叔丁基过氧化氢诱导小梁网细胞氧化应激模型的建立

目的体外建立叔丁基过氧化氢小梁网细胞氧化应激模型。方法应用t BHP刺激体外培养的小梁网细胞(i HTM)后,观察小梁网细胞形态学的改变,分别用MTT法检测氧化损伤后小梁细胞的活性,流式细胞术检测活性氧水平,SucLLVY-荧光底物检测糜蛋白酶样蛋白酶体的活性,流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测小梁细胞的凋亡。结果正常培养的小梁细胞呈梭形,折光性好,贴壁较牢;应用t BHP刺激后,部分细胞变圆、脱落、皱缩,小梁细胞的细胞活性明显下降,活性氧水平升高,糜蛋白酶样蛋白酶体活性降低,细胞凋亡水平明显增加。随着刺激时间的延长,上述改变更为明显。结论 t BHP刺激后,小梁网细胞出现典型的氧化应激改变,t BHP刺激小梁网模型的建立可应用于青光眼氧化应激的研究。     

过氧化氢诱导HUVECs氧化应激模型的构建

目的 利用过氧化氢 (H2O2) 诱导人脐静脉内皮细胞 (human umbilical vein endothelial cells, HUVECs) 构建体外氧化应激细胞模型.方法 H2O2分6个浓度梯度处理HUVECs不同时间, 倒置显微镜观察细胞形态变化, CCK-8法检测细胞存活率, 流式细胞术检测细胞凋亡率, DCFH-DA荧光探针和流式细胞仪检测细胞内活性氧水平, 筛选H2O2的最佳作用浓度和时间.结果 不同浓度H2O2处理细胞不同时间, 对HUVECs均有损伤作用;400、600、800μmol/L H2O2处理HUVECs 24 h, 细胞存活率显著降低 (P<0.05) , 800μmol/L H2O2作用HUVECs不同时间, 细胞存活率随处理时间延长逐渐降低 (P<0.01) ;各组H2O2处理HUVECs 24 h, 细胞凋亡率显著增加 (1 000μmol/L除外, P<0.05) , 坏死率亦显著增加 (100μmol/L除外, P<0.05) ;800μmol/L H2O2处理HUVECs不同时间, 细胞凋亡率随处理时间延长逐渐增加, 24 h时达到最高 (P<0.05) , 细胞坏死率亦逐渐增加, 48 h时达到最高 (P<0.05) ;各组H2O2作用HUVECs 24 h, 浓度400μmol/L时, 细胞内ROS水平达到最高 (P<0.01) , 800μmol/L H2O2处理HUVECs, 胞内ROS水平随处理时间延长而递增 (P<0.01) .结论800μmol/L H2O2与HUVECs作用24 h可构建体外细胞氧化应激模型.     

EZH2在卵巢颗粒细胞氧化应激反应诱导子宫内膜异位症相关不孕中的作用

  目的  探讨Zeste基因增强子同源物2(EZH2)在卵巢颗粒细胞(GCs)氧化应激反应(OS)诱导的子宫内膜异位症(EM)相关不孕中的作用。  方法  收集2019年4月—2020年11月青海红十字医院生殖医学科66例深浸润性EM患者和63例输卵管不孕症患者(对照组)的GCs。采用流式细胞术分析GCs中活性氧(ROS)水平。建立EZH2低表达COV434细胞模型,采用H₂O₂处理,通过SA-β-gal测定细胞衰老情况。建立小鼠EM模型,通过腹腔注射EZH2抑制剂DZNep进行治疗,并进行为期6个月的生育力测试。  结果  与对照组比较,EM组患者慢性盆腔疼痛评分、痛经疼痛评分和血清CA-125抗原均显著增加(均P＜0.001),并且平均取卵数量、平均成熟卵母细胞数量、平均2 PN胚胎数量、平均优质胚胎数量以及每个胚胎移植周期的临床妊娠率均显著降低(均P＜0.001)。与对照GCs相比,EM患者GCs中的细胞内ROS显著增加(3.62±0.26 vs. 12.25±0.74,P＜0.001),并且GCs中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和超氧化物歧化酶1(SOD1)蛋白表达显著减少(均P＜0.05)。EZH2敲低显著逆转了H₂O₂诱导的ROS水平、SA-β-Gal活性增加(均P＜0.05),并下调衰老相关蛋白表达(均P＜0.05)。EM+DZNep组中的子宫内膜异位病变尺寸比EM组显著减小[(433±74) mm3 vs. (1 624±182)mm3, P < 0.001],并且每次分娩的平均幼崽数明显大于EM组(均P＜0.05)。  结论  EZH2参与GCs细胞OS诱导的EM相关不孕。      

