MAPK1基因沉默对肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinases1,MAPK1)基因沉默对肺癌A549细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。方法 利用CRISPR/CAS9基因编辑技术构建MAPK1沉默细胞系,采用Real-time PCR和Western blot检测沉默MAPK1后mRNA和蛋白表达水平。将MAPK1沉默载体与空载体转染至肺癌A549细胞中,并分为MAPK1沉默组、空载体组和空白组。对各组的肺癌A549细胞进行培养,利用CCK-8实验检测细胞增殖能力;平板集落形成实验检测细胞集落形成能力;平板划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡和周期情况以及Western blot实验检测MAPK1沉默后ERK/mTOR通路蛋白表达。结果 Real-time PCR和Western blot结果表明成功构建肺癌A549细胞MAPK1沉默细胞系。MAPK1沉默使肺癌A549细胞增殖能力减弱（P<0.05）,迁移和侵袭能力降低（P<0.05）,细胞凋亡率增加且细胞周期被阻滞于S期（P<0.0...     

MiR-24对肺癌A549细胞增殖和迁移的影响

目的:分析MiR-24对肺癌A549细胞增殖和迁移的影响,并探讨其作用机制。方法:人肺癌A549细胞分为观察组(MiR-24拟似物)、抑制组(MiR-24抑制物)和对照组,培养0、12、24和48 h; MTT法、划痕实验和Transwell法检测MiR-24对人肺癌A549细胞增殖和迁移能力,qPCR和Western...     

LSD1对非小细胞肺癌细胞增殖与迁移的影响

目的: 探讨赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(lysine specific demethylase 1,LSD1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及对细胞增殖与迁移的影响。方法: qRT PCR检测52例NSCLC标本和对应癌旁组织中LSD1 mRNA水平,分析其与NSCLC临床病理特征的关系。qRT PCR检测NSCLC细胞A549与正常肺支气管上皮细胞16HBE中LSD1 mRNA表达;将A549细胞分为2组,分别转染LSD1干扰RNA(si LSD1组),阴性对照RNA(对照组);MTT实验、克隆形成实验、流式细胞技术、Transwell迁移实验分别检测两组细胞增殖、凋亡、迁移能力的差异;qRT PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞上皮间质转化相关分子mRNA和蛋白水平。结果： 与癌旁组织相比,NSCLC组织中LSD1 mRNA表达升高(t=2.861,P<0.05);LSD1表达量与NSCLC患者TNM分期及淋巴结转移相关(χ2=4.062,6.047,P均<0.05),与患者年龄、性别、吸烟、肿瘤直径、病理分型无明显相关性(P>0.05)。A549细胞中LSD1 mRNA表达量明显高于16HBE细胞（t=3.569,P<0.05)。与对照组相比,si LSD1组A549细胞增殖与迁移能力降低,细胞凋亡率显著增加(t=3.618,P<0.05),E 钙黏蛋白表达上调(t=5.607,P<0.05),波形蛋白表达下调(t=-6.628,P<0.05)。 结论： LSD1在NSCLC组织及细胞中表达上调,可能通过促进上皮间质转化参与细胞增殖和迁移调控。     

microRNA-21对肺癌A549细胞增殖和Smad7表达的影响

目的 探讨微小RNA-21 ( miR-21 )对肺癌A549细胞中Smad7表达的调控和对肺癌A549 细胞增殖的影响. 方法 常规培养肺癌细胞系A549,经脂质体转染miR-21模拟物和抑制物及阴性对照片段48 h后,采用Western blot、qRT-PCR法检测 Smad7 基因及蛋白的表达水平, MTT 法检测A549细胞增殖情况. 结果 转染miR-21 模拟物后Smad7的mRNA和蛋白表达量降低( P<0. 05 ) ,而转染miR-21 抑制物后Smad7的mRNA和蛋白表达量升高( P<0. 05 );MTT结果显示转染 miR-21 模拟物后细胞的增殖能力明显增强(P<0. 05),而转染miR-21 抑制物后细胞增殖能力明显减弱( P<0. 05 ). 结论 通过下调 miR-21 可提高 Smad7 的mRNA和蛋白表达,进而抑制A549细胞的增殖.     

