高压氧对大脑中动脉阻塞大鼠细胞凋亡的影响

目的 观察高压氧（HBO）对永久性大脑中动脉阻塞（MCAO）大鼠凋亡诱导因子（AIF）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的影响,探讨凋亡途径。 方法 选取SD大鼠60只,制作大鼠永久MCAO模型,按照随机数字表法将其分为对照组和HBO组,每组30只。HBO组造模成功后3 h予以HBO干预,压力0.2 MPa,持续9 h,于HBO干预介入后1 h、3 h、5 h、7 h、9 h吸氧。对照组呼吸常压空气。MCAO造模成功后3 h、13 h、72 h行Garcia评分,MCAO造模成功后13 h、72 h检测细胞凋亡情况、细胞核和线粒体AIF、Caspase-3水平。 结果 与组内3 h比较,2组大鼠13 h的Garcia评分有所改善（P<0.05）,72 h的Garcia评分改善更明显（P<0.05）。2组大鼠缺血半暗带区各时间点皆可见大量凋亡细胞,对照组72 h凋亡细胞数少于13 h,差异有统计学意义（P<0.05）,与对照组比较,HBO组13 h时的细胞凋亡数较少（P<0.05）。与组内13 h比较,2组大鼠72 h时AIF在细胞核中的表达水平均下降（P<0.05）,AIF在线粒体中的表达水平均升高（P<0.05）。与对照组同时间点比较,HBO组13 h［（1.10±0.08）ng/ml］、72 h［（0.41±0.07）ng/ml］AIF在细胞核中的表达水平均较低（P<0.05）,13 h［（1.60±0.05）ng/ml］、72 h［（5.94±0.14）ng/ml］AIF在线粒体中的表达水平均较高（P<0.05）。2组大鼠Caspase-3水平在13 h增高（正常时胞浆内水平为0）。与组内13 h比较,2组大鼠Caspase-3水平在72 h下降（P<0.05）。 结论 HBO治疗可以改善大鼠神经功能,抑制AIF由线粒体向细胞核转位,降低Caspase-3水平,其机制可能是通过线粒体非Caspase依赖途径及Caspase途径减少细胞凋亡。     

氯沙坦对脓毒症大鼠的脑保护作用及可能机制

目的探讨血管紧张素ⅡAT1受体拮抗剂氯沙坦干预在脓毒症大鼠中枢神经系统损伤中的调节作用及可能机制。方法应用盲肠结扎穿孔(CLP)法建立大鼠脓毒症模型,清洁级Wistar大鼠45只随机分为3组,假手术组15只(Sham,S组)、CLP模型组15只(C组)、氯沙坦干预组15只(L组),术后12 h内死亡者剔除,并再次补足每组大鼠数量,术后24 h行神经功能评分,收集血清,后断颈处死大鼠取脑组织。分别检测血清及脑组织TNF-α、IL-6炎症因子表达,测定脑组织含水量及半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)含量,并观察脑组织病理变化。结果与S组相比,C、L组神经功能评分明显降低、脑组织含水量及caspase-3含量明显增加,血清及脑组织局部TNF-α、IL-6表达上调(P<0.05),病理损伤严重。与C组相比,L组神经功能评分升高、脑组织含水量、血清及脑组织TNF-α、IL-6、caspase-3表达明显下调(P<0.05),脑组织病理损伤减轻。结论氯沙坦可通过下调炎症因子、抑制细胞凋亡蛋白表达对脓毒症大鼠起到一定脑保护作用。     