过氧化氢诱导人巨核细胞系Dami氧化应激模型的建立及评价

目的探讨过氧化氢（H202）诱导Dami细胞氧化应激模型的条件,建立并评价模型。方法不同浓度过氧化氢处理Dami细胞后,Giemsa染色,显微镜观察细胞形态学的变化;CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性,绘制生长曲线,计算半数抑制浓度（IC50）;加载DCFH—DA探针后流式细胞仪检测细胞内活性氧自由基水平;Westernblot检测核因子NF—E2相关因子（N㈣、醌氧化还原酶（NQ01）、血红素加氧酶（HO-1）、1-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位（GCLC）表达量。结果随着H202浓度升高,Dami细胞核皱缩趋于明显,存活率下降,Ic50为（0．9132±0．144）mmol／L;0．1mmol／L、1mmol／L、10mmol／LH2O2处理Dami细胞2h,细胞氧化应激阳性率分别为12．11％、20．91％、52．53％;H2O2处理Dami细胞24h后,抗氧化蛋白Nrf2、GCLC水平升高,未检测到HO-1和NQ01的表达。结论1mmol／LH2O2是建立Dami细胞氧化应激模型的合适浓度。Dami细胞抗氧化应激反应与Nrf2／ARE通路有关。     

颗粒细胞氧化应激及凋亡对IVF-ET结局的影响

目的：研究颗粒细胞丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平及凋亡对IVF-ET结局的影响。方法：选取51名首次行IVF-ET的输卵管性因素不孕患者。用GnRH-a长方案超促排卵治疗,密度梯度离心法分离卵泡液中颗粒细胞,硫代巴比妥酸法测定MDA水平,化学发光法测定SOD水平,流式细胞仪法测定凋亡率。结果：妊娠组与未妊娠组相比有较低的MDA水平和凋亡率,较高的优胚率,差异有统计学意义（P<0.05）。MDA与受精率呈中度负相关（r=-0.425,P=0.002）,与获卵数、成熟卵子数、卵裂率、优胚率无明显相关关系;SOD与之均无相关关系;凋亡率与获卵数(r=-286,P=0.042)、成熟卵子数(r=-0.330,P=0.020)、优胚率(r=-0.311,P=0.026)呈低度负相关。MDA与SOD呈中度负相关(r=-0.471,P<0.001);与凋亡率呈中度正相关(r=0.475,P<0.001)。结论：氧化应激可能导致卵巢颗粒细胞凋亡,进而影响卵子的发育潜能及IVF-ET的结局。     

