSO 5μl和溶于20%DMSO的JWH015 1 μg;S组注射DMSO.各组于接种前,接种后的3d、5d、7d、10d、14d以及给药后的1h、6h、24h、48h、72h测定小鼠的机械性缩足阈值(FWMT)和热缩腿潜伏期(FWTL).结果 与术后14d给药前的基础值[PWMT(0.45±0.09)g,PWTL(11.87±1.1)s]相比,鞘内注射JWH015后6h小鼠骨癌痛即缓解[PWMT(1.20±0.21)g,PWTL(15.35±2.42)s](P<0.05);24h缓解作用达到高峰[PWMT(1.85±0.28)g,PWTL(18.80±2.93)s](P<0.05);在72h作用衰退到给药前水平[PWMT(0.48±0.10)g,PWTL(11.83±1.19)s]P>0.05).结论 鞘内注射JWH015能够显著改善骨癌痛小鼠的痛行为.     

鞘内注射塞地塞米松联合螺内酯对大鼠根性神经痛行为的影响

目的 探讨鞘内注射地塞米松(Dex)联合螺内酯(Spir)对大鼠根性神经痛行为的影响.方法 选择成功鞘内置管后无运动障碍的雄性SD大鼠48只,分为假手术组(Sham组,n=12)、溶剂对照组(C组,n=12)、Dex组(D组,n=8)、Spir组(S组,n=8)和Dex联合Spir组(DS组,n=8),制备注射式根性神经痛模型.D组、S组和DS组分别于造模后第2～4天,每次鞘内给予Dex 4μg、Spir 3μg、Dex 4μg+Spir 3μg,每天2次.Sham组和C组则给予等量的10%酒精.于造模前后测量双侧足底机械缩足阈值(PWMT)和热辐射刺激潜伏期(PWTL).结果 与Sham组相比,CCD术后同侧PWMT和PWTL都明显降低(P＜0.01).与C组相比,鞘内注射Dex明显抑制疼痛行为(P＜0.01),并一直持续到术后第10天;Spir也明显改善PWMT(P＜0.01)和PWTL(P＜0.01),并持续到术后第7天;Dex联合Spir则产生明显的协同作用[PWMT:(13.52±0.72)g,(11.58±1.38)g,P＜0.0l;PWTL:(19.63±1.68)s,(14.14±1.52)s,P＜0.01],并且这一作用持续了至少10 d.结论 鞘内注射Dex和Spir对慢性压迫大鼠背根神经节诱导的根性神经痛有治疗作用,二者联合使用可以产生明显的协同作用.

Abstract：

Objective To investigate the effects of intrathecally coadministered dexamethasone and spironolactone in trathecally on radicular pain behaviors.Methods Using rat model of radicular pain induced by chronic compression of dorsal root ganglion (CCD) ,48 male SD rats successfully received intrathecal catheter implantation and without motor dysfunction were randomly divided into Sham-operation group (Sham group, n= 12),Control group ( C group, n = 12 ), Dexamethasone group ( D group, n = 8 ), Spironolactone group ( S group, n = 8 )and Dexamethasone plus spironolactone group (DS group, n=8).Rats in D group,S group or DS group were intrathecally treated with dexamethasone 4 μg, spironolactone 3 μg or dexamethasone 4 μg plus spironolactone 3 μg twice daily on day 2 ～4 after CCD respectively,while rats in C and Sham group received 10μl 10% alcohol.Paw withdrawal mechanical threshold(PWMT) and paw withdrawal thermal latency (PWTL) were tested on day 1 before CCD and day 1,4,7,10,14,17 and 21 after CCD.Results Compared with Sham group, both PWMT and PWTL were significantly decreased after CCD surgery on the ipsilateral side(P＜0.01 ＝.Intrathecally administrated with dexamethasone significantly improved pain behaviors (P＜0.01 ＝ and these therapeutic effects lasted up to 10 days after CCD surgery.As with dexamethasone,intrathecal spironolactone also significantly attenuated PWMT (P＜0.01 ＝ and PWTL (P＜0.01 ＝ and the change lasted up to 7 days after CCD surgery.Coadministration spironolactone and dexamethasone exhibited significant synergies( PWMT: ( 13.52 ± 0.72) g vs ( 11.58 ± 1.38 ) g, P ＜0.01; PWTL: ( 19.63 ± 1.68) s vs ( 14.14 ± 1.52) s, P ＜ 0.01 ＝.These effects lasted up to at least 10 days.Conclusion Both dexamethasone and spironolactone intrathecally have therapeutic effects on radicular pain behaviors, combination injection of these two drugs could generate significant synergies.     

