荧光定量PCR与免疫荧光法定量定性检测牛血清中呼肠孤病毒

目的采用TaqMan荧光探针定量PCR技术与免疫荧光技术定量定性检测牛血清中呼肠孤病毒。方法以携带有Reovirus保守系列的重组质粒作为标准品,优化定量PCR体系,建立标准曲线,用Vero细胞培养不同病毒评价方法的特异性;用FITC标记的抗Reovirus病毒蛋白单克隆抗体对感染不同滴度Reovirus的Vero细胞培养物进行直接免疫荧光检测,用Vero细胞培养不同病毒评价方法的特异性。结果 Taq Man Real-time PCR方法检测灵敏度可达1.0×102拷贝/l,线性范围为109～103;免疫荧光法对Reovirus检测具有很高的特异性。结论以TaqMan荧光探针检测Reovirus荧光定量PCR方法,灵敏度高、特异性强,辅以免疫荧光定性检测方法,可以作为牛血清感染Reovirus的定量和定性检测。     

荧光定量PCR技术检测宫颈感染HPV方法的研究

目的 研究荧光定量PCR技术检测宫颈感染HPV的方法.方法 选取已确诊患有宫颈疾病的50例妇女作为试验组;再选取同时间段内的50例健康妇女作为对照组,采用荧光定量PCR检测技术对两组妇女进行HPV16 、HPV18 检测,分析两组妇女的检测结果,研究荧光定量PCR技术检测宫颈感染HPV的临床意义.结果 试验组的50例妇女中,HPV16检测结果呈阳性的有6例,所占比例为12%,HPV18检测结果呈阳性的有2例,所占比例为4%.对照组的50例妇女中,HPV18检测结果呈阳性的有1例,所占比例为2%,未出现HPV16检测结果呈阳性的病例.结论 荧光定量PCR技术检测宫颈感染HPV的方法简洁准确,医务人员应该积极利用并不断探索更好的诊治方法.     

MP DNA检测对小儿支原体肺炎的诊断价值

目的探讨肺炎支原体（MP）DNA检测在小儿支原体肺炎早期诊断中的价值。方法用荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）技术对我院2009年1-11月805例疑似MP感染患儿的咽拭子标本进行MPDNA检测,同时采取静脉血检测805例患儿血清中MP-IgM抗体。结果805倒患儿咽拭子标本MPDNA检测阳性率显著高于血清中MP-IgM抗体检测阳性（P〈0.05）。结论PCR技术可以快速、敏感、准确地定量检测标本中MPDNA,对儿童MP感染的早期、快速诊断诊断具有重要的参考价值。     

荧光定量PCR检测生殖道内沙眼衣原体感染的应用

目的 评价DNA定量测定技术在生殖道衣原体感染诊断中的应用价值.方法 比较荧光定量DNA测定与传统检测手段对衣原体感染的检测结果.结果 用荧光定量PCR法测定DNA来检测沙眼衣原体(CT)感染,其敏感性和特异性均比传统的方法高.结论 CT-DNA定量测定不宜用作短期判愈,在沙眼衣原体诊断中具有巨大的潜力.     

荧光定量PCR技术在淋病预后诊断中的作用

目的 探讨荧光定量PCR技术在性病预后诊断中的应用。方法 用荧光定量PCR法追踪检测25例性病门诊患者淋球菌(NG)。结果 荧光定量PCR法能够检测淋病的治疗效果。结论 荧光定量PCR技术具有高灵敏性、高特异性、高精确性、效率高和污染小等特点，是一种有效、快速和简便的检测方法，具有广泛应用价值。     

荧光定量PCR对小儿EB病毒感染诊断价值探讨

目的探讨荧光定量PCR检测Epstein-BarrVirusDNA(EBV-DNA)在EB病毒(EBV)感染中临床意义。方法对289例临床疑似EB病毒感染患儿应用实时荧光定量PCR方法进行检测。结果检测出145例EB病毒病原体DNA,男82例,女63例。其中阳性结果拷贝数主要集中于4～5次方之间,占48.3%;其次为1～4次方之间,占32.4%。临床表现以发热、淋巴结肿大、肝脾肿大居多,分别占:57.2%、26.9%、35.9%。结论荧光定量PCR方法对EB病毒(EBV)感染的检测具有早期、快速等优点,具有广泛应用价值。     