Chemerin对卵巢颗粒细胞的影响及对PCOS发病机制的研究

目的：探究Chemerin在多囊卵巢综合征（polycystic ovarian syndrome,PCOS）发病机制中的作用。方法：体外培养人卵巢颗粒细胞（COV434）,分别下调及过表达COV434细胞中的Chemerin基因,采用ELISA测定培养液炎性因子白介素-6（inter－leukin-6,IL-6）、白介素-8（interleukin-8,IL-8）、白介素-10（interleukin-10,IL-10）及肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）浓度,EdU方法测定各组细胞增殖能力,流式细胞法测定细胞凋亡。结果：下调组（LV3-shChemerin-1、LV3-shChemerin-2）与阴性对照组（LV3-NC）相比,培养液中IL-6、IL-8、TNF-α浓度均明显降低,IL-10浓度明显升高,差异均有统计学意义（P IL-6=0.006,PIL-8=0.001,PTNF-α=0.012,PIL-10=0.002）,颗粒细胞COV434增殖能力明显降低（P=0.004）,凋亡明显增加（P=0.000）。过表达组（LV5-Chemerin）与阴性对照组（LV5-NC）相比,培养液中IL-6、IL-8、TNF-α明显升高,IL-10明显降低,差异均有统计学意义（PIL-6=0.044,PIL-8=0.008,PTNF-α=0.015,PIL-10=0.004）,颗粒细胞COV434增殖能力明显提高（P=0.013）,凋亡明显降低（P=0.029）。结论：Chemerin可能通过促进卵巢颗粒细胞炎症反应,并诱导颗粒细胞增殖抑制凋亡参与PCOS的发生发展。     

过氧化氢诱导大鼠主动脉内皮细胞氧化损伤模型的建立

目的采用过氧化氢(H2O2)诱导大鼠主动脉内皮细胞(SVAREC)氧化损伤,建立SVAREC氧化损伤模型。方法体外培养SVAREC细胞,绘制细胞生长曲线,用不同浓度的H2O2刺激细胞,并在不同时间点用MTS法测定细胞存活率,以确定SVAREC氧化损伤模型条件。倒置显微镜下观察细胞形态学变化,微孔酶标法测乳酸脱氢酶(LDH)活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,WB检测细胞中半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)的表达情况。结果与空白对照组细胞比较,当H2O2浓度为100μM,作用时间为2 h时,造成细胞损伤,其细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达量明显高于空白对照组。结论该实验条件下H2O2浓度为100μmol/L,作用时间为2 h是模型的最佳复制条件。     

外源性硫化氢通过抗氧化应激逆转过氧化氢诱导的 人脐静脉内皮细胞衰老

摘 要： 【目的】探讨硫化氢（Ｈ２Ｓ）对过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）诱导的人脐静脉内皮细胞衰老的影响及其抗氧化机制。【方法】建立Ｈ２Ｏ２诱导的人脐静脉内皮细胞衰老模型,采用不同浓度的硫氢化钠（ＮａＨＳ）预处理内皮细胞,观察其对衰老的作用。【结果】与对照组相比,６０ μｍｏｌ／Ｌ Ｈ２Ｏ２预处理后,能显著提高细胞ＳＡ β－ｇａｌ阳性率和血浆纤溶酶原激活物抑制剂－１（ＰＡＩ－１）的表达,同时增加丙二醛（ＭＤＡ）含量,但减少过氧化物歧化酶１（ＳＯＤ１）的表达。而ＮａＨＳ的预处理可以显著减少细胞ＳＡ β－ｇａｌ阳性率和ＰＡＩ－１的表达,减少ＭＤＡ的含量,增加ＳＯＤ１的表达。【结论】ＮａＨＳ可以逆转Ｈ２Ｏ２诱导的内皮细胞衰老,其机制与抗氧化应激有关。     