高压氧对大鼠局灶性脑缺血再灌注神经细胞caspase-3表达的影响

目的探讨高压氧对大鼠局灶性脑缺血再灌注神经细胞caspase-3表达的影响。方法选取健康雄性Wistar大鼠60只，随机分为假手术组、模型组及HBO组，采用栓线法阻断大脑中动脉3h建立大鼠局灶性脑缺血一再灌注损伤模型。应用免疫组织化学方法检测再灌注6h、24h、48h、72h和120h各时间点大鼠脑组织神经细胞caspase-3的表达。结果假手术组无caspase-3表达。模型组和HBO组再灌注各时间点caspase-3的表达均增高，HBO组大鼠再灌注6h、24h和48h各时间点easpase-3的表达均明显低于模型组（P〈0．05）。结论脑缺血再灌注后caspase-3表达增强，高压氧治疗可抑制大鼠脑神经细胞easpase-3的活性，减少脑神经细胞凋亡，具有脑神经保护作用。     

高压氧联合骨髓间充质干细胞治疗创伤性脑损伤大鼠的疗效观察

目的 观察高压氧联合骨髓间充质干细胞（BMSCs）对创伤性脑损伤（TBI）的治疗效果。 方法 采用随机数字法将80只TBI大鼠分为对照组、高压氧治疗组（高压氧组）、干细胞移植组（干细胞组）、干细胞移植+高压氧治疗组（联合组），每组20只。对照组造模成功后不接受治疗；干细胞组于造模成功24 h后进行干细胞移植；高压氧组于造模成功24 h后接受高压氧治疗；联合组于造模成功24 h后先进行干细胞移植，移植完成1 h后即接受高压氧治疗。4组大鼠均于造模成功后和取材前进行神经功能缺失评分（NSS），并于对应的取材时间点取脑组织行苏木精-伊红（HE）染色，并于光镜下计算免疫组化检测核因子-kB（NF-kB）、脑源性神经营养因子（BDNF）表达。 结果 造模后第3、5、10、20天，均以联合组的NSS评分最低，与其余3组同时间点比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；造模后第20天，联合组的NSS评分为（1.8±0.45）分，显著优于组内造模后第3、5天，差异均有统计学意义（P<0.05）。高压氧组、干细胞组、联合组的脑细胞水肿程度均较对照组轻，炎症细胞浸润少。造模后第3、5、10、20天，联合组脑组织中NF-kB和BDNF的阳性细胞数均高于其余3组同时间点，差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论 高压氧联合BMSCs可显著改善TBI大鼠神经神经功能障碍程度，减轻损伤区和周围组织的炎症和水肿，促进NF-kB和BDNF的表达，且以长疗程的高压氧治疗疗效更佳。     

[Gly14]-Humanin对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响及其机制研究

目的:通过观察[Gly14]-Humanin(HNG)预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经功能缺损评分、脑水肿、细胞凋亡及炎症反应等方面的影响,探讨其相关的神经功能保护机制。方法:将96只健康雄性SD大鼠随机分为HNG组、生理盐水组、模型组及假手术组,每组24只。采用改良的Zea-longa线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,生理盐水组与假手术组大鼠术前7天给予生理盐水(2ml/kg)连续尾静脉注射,每日1次;HNG组给予HNG(2μl/kg),而模型组除正常饲养外术前不接受任何处理。各组大鼠在线栓法造模成功后6h,再拔除线栓恢复血液灌注24h后进行神经功能缺损评分(NDS),开阔法观察SD大鼠脑缺血再灌注后行为学改变;采用干湿质量法检测脑组织含水量、HE染色观察缺血区病理学改变,ELISA法测定大鼠脑组织核因子-κB p65(NF-κB p65)及干扰素-γ(IFN-γ)水平,原位末端标记染色观察凋亡细胞数并进行统计学分析。结果:①与假手术组相比,其余3组大鼠的NDS、脑组织含水量、NF-κB p65及IFN-γ水平及细胞凋亡数均升高,而行为学指数降低,差异有显著性意义(P0.01—0.05);②与生理盐水组及模型组相比,HNG组大鼠的NDS、脑组织含水量、NF-κB p65和IFN-γ水平、细胞凋亡数降低,而行为学指数增高,差异有显著性意义(P0.01—0.05);③HNG组大鼠脑组织IFN-γ与NF-κB p65含量水平呈正相关(r=0.762,P0.001)。结论:HNG预处理减轻脑缺血再灌注损伤过程中的脑水肿,下调脑组织中NF-κB p65的水平,减少促炎介质(IFN-γ)的释放,抵制神经细胞的凋亡,从而减轻临床神经功能的缺损。     

