哮喘患儿转录因子T-bet/GATA-3 mRNA比值及其与Th1/Th2平衡间的关系

【目的】研究转录因子T-bet/GATA-3在小儿哮喘发病以及Th1/Th2失衡中的作用。【方法】本实验拟通过半定量RT-PCR检测部分哮喘患儿外周血单个核细胞（PBMC）中T-bet、GATA-3 mRNA表达情况,同时采用三色荧光流式细胞仪检测哮喘患儿的Th1、Th2细胞数量,并对T-bet、GATA-3 mRNA表达水平与Th1、Th2细胞比率进行相关分析,了解T-bet/GATA-3对哮喘患儿的Th细胞分化的调节作用。【结果】哮喘患儿外周血淋巴细胞转录因子T-bet mRNA表达水平显著低于正常对照组,其中哮喘发作组显著低于缓解组（P〈0.05）;转录因子GATA-3 mRNA表达水平显著高于正常对照组,哮喘发作组又显著高于缓解组（P〈0.05）。哮喘患儿外周血淋巴细胞亚群Th1百分率显著低于正常对照组,其中哮喘发作组又显著低于缓解组（P〈0.05）;Th2细胞百分率显著高于正常对照组,哮喘发作组又显著高于缓解组（P〈0.05）。哮喘患儿T-bet mRNA表达量与Th1细胞比率呈正相关（r=0.731）,与Th2细胞比率呈负相关（r=-0.685）;GATA-3 mRNA表达量与Th1细胞比率呈负相关（r=-0.692）,与Th2细胞比率呈正相关（r=0.717）;T-bet/GATA-3 mRNA比值与Th1细胞比率呈正相关（r=0.793）,与Th2细胞比率呈负相关（r=-0.639）,与Th1/Th2比值呈正相关（r=0.801）。【结论】哮喘患儿T-bet/GATA-3 mRNA表达水平失调,与哮喘患儿Th1/Th2失衡密切相关,可作为衡量Th1/Th2平衡的新指标。     

哮喘患儿转录因子T-bet/GATA-3 mRNA比值及其与Th1/Th2平衡间的关系

 【目的】 研究转录因子T-bet/GATA-3在小儿哮喘发病以及Th1/Th2失衡中的作用。【方法】 本实验拟通过半定量RT-PCR检测部分哮喘患儿外周血单个核细胞（PBMC）中T-bet、GATA-3 mRNA表达情况，同时采用三色荧光流式细胞仪检测哮喘患儿的Th1、Th2细胞数量，并对T-bet、GATA-3 mRNA表达水平与Th1、Th2细胞比率进行相关分析，了解T-bet/GATA-3对哮喘患儿的Th细胞分化的调节作用。【结果】 哮喘患儿外周血淋巴细胞转录因子T-bet mRNA表达水平显著低于正常对照组，其中哮喘发作组显著低于缓解组（P<0．05）；转录因子GATA-3 mRNA表达水平显著高于正常对照组，哮喘发作组又显著高于缓解组（P<0．05）。哮喘患儿外周血淋巴细胞亚群Th1百分率显著低于正常对照组，其中哮喘发作组又显著低于缓解组（P<0．05）； Th2细胞百分率显著高于正常对照组，哮喘发作组又显著高于缓解组（P<0．05）。哮喘患儿T-bet mRNA表达量与Th1细胞比率呈正相关（r＝0．731），与Th2细胞比率呈负相关（r＝-0．685）；GATA-3 mRNA表达量与Th1细胞比率呈负相关（r＝-0．692），与Th2细胞比率呈正相关（r＝0．717）；T-bet/GATA-3 mRNA比值与Th1细胞比率呈正相关（r＝0．793），与Th2细胞比率呈负相关（r＝-0．639），与Th1/Th2比值呈正相关（r＝0．801）。【结论】 哮喘患儿T-bet/GATA-3 mRNA表达水平失调，与哮喘患儿Th1/Th2失衡密切相关，可作为衡量Th1/Th2平衡的新指标。     