实时荧光定量PCR对社区暴露腹泻样本CA-CDI的诊断价值

目的评估实时荧光定量PCR检测技术对社区获得性艰难梭菌感染(CA-CDI)的诊断价值。方法选取具有社区暴露史的有效非重复腹泻标本329例,分别以实时荧光定量PCR粪便标本直接检测法与产毒培养+细胞毒性酶免疫分析法(EIA)对CA-CDI进行诊断,并以产毒培养+EIA为“金标准”,评估实时荧光定量PCR检测的效能。结果CA-CDI“金标准”检测阳性率为5.17%(17/329).艰难梭菌荧光PCR检测试剂盒诊断结果与“金标准”差异无统计学意义(P>0.05),检测一致性为0.831,灵敏度与特异度分为76.47%、99.68%。艰难梭菌荧光PCR检测试剂盒对tcd-B的检测结果与“金标准”差异无统计学意义(P>0.05),检测一致性为0.860,灵敏度与特异度为81.25%、99.68%。结论实时荧光定量PCR检测技术以快速、高敏感度、高特异度等特点,可对社区暴露腹泻样本CA-CDI进行独立检测。     

应用荧光定量PCR检测前列腺炎沙眼衣原体的探讨

目的:探讨分析应用荧光定量PCR检测前列腺炎的沙眼衣原体(CT)的感染情况和荧光定量PCR检测在前列腺炎中的诊断价值。方法:采用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测法,对256例前列腺炎患者前列腺液的CT进行检测。结果:256例前列腺炎患者检出CT63例,阳性率为24.5%。结论:前列腺炎患者与CT感染有着密切的关系,对指导临床在病原学的诊断与治疗具有其重要的应用价值。     

荧光定量PCR技术及其应用

PCR技术是一种体外核酸扩增技术。1986年第1台PCR热循环仪的问世使PCR技术实现了操作自动化。通过PCR技术可对特定基因进行扩增,其主要应用领域是基因检测和临床基因诊断。但是,PCR技术应用于基因诊断还存在许多局限性,主要表现在不能准确定量和易产生假阳性和交叉污染等。由于传统的PCR技术只能进行定性检测,PCR技术已从传统的定性检测发展为新型的定量分析。定量PCR技术(QPCR)是PCR技术的革命性进展,它可以定量分析DNA或RNA样本的拷贝数,准确检测出样品中的基因数目,在临床实践中有着重要的意义和应用前景。通过定量PER技术能定量分析病原微生物感染的严重程度和评价药物疗效,对传染病诊断,选择药物、确定药量和疗程等有着重要指导作用。     

肺炎衣原体实时定量PCR检测方法的建立

目的:探讨实时定量PCR检测肺炎衣原体(chlamydia pneumonia,Cpn)的方法.方法:根据GenBank提供的肺炎衣原体基因序列,选取高特异性和保守型的区域进行引物设计,并建立实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)的检测方法.同时用肺炎支原体、肺炎双球菌、流感病毒、副流感病毒以及腺病毒对Cpn引物的特异性进行分析.对呼吸道感染患者200个咽拭子样本和68个肺泡冲洗液样本进行检测,以荧光抗体检测法作对照,评价实时定量PCR检测Cpn的准确性.结果:Cpn PCR引物对肺炎支原体、肺炎双球菌、流感病毒、副流感病毒以及腺病毒均显示阴性,对Cpn显示为阳性,特异性良好;荧光实时定量PCR技术检测的准确性优于荧光抗体检测法.结论:荧光实时定量PCR技术检测Cpn体灵敏度高、周期短,可作为临床诊断Cpn的手段.     