骨髓间充质干细胞移植对脑缺血大鼠神经功能及IL-10、TNF-α水平的影响

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSC)移植治疗对大鼠脑缺血后神经功能及脑组织中IL-10、TNF-α表达的影响。方法:原代分离培养MSC。27只大鼠随机分为3组,各9只:假手术组,仅剪开皮肤;模型组,制作局灶性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,术后24 h尾静脉注射PBS;MSC组,制作MCAO模型,术后24 h尾静脉注射移植MSC。术后第3天行改良大鼠神经功能缺损评分(m NSS)评定大鼠神经功能;行为学测试后取梗死灶周围缺血半暗带脑组织,western blot法检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-10蛋白表达水平。结果:与模型组比较,MSC组m NSS评分升高(P0.05),脑组织蛋白IL-10表达水平上调(P0.05),TNF-α表达水平下调(P0.05)。结论:尾静脉移植MSC治疗可改善局灶性脑缺血大鼠神经功能,可能与移植MSC后脑组织中TNF-α和IL-10水平有关。     

高压氧对脑缺血再灌注大鼠神经功能的影响

【目的】探讨高压氧对脑缺血再灌注大鼠神经功能的影响。【方法】选取60只Wistar大鼠,随机分成3组,假手术组、模型组和实验组,每组20只。假手术组大鼠仅进行手术过程而不造成缺血,模型组大鼠直接行大脑中动脉缺血再灌注,实验组大鼠采用高压氧预处理再行大脑中动脉缺血再灌注,对比三组大鼠再灌注24 h后神经功能缺损评分、脑梗死体积、缺血病灶脑组织神经细胞凋亡指数(AI),脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)活力、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量变化。【结果】假手术组的脑组织没有受损,其神经功能缺损评分和脑梗死体积占比均为0。模型组和实验组脑组织均受到损伤,神经功能缺损评分和脑梗死体积及AI这3种指标均升高,但实验组损伤较轻,其数据低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);三组大鼠再灌注24 h后脑组织SOD、LDH活力及MDA、NO含量比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠脑组织SOD、LDH活力均低于假手术组(P<0.05),但实验组大鼠脑组织SOD.LDH活力均高于模型组(P<0.05)。模型组大鼠脑组织MDA、NO均高于假手术组(P<0.05),但实验组大鼠脑组织MDA、NO活力均低于模型组(P<0.05)。【结论】高压氧可通过改善脑组织氧化应激损伤抑制大鼠脑缺血再灌注损伤。     

头针对急性脑缺血再灌注大鼠脑内Bax、Fas、caspase-3的影响

目的：观察头针对脑缺血再灌注后大鼠脑神经元损伤的保护作用,探讨头针治疗脑缺血的可能机制。方法：90只健康SD雌性大鼠随机分为假手术组10只,模型组和头针组各40只。采用大脑中动脉线栓法将模型组和头针组大鼠制备大脑中动脉闭塞（MCAO）再灌注模型,头针组大鼠给予头针治疗。观察治疗6、24、48及72h各时相点各组大鼠神经功能缺损（NSS）评分,脑组织Bax、Fas及caspase-3的表达。结果：①NSS评分：造模后各时相上点组间比较,头针组与模型组NSS评分显著高于假手术组（P〈0.01）;在第72h时相点头针组NSS评分显著低于模型组（P〈0.01）。②Western bloting检测：造模后6、24、48和72h时相点头针组及模型组Bax蛋白在梗死侧脑组织中均有表达,且在24h达高峰,随着时间推移,模型组的Bax蛋白相对光密度比值较头针组减少缓慢（P〈0.01）。③RT-PCR检测：头针组与模型组Fas、caspase-3mRNA在梗死边缘区的内侧诱导表达,头针组明显少于模型组。结论：脑缺血损伤诱导Bax、caspase-3、Fas基因表达增强,Bax、caspase-3、Fas在介导神经细胞凋亡和缺血性脑损害中起关键作用。使用头针治疗对脑缺血再灌注后大鼠脑组织有保护作用。     