麻黄-甘草药对对小鼠脾细胞的增殖以及Th1/Th2平衡的影响

目的研究麻黄-甘草药对对小鼠脾细胞的增殖以及在刀豆蛋白A刺激下对Th1/Th2平衡的影响,探讨其对免疫功能的作用与机制。方法利用MTT法考察不同质量浓度的药对及单体对脾淋巴细胞增殖的影响;药对干预刀豆蛋白A(5mg/L)建立的淋巴细胞Th1/Th2平衡模型,qPCR法检测药对及单体对刀豆蛋白A刺激条件下脾淋巴细胞Th1型常见标志物IFN-γ、T-bet及Th2型常见标志物IL-4、GATA3基因的表达,ELISA法检测IL-4与IFN-γ蛋白水平。结果 25~100mg/L浓度的麻黄-甘草药对对静息状态以及刀豆蛋白A诱导的脾细胞有促增殖作用;麻黄碱、伪麻黄碱对静息状态以及刀豆蛋白A诱导的脾细胞有促增殖作用;甘草苷与甘草酸在0.01~10μmol/L浓度范围内对脾细胞增殖未见明显影响。在调节Th1/Th2平衡方面,麻黄-甘草药对可以显著抑制IL-4与GATA3的表达,而对IFN-γ与T-bet的表达未见明显影响;其中麻黄碱能显著上调IFN-γ与T-bet的表达,伪麻黄碱既能抑制IL-4与GATA3的表达,也能抑制IFN-γ与T-bet的表达;甘草酸能抑制IL-4与GATA3的表达,同时能上调IFN-γ与T-bet的表达(P0.01);甘草苷对上述基因未见明显影响;药对及单体均能抑制IL-4的蛋白水平,其中以药对、麻黄碱与伪麻黄碱作用更明显(P0.05~0.01);药对与甘草苷能抑制IFN-γ的蛋白水平,麻黄碱、伪麻黄碱及甘草酸能提高IFN-γ的蛋白水平,其中甘草酸的作用最明显(P0.05)。结论麻黄-甘草药对及其单体能对静息状态与活化状态的脾细胞产生促增殖作用,并能通过调节Th1/Th2平衡影响机体的免疫功能。     

T-bet与Thl/Th2在乙型肝炎中的作用机制

T-bet是T-box家族的一种重要转录因子,在CD4+T细胞Thl型的分化中起重要作用,并抑制Th2细胞因子合成,可使完全分化的Th2逆转为Th1。目前已证实多种疾病的发生、发展和预后涉及Thl/Th2分化失衡。而T-bet对Thl/Th2分化调控作用在疾病中的作用机制有助于解释疾病的发展机制,为疾病的治疗提供依据。文中就T-bet在乙型肝炎中的作用机制作一综述。     

IL-11对ITP患者Th1、Th2细胞及T-bet、GATA-3 mRNA的影响

目的：研究白细胞介素-11 （IL-11）对免疫性血小板减少症（ITP）患者Th1、Th2细胞亚群及其调控因子T-bet mRNA和GATA-3 mRNA表达的影响.方法：从10例ITP患者静脉中抽取外周血提取单个核细胞,加入不同浓度IL-11（0、25、50、100、200 ng/mL）培养4d后,应用流式细胞术和实时荧光定量反转录-多聚酶链反应法检测Th1、Th2细胞亚群比例及T-bet mRNA、GATA-3 mRNA表达水平.结果：当IL-11浓度为100 ng/mL时,与浓度为0的对照组差异最明显,表现为Th1比例及Th1/Th2比值下降,Th2比例升高,差异有统计学意义（P＜0.01）,同时T-bet mRNA表达下降,GATA-3 mRNA表达增加,T-bet/GATA-3比值显著下降,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论：一定浓度的IL-11在体外培养中能促使ITP患者Th1细胞向Th2细胞转化,同时GATA-3 mRNA表达增加、T-bet mRNA表达下降.     

Th1和Th2细胞对记忆性CTL抗肿瘤的增强作用

目的：研究CD4 辅助型T细胞在记忆性CTL介导的抗肿瘤免疫中的作用。方法：以OT-1细胞转输RAG基因敲除小鼠产生记忆性CTL，以OVA特异性T细胞表位多肽联合不同佐剂事先免疫C57BL/6小鼠产生不同类型的T细胞，将记忆性CTL传输上述C57BL/6小鼠并接种表达OVA的肿瘤细胞EG7。结果：遇肿瘤细胞攻击时，单纯OVA特异性Th多肽免疫小鼠虽可产生较多效应性CTL，但不能完全抵御肿瘤攻击；记忆性CTL介导的抗肿瘤免疫效应需要Th1和Th2细胞的辅助；Th12和Th2细胞间的相互作用有利于机体产生较多的效应性CTL以发挥强大的抗肿瘤效应。结论：记忆性CTL介导的抗肿瘤效应中，Th1和Th2的联合作用有较单纯Th1或Th2细胞更为重要的辅助作用，应是进一步研究的重点。     