鞘内联合注射地塞米松和Akt抑制剂对背根神经节压迫大鼠的镇痛作用

目的 在大鼠慢性背根神经节压迫模型中观察鞘内联合注射大剂量地塞米松(Dexamethasone,Dex)和Akt抑制剂Ⅳ的镇痛效果.方法 选择成功鞘内置管后无运动障碍的雄性SD大鼠40只,随机分为假手术组(Sham组,n=8)、溶剂对照组(CCD组,n=8)、Dex组(D组,n=8)、Akt抑制剂组(A组,n=8)和Dex联合Akt抑制剂组(DA组,n=8),制备根性神经痛模型.D组、A组和DA组分别于造模后第3,13天,每次鞘内给予Dex(100μg/kg)、Akt抑制剂(0.6μg/10μl)、Dex(100/kg)+Akt抑制剂(0.6μg/10μl).Sham组和C组则给予等量的溶剂(10%DMSO).于造模前3d、术后第3,4,7,10,13,14,15天测量术侧足底机械缩足阈值(PWMT)和热辐射刺激潜伏期(PWTL).结果 与Sham组相比,CCD组术后压迫侧PWMT(P＜0.01)和PWTL(P＜0.01)明显降低.与CCD组相比,造模后第3天,鞘内分别给予Dex、Akt抑制剂、Dex+Akt抑制剂后,PWMT(7.33±1.03)g、(5.67±1.03)g、(2.67±1.03)g(P＜0.01),PWTL(16.47±0.46)s、(14.48±0.84)s、(10.82±2.21)s(P＜0.01),随后逐渐下降,第13天鞘内再次分别给予Dex、Akt抑制剂后,PWMT(7.33±1.03)g、(5.67±1.03)g、(2.33±0.81)g(P＜0.01),PWTL(16.44±0.90)s、(14.01±0.82)s、(10.22±1.28)s(P＜0.01).而术后第3天,鞘内联合使用Dex和Akt抑制剂后,产生明显的协同作用,第4天PWMT(10.83±2.04)g、(2.67±1.03)g(P＜0.01),PWTL(19.11±2.01)s、(10.82±2.21)s(P＜0.01);第14天PWMT(7±0.82)g、(2.33±0.81)g(P＜0.01),PWTL(17.16±1.14)s、(10.22±1.28)s(P＜0.01).结论 鞘内注射大剂量地塞米松或Akt抑制剂可以有效改善慢性背根神经节压迫引起的痛行为学反应,而联合大剂量地塞米松和Akt抑制剂Ⅳ具有共同协同作用,对改善背根神经节压迫大鼠痛行为学反应更明显,更持久.     

鞘内注射依那西普对完全弗氏佐剂致痛大鼠痛阈的影响

目的探讨鞘内注射依那西普（etanercept）对完全弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant,CFA）所致大鼠炎性疼痛的影响,进一步探讨TNF-α在炎性痛中的作用。方法SD大鼠48只,随机分为8组（n=6）。A组为腹腔注射生理盐水（NS）;B组为腹腔注射依那西普;C组为腹腔注射NS,足底注射CFA;D组为腹腔注射依那西普,足底注射CFA;E组为鞘内注射NS;F组为鞘内注射依那西普;G组为鞘内注射NS,足底注射CFA;H组为鞘内注射依那西普,足底注射CFA。测量各时间点大鼠左足50％缩足阈值。结果腹腔注射和鞘内注射etanercept均升高CFA致痛大鼠的痛闽（P〈0．05）,两者间无统计学差异（P〉0．05）。结论鞘内注射依那西普升高CFA致痛大鼠的痛阈,提示TNF—α在CFA所致炎性疼痛的外周致敏和中枢致敏中均起作用。     