脂联素受体AdipoR1对肺癌PC9细胞增殖和迁移的影响

目的 检测过表达或敲低人脂联素受体1（AdipoR1）基因对PC9细胞增殖和迁移的影响,阐明AdipoR1基因对肺癌的调控作用。方法 通过PCR检测AdipoR1在PC9细胞及对照细胞HBEC中的表达量;利用分子克隆的方法构建AdipoR1的过表达和shRNA干扰载体,并采用PCR和western blot方法检测转染AdipoR1过表达和干扰载体PC9细胞中AdipoR1的表达情况。运用CCK-8方法和划痕愈合实验检测AdipoR1激动剂AdipoRon、AdipoR1过表达及AdipoR1敲低对PC9细胞的增殖和迁移活性的调控作用。结果 PCR结果显示AdipoR1在PC9细胞中的表达量明显降低（P < 0.05）。PCR和western blot结果显示AdipoR1 mRNA和蛋白在其过表达的PC9细胞中的表达量明显高于空载体细胞系（P 均 < 0.05）,在其干扰RNA处理组表达量明显低于空载体细胞系（P 均 <0.05）。CCK-8和划痕愈合实验结果显示：在24h和48h时,与溶剂对照组相比,AdipoRon能显著降低PC9细胞的吸光度值和划痕愈合百分比（P均 < 0.05）。过表达AdipoR1 PC9细胞的吸光度值和划痕愈合百分比明显低于空载体细胞（P均 < 0.05）。AdipoR1敲低能明显促进PC9细胞的吸光度值和划痕愈合百分比（P均 < 0.05）。结论 成功构建了人AdipoR1的真核过表达和shRNA干扰载体,AdipoR1激动剂AdipoRon或AdipoR1过表达能抑制肺癌PC9细胞增殖和迁移活性,而AdipoR1敲低则能明显促进肺癌PC9细胞增殖和迁移的活性。     

高表达Kiss-1对结肠癌SW480细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨高表达Kiss-1基因对结肠癌SW480细胞增殖及迁移的影响.方法 将pEGFP-N1-Kiss-1重组质粒转染至SW480细胞设为实验组,将pEGFP-N1质粒转染至SW480细胞设为阴性对照组,将SW480细胞设为空白对照组,采用Western blot法检测各组细胞中Kiss-1表达量;采用CCK-8法分析Kiss-1对SW480细胞增殖的影响;并用划痕实验评估Kiss-1对SW480细胞迁移能力的影响.结果 将pEGFP-N1和pEGFP-N1-Kiss-1重组质粒转染至SW480结肠癌细胞,检测实验组Kiss-1表达量增加,实验组细胞增殖率明显低于对照组(P＜0.05),且实验组细胞划痕损伤愈合的速度明显下降.结论 高表达Kiss-1可抑制结肠癌SW480细胞的增殖,降低细胞迁移速度.     

丙泊酚调控HIF-1α表达靶向SIRT1信号通路对胰腺癌细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨丙泊酚对胰腺癌细胞增殖凋亡的影响,进一步分析丙泊酚对胰腺癌细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和沉默信号调节因子1(SIRT1)信号通路的影响.方法 分别采用5μg/ml和10μg/ml的丙泊酚处理胰腺癌Panc-1细胞48 h,设置control组、低剂量组和高剂量组.采用CCK8检测各组细胞的增殖能力...     

SIRT6基因沉默对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨SIRT6基因沉默对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建肝癌细胞系,转染SIRT6,检测SIRT6 mRNA及蛋白质的表达水平;将表达shSIRT6的慢病毒感染Huh-7细胞,培养后检测SIRT6 mRNA、蛋白质表达水平及凋亡情况.结果 成功构建了沉默SIRT6基因的Huh-7稳定细胞系,在Huh-7细胞中,mRNA表达的抑制率达81.25%,其SIRT6蛋白质水平亦受到抑制;Huh-7细胞的凋亡比例为(16.52±2.08)%.结论 SIRT6基因沉默可诱导人肝癌细胞凋亡,进而抑制其增殖.     