针刺对急性脑缺血大鼠昼夜节律蛋白Clock和Bmal1的影响

目的 探讨不同时间点针刺对急性脑缺血大鼠缺血脑区Clock,Bmal1的影响。 方法 选取3月龄SD雌性大鼠80只,随机均分为正常组、模型组、6 h针刺组和24 h针刺组,每组20只大鼠。模型组、6 h针刺组和24 h针刺组采用开颅法电凝大脑中动脉复制急性脑缺血模型,6 h针刺组和24 h针刺组于对应的造模成功后时间点针刺百会、足三里和关元穴。造模成功24.5 h后,采用改良的神经功能量表(mNSS) 对4组大鼠进行神经功能评分。造模成功25 h后,4组大鼠均拉断脊髓处死,断头取脑组织,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定梗死面积,Western blot法检测缺血脑组织Clock和Bmal1蛋白含量。 结果 造模成功24.5 h后,6 h针刺组和24 h针刺组大鼠的神经功能评分均显著低于模型组同时间点,差异均有统计学意义(P<0.05);且6 h针刺组分的神经功能评分亦显著低于24 h针刺组同时间点(P<0.05)。造模成功25 h后,模型组、6 h针刺组和24 h针刺组的脑梗死体积显著大于正常组,模型组脑梗死体积显著大于6 h针刺组和24 h针刺组,且6 h针刺组脑梗死体积显著小于24 h针刺组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。造模25 h后,模型组、6 h针刺组和24 h针刺组大鼠梗死区域脑组织中Clock和Bmal1蛋白的含量较正常大鼠明显减少,差异均有统计学意义(P＜0.01);6 h针刺组和24 h针刺组大鼠梗死区域脑组织中Clock和Bmal1蛋白的表达显著高于与模型组,差异均有统计学意义(P＜0.05),且6 h针刺组大鼠梗死区域Clock和Bmal1蛋白的表达亦显著高于24 h针刺组,差异有统计学意义(P＜0.05。 结论 针刺可以显著提高缺血脑组织Clock和Bmal1蛋白的表达,促进神经功能恢复,具有抗脑缺血损伤作用。     

阿托伐他汀对大鼠脑缺血后补体水平的影响

目的 研究大鼠脑缺血后补体表达的变化规律,探讨阿托伐他汀对大鼠脑缺血后补体表达的影响.方法 160只健康成年S-D大鼠随机分为正常组、假手术组、缺血组、治疗组,缺血组和治疗组分别再分为缺血后6 h、12 h、24 h、48 h、3 d、5 d、2同七个小组.线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(The middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,缺血2h后退出线栓,假手术组不插入线栓.麻醉清醒后大鼠出现对侧肢体瘫痪表明造模成功.治疗组在造模成功后开始口饲阿托伐他汀钙10 mg/d,每日1次,连用2周.缺血组不给予阿托线他汀类药物.对缺血组和治疗组大鼠不同时点进行神经功能缺失评分,然后断头取脑,免疫组化法检测脑内补体C1q和C3d的表达情况.结果 正常组大鼠脑内有少量补体表达,假手术组补体表达与正常组比较无统计学意义(P＜0.05),脑缺血后脑内补体C1q和C3d的表达水平逐渐增加,至缺血后24 h达高峰,5 d左右恢复至正常水平.缺血组补体C1q、C3d的表达明显高于假手术组(P＜0.05),治疗组补体C1q和C3d的表达明显低于缺血组(P＜0.05),治疗组神经功能评分明显低于缺血组(P＜0.05);结论 脑缺血后脑内补体C1q、C3d的表达逐渐升高,阿托伐他汀可以抑制脑内补体的激活,改善神经功能.     

