黄芪甲苷对人外周血内皮祖细胞的保护作用

目的:探讨黄芪甲苷对人外周血内皮祖细胞的保护作用。方法:用密度梯度离心法获取单个核细胞(MNCs),培养7天后,收集贴壁细胞,采用多波长激光共聚焦显微镜(laserscanningeonfoealmicroscope,LSCM)鉴定后将细胞随机分成:(l)对照组;(2)辛伐他汀对照组;(3)黄芪甲苷组。24h后采用流式细胞仪检测EPCs的增殖周期;MTT比色法、黏附能力实验检测内皮祖细胞(En-dothelialprogenitoreells,EPCs)的增殖能力、黏附能力。结果:黄芪甲苷在10-1mmol/L～10-10mmol/L的浓度范围中均有效,在黄芪甲苷10-9mmol/L浓度时,EPCs的增殖力最强,黄芪甲苷能明显增强EPCs的黏附、增殖能力。结论:黄芪甲苷能够增强EPCs的生物学功能,对EPCs有保护作用。     

黄芪甲苷联合血管内皮生长因子转染内皮祖细胞对心肌梗死模型大鼠的保护作用

为证实黄芪甲苷联合血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF）转染内皮祖细胞（Endothelial Progenitor Cells,EPCs）对心肌梗死大鼠的保护作用,建立心肌缺血/再灌注损伤（Myocardial Ischemia Reperfusion Injury,MIRI）模型。观察不同组别大鼠心肌组织、血管分布等病理学变化,以及相关炎性细胞因子及其上游调控基因和信号转导蛋白的关系,结果表明：黄芪甲苷联合基因干细胞具有促血管新生作用,并能有效抑制炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)及其上游调控因子核转录因子-κB p65(Nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)和信号转运蛋白Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)的表达,减少心肌炎性反应。可见联合治疗对大鼠MIRI具有积极的保护作用。     

黄芪甲苷对高糖受损人内皮祖细胞分泌SDF-1α和CXCR4的影响

目的:研究黄芪甲苷(astrological Ⅳ,AS-Ⅳ)对高糖受损人内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)分泌基质细胞衍生因子-1α(stromalcell-derived factor-1α,SDF-1α)和CXC趋化生长因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)的影响。方法:从足月健康新生儿脐带血中分离培养出单个核细胞,采用CD31抗体联合DAPI核染及FITC-UEA-I和Dil-ac-LDL双荧光染色法鉴定EPCs。用30 mmol/L葡萄糖预处理EPCs得到高糖受损EPCs。用不同浓度梯度(25、50、100、200、400 mg/L)的AS-Ⅳ干预EPCs,经ELISA法检测分别确定AS-Ⅳ促SDF-1α和CXCR4分泌的最佳浓度。用最佳浓度AS-Ⅳ干预受损的EPCs,分别于6、12、24、48、72 h收集样本以确定AS-Ⅳ的最佳作用时间。将受损EPCs随机分为实验组和对照组,同时设置空白组。实验组用最佳浓度AS-Ⅳ干预,对照组及空白组用等容量的PBS液处理,用ELISA法检测各组SDF-1α和CXCR4的含量。结果:100 mg/L的AS-Ⅳ作用24 h时受损的EPCs分泌SDF-1α的量达最佳;50 mg/L的AS-Ⅳ作用48 h时受损的EPCs分泌CXCR4的量达最佳。与对照组比较,实验组EPCs分泌SDF-1α、CXCR4的含量明显增多,差异有统计学意义(P0.05)。实验组EPCs分泌SDF-1α和CXCR4的含量与空白组比较,差异无统计学意义(P≥0.05)。结论:AS-Ⅳ能促进高糖受损人EPCs分泌SDF-1α和CXCR4,且分泌量能达到正常生理状态。     

黄芪甲苷对内皮祖细胞生物学功能影响的实验研究

目的:观察黄芪甲苷对内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生物学功能的影响。方法:采用密度梯度离心法获取外周血单个核细胞培养内皮祖细胞,培养7d后,收集贴壁细胞并随机分为对照组及黄芪干预组(黄芪甲苷浓度分别为5、25和75μg/mL),各自干预24h后采用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、黏附能力测定试验、Matrigel体外成血管试验及Transwell小室法观察黄芪甲苷对EPCs增殖、黏附、成血管及迁移能力的影响。结果:与对照组比较,黄芪甲苷各剂量干预组内皮祖细胞增殖能力、黏附细胞数、血管数、迁移细胞数均明显增加。结论:黄芪甲苷可显著提高内皮祖细胞多种细胞生物学功能。     