Human decorin regulates proliferation and migration of human lung cancer A549 cells

Background Decorin is a small leucine-rich proteoglycan and it plays an important role in regulation of cell growth and migration in various tumor cell lines. Decorin was found down-regulated in non-small cell lung cancer tissue and may be involved in regulation of lung cancer development. Methods In this study, lentivirus-mediated RNA interference and over expression were employed to change the expression levels of decorJn Jn lung cancer A549 cells. We tested the cell cycle of A549 cells and the expression of transforming growth factor （TGF）-[31, cyclin D1, epidermal growth factor receptor （EGFR）, P53, and P21. Results We found that up-regulation of decorin could inhibit proliferation, block cell cycle at G1 and decrease invasive activity of A549 cells. Moreover, we also show that up-regulation of decorin induced significant decreases of TGF-131, cyclin D1 expression, phosphorylation of EGFR, and increases of P53 and P21 expression. Opposite results were observed in A549 cells with down-regulation of decorin. Conclusion Our results suggest that decorin is a key regulator involved in proliferation and migration ofA549 cells.     

外泌体对A549细胞增殖、凋亡及迁移功能的影响

目的 观察肺癌细胞来源的外泌体对肿瘤细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响.方法 采用多步超速离心法从肺癌A549细胞的培养液上清中分离出肺癌细胞来源的外泌体,并通过透射电子显微镜观察外泌体形态,利用Western blot 检测其表面跨膜蛋白的表达.采用 MTT 法、ELISA法分别检测外泌体对A549细胞增殖和凋亡的影响;采用Transwell法了解外泌体对A549细胞迁移能力的影响.结果 观察所提取的外泌体大小均匀,形态规则,多为圆形及椭圆形膜性囊泡盘状结构,直径30~100 nm,其外周包被被膜,表面具有丰富的四次跨膜蛋白CD9、CD63等.MTT法提示外泌体对A549细胞具有促增殖作用,且其影响具有时间和剂量依赖特征(P<0.05),ELISA法检测用外泌体共培育后的A549细胞的凋亡情况,结果显示外泌体在一定程度上抑制肿瘤细胞凋亡(F=365.496,P=0.000).Transwell法观察显示,外泌体具有促进A549细胞迁移运动的作用(F=252.005,P=0.000).结论 肺癌细胞来源的外泌体能促进A549细胞增殖、减少其凋亡、增强其迁移运动的能力.     

AS-miR-21对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移及对PTEN/PI3K/Akt信号通路的作用

目的 探讨miR-21的反义寡核苷酸(AS-miR-21)对非小细胞肺癌(NSCLC) A549细胞增殖和迁移能力的影响及对PTEN/PI3K/Akt信号通路的调控作用机制.方法 将NSCLC A549细胞分为3组,分别为AS-miR-21组、miR-NC组和Blank组,前两组分别应用阳离子脂质体LipofectamineTM 2000瞬时转染AS-miR-21及阴性对照miRNA(miR-NC),后者未进行任何干预.应用qRT-PCR检测AS-miR-21对NSCLCA549细胞中miR-21表达的影响;应用MTT检测NSCLC A549细胞增殖抑制率;Giemsa染色检测NSCLCA549细胞克隆形成;细胞划痕实验检测NSCLCA549细胞迁移潜能;qRT-PCR检测AS-miR-21对NSCLC A549细胞中PTEN mRNA表达水平的影响;蛋白质免疫印迹法检测AS-miR-21对NSCLC A549细胞中PTEN、PI3K、Akt蛋白表达水平的影响.结果 与miR-NC组和Blank组比较,AS-miR-21组miR-21表达水平下调(P ＜0.05);AS-miR-21显著抑制NSCLCA549细胞增殖能力(P＜0.05),显著减少NSCLCA549细胞克隆形成(P＜0.01)和迁移率(P＜0.01);AS-miR-21显著上调NSCLC A549细胞中PTEN蛋白表达水平(P＜0.01),而显著下调PI3K和Akt蛋白表达水平(P＜0.01).结论 AS-miR-21能抑制NSCLCA549细胞增殖及迁移,此外,AS-miR-21通过负调控PTEN/PI3K/Akt信号通路有可能成为NSCLC治疗新靶点.     

