CD_3AK的制备及杀瘤作用观察

目的：观察CD_3AK抗CD3单克隆抗体）的活化及对肿瘤细胞的杀伤活性。方法：以不同的肿瘤细胞为靶细胞,以人外周血淋巴细胞为效应细胞,在体外用不同浓度的抗CD3单克隆抗体和／或IL-2进行激活,用MTT法观察细胞毒杀伤作用。结果：CD3AK的扩增率较LAK高一个数量级,且对不同的肿瘤细胞均有杀伤作用。其18h杀伤均大于4h。结论：由于CD3AK较LAK对IL-2的需要量少,扩增率高,而比LAK更有临床应用发展前景。     

CD3 AK细胞与LAK细胞的诱导和体外杀伤活性的比较

目的：探讨CD3AK细胞与LAK细胞的诱导、增殖动力学和杀伤活性的变化。方法：采用抗CD3单克隆抗体（anti-CD3McAb)和rIL-2及PHA（植物血凝素）共刺激法诱生扩增CD3AK细胞,用等量rIL-2 t PHA共刺激法诱生LAK细胞。观察它们的增殖动力学变化;用MTT法以K562细胞和H7402细胞为靶细胞,测量CD3AK细胞和LAK细胞的杀伤活性。结果：微量的anti-CD3McAb辅以少量的rIL-2和PHA就能诱导和大量扩增CD3AK细胞,其扩增能力显著高于LAK细胞（P<0.001);CD3AK细胞对K562细胞和H7402细胞的杀伤活性显著高于LAK细胞（P<0.05)。结论：CD3AK细胞的扩增能力及杀伤活性均较LAK细胞为强,是更为有效的杀瘤效应细胞。     

CD3AK、LAK与CIK细胞生物学特性的研究

①目的探讨CD3AK、LAK及CIK细胞的诱导、增殖能力及杀伤活性的变化.②方法采用CD3单抗和IL-2刺激诱生扩增CD3AK细胞,用IL-2刺激诱生LAK细胞,采用第0天加入IFN-γ,第1天加入IL-1,CD3单抗,IL-2诱生CIK细胞,观察它们的扩增情况;用MTT法以K562和H7402细胞为靶细胞,测定CD3AK、LAK及CIK细胞的杀伤活性.③结果CD3AK和CIK细胞的扩增能力远大于LAK细胞(P＜0.05).CIK细胞和CD3AK相比,在前期无明显差异,至第19、22天时CIK细胞的扩增能力显著高于CD3AK的扩增倍数(P＜0.05).CD3AK和CIK细胞对K562和H7402细胞的杀伤活性均显著高于LAK细胞(P＜0.05).④结论CIK细胞具有更高的扩增能力和更强的杀伤活性,是肿瘤过继免疫治疗中更为有效的杀瘤效应细胞.     

CD3AK细胞治疗恶性脑质瘤体外实验

目的：提高人脑胶质瘤过继免疫治疗的效果,探讨治疗脑胶质瘤的新途径。方法：用CD3和rIL-2共同诱导人外周血单个核细胞,诱导、扩增新型抗胶质瘤效应细胞CD3AK细胞,并与LAK细胞在某些生物学方面进行了比较。结果两组效应细胞增曲线均于第6天达高峰,峰值可见,CD3AK细胞＞LAK细胞（P＜0．05）;CD3AK细胞扩增倍数明显高于LAK细胞（P＜0．05）;两组效应细胞于培养的第6、8、10天所测得的杀伤胶质瘤细胞BT325活性可见,CD3AK细胞＞LAK细胞（P＜0．05或P＜0．01）。结论CD3和rIL-2具有协同增强作用,使CD3A细胞成为较LAK细胞增殖能力、杀伤活性更强的免疫效应细胞,且rIL-2用量减少,有胶质瘤的过继免疫治疗打下了理论基础。     

树突状细胞的体外培养及其诱导的抗肿瘤免疫作用

目的 建立体外培养扩增树突状细胞（DC）的方法,并观察其诱导的抗肿瘤免疫作用。方法 分离外周血单个核细胞,应用GM－CSF及IL－4诱导DC产生,用TNF－α和PGE2促进其成熟,并用肺癌细胞系GLC－82可溶性抗原致敏。将成熟DC与自体LAK细胞混合培养（DC－LAK）,用MTT法检测DC－LAK细胞及LAK细胞对多种肿瘤细胞系的杀伤作用。结果 经GM－CSF,IL－4,TNF－α,PGE2作用后,细胞表达CD1a阳性率为71．0％,CD8350．0％,CD14阳性率低于10．0％,高表HLA－I,HLA-Ⅱ和CD45,为典型的DC表型特征。DC－LAK和LAK细胞对4种肿瘤细胞（GLC－82,A549,moser和MCF－7）的杀伤率,前为84．7％,66．9％,49．3％和56．0％,后为43．5％,31．3％,45．0％和32．4％。结论 成功的诱导出具有典型形态特征及增强LAK细胞杀伤活性的DC。     