黄芪甲苷改善高糖受损内皮祖细胞生物学功能的实验研究

目的:研究黄芪甲苷(Astragaloside IV,AS-IV)干预高糖受损人内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)增殖的最佳浓度,并探讨AS-IV对高糖受损EPCs生物学功能的影响。方法:取足月新生儿脐带血分离、培养并鉴定EPCs,将鉴定成功的EPCs用30 mmol/L的葡萄糖预处理120 h后,随机分为实验组(HG+AS-IV组)和对照组(HG组),同时设置正常组(NC组)。用CCK8检测不同浓度AS-IV(0、25、50、100、200、400 mg/L)干预EPCs 24 h后的增殖情况,绘制增殖曲线,初步得出AS-IV干预高糖受损人EPCs增殖的最佳浓度。进而通过CCK-8增殖实验、黏附能力测定试验、细胞划痕试验及Matrigel体外成血管实验检测最佳浓度的AS-IV对高糖受损EPCs增殖、黏附、迁移和成管功能的影响。结果:AS-IV促高糖受损EPCs增殖的最佳浓度为100 mg/L;与对照组比较,100 mg/L AS-IV干预后的高糖受损EPCs增殖能力、黏附细胞数、细胞迁移率、体外成管数均明显增加,差异均有统计学意义(P1<0.05);同时检测实验组与正常组差异无统计学意义(P2>0.05)。结论:AS-IV可显著改善体外高糖受损的人EPCs的生物学功能,恢复其原有活力并具有介导血管新生的潜能。     

黄芪甲苷对内皮祖细胞氧化损伤的影响

目的 观察黄芪甲苷对氧化低密度脂蛋白（oxidative low-density lipoprotein,Ox-LDL）介导的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)氧化损伤的影响。     

不同浓度和比例的黄芪甲苷和阿魏酸对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

中药黄芪和当归均具有行气活血的作用,且两者具有协同作用,体外实验证明其能通过促进内皮细胞增殖来促进血管的生成。本实验用CCK-8法测定黄芪甲苷(AT,黄芪主要有效成分)和阿魏酸(FA,当归主要成分)对体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEc)5 d后的促增殖作用。实验结果表明,当AT和FA总浓度为2μg/mL,且AT和FA比例为7.5∶2.5时能最大限度的促进HUVEc的增殖。     

川芎嗪与黄芪甲苷配伍对人脐静脉内皮细胞血管生成的作用及机制探讨

目的研究川芎嗪与黄芪甲苷配伍对缺氧诱导损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的增殖的影响及机制。方法建立HUVECs缺氧损伤模型,将细胞分为5组,对照组、模型组、川芎嗪(80μg/mL)组、黄芪甲苷(40μg/mL)组及川芎嗪(80μg/mL)+黄芪甲苷(40μg/mL)组,MTT法检测川芎嗪、黄芪甲苷及其配伍对缺氧损伤HUVECs增殖的影响;免疫组化法检测缺氧损伤HUVECs细胞VEGF、Ang-II蛋白表达,Western blotting检测VEGF和Ang-II蛋白的表达,RT-PCR检测VEGF和Ang-II mR NA表达。结果与模型组相比,川芎嗪与黄芪甲苷均能提高细胞存活率,川芎嗪与黄芪甲苷配伍组具有极显著差异(P0.001);川芎嗪与黄芪甲苷配伍提高VEGF、Ang-II蛋白表达。同时,川芎嗪与黄芪甲苷配伍组能上调VEGF和Ang-II mR NA的表达(P0.001)。结论川芎嗪与黄芪甲苷配伍可能通过增加血管生成靶向因子VEGF和Ang-II的表达发挥促进血管生成的作用。     

黄芪对2型糖尿病外周血内皮祖细胞增殖、分化的影响

目的:研究黄芪对2型糖尿病(T2DM)患者外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增殖、分化的影响。方法:选择T2DM患者和非T2DM对照人群各20例,密度梯度离心法获取外周血单个核细胞,培养7d后,收集贴壁细胞并加入黄芪注射液(0.2,2,20,200mg/ml)干预一定时间(6h,12h,24h,48h)。激光共聚焦显微镜鉴定EPCs,MTT法、流式细胞仪检测黄芪对T2DM患者EPCs增殖、分化的影响。结果:T2DM患者外周血EPCs数量减少(P<0.01),增殖能力受损(P<0.05),EPCs数量、增殖能力与糖化血红蛋白(HbA1c)水平和糖尿病病程年呈负相关(P<0.01);T2DM患者外周血EPCs CD14+、CD64+细胞百分比明显高于对照组,而vWF+细胞百分比明显低于对照组(P<0.01)。黄芪对T2DM患者外周血EPCs具有明显的促增殖及促进其向内皮细胞系分化的作用。结论:T2DM患者外周血EPCs数量减少、增殖及分化能力受损;黄芪对T2DM患者外周血EPCs增殖及向内皮细胞系分化有显著促进作用。     