MicroRNA-433在非小细胞肺癌A549细胞增殖及迁移中的作用

目的 研究microRNA-433（miR-433）对人非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞增殖及迁移的作用。方法 采用实时聚合酶链反应（real-time PCR）检测miR-433在A549、NCI-H1299、NCI-H358以及人肺成纤维细胞系HFL1中的表达。不同浓度miR-433?mimic转染A549细胞,选取最佳浓度进行后续实验;MTT法检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞迁移情况;双荧光素酶报告基因法检测miR-433与p21活化激酶4（PAK4）的靶向关系;Western blotting检测PAK4、单丝氨酸蛋白激酶1（LIMK1）、磷酸化单丝氨酸蛋白激酶1（p-LIMK1）、丝切蛋白（Cofilin）和磷酸化丝切蛋白（p-Cofilin）的表达。结果 与HFL1比较,miR-433 在3种NSCLC中的表达均降低。过表达miR-433 48?h后,A549细胞增殖和迁移能力降低,差异有统计学意义（P?< 0.05）。双荧光素酶报告基因法证明PAK4为miR-433的靶向调节基因,且PAK4在3种NSCLC中的表达均上升。过表达miR-433后细胞中PAK4、p-LIMK1、p-Cofilin的表达均降低,与mimic control组比较,差异有统计学意义（P?<0.05）。结论 miR-433能通过靶向下调PAK4的表达,抑制LIMK1/cofilin信号通路,抑制A549细胞的增殖及迁移。     

Effect of Antisense RNA Targeting Polo-like Kinase 1 on Cell Growth in A549 Lung Cancer Cells

In order to investigate the effect of Polo-like kinase-1 （Plk1） depletion on cell cycle progression and cell growth in lung cancer cells, a recombinant plasmid containing antisense RNA targeting Plk1 （pcDNA3-Plk1） was transfected into A549 cells by lipofectine. RT-PCR and Western-blot were used to detect the Plk1 gene expression. Cell proliferation was evaluated by direct cell counting and bromodeoxyuridine （BrdU） labeling. Cell cycle distribution and apoptosis were examined by flow cytometry, and the inhibition rate （IR） by vinorebline （NVB） was determined by MTF assay. The results showed that after transfection of pcDNA3-Plk1 into A549 cells, the expression levels of Plk1 mRNA and protein were greatly decreased. In pcDNA3-Plk1 transfected groups, abnormal morphological changes of cells and growth inhibition were observed, and the BrdU labeling index was significantly lower than in the control groups （P〈0.05）. Cells in pcDNA3-Plk1 transfected groups were arresed in G2/M phase and apoptosis was detectable 72 h post transfection. IR induced by vinorebline in pcDNA3-Plk1 transfected groups was significantly higher than in other groups. These data suggested that antisense RNA targeting Plk1 could suppress the Plk1 expression, and therefore, significantly inhibit cell proliferation and induce cell cycle arrest and apoptosis. Moreover, it sensitized lung cancer cells to chemotherapy.     

A激酶锚定蛋白9提高ERK通路活性促进肺腺癌细胞A549增殖和迁移

目的：探讨A激酶锚定蛋白9(AKAP9)对肺腺癌细胞A549的作用及其可能的分子机制。方法：通过实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质印迹（Western blot）法检测shRNA的沉默效果;通过MTT和克隆形成实验检测AKAP9对肺腺癌细胞A549增殖的影响;Transwell实验检测AKAP9对肺腺癌细胞A549迁移的影响;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测周期相关蛋白P27、细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)的表达和细胞外信号调节激酶（ERK）通路中表皮生长因子受体（EGFR）、ERK的磷酸化水平。结果：RT-q PCR和Western blot结果显示,shRNA可以有效地沉默肺腺癌细胞A549中AKAP9的表达（P<0.01）。MTT和克隆形成结果示,与对照组相比,沉默AKAP9显著抑制癌细胞A549的增殖和克隆形成能力（P<0.01）。Transwell实验示,与对照组相比,沉默AKAP9显著抑制癌细胞A549的迁移能力（P<0.01）。流式细胞术结果示,与对照组相比,沉默AKAP9可以诱导...     

滑膜素对乳腺癌细胞迁移和增殖的影响

目的:探讨滑膜素(synoviolin)在乳腺癌组织中的表达情况及其对乳腺癌细胞MCF-7增殖和迁移能力的影响?方法:通过Western blot?免疫组织化学染色及免疫组织芯片技术检测乳腺癌组织中滑膜素的表达水平;在乳腺癌细胞MCF-7中利用腺病毒过表达滑膜素,并以划痕实验?Transwell迁移实验?CCK-8细胞增殖试剂盒等检测其对于乳腺癌细胞MCF-7迁移和增殖能力的影响?结果:滑膜素在乳腺癌组织中的表达水平明显低于相应癌旁组织;过表达滑膜素能抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖和迁移能力;过表达滑膜素能抑制乳腺癌细胞MCF-7发生上皮-间质转化?结论:滑膜素在乳腺癌组织中低表达,可能与抑制乳腺癌细胞的迁移和增殖能力密切相关?     