MtbAK细胞与CD3AK、LAK细胞全外增殖和杀瘤活性比较

目的：比较结核杆菌抗原激活的杀伤细胞（MtbAK）、CD3AK及LAK细胞的体外增殖能力和杀瘤活性。方法：分别和结核杆菌抗原（Mtb-Ag）、CD3 mAb和rIL-2刺激人外周血单个核细胞（PBMC）,在含rIL-2的RPMI1640培养液中诱导扩增MtbAK、CD3AK和LAK细胞,用计数法动态观察细胞扩增情况,在流式细胞仪上分析MtbAK中的γδT细胞比例,以MTT法检测三种扩增细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性。结果：与CD3AK和LAK细胞相比,MtbAK细胞具有更强的增殖能力和较高的细胞毒活性。结论：MtbAK细胞在体外更易于扩增,具有较高的杀瘤活性,有可能应用于肿瘤患者的临床过继免疫治疗。     

妇科恶性肿瘤患者CD_3AK细胞与LAK细胞体外增殖能力动态观察

采用CD3MAb＋IL－2联合刺激法制备了妇科恶性肿瘤患者CD3AK细胞，体外动态观察CD3AK细胞的形态特征及增殖能力，井与LAK细胞进行比较。结果显示：①CD3AK细胞与LAK细胞在体外分别经CD3MAb（0．5mg／L）＋IL－2（105U／L）和IL－2（106U／L）刺激后，细胞体积增大，继之变为不规则形；②CD3AK细胞培养第1周增殖倍数为2．89，至第4周增殖倍数达109．37倍，均显著高于同期培养的LAK细胞的增殖倍数；③CD3AK细胞体外存活时间为4～5周，而LAK细胞仅为2～3周。结果提示：CD3AK细胞制备简便，体外存活时间长，增殖能力强，可以为临床提供充足的过继免疫效应细胞。     

CD3AK细胞抗肿瘤作用与MHC限制性关系

目的 研究抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞(anti-CD3McAb activated killer cells,CD3AK细胞)杀伤肿瘤细胞作用与MHC限制性的关系。方法 采用微量淋巴细胞毒实验方法测定CD3AK细胞及肿瘤细胞MHC表型，用MTT法测定CD3AK细胞杀伤活性。结果 (1)不同人来源的CD3AK细胞，其MHC表型不同，但对同种肿瘤传代细胞都有很强的杀伤作用，且不同人来源的CD3AK细胞间杀伤作用差异无显著性(P＞0．05)；(2)同一来源CD3AK细胞对不同肿瘤传代细胞株(MHC表型不同)的杀伤作用差异无显著性(P＞0．05)；(3)人外周血诱导的CD3AK细胞对鼠肿瘤细胞株(Yac—1)与对人肿瘤传代细胞株(K—562，Raji)一样具有很强的杀伤作用。结论 CD3AK细胞杀伤肿瘤的作用是非MHC限制的，在临床应用中可用正常人外周血诱导得到的CD3AK细胞体外培养增殖后输给肿瘤病人进行治疗。该效应细胞来源方便，可用于肿瘤术后清除残留肿瘤细胞，具有重要应用价值。     

MtbAK细胞与CD3AK、LAK细胞体外增殖和杀瘤活性比较

目的:比较结核杆菌抗原激活的杀伤细胞(Mtb AK)、CD3AK及LAK细胞的体外增殖能力和杀瘤活性.方法:分别用结核杆菌抗原(Mtb-Ag)、CD3 mAb和rIL-2刺激人外周血单个核细胞(PBMC),在含rIL-2的RPMI 1640培养液中诱导扩增MtbAk、CD3AK和LAK细胞,用计数法动态观察细胞扩增情况,在流式细胞仪上分析MtbAK中的γδ T细胞比例,以MTT法检测三种扩增细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性.结果:与CD3AK和LAK细胞相比,MtbAK细胞具有更强的增殖能力和较高的细胞毒活性.结论:MtbAK细胞在体外更易于扩增,具有较高的杀瘤活性,有可能应用于肿瘤患者的临床过继免疫治疗.     