亚低温对复苏后大鼠脑细胞凋亡相关因子的影响

  目的  研究亚低温对心肺复苏后大鼠神经细胞凋亡及凋亡基因表达的影响。  方法  60只健康雄性SD大鼠随机分为常温组(T=37℃±0.5℃)和亚低温组(T=33℃±1.0℃), 每组30只; 窒息法建立心肺复苏模型, 于自主循环恢复后12、24 h通过神经功能缺损评分评价神经功能, 使用TUNEL染色观察脑细胞凋亡情况, 并于自主循环恢复后0、2、6、12、24 h采用RT-PCR检测脑组织中凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor, AIF)、caspase-3、Fas基因mRNA表达。  结果  亚低温组大鼠12及24 h神经功能缺损评分明显高于常温组(P < 0.05), 6、12、24 h神经细胞凋亡数量明显少于常温组(P < 0.05);与常温组相比, 自主循环恢复后各时间点AIF、caspase- 3及6、12、24 h Fas基因mRNA表达显著下调(P < 0.05)。  结论  亚低温可能通过抑制脑组织中AIF、caspase-3、Fas凋亡基因表达, 减少神经元凋亡, 改善神经功能。     

p62与NF-κB介导的凋亡通路在大鼠急性胸段脊柱脊髓损伤中的机制

目的观察p62、核因子κB(NF-κB)以及caspase-3在大鼠脊髓损伤中的表达,并探讨相关机制。方法60只大鼠随机分为假手术组和实验组,实验组大鼠采用Allen法制作脊髓损伤模型,分别于24 h、48 h和72 h进行神经功能评分,以及通过Western blot法检测不同时间段p62和NF-κB蛋白表达,Elisa法检测不同时间段caspase-3蛋白水平。结果脊髓损伤后大鼠BBB评分显著降低,并随造模时间的延长而上升(P0.05),Western blot法显示脊髓损伤后p62和NF-κB蛋白水平明显提高,而随时间的延长p62和NF-κB蛋白表达下降(P0.05),Elisa法显示脊髓损伤后caspase-3活性明显提高,而随时间的延长caspase-3蛋白活性得到显著下降(P0.05)。结论脊髓损伤可激活p62与NF-κB介导的凋亡通路,并对损伤脊髓的细胞凋亡起着重要的调控作用。     

高压氧治疗对大鼠脑挫裂伤后认知功能和细胞凋亡的影响

目的:探讨高压氧对脑挫裂伤的治疗作用与对细胞凋亡影响之间的关系。方法:实验于2001-03/2002-05在上海交通大学医学院附属第三人民医院神经外科实验室进行。选择SD雄性大鼠109只,随机分为假手术组、高压氧治疗组和脑损伤组,使用Morris水迷宫实验测试大鼠伤前及伤后的认知功能;分别应用透射电镜、原位末端标记法(TUNEL)和流式细胞技术对各组动物挫伤灶旁和海马结构的细胞凋亡情况进行检测。结果:各组大鼠全部进入结果分析,无脱落。①Morris水迷宫实验结果:脑外伤后大鼠逃生时间显著延长(P<0.01),而高压氧治疗使逃生时间明显缩短(P<0.05);②各组动物挫伤灶旁和海马结构的细胞凋亡情况:假手术组无细胞凋亡,损伤组和治疗组存在细胞凋亡,细胞凋亡的发生在伤后24h达到高峰,高压氧治疗组在伤后24h和48h细胞凋亡发生率显著低于相应的损伤对照组(P<0.05)。结论:脑挫裂伤后大鼠的认知功能显著减退,高压氧可以显著改善脑外伤后下降的神经功能;高压氧治疗对脑挫裂伤后细胞凋亡的发生有显著影响,抑制细胞凋亡很可能是高压氧对脑挫裂伤治疗作用的重要机制。     