过氧化氢介导人瓣膜间质细胞产生氧化应激细胞模型的建立

目的 建立过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)介导的瓣膜间质细胞(valve interstitial cells,VICs)氧化应激模型,为心脏瓣膜病始发机制的研究以及未来抗氧化治疗药物筛选提供细胞学模型.方法 将分离培养的原代人主动脉瓣VICs随机分为对照组和处理组,分别以含10％胎牛血清的DMEM培养液和普通培养液+不同浓度梯度(0、50、100、300、500、800、1 000 μmol/L)的H2O2进行培养.采用H-E染色、MTT比色法、Annexin Ⅴ/PI双染流式细胞术检测细胞生存能力和凋亡的发生.结果 处理24 h后,MTT结果显示各组VICs细胞存活率差异有统计学意义(P＜0.01),H2O2浓度在50、100μmol/L时细胞存活率与对照组相比升高(P＜0.05),随后细胞存活率随H2O2浓度升高开始下降,在800 μmol/L时出现快速降低的拐点,此时细胞存活率为(69.8±8.3)％,1 000 μmol/L时细胞存活率降为(14.3±11.0)％.H-E染色显示在800μmol/L时VICs形态皱缩,胞核固缩.流式细胞检测则进一步证实800 μmol/L时VICs出现明显凋亡,此时多为中晚期凋亡.结论 H2O2最佳作用浓度为800 μmol/L,作用时间为24 h,在该条件下可成功建立氧化应激细胞模型.     

过氧化氢诱导人胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo氧化应激模型的建立

 目的 通过研究不同浓度过氧化氢(H2O2)作用不同时间对人胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo氧化应激水平的影响,确定建立滋养细胞氧化应激模型的条件。 方法 将HTR-8/SVneo用不同浓度(125、250、500 μmol/L) H2O2分别处理不同时间(1、2、4、24 h)后,采用CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术分析检测细胞内超氧化物阴离子水平以及细胞凋亡情况;紫外分光光度法检测细胞培养上清液中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性以及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量。结果 随H2O2浓度增加及作用时间延长,HTR-8/SVneo细胞存活率逐渐下降,细胞内超氧化物阴离子含量及细胞凋亡率不断增加,细胞培养上清液中SOD活性逐渐降低、LDH含量不断升高。其中在250 μmol/L H2O2作用4 h条件下,SOD活性明显低于对照组(P<0.05),细胞内超氧化物阴离子水平及细胞凋亡率较对照组均显著增加(P<0.05),但LDH漏出量无明显增多(P>0.05),且该条件下细胞有较高的存活率(85.13%)。结论 建立人胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo氧化应激模型的最适条件为250 μmol/L H2O2作用4 h。     

白藜芦醇对过氧化氢诱导人动脉平滑肌细胞的影响及其机制

目的：探讨白藜芦醇（Res）对过氧化氢（H2O2）诱导的人动脉平滑肌细胞的影响及其可能机制。方法：在人动脉平滑肌细胞中加入不同浓度（20、100、500umol／L）H2O2处理24h,建立动脉平滑肌细胞氧化损伤模型。不同终浓度（2、10、50umol／L）的Res单纯作用或分别与100umol／LH202共同作用于动脉平滑肌细胞24h。应用MTT比色法检测细胞存活率,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶（SODl的活力,硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛（MDA）含量,2,7-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH—DA）染色荧光显微镜照相检测细胞内的活性氧簇（ROS）水平,流式细胞术检测细胞凋亡百分率。结果：20、100、500umol／LH2O2处理人动脉平滑肌细胞24h后,动脉平滑肌细胞存活率和培养基上清液SOD活力均呈剂量依赖性地下降,细胞蛋白裂解液MDA含量活性则呈剂量依赖性地升高（P〈0．05）。2、10和50txmol／LRes与100umol／LH2O2共同作用动脉平滑肌细胞24h后,可呈剂量依赖性地抑制H2O2诱导的细胞存活率、SOD活力的下降以及MDA含量的升高,其中10和50umol／LRes＋100umol／LH202处理组与100umol／LH2O2模型组比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。10和50umol／LRes＋100Ixmol／LH202处理组DCF荧光强度均显著低于100txmol／LH2O2模型组（P均〈0．05）。10和50btmol／LRes＋100umol／LH2O2处理组人动脉平滑肌细胞的凋亡率分别为（20．7±3．0）％和（13．2±1．5）％,均显著低于100umol／LH2O2模型组的（27．2±3．6）％（均P〈0．05）。结论：Res可对抗H2O2诱导的动脉平滑肌细胞氧化损伤,其机制可能与其减少ROS生成以及降低动脉平滑肌细胞凋亡率有关。     