妇科恶性肿瘤患者CD_3AK细胞和LAK细胞表型特征动态比较

CD3AK细胞和LAK细胞均为异质细胞群，为了比较妇科恶性肿瘤患者LAK细胞和CD3AK细胞在体外培养过程中的表型特征，采用间接免疫荧光法动态观察CD3AK细胞和LAK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率。结果表明：①培养第1周，CD3AK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率分别为61．36％，54．23％和52．96％，显著高于LAK细胞组（P＜0．01）；③培养第2，3周，CD3AK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋和CD_8~＋细胞率高于LAK细胞，但无统计学差异（P＞0．05）；③随着培养时间延长，CD3AK细胞CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率均不同程度下降，尤以CD_3~＋细胞率下降最快，而LAK细胞在培养第2周，CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率均有所升高，但第3周时又开始下降；④CD3AK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋和CD_8~＋细胞率在培养第1周最高，而LAK细胞在培养第2周最高。提示：CD3MAb和IL－2激活CD3AK细胞和LAK细胞的途径不同，致使CD3AK细胞和LAK细胞向不同的表型特征分化。     

PHA、抗CD_3单克隆抗体、LI-2诱导牌细胞培养上清液抗肿瘤效应的研究

本文探讨了PHA、CD_3单克隆抗体、IL-2体外诱导正常人脾细胞培养上清液抗肿瘤效应及其对LAK细胞抗肿瘤效应的增强作用。结果显示，IL-2诱导脾细胞的培养上清液在体外不仅具有直接杀伤肿瘤细胞效应，并且能增强LAK细胞的抗肿瘤作用。PHA、抗CD_3单克隆抗体和IL-2联合刺激可增强脾细胞培养上清液杀伤肿瘤细胞效应。     

抗CD_3单抗激活之杀伤细胞的研究进展

CD_3AK(anti-CD_3antibody induced acti-vated killer cells)是抗CD_3单克隆抗体激活的杀伤细胞,因其体外存活时间(4～5周)、扩增速度(100万倍/4周)以及抗肿瘤细胞毒活性(提高10～15倍)均显著优于LAK细胞,从而日益受到重视。作者就近来CD_3AK细胞的研究进展作一综述。     

CD3AK细胞介导细胞因子抗肿瘤作用机制的研究

目的：探讨CD3AK细胞介导细胞因子抗肿瘤作用的机制。方法：将卵巢癌细胞株（A2780)分成两组,实验组采用CD3AK＋A2780,对照组采用LAK＋A2780,分别共育24h并于作用前和作用后每4h收集一次上清液以检测TNF－α和IFN－γ分泌水平。结果：实验组和对照组共育前,后上清液中均有TNF－α和IFN－γ分泌,但共育后TNF－α和IFN－γ分泌水平显著高于共育前（P＜0．01）,且同一效靶比的实验组TNF－α和IFN－γ分泌水平明显高于对照组（P＜0．05）。结论：CD3AK细胞可通过分泌细胞因子TNF－α和IFN－γ杀伤肿瘤细胞。     

抗CD3单克隆抗体、rIL-2协同活化PBMC抗人脑胶质瘤的体外实验研究

目的探讨抗CD3单克隆抗体活化杀伤细胞(aCD3AK)体外抗脑胶质瘤的机制.方法采用抗CD3单克隆抗体(CD3McAb)和重组白细胞介素2(rIL-2)共同刺激人外周血单个核细胞(PBMC)而获aCD3AK.对比aCD3AK与淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)在增殖动力学、抗脑胶质瘤活性等方面的差别,并测定aCD3AK抗脑胶质瘤的适宜效靶比和最佳培养时段.结果aACD3AK的增殖倍数明显高于LAK及TIL(均P<0.05),抗脑胶质瘤细胞活性优于LAK,但与TIL比较,差异无统计学意义(P>0.05),抗脑胶质瘤适宜效靶比为201,培养至第7～10天活性最强.结论aCD3AK作为一种新型抗人脑胶质瘤免疫细胞,具有抗脑胶质瘤活性强,前体来源广泛、诱导简易等优势,值得深入研究.     

妇科肿瘤患者CD_3AK细胞和LAK细胞杀瘤活性比较

为比较CD3AK细胞和LAK细胞的杀瘤特性，观察了妇科肿瘤患者CD3AK细胞和LAK细胞对卵巢癌细胞系（3AO）的杀伤活性。结果表明：良性肿瘤组LAK细胞杀瘤活性高峰在培养第1、2周，显著高于同期培养的CD3AK细胞（P＜0．05，P＜0．01），第3周则较低，而CD3AK细胞的杀瘤活性高峰在培养第3、4周，显著高于LAK细胞（P＜0．05）；恶性肿瘤组，LAK细胞杀瘤高峰在培养第1周，显著高于同期培养的CD3AK细胞（P＜0．05），而CD3AK细胞杀瘤高峰在培养第2、3周，显著高于同期培养的LAK细胞（P＜0．05）。提示：妇科恶性肿瘤组LAK细胞和CD3AK细胞杀瘤活性高峰均较妇科良性肿瘤早1周左右；CD3AK细胞杀瘤活性高峰较LAK细胞延迟1～2周。说明CD3AK和LAK细胞的杀瘤活性在不同培养阶段表现不同，LAK细胞宜短期培养，CD3AK细胞宜长期培养。     