头穴丛刺法对急性脑梗死大鼠行为学及凋亡相关基因bcl-2 的影响

目的探讨头穴丛刺对急性脑梗死大鼠神经行为学及凋亡相关基因bcl-2 的影响。方法将72 只雄性Wistar 大鼠随机分为3 组：假手术组(A)、造模组(B)和头穴丛刺组(C),每组各24 只。各组再根据脑梗死后不同时间分为6 h、24 h 和3 d 三个亚组,每个时间点各8 只。采用线栓法制备急性脑梗死动物模型,观察不同时间点头穴丛刺法对急性脑梗死大鼠行为学及脑组织凋亡相关基因bcl-2 表达的影响。结果脑梗死第3 天,C组大鼠神经功能评分明显低于B组(P<0.01);C组大鼠术后不同时间点缺血半暗区bcl-2 的表达增多,24 h 时达到高峰,与B组比较差异均具有高度显著性差异(P<0.01)。结论头穴丛刺能明显降低急性脑梗死大鼠神经功能评分,促进运动功能恢复;并可促进大鼠缺血半暗区bcl-2 的表达,抑制细胞凋亡。     

人尿液干细胞定向移植治疗大鼠颅脑损伤

目的探讨人尿液干细胞(h USCs)对大鼠颅脑损伤(TBI)后神经运动功能及神经细胞凋亡的作用及其相关机制。方法体外获取h USCs进行增殖培养,利用流式细胞仪检测h USCs细胞表型。Feeney氏自由落体法制备大鼠TBI动物模型,45只大鼠随机分为3组:A组为正常对照组,B组为模型组,C组为实验组。实验组造模后利用h USCs定向移植治疗大鼠TBI。A组和B组注射等量高糖DMEM培养基。分别于10 d、20 d和30 d后进行神经功能评分,30 d后处死所有大鼠,取出损伤区域脑组织,利用Western blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2以及Caspase-3表达,并利用免疫组织化学染色检测Caspase-3表达。结果 h USCs细胞表型CD29表达率为(99.12±0.57)%,CD73表达率为(98.73±0.79)%,CD34表达率为(0.41±0.15)%,神经功能评分显示,B组大鼠颅脑损伤后神经功能评分较A组明显升高,C组经h USCs治疗10 d、20 d和30 d可显著改善降低颅脑损伤大鼠神经功能评分。Western blot结果显示,B组Bax、Caspase-3蛋白表达较A组明显增加,B组Bcl-2蛋白表达较A组明显下调,C组经h USCs治疗可显著抑制Bax和Caspase-3蛋白,提高Bcl-2表达。免疫组织化学染色结果显示,B组Caspase-3表达均显著高于A组,C组经h USCs治疗可显著降低Caspase-3在脑组织中平均光密度。结论 h USCs可提高大鼠颅脑损伤后神经运动功能,抑制颅脑损伤后神经细胞的凋亡。     

蛛网膜下腔出血大鼠鼻咽全氟化合物处理对其神经保护作用研究

[目的]探究蛛网膜下腔出血大鼠鼻咽全氟化合物处理(NP-PFC)对其神经保护作用及作用机制。[方法]40只大鼠经造模后随机均分为模型组(B组)、NP-PFC处理组(C组),另随机选取20只大鼠作为假手术组(A组)。通过对各组大鼠进行神经功能评价.脑组织切片HE染色、MDA含量的测定、SOD及CAT活性检测、脑组织RT-PCR实验、脑组织Wenstern blot实验,对NP-PFC的神经保护作用进行探究。[结果]A、B.C组大鼠的神经功能评分分别为(16.9±2.4)分.(11.6±2.2)分.(15.1±2.4)分,B组.C组大鼠神经功能评分低于A组,C组高于B组,差异具有统计学意义(F=26.64,P<0.001)。A组大鼠前额叶皮质中各层细胞结构清晰,神经细胞边缘清晰;B组大鼠前额叶皮质中各层细胞排列稀疏散乱,神经细胞边缘模糊;C组大鼠前额叶皮质中各层细胞排列情况较B组大鼠相比明显改善,其神经细胞边缘也较B组大鼠清晰。三组大鼠脑组织中MDA.SOD及CAT含量比较,差异具有统计学意义(F=331.94.473.27.275.82,P<0.05)。A.B,C三组大鼠脑组织中caspase-3 mRNA表达量分别为(0.63±0.11).(1.42±0.26).(0.77±0.19),差异具有统计学意义(F=46.04.P<0.001)。A.B.C三组大鼠脑组织中caspase-3蛋白表达量分别为(0.32±0.08).(0.72±0.13)、(0.39±0.09),差异具有统计学意义(F=43.60,P<0.001)。[结论]NP-PFC可通过抑制氧化应激及神经细胞的凋亡保护蛛网.膜下腔出血大鼠的神经系统。     