慢性乙型肝炎患者外周血Th17/Treg和Th1免疫失衡研究

目的：探讨Th17、Treg和Th1细胞免疫失衡在慢性乙型肝炎（CHB）发病中的作用。方法：采用荧光定量PCR检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMCs）中Th17、Treg和Th1细胞的特异性转录因子RORC、Foxp3和T-bet的mRNA表达,ELISA分析CHB患者PBMCs培养上清液中白细胞介素（IL）-17、IL-21和血清IL-6、IL-1β的水平,PCR检测外周血HBV DNA;生化分析仪检测谷丙转氨酶（ALT）。结果：与正常对照组相比,CHB患者PBMCs中RORC mRNA、IL-17、IL-21水平明显升高（P〈0.01）;RORC mRNA与ALT呈正相关,与T-bet mRNA呈负相关;T-betmRNA与ALT呈负相关,外周血中IL-6、IL-1β水平也明显增高（P〈0.01）;Foxp3 mRNA与HBV DNA正相关。结论：Th17和Treg、Th1细胞免疫功能失衡与CHB病情密切相关。     

系统性红斑狼疮合并冠状动脉性心脏病患者Th1／Th2失衡的研究

目的：探讨系统性红斑狼疮（SLE）合并冠状动脉性心脏病（简称冠心病）患者的 Th1／Th2是否存在失衡状况。方法收集 SLE 患者（SLE 组）、SLE 合并冠心病患者（合并组）及健康对照者（对照组）外周血,real-time PCR 法检测外周血 Th1／Th2细胞转录因子 T-bet／GATA-3的表达;流式细胞术检测 Th1／Th2细胞内 IFN-γ及 IL-4水平;酶联免疫吸附法（ELISA）检测患者外周血清中 IFN-γ及 IL-4水平并与对照组比较。结果 SLE 组患者外周血 Th1细胞转录因子 T-bet 表达水平、CD4＋ T 细胞内 IFN-γ分泌水平及血清 IFN-γ水平均明显低于对照组（P＜0．05）。合并组患者外周血 Th1细胞转录因子 T-bet 表达水平、CD4＋ T 细胞内 IFN-γ分泌水平及血清 IFN-γ水平均明显高于 SLE 组患者及对照组（P＜0．05）;合并组患者外周血 Th2细胞转录因子 GATA-3表达水平、CD4＋ T 细胞胞内 IL-4分泌水平及血清 IL-4水平均明显低于 SLE 组患者及对照组（ P ＜0．05）。结论 SLE合并冠心病患者存在 Th1优势活化的 Th1／Th2失衡状态,这种失衡状态可能与疾病的发生发展有关。     

Th17细胞与肿瘤的研究进展

Th17细胞是近些年来才被发现确立的Th细胞亚群,主要的功能是促进炎症发展,并参与多种自身免疫性疾病的发生。现在发现Th17细胞与肿瘤也有一定的关系,研究主要集中在Th17细胞水平与肿瘤相关性、相关细胞因子的作用、Th17细胞对肿瘤作用等方面,但是研究的结果还不能明确说明Th17细胞在肿瘤中的确切作用,还需要深入地研究来验证。现就Th17细胞与肿瘤的研究进展予以综述。     

参与Th1／Th2极化的细胞因子

Th1／Th2极化是免疫应答调节中的关键环节，Th1／Th2极化异常或缺陷均可导致疾病．如慢性感染、自身免疫性疾病或变态反应。因而Th1／Th2极化已成为目前研究的新热点．并已取得一些共同的认识：双信号刺激活化CD4^＋T细胞，活化信号传向胞内，启动多条信号转导通路，激活转录因子．继而转录因子结合到目的基因的启动子区．促使原癌基因、细胞因子基因及其受体基因表达。细胞因子可经自分泌和旁分泌作用．促使T细胞克隆扩增．之后分化为功能各异的Th1和Th2效应细胞，部分分化为记忆细胞。在Th细胞分化过程中．细胞因子被认为是最重要的因素。     