长链非编码RNA PRNCR1对胃癌细胞增殖、侵袭及转移的研究

探索胃癌MGC-803细胞和人正常胃黏膜上皮GES-1细胞中,长链非编码RNA PRNCR1的表达,以及沉默PRNCR1 对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法利用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测细胞中PRNCR1 表达水平;设计并合成PRNCR1-siRNA及对照序列（PRNCR1-NC）转染胃癌细胞,通过qRT-PCR 检测细胞中PRNCR1 的沉默效果;利用四甲基偶氮唑盐比色法检测胃癌细胞 的增殖;Transwell实验检测胃癌细胞迁移和侵袭能力的变化。结果PRNCR1 在胃癌MGC-803 细胞中的表达高于人正常胃黏膜上皮GES-1 细胞,PRNCR1-siRNA 可以下调胃癌MGC-803 细胞中PRNCR1 的表达,并可以抑制MGC-803 细胞的增殖和侵袭转移能力。结论PRNCR1-siRNA 能够下调PRNCR1 的表达,并有效抑制胃癌细胞的增殖和侵袭迁移力,为以PRNCR1 为靶点的胃癌基因治疗奠定理论基础。     

大黄酸对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其机制

目的：探讨大黄酸对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并阐明其机制。方法：将NSCLC A549细胞分为对照组和低、中及高剂量大黄酸组,采用不含大黄酸的培养基和含有质量浓度为5、10和20 μmol·L^-1大黄酸的培养基分别培养细胞24、48和72 h。采用MTT法检测各组A549细胞增殖率,流式细胞术检测A549细胞凋亡率以及不同细胞周期A549细胞百分比,Western blotting法检测各组A549细胞中半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）、半胱氨酸蛋白酶9（Caspase-9）、细胞色素C（Cyt-C）和凋亡诱导因子（AIF）蛋白表达水平,划痕实验和Transwell实验检测各组A549细胞迁移和侵袭能力。结果：大黄酸处理24h后,与对照组比较,低、中和高剂量大黄酸组A549细胞增殖率明显降低（P<0.05）,细胞迁移距离明显减少,侵袭细胞数量明显减少;中和高剂量大黄酸组A549细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;高剂量大黄酸组G₁期细胞百分比明显降低（P<0.05）。大黄酸处理48 h后,与对照组比较,中和高剂量大黄酸组A549细胞中Caspase-3、Caspase-9、Cyt-C和AIF蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：大黄酸可抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其作用机制可能与上调Caspase-3、Caspase-9、Cyt-C和AIF蛋白表达有关。     

lncRNA MNX1-AS1通过调控miR-218-5p影响非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡及迁移

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MNX1-AS1通过调控miR-218-5p的表达对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法qRT-PCR检测MNX1-AS1和miR-218-5p在肺癌细胞系及肺正常上皮细胞系中的表达;采用双荧光素酶报告基因实验和RNA pull down实验验证MNX1-AS1和miR-218-5p之间的靶向关系;干扰A549细胞中MNX1-AS1和miR-218-5p的表达后,MTT、流式细胞术和Transwell实验检测MNX1-AS1靶向miR-218-5p对癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。结果与肺正常上皮细胞系相比,肺癌细胞系中MNX1-AS1表达升高,miR-218-5p表达降低(P＜0.05);荧光素酶报告基因实验显示,MNX1-AS1可与miR-218-5p结合导致荧光素酶活性显著降低(P＜0.05);RNA pull down实验证实miR-218-5p能特异性结合MNX1-AS1(P＜0.05);抑制A549细胞中MNX1-AS1的表达后,miR-218-5p水平上调,细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低,凋亡率显著升高;与MNX1-AS1抑制剂组相比,共抑制MNX1-AS1和miR-218-5p的细胞增殖、迁移、侵袭能力升高,凋亡率下降(P＜0.05)。结论MNX1-AS1可以通过靶向下调miR-218-5p的表达影响非小细胞癌的增殖、凋亡、迁移和侵袭。