冬虫夏草菌粉对糖尿病大鼠对比剂肾损伤的影响

目的观察冬虫夏草菌粉对糖尿病大鼠对比剂肾病的影响,探讨其可能的肾保护机制。方法将100只雄性SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素(60mg/kg)制备成糖尿病模型,造模成功大鼠84只,随机分为对照组(N组),对比剂肾病组(M组),冬虫夏草干预组(C组),普罗布考干预组(P组,阳性对照组)4组。糖尿病造模饲养9周后,C组大鼠给予冬虫夏草菌粉(3g/kg/d)灌胃,P组给予普罗布考(500mg/kg)灌胃,其余各组给予等量的生理盐水灌胃,连续7天;第8天经尾静脉注射碘克沙醇注射液(2.0g iodine/kg)制备CIN模型,于注射对比剂前及注射24h后,血标本检测Scr、BUN;尿标本检测NGAL、KIM-1。开腹后采集双侧肾脏,取左肾用于病理;右肾用于Western blotting检测抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白在肾内的表达量变化水平。结果(1)与M组相比,C、P组BUN、Scr均明显减低(P均0.05)。(2)与M组比较,C、P组肾脏Bax、caspase-3表达水平降低,Bcl-2表达升高(P均0.05)。结论冬虫夏草可减轻糖尿病大鼠CIN的早期肾脏损伤,其机制可能与下调Bax、caspase-3表达,上调Bcl-2/Bax比值,抗细胞凋亡有关,且效果与普罗布考相当。     

七氟烷后处理对脑缺血-再灌注大鼠脑组织TLR4、TRAF6表达的影响

目的观察七氟烷后处理对脑缺血-再灌注大鼠脑组织toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)表达的影响。方法选取健康SD雄性大鼠随机分为假手术组(C组)、缺血-再灌注组(I-R组)、1. 0MAC七氟烷后处理组(S1组)、1. 5 MAC七氟烷后处理组(S2组),根据再灌注时间分为6 h、12 h、24 h、48 h亚组(n=10)。采用线栓法制备缺血-再灌注模型。C组除不插线栓进行缺血操作外,其余步骤同脑缺血-再灌注建模操作。I-R组行脑缺血2 h,并根据分组进行持续再灌注6 h、12 h、24 h、48 h。S1、S2组在I-R组的基础上进行七氟烷后处理。对4组大鼠进行神经功能缺损评分,TCC染色测定脑梗死体积,免疫组化法检测脑组织TLR4、TRAF6蛋白表达水平,荧光定量PCR检测TLR4、TRAF6 mRNA表达,TUNEL染色检测细胞凋亡。结果与C组各亚组比较,I-R组可见明显神经功能缺损、缺血侧大脑半球梗死、脑组织细胞凋亡,七氟烷后处理大鼠神经功能缺损评分显著降低、大脑梗死体积显著减小、细胞凋亡指数(AI)显著降低(P 0. 05),且S2组显著优于S1组(P 0. 05);组内比较,再灌注24 h组脑梗死体积、细胞凋亡指数(AI)显著高于其他亚组(P 0. 05)。与C组各亚组比较,I-R组相应亚组TLR4、TRAF6蛋白及mRNA表达显著升高(P 0. 05),七氟烷处理后有所降低(P 0. 05),且S2组显著低于S1组(P 0. 05);组内比较,再灌注后24 h组TLR4、TRAF6蛋白及mRNA表达显著高于其他亚组(P 0. 05)。结论七氟烷后处理可减轻缺血-再灌注大鼠脑组织损伤及神经功能缺损,降低脑组织TLR4及TRAF6的表达。     