老年非小细胞肺癌患者Th1/Th2漂移状态与T-bet/GATA3基因表达的关系

目的探讨老年非小细胞肺癌患者Th1/Th2漂移状态及其与T-bet、GATA3基因表达的关系。方法选取老年非小细胞肺癌患者及健康受试者各120例,双抗夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测各组血浆中Th1类细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)和Th2类细胞因子IL-4、IL-10的浓度;梯度离心法分离出单个核细胞(PB-MC),采用RT-PCR方法检测其T-bet、GATA3mRNA水平。结果老年非小细胞肺癌患者Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2水平与老年健康受试者比较明显下降[(10.28±0.88)pg/mL vs(16.94±1.05)pg/mL;(9.06±0.85)pg/mL vs(13.96±0.87)pg/mL)],差异均具有统计学意义;老年非小细胞肺癌患者Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平与老年健康受试者比较明显升高[(5.98±0.98)pg/mL vs(3.89±0.28)pg/mL;(47.59±2.89)pg/mL vs(40.47±1.28)pg/mL)],差异均具有统计学意义。老年非小细胞肺癌患者Th1型核转录因子T-bet mRNA的表达水平较老年健康受试者下降[(0.85±0.11)vs(1.46±0.09)];老年非小细胞肺癌患者Th2型核转录因子GATA3mRNA的表达水平较老年健康受试者明显增高[(1.51±0.12)vs(0.89±0.10)],差异均具有统计学意义。结论老年非小细胞肺癌患者存在着Th2漂移现象,该现象可能与影响Th1/Th2的极化状态的关键因子T-bet和GATA3的表达失常有关。     

T-bet基因转染对哮喘小鼠脾脏Th1/Th2平衡的影响

【目的】 观察气道内T-bet基因转染对哮喘小鼠脾脏淋巴细胞Th1/Th2平衡&#65380;T-bet及GATA-3 mRNA表达的影响&#65377; 【方法】 将C57BL/6小鼠32只随机分为4组,每组8只,分别为正常对照组(A组)&#65380;哮喘模型组(B组)&#65380;空质粒干预组(C组) 和T-bet质粒干预组(D组)&#65377;卵白蛋白(OVA) 抗原溶液腹腔注射致敏,滴鼻造模&#65377;空质粒组和T-bet质粒干预组OVA激发24 h前,分别经鼻滴入50 μg空质粒&#65380;重组T-bet质粒,对照组用生理盐水代替OVA&#65377;最后一次滴鼻激发48 h后处死小鼠,流式细胞仪检测各组实验小鼠的脾脏淋巴细胞的Th1/Th2, RT-PCR检测小鼠脾脏淋巴细胞的T-bet及GATA-3mRNA表达&#65377; 【结果】 哮喘小鼠气道转染pcDNA3-T-bet质粒后:①流式细胞仪检测发现,脾脏Th1百分率较哮喘模型组显著升高[(2.29 ± 1.55)% vs. (1.93 ± 1.14)%,P﹤0.05],Th2百分率显著降低[(0.93 ± 0.64)% vs. (1.63 ± 0.59)%];②RT-PCR检测发现脾脏淋巴细胞转录因子T-bet mRNA表达水平显著增加(0.53 ± 0.027 vs. 0.28 ± 0.035,P﹤0.05), GATA-3 mRNA表达水平显著降低(0.24 ± 0.022 vs. 0.58 ± 0.038,P﹤0.05)&#65377;而pcDNA3空质粒干预后与哮喘模型组比较无显著差异&#65377;【结论】 气道内转导pcDNA3-T-bet质粒后,可显著上调哮喘小鼠体内T-betmRNA表达,下调GATA-3 mRNA表达,有效改善哮喘小鼠体内Th1/Th2比例失衡,从而抑制哮喘小鼠的气道炎症,为哮喘的T-bet基因治疗提供依据&#65377;     

慢性心衰患者 Th1与 Th2型细胞及 Treg细胞的表达

目的探讨Th1、Th2型细胞及Treg细胞在慢性心衰发病中的作用机制。方法采用RT-PCR技术检测62例慢性心衰患者和42例正常人外周血单个核细胞中T—bet、GATA-3及Foxp3mRNA的表达水平;ELISA法检测血浆中Th1／Th2型细胞因子IFN-γ／IL-4水平。结果慢性心衰患者T-bet表达水平高于正常对照组,GATA-3及Foxp3表达水平低于正常对照组（均P〈0．05）。慢性心衰组患者血浆中IFN-γ水平及IFN-γ／IL-4高于对照组（均P〈0．01）。结论慢性心衰患者T-bet／GATA-3及IFN-γ／IL-4升高,Foxp3降低,提示Th1细胞亚群表达升高,Th2型细胞及CD4＋、CD25＋调节性T细胞减少,细胞免疫异常可能参与慢性心衰的发病机制。     

Th细胞分化特异性转录因子在低体质量先天性心脏病患儿肺血流异常发病机制中的作用

目的 观察Th细胞分化特异性转录因子在低体质量先天性心脏病(CHD)患儿肺血流异常发病机制中的作用.方法 回顾分析2016年4月—2018年10月河北省儿童医院心脏外科收治的低体质量先天性心脏病患儿100例的临床资料,根据患儿肺充血情况,分为肺充血组(n=62)和肺缺血组(n=38),另取同期在医院治疗的其他疾病低体质...     