PCR检测技术在常见细菌中的运用

目的评价PCR检测技术在临床血流感染细菌中的应用价值。方法为了探索PCR检测技术在细菌中的特异性,在2013年5月至2015年5月期间收集100例血流感染患者为研究对象,对所有患者进行PCR检测技术和血培养检测。结果 PCR检测技术在血流感染患者中常见细菌中特异性为96.25%、敏感性为90.00%,而血培养检测技术在血流感染患者常见细菌中特异性为52.50%、敏感性为30.00%,PCR检测技术敏感性、特异性明显高于血培养(P0.05)。结论 PCR检测技术在血流感染患者常见细菌中具有较高的应用价值。     

实时荧光定量聚合酶链反应快速检测下呼吸道痰液标本耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床应用

目的 应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)核酸,寻求呼吸道标本MRSA的快速检测技术.方法 收集临床分离的75株金黄色葡萄球菌菌株及97份下呼吸道感染患者的合格痰液标本,应用实时荧光定量PCR快速检测法检测标本中Nuc及MecA基因,并以常规培养+头孢西丁纸片扩散法的检测结果为标准,判断实时荧光定量PCR与传统方法检测结果的一致性,及该方法对下呼吸道痰液标本检测的敏感度、特异度.结果 以常规培养+头孢西丁纸片扩散法的检测结果为对照,实时荧光定量PCR快速检测法检测金黄色葡萄球菌菌株中MRSA的敏感度及特异度均为100.0％,检测下呼吸道痰液标本MRSA的敏感度为100.0％、特异度为84.7％.结论 应用实时荧光定量PCR快速检测下呼吸道痰液标本MRSA的敏感度高,特异性强,操作时间短,与常规培养+药物敏感试验的检测结果具有良好的一致性,具有较高的临床应用价值.     

荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌检测中的应用

目的探讨荧光定量PCR（FQ-PCR）技术在结核分枝杆菌检测中的应用价值。方法采用荧光定量PCR、抗酸染色和改良罗氏培养三种方法同时检测156例结核患者标本,对检测结果进行比较。结果荧光定量PCR、抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的阳性率分别为50%、25.64%、33.33%,以荧光定量PCR检测的阳性率最高。结论荧光定量PCR方法检测结核分枝杆菌具有灵敏度高、简便、快速的特点,可作为结核病诊断的常规方法,在临床上有重要应用价值。     

RT-PCR,pp65抗原及组织病理学测定肾移植术后巨细胞病毒感染的比较研究

目的比较巨细胞病毒（CMV）定量PCR检测,CMV-pp65抗原检测及组织病理学在肾移植术后CMV感染中的诊断价值。方法回顾性分析28例肾移植患者临床资料,并结合文献进行讨论。结果共有11例患者发生无临床症状的巨细胞病毒感染,经静脉注射更昔洛韦,11例全部治愈。结论 CMV定量PCR,CMV-pp65抗原检测及组织病理学均能作为肾移植术后CMV感染早期诊断的有效手段,三者比较,CMV定量PCR更敏感,CMV-pp65抗原检测更特异,组织病理学则具有创伤性,因此三者共同应用对CMV感染早期诊断更有意义。     

儿童肺炎支原体感染三种实验诊断方法评价

目的:探讨儿童肺炎支原体感染的快速、简便、有效的临床实验室诊断方法。方法:对2016年12月收集的200例临床呼吸道感染患儿的咽拭子和静脉血样本进行肺炎支原体快速鉴定培养镜检、抗体检测、抗原检测及荧光定量PCR(Polymerase chain reaction)分析。以快速培养鉴定镜检法为诊断肺炎支原体感染金标准,比较抗体检测、抗原检测及荧光定量PCR三种诊断方法的灵敏度、特异度和Youden指数(正确诊断指数)。结果:抗体检测的灵敏度、特异度和Youden指数分别为76.3%、77.9%、54.2%;抗原检测为37.7%、89.5%、27.2%;荧光定量PCR为93.0%、96.5%、89.5%。荧光定量PCR法的灵敏度、特异度和Youden指数均高于抗体检测和抗原检测法(P0.05),三者Youden指数两两比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:荧光定量PCR具有较高的灵敏度、特异度和Youden指数,可以在未来替代快速鉴定培养镜检、抗体检测和抗原检测法,作为临床诊断儿童肺炎支原体感染的快速、简便而有效的实验室诊断方法。     