滋补脾阴方药对大鼠脊髓损伤后IL-1β、caspase-3表达及细胞凋亡的影响

目的:研究大鼠脊髓损伤后白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)半胱氨酸天冬特异性蛋白酶(cysteingl aspartate specific protease,caspase)表达和细胞凋亡的规律及三者之间的关系、滋补脾阴方药对它们的影响.方法:将成年SD大鼠随机分为假手术组、损伤组和滋补脾阴方药组,于伤后不同时间点(1h、8h、24h、72h)处死,用免疫组化染色检测IL-1β、caspase-3阳性细胞,TUNEL法标记凋亡细胞.结果:免疫组化结果显示假手术组仅有少量IL-1β和caspase-3阳性细胞表达;损伤组的两者均在8h表达最多,24h减少,72h减少至略多于假手术组.TUNET标记阳性细胞的时间分布特点与IL-1β和caspase-3相似,8h最多,72h减少至较低水平.IL-1β、caspase-3表达阳性细胞率和细胞凋亡指数三者间呈正相关;滋补脾阴方药使IL-1β、caspase-3表达阳性细胞率和细胞凋亡指数降低.结论:大鼠脊髓损伤后,IL-1β和caspase-3表达增强,凋亡细胞大量出现,三者间存在正相关;滋补脾阴方药能够抑制脊髓损伤后的炎症反应,减少细胞凋亡,减轻脊髓继发性损伤.     

NRG1β/JNK信号通路在大鼠脑缺血再灌注损伤的作用机制研究

目的探究神经调节素1β(NRG1β)/JNK信号通路在大鼠脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法选取40只6周龄SPF级SD大鼠,随机分为4组,空白对照组、模型组、神经调节素1β组、JNK信号通路抑制剂组。空白对照组不建模,其他三组采用改良线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。造模成功后神经调节素1β组按照2μg/kg的注射比例给大鼠注射NRG1β,JNK信号通路抑制剂组将抑制剂用10%DMSO溶解稀释,向大鼠血管内注入5μl浓度为4 mg/kg的JNK信号通路抑制剂-SP600125。模型组和空白组使用等量的生理盐水处理。采用HE将大鼠脑组织细胞染色,观察缺血脑组织病理改变;采用原位末端标记法(TUNEL)检测缺血后神经细胞凋亡情况;采用改良神经功能缺损评分评价大鼠神经行为功能;检测大鼠脑组织含水量;采用Western blot法检测脑组织JNK表达水平。结果 HE染色结果显示,相比空白对照组,模型组大鼠脑细胞列紊乱、细胞固缩且被染色加深,坏死细胞较多;相比模型组,神经调节素1β组和JNK信号通路抑制剂组大鼠脑细胞显著改善。相比空白对照组,模型组大鼠脑细胞凋亡指数、神经功能缺损评分、大鼠脑组织含水量、p-JNK蛋白表达水平显著升高,且差异有统计学意义(P 0. 01);大鼠脑组织JNK蛋白表达水平无显著变化(P 0. 05);相比模型组,神经调节素1β组和NK信号通路抑制剂组大鼠细胞凋亡指数、神经功能缺损评分、大鼠脑组织含水量、p-JNK蛋白表达水平显著降低,且差异有统计学意义(P 0. 01);大鼠脑组织JNK蛋白表达水平无显著变化(P 0. 05)。结论经NRG1β可以通过抑制JNK信号通路,从而缓解大鼠脑缺血再灌注损伤。