左归丸对阴虚阳亢大鼠Th1/Th2细胞漂移特异性转录因子T—bet及GATA-3mRNA的干预作用

目的：观察阴虚阳亢大鼠Th1／Th2细胞漂移现象、两类细胞特异性转录因子T—bet及GATA-3mRNA地表达及左归丸对阴虚阳亢大鼠Th1／Th2细胞漂移特异性转录因子T-bet及GATA-3mRNA的干预作用。方法：30只大鼠随机分成空白对照组（A组）、阴虚阳亢组（B组）、左归丸组（C组）,B、C两组采取腺嘌呤法建立阴虚阳亢模型,然后C组用左归丸滤液灌胃,A、B两组大鼠用生理盐水灌胃,RT—PCR法分别检测用药后大鼠脾脏T—bet及GATA-3mRNA的表达。结果：B、C组造模后、用药前T-bet mRNA表达明显上调,而GATA-3mRNA表达下调,经左归丸组干预后,T-betmRNA表达明显下调,而GATA-3mRNA表达上调。结论：左归丸干预Th1／Th2细胞漂移的途径可能是通过下调Th1细胞特异性转录因子T—betmRNA表达,上调Th2细胞特异性转录因子GATA-3mRNA表达,使阴虚阳亢大鼠Th1／Th2细胞达到一种新的平衡。     

系统性红斑狼疮患者Th1／Th2相关转录因子的基因表达

目的：探讨转录因子对T细胞分化的影响及它们和细胞因子在系统性红斑狼疮（SEE）发病机制中的作用。方法：利用实时荧光定量PCR技术检测SLE患者、正常人外周血单核细胞（PBMC）中T—bet和GATA-3 mRNA表达状况;用ELISA检测SLE患者、正常人血清中IL-10和TGF-β水平。结果：SLE患者T—bet mRNA表达低于正常人,差异具有显著性（P〈0．05）;SLE患者GATA-3mRNA表达明显高于正常人,具有统计学差异（P〈0．05）。SLE患者IL-10明显高于正常人,差异具有统计学意义（P〈0．05）;SLE患者TGF-8与正常人差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：SLE患者Th1／Th2免疫不平衡占优势,调节Th1细胞的转录因子T—bet表达降低。调节Th2细胞的转录因子GATA-3表达升高,细胞因子IL-10水平升高,TGF—β没有明显变化。     

Th9细胞的研究进展

Th9细胞是近期发现的一类CD4+亚群效应性T细胞,由转化生长因子β(TGF-β)和白细胞介素(IL)4共同培养的条件下由静息T细胞诱导产生,也可以由TGF-β单独诱导Th2细胞分化而成,PU.1和干扰素调节因子4基因被认为是Th9细胞分化的特异的转录因子。小鼠实验表明Th9细胞可大量分泌细胞因子IL-9和IL-10。但与小鼠不同的是,人Th9细胞不分泌IL-10。Th9细胞在过敏性疾病、抗寄生虫感染和自身免疫性疾病中起着重要作用。Th9细胞亚群的发现,为这些疾病的病因学及临床诊断治疗的研究找到了新的突破口。     

调节Th1／Th2平衡对脑胶质瘤细胞增殖的影响

目的研究外源性细胞因子调节Th1/Th2平衡对脑胶质瘤细胞增殖的影响.方法分别将IFN-γ+IL-4单抗或IL-4+IFN-γ单抗与脑胶质瘤细胞共同孵育,半定量RT-PCR方法观察Th1/Th2类细胞因子基因表达的变化,并用MTT方法检测其对脑胶质瘤细胞生长情况的影响.结果脑胶质瘤细胞Th2类细胞因子的表达明显强于Th1类(P＜0.01),IFN-γ+IL-4单抗可以增强IFN-γ的表达,抑制脑胶质瘤细胞的增殖并呈剂量依赖性关系(P＜0.01);IL-4+IFN-γ单抗则使Th2类细胞因子的表达有所增强,促进脑胶质瘤细胞的增殖,也呈剂量依赖性关系(P＜0.01).结论 外源性的细胞因子或细胞因子单抗可以调节Th1/Th2平衡,逆转Th2优势,影响脑胶质瘤细胞的生长.