鞘内注射CREB反义寡核苷酸对坐骨神经结扎小鼠疼痛行为的影响

目的 探讨鞘内注射cAMP反应元件结合蛋白(CREB)反义寡核苷酸(ODN)对坐骨神经结扎小鼠痛行为的影响.方法 鞘内置管成功C57BL/6雄性小鼠24只,体质量20 ～25g,随机分为4组(n=6),生理盐水组(NS组),CREB同义寡核苷酸组(S组),CREB错义寡核苷酸组(M组),CREB反义寡核苷酸组(A组).制备坐骨神经慢性挤压伤(CCI)模型,造模后第1～6天,4组分别鞘内给予生理盐水5μl、同义寡核苷酸5μg／5μl、错义寡核苷酸5μg/μl、反义寡核苷酸5μg/5μl,每天1次.于造模前、后第1,3,5,7,10,14,17,21天测量CCl小鼠同侧足底机械刺激痛阈值(PWMT)和热辐射刺激潜伏期(PWTL).结果 A组小鼠1～7d内的疼痛阈值维持在基础值水平[第7天,PWMT:(0.81±0.20),(1.00±0.19)g,P＞0.05;PWTL:(5.96±0.69),(6.93±1.08)s,P＞0.05].在小鼠CCI后的第10天,A组损伤侧足出现疼痛[第10天,PWMT:(0.56 ±0.19),(1.00±0.19)g,P＜0.05;PWTL:(3.93±0.28),(6.93±1.08)s,P＜0.05],但是与NS组[第10天,PWMT:(0.56±0.19),(0.37±0.08)g,P＜0.05; PWTL:(3.93±0.28),(3.14±0.45)s,P＜0.05]、S组、M组相比,疼痛明显减轻,并且持续到术后第21天.结论 在CCI诱导的神经病理性疼痛的发展阶段连续鞘内注射CREB反义寡核苷酸可以完全抑制给药期内痛行为表现,并且在停止给药后15d仍有明显缓解疼痛的作用.     

鞘内注射SAHA对M型瞬时受体电位通道2介导小鼠慢性炎性痛的影响

目的 探讨鞘内注射辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对M型瞬时受体电位通道2(TRPM2)介导小鼠慢性炎性痛的影响.方法 将雄性野生型(WT)小鼠和TRPM2-/-小鼠各32只,按随机对照原则分为8组:WT对照组(WT CON组)、WT溶媒组(WT DMSO组)、WT炎性痛组(WT CFA组)、WT炎性痛+SAHA组(WT SAHA组)、TRPM2-/-对照组(TRPM2-/-CON组)、TRPM2-溶媒组(TRPM2-/-DM-SO组)、TRPM2-/-炎性痛组(TRPM2-/-CFA组)、TR-PM2-/-炎性痛+SAHA组(TRPM2-/-SAHA组),每组8只.采用完全弗氏佐剂(CFA)40μl于小鼠左后肢足底皮下注射建立慢性炎性痛模型,WT和TRPM2-/-的SAHA组于造模后3～9d行为学测试后鞘内注射50 mg/kg的SAHA,WTCON组、WT CFA组、TRPM2-/-CON组、TRPM2-/-CFA组4组注射等量生理盐水.WT和TRPM2-/-的DMSO组鞘内注射与SAHA等体积的DMSO.分别测定小鼠的机械刺激伤害感受阈、辐射热刺激伤害感受阈及足爪的肿胀度.结果 TRPM2-/-小鼠在未造模前表现出正常的疼痛行为学反应,与WT小鼠差异无统计学意义.WT和TRPM2-/-小鼠鞘内注射DMSO,其疼痛行为学指标与未注射前差异无统计学意义.WTCFA组的机械刺激伤害感受阈值和热刺激伤害感受阈值均明显低于WT CON组(P ＜0.001),WT SAHA组在给予SAHA干预后,各种疼痛阈值显著升高,与WTCFA组比较差异有统计学意义(P ＜0.001);TRPM2-/-CFA组机械刺激伤害感受阈值和辐射热刺激伤害感受阈值均明显高于WT CFA组,与TRPM2-/-SAHA组比较差异无统计学意义.WT CFA组足爪肿胀度造模后明显升高,与WTCON组、WT SAHA组比较均差异有统计学意义(P＜0.001);TRPM2-/-CFA组足爪肿胀度明显低于WT CFA组(P ＜0.001),与TRPM2-/-SAHA比较差异无统计学意义.结论 TRPM2参与小鼠慢性炎性痛的发生发展,鞘内注射SAHA可能改善TRPM2介导的慢性炎性痛.