HSPA13在ARPE19细胞氧化应激中的作用

目的 探讨HSPA13在ARPE19细胞氧化应激中的作用。 方法 采用CCK8法检测不同浓度H2O2对ARPE19细胞活力的影响;Western印迹法和免疫荧光检测H2O2对HSPA13表达的影响;CCK8法检测HSPA13的表达水平对氧化应激诱导的细胞活力的影响;过表达或siRNA干扰HSPA13后,分别检测氧化应激相关指标和促炎因子的分泌;RNA测序分析空载组和HSPA13干扰组差异表达的基因,并进行GO富集及KEGG信号通路分析。 结果 CCK8法结果显示,与H2O2空白对照组相比,100、200、300、400μmol/L H2O2处理组细胞活力降低（P<0.05）。Western印迹法结果显示,与H2O2空白对照组相比,H2O2处理组HSPA13的表达上升（P<0.05）。CCK8法结果显示,过表达HSPA13可保护细胞活力。氧化应激相关指标和促炎因子检测结果显示,与H2O2处理组相比,过表达HSPA13加H2O2处理组中SOD1和GPX1 mRNA表达上升,MDA含量降低,GSH含量上升,IL-8、IL-2和IL-1β分泌下降;而siRNA干扰HSPA13加H2O2处理组的结果则相反,并且活性氧类含量上升（P<0.05）。RNA测序结果显示,与空载组相比,HSPA13干扰组差异基因表达上调的有64个,下调的有254个。GO富集分析表明,HSPA13与细胞代谢或多种生理过程相关。KEGG分析显示,HSPA13与PI3K-Akt信号通路、TGFβ信号通路相关。 结论 氧化应激诱导ARPE19细胞中HSPA13的表达上调;HSPA13在细胞氧化损伤中发挥保护作用,这为寻找年龄相关性黄斑变性新的治疗靶点提供有益的线索。     

白藜芦醇对Gc-1 spg细胞氧化应激损伤的作用研究

目的 观察白藜芦醇（RES）对过氧化氢H₂O₂诱导的小鼠精原细胞（Gc-1 spg）氧化应激损伤的作用。方法 H₂O₂复制Gc-1 spg细胞氧化应激损伤模型,设置空白组、H₂O₂组（800 μmol/L）、H₂O₂ +5 μmol/L RES组、H₂O₂ +10 μmol/L RES组和H₂O₂+15 μmol/L RES组。检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平,CCK-8法检测细胞活力,JC-1试剂盒检测线粒体膜电位,Mito Tracker^?? Green FM试剂盒检测活细胞线粒体水平,Hoechst 33342染色检测细胞核凋亡率,Western blotting检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3表达。结果 浓度为800 μmol/L H₂O₂处理Gc-1 spg细胞6 h时达到实验要求（P <0.05）。与空白组比较,各H₂O₂组细胞活力降低（P <0.05）,与H₂O₂组比较,H₂O₂ +5 μmol/L RES组、H₂O₂+10 μmol/L RES组、H₂O₂ +15 μmol/L RES组细胞活力升高（P <0.05）。与空白组比较,各H₂O₂组的GSH-Px和SOD水平降低（P <0.05）,LDH和MDA水平升高（P <0.05）;与H₂O₂组比较,H₂O₂ +5 μmol/L RES组、H₂O₂+10 μmol/L RES组、H₂O₂ +15 μmol/L RES组GSH-PX和SOD水平降低（P <0.05）,LDH和MDA水平升高（P <0.05）。与空白组比较,H₂O₂组细胞的红/绿荧光比值降低,提示线粒体膜电位降低（P <0.05）;与H₂O₂组比较,H₂O₂+5 μmol/L RES组、H₂O₂ +10 μmol/L RES组、H₂O₂ +15 μmol/L RES组JC-1红/绿荧光比值升高（P <0.05）。与空白组比较,H₂O₂组细胞线粒体数明显减少（P <0.05）;与H₂O₂组比较,H₂O₂ +5 μmol/L RES组、H₂O₂+10 μmol/L RES组、H₂O₂ +15 μmol/L RES组细胞荧光强度升高（P <0.05）。与空白组比较,H₂O₂组大量细胞核皱缩、碎裂,染色程度明显增强,细胞凋亡严重;与H₂O₂组比较,H₂O₂ +5 μmol/L RES组、H₂O₂+10 μmol/L RES组、H₂O₂ +15 μmol/L RES组细胞凋亡率降低（P <0.05）。与空白组比较,H₂O₂组凋亡蛋白Bax和Caspase-3相对表达量增加（P <0.05）,Bcl-2相对表达量减少（P <0.05）;与H₂O₂组比较,H₂O₂ +5 μmol/L RES组、H₂O₂ +10 μmol/L RES组、H₂O₂ +15 μmol/L RES组Bax和Caspase-3相对表达量降低（P <0.05）,Bcl-2相对表达量增加（P <0.05）。结论 RES对H₂O₂诱导的Gc-1 spg细胞氧化应激损伤具有保护作用,这种保护作用与RES浓度有关。     