荧光定量PCR技术在结核杆菌检测中的初步探讨

目的:探讨荧光定量PCR技术在结核病诊断中的价值。方法:应用荧光定量PCR技术对我院102例门诊及住院病人的痰、胸腔积液、尿等标本进行结核杆菌DNA检测,同时涂片镜检与培养,并对3种方法检测的阳性率进行比较。结果:荧光定量PCR阳性率为48%、涂片抗酸染色法阳性率为15%、结核培养法阳性率为14%。结论:荧光定量PCR技术较传统方法具有较高的敏感性与特异性,尤其对涂片染色与结核培养阴性的结核病具有更大的诊断价值。     

荧光定量PCR法和巢式PCR法检测新生儿脐血人巨细胞病毒DNA的比较

目的 比较荧光定量PCR法和巢式PCR法在检测新生儿人巨细胞病毒(HCMV)先天性感染中的灵敏度,为HCMV先天性感染的快速特异性检测提供实验依据.方法 随机收集36例脐血标本,分离单核细胞,提取总DNA,进行巢式PCR和荧光定量PCR检测.结果 巢式PCR法检测HCMV糖蛋白(gB) DNA的阳性率为22.2%(7/...     

实时荧光定量PCR在高危型HPV感染检测中的应用价值

目的分析实时荧光定量PCR检验在高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染检测中的应用价值。方法选取2018年2月至2019年12月新野县人民医院收治的198例高危型HPV感染患者,均行实时荧光定量PCR检验、第二代杂交捕获试验(HC-Ⅱ)检测,比较实时荧光定量PCR检验、HC-Ⅱ检测阳性检出率和符合率,统计不同病变类型检出情况。结果实时荧光定量PCR检验HPV阳性检出率[75.25%(149/198)]较HC-Ⅱ检测[62.63%(124/198)]高,差异有统计学意义(P<0.05);实时荧光定量PCR检验、HC-Ⅱ检测符合率为83.33%(165/198)(Kappa值=0.618,P<0.001);实时荧光定量PCR检验鳞状上皮病变和慢性宫颈炎检出率[62.50%(40/64)]较HC-Ⅱ检测[32.81%(21/64)]高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论实时荧光定量PCR检验、HC-Ⅱ检测应用于高危型HPV感染患者中一致性较好,但实时荧光定量PCR检验HPV阳性、鳞状上皮病变和慢性宫颈炎检出率较高,对促使临床制定针对性的治疗方案,改善患者预后有积极意义。     

实时荧光定量PCR技术在手足口病检测中的应用

目的探讨实时荧光定量PCR技术在手足口病检测中的应用。方法选择本溪市疾病预防控制中心2018年2月～2019年6月收治的120例手足口病患儿作为研究对象,根据检测方法不同分为对照组和观察组。对照组利用常规PCR技术检测手足口病组,实时荧光定量PCR技术检测手足口病为观察组。比较两组的检出肠道病毒分型EV、EV71、CoxA16阳性率,特异性和灵敏度。结果采用实时荧光定量PCR技术与常规PCR技术检测手足口病肠道病毒分型EV、EV71、CoxA16的阳性率及两组特异性和灵敏度相比,观察组检测阳性率为66.67%,明显高于对照组检测阳性率的21.67%,观察组检出阳性率高于对照组,两组均有特异性,观察组灵敏度优于对照组,对照组最低检测限均为4.11×10~3cfu/mL。而观察组均为4.11×10~2cfu/mL。结论荧光定量PCR技术在检测肠道病毒中不仅具有特异性高,还具有灵敏度高、检测时间快的特点,有助于更快诊断手足口病,更好的服务于临床。     

围产期孕妇B群链球菌感染率调查

目的对围产期B群链球菌感染情况进行调查,为临床预防、治疗提供依据。方法收集到2017年1月12月在我院进行孕前检查的200例怀孕35~37周孕妇的生殖道和直肠分泌物标本,采用实时荧光定量PCR技术对B群链球菌进行检测,统计围产期B群链球菌群体感染率。结果 200名孕妇标本中检出B群链球菌阳性32例,阳性率为16.0%。结论实时荧光定量PCR技术对围产期B群链球菌感染快速辅助诊断具有重要价值。