穿孔素对不同肿瘤细胞的杀伤作用

目的：研究穿孔素对不同肿瘤细胞株的杀伤作用是否一致,以确定肿瘤细胞对穿孔素的杀伤是否有抵抗作用。方法：大量培养LAK细胞,制备含穿孔素毒性颗粒的LAK细胞裂解物,用红细胞裂解试验证实LAK细胞裂解物的杀伤活性,培养穿孔素敏感的K562肿瘤细胞株和穿孔素不敏感的Hela,MGC80-3肿瘤细胞株,用流式细胞计数的方法研究LAK细胞裂解物对3种不同肿瘤细胞的杀伤作用。结果：红细胞裂解试验证实,LAK细胞裂解物具有杀伤活性;抗人穿孔素（Human perforin HP)McAbs可封闭LAK细胞裂解物对不同肿瘤细胞株的细胞毒作用,LAK细胞裂解物对K562细胞的杀伤是通过穿孔素依赖途径的。结论：穿孔素对K562,Hela和MGC80－3肿瘤细胞的杀伤明显不同,说明肿瘤细胞存在对穿孔素的抵抗机制。     

CD_3AK细胞加IL-2治疗恶性肿瘤体外与临床应用研究

CD3AK细胞在体外对体外癌细胞系细胞杀伤活性最强，对自体癌细胞杀伤活性与TIL细胞接近，且均显著大于LAK细胞．CD3AK细胞IL－2治疗癌症患者30例中，CR＋PR14例，有效率为46％．Kernofsky的生活质量标准评分治疗后有显著提高（P＜0．01）．血浆IL－2活性治疗后有明显提高（P＜0．05）．T4／T6治疗后有所提高．     

妇科良、恶性肿瘤患者CD_3AK细胞和LAK细胞体外扩增能力比较

为探讨妇科良、恶性肿瘤患者CD3AK细胞的体外增殖能力，对其外周血淋巴细胞用CD3MAb＋IL－2诱导CD3AK细胞，体外动态观察CD3AK细胞增殖倍数，并与同期培养的LAK细胞进行对比。结果：①良性肿瘤组CD3AK细胞在培养第1周，增殖倍数高于恶性肿瘤组，但无显著性差异（P＞0．05），第2、3、4周，良、恶性肿瘤组CD3AK的增殖倍数较接近；②LAK细胞增殖倍数，在良性肿瘤组培养第1周时显著高于恶性肿瘤组（P＜0．05），培养第2、3周也高于恶性肿瘤组，但无统计学意义（P＞0．05）。结果提示：CD3AK细胞和LAK细胞短期培养时，不宜取材于恶性肿瘤患者。     

淫羊藿甙的体外免疫调节作用研究

淫羊藿甙是从朝鲜淫羊藿中提取的主要单体。采用依赖细胞株法和乳酸脱氢酶4h释放法，分别检测了淫羊藿甙协同诱生IL－2、IL－3、IL－6，及对NK、LAK细胞杀伤活性的影响。结果表明：建羊藿甙可协同PHA诱导扁桃体单个核细胞产生IL－2、3、6呈剂量依赖关系，动力学观察表明：IL－2、IL－6的分泌高峰时相为作用后48h，IL－3的分泌高峰时相为作用后72h。淫羊藿甙可以提高扁桃体单个核细胞NK、LAK细胞杀伤活性；动力学观察表明：在诱导第5天时LAK细胞杀伤活性最强。提示淫羊藿甙是一种有效的生物反应调节剂。     

原发性卵巢癌患者CD_3AK细胞和LAK细胞杀瘤活性比较

为探讨CD3AK细胞和LAK细胞杀瘤作用的特异性及靶细胞选择性，对比观察了3例原发性卵巢癌患者CD3AK细胞和LAK细胞对卵巢癌细胞系（3AO）和人早幼粒细胞白血病细胞系（HL60）的杀伤活性。结果表明：LAK细胞在培养第1～3周，各效靶比（10：1，20：1，40：1）对HL60的杀伤活性略高于对3AO的杀伤活性，但差异无显著性（P＞0．05）；CD3AK细胞在培养第1周，各效靶比（10：1，20：1，40：1）对HL60的杀伤活性均显著高于对3AO的杀伤活性（P＜0．05），而培养第2、3、4周时，对HL60和3AO的杀伤活性无显著区别（P＞0．05）。提示：LAK细胞和CD3AK细胞均缺乏杀瘤特异性，而CD3AK细胞具有一定的靶细胞选择性。