高糖对人腹膜间皮细胞氧化应激的影响

目的研究不同浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞(HPMC)氧化应激的影响。方法HPMC体外培养并行免疫组化鉴定,取第2代细胞用于实验。将不同浓度葡萄糖干预HPMC一定时间后,MTT比色法检测细胞活力;采用活性氧捕获剂双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)孵育细胞,通过流式细胞仪检测细胞内的荧光强度而测得细胞内活性氧(ROS)水平。分析不同浓度葡萄糖及不同作用时间对HPMC细胞活力及ROS水平的影响。结果高糖明显抑制HPMC细胞活力(P<0.05),随着葡萄糖浓度增加及作用时间的延长,抑制率呈上升趋势。高糖干预HPMC后,细胞内的平均荧光强度明显升高。结论高糖导致细胞发生氧化应激,其对细胞的损伤作用可能与氧自由基生成过多及ROS蓄积有关。     

参杞强精颗粒对H2O2诱导小鼠睾丸间质细胞氧化应激损伤的作用

目的 探讨参杞强精颗粒对过氧化氢H₂O₂诱导的小鼠睾丸间质细胞TM3氧化应激损伤的作用。方法 以小鼠睾丸间质细胞为细胞模型,用MTT法检测参杞强精颗粒对正常TM3的细胞毒性作用;以500 μmol/L H₂O₂诱导损伤TM3细胞4 h后复制氧化应激损伤模型,采用CCK-8法检测不同浓度参杞强精颗粒对H₂O₂损伤TM3细胞增殖活力的影响;分别给予参杞强精颗粒（0.4、0.8和1.6 mg/mL）干预处理24 h后,用酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中睾酮分泌水平、一氧化氮（NO）、乳酸脱氢酶（LDH）、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）含量及谷胱甘肽-S转移酶（GST）的活性;同时检测细胞内活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）及总抗氧化能力（TAOC）的含量;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测睾酮合成酶类固醇合成快速调节蛋白（StAR）、胆固醇侧链裂解酶（P450scc）、17β-羟基固醇脱氢酶（17β-HSD） mRNA表达。结果 参杞强精颗粒在浓度为0.05～2.50 mg/mL时对正常TM3细胞无毒性作用。与H₂O₂损伤模型组比较,参杞强精颗粒各剂量组能提高TM3细胞增殖活率（P <0.05）。与H₂O₂模型组比较,参杞强精颗粒各剂量组提高细胞上清液中睾酮水平和NO含量,增加GST活性,降低LDH和8-OHdG含量（P <0.05）。与H₂O₂损伤模型组比较,参杞强精颗粒各剂量组降低细胞内ROS、MDA含量,同时增强CAT、SOD和TAOC的活性（P <0.05）。与H₂O₂模型组比较,参杞强精颗粒各剂量组能提高睾酮合成酶StAR、P450scc、17β-HSD mRNA相对表达量（P <0.05）。结论 参杞强精颗粒对H₂O₂诱导睾丸间质细胞氧化应激损伤具有保护作用,其机制可能通过清除氧自由基、抗氧化应激损伤及促进睾酮合成有关。     

槲皮素抗人脐静脉内皮细胞氧化损伤的作用研究

目的观察槲皮素（quercetin,Que）对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）过氧化氢损伤的保护作用及可能机制。方法用体外培养的HUVECs传代后进行实验,实验分为3组：对照组常规培养;过氧化氢损伤组;药物干预组加入Que低、中、高浓度组（62.5、125、250 umol/L预处理）。用MTT法观察Que对过氧化氢损伤的内皮细胞活性的影响,各组均测定细胞中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（（malondialdehyde,MDA）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogense,LDH）的活性,TUNEL法检测细胞凋亡率。结果 Que使过氧化氢损伤的内皮细胞的脂质过氧化物MDA生成减少,LDH漏出液减少,SOD活力增加;过氧化氢损伤可以诱导内皮细胞凋亡,Que可显著减少过氧化氢诱导的内皮细胞的凋亡。结论 Que处理对过氧化氢所致的内皮细胞的损伤有保护作用,机制可能通过抗脂质过氧化,对氧自由基的清除,以及抗细胞凋亡有关。     

氧化应激对人胰腺导管上皮细胞增殖的影响

目的探讨氧化应激对人胰腺导管上皮细胞增殖的影响。方法不同浓度过氧化氢（H,0,）作用于人胰腺导管上皮细胞6～48h,采用四甲基偶氮唑盐（MTr）比色法检测细胞光密度（OD）,绘制细胞生长曲线,计算细胞存活率;采用碘化丙啶（PI）单染色法检测细胞周期,计算细胞增殖指数（proliferationindex,PI’）。结果细胞处理6h．H202300μmol／L组存活率下降[（79．10±9．21）％VS．（100．00±14．84）％,P〈O．05]。12hH202300vμmoYL组OD值降低（O．277±0．022vs．0．309±0．015;P〈0．05）,存活率明显下降f（56．90±29．91）％vs．（100．00±20．91）％,P〈0．01]。24hH20,100、200、300~mol／L组OD值明显降低（0．493±0．011,0．434±0．029,0．373~0．014VS．0．529~0．011;P〈0．01）．存活率明显下降[（87．95±3．73）％,（67．61±9．87）％,（46．84±4．76）％VS．（100．00~3．85）％;P〈0．01】,PI’明显降低【（25．50~1．81）％。（25．20~1．80）％,（21．11＋1．78）％VS．（32．20~2．33）％;P〈0．011。48hH202251~mol／L组OD值明显升高（0．683~0．014VS．0．587~0．024,P〈0．01）,存活率明显升高[（127．39~3．99）％VS．（100．00~6．72）％;P〈0．011,H20225、50~moUL组PI’明显升高【（44．20~4．75）％,（40．50~2．67）％VS．（35．40~1．25）％;P〈0．01】;而H202100、200、300txmol／L组OD值明显降低（0．533±0．011,0．440±0．018,0．376~0．003VS．0．587~0．024;P〈0．01）,存活率明显下降『（84．74±3．08）％,（58．20±5．10）％,（39．87±0．71）％vs．（100．00±6．72）％;P〈0．01】,PI’明显降低f（24．30±1．83）％,（21．97~1．82）％,（16．94±3．55）％vs．（35．40±1．25）％;P〈0．011。结论低浓度H202显著促进人胰腺导管上皮细胞增殖,呈时效及量效关系：反之,高浓度H,0,抑制细胞增殖。