黄芪对人外周血内皮祖细胞增殖及细胞周期的影响

目的研究黄芪对人外周血内皮祖细胞(EPCs)增殖、细胞周期的影响。方法采用密度梯度离心法获取外周血单个核细胞,培养7天后,收集贴壁细胞并加入不同浓度黄芪注射液(0.2、2、20和200mg/ml)干预一定时间(6、12、24和48小时)。激光共聚焦显微镜鉴定人外周血EPCs,噻唑蓝比色试验(MTT法)检测黄芪对人外周血EPCs体外增殖作用,流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果黄芪明显促进人外周血EPCs的增殖,呈一定的量效时效关系;流式细胞仪分析表明,黄芪作用后,细胞周期中S期、G2/M期细胞比例增加,G0/G1期细胞相对比例减少(P<0.01)。结论黄芪对人外周血EPCs增殖有显著促进作用,其作用机制可能是通过促进DNA合成,增加进入S期细胞数目来实现的。     

固相萃取HPLC法研究黄芪总苷、黄芪甲苷在大鼠体内的黄芪甲苷血药浓度

目的 建立了固相萃取HPLC测定大鼠血清中黄芪甲苷含量的方法,比较黄芪总苷(AST)、黄芪甲苷(AST-Ⅳ)在大鼠腹腔注射给药后相同时间大鼠血清中AST-Ⅳ的含量.方法 分别以AST、AST-Ⅳ(按AST-Ⅳ计20 mg/kg相等剂量)二种药物大鼠腹腔注射,给药后30,60,75,90,105,120 min测定大鼠血清中AST-Ⅳ的含量,并对两种药物结果 进行分析、比较.结果 在大鼠腹腔注射等量AST-Ⅳ,测得AST、AST-Ⅳ两种药物各时点血清中AST-Ⅳ浓度前者均是后者3倍以上,且最高浓度前者是后者的3.5倍.结论 以AST-Ⅳ血药浓度为指标,AST较AST-Ⅳ更易于吸收.     

HPLC-ESI-MSn法测定黄芪药材中黄芪甲苷

目的 建立黄芪醇提物中黄芪甲苷的高效液相色谱-电喷雾-离子阱质谱测定方法,测定黄芪药材中黄芪甲苷.方法 超声法制备黄芪药材的总提物,反相色谱分离,采用离子阱质谱多级反应模式,以m/z807.4→627.2为提取离子对,外标法测定黄芪甲苷.结果 方法 最低检测限为5 ng/mL,线性范围为0.10～1.04 mg/mL,精密度、重复性、稳定性RSD均小于5.0%,平均加样同收率为96.51%.供试黄良药材中含黄芪甲苷为0.54 mg/g.结论 该方法 具有简便,快速和灵敏度高的特点,可用于黄芪药材及其生物制品样品中黄芪甲苷测定.     

黄芪甲苷的药理研究进展

目的:综述黄芪甲苷的药理研究进展.方法:参阅国内、外文献,分别从对器官保护、免疫调节、强心、降糖、抗衰老、抗炎抗病毒等方面对黄芪甲苷的药理研究进展进行较为详细的介绍和总结.结论:黄芪甲苷药理作用显著,有望成为疾病治疗和康复用药物,具有广阔的市场发展空间.     

HPLC-ELSD法测定黄芪注射液中黄芪甲苷的含量

目的:建立高效液相法测定黄芪甲苷含量的方法。方法:采用蒸发光散射检测器(ELSD),以黄芪甲苷为对照品,对自制的黄芪注射液中黄芪甲苷的含量进行测定,色谱柱:MerckODSC18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈水(33∶67),流速:1.0ml/min,ELSD参数:漂移管温度为95℃,氮气气压为3.5kPa。结果:在选定的色谱条件下,当黄芪甲苷的进样量在0.396～3.168μg范围内时与峰面积积分值线性关系良好(r=0.9998,n=8),平均回收率为98.09%,RSD为2.52%。结论:HPLCELSD法具有准确、简便、灵敏度高、无干扰而且重现性好的优点,适合用于黄芪注射液中黄芪甲苷含量的测定。     

HPLC法测定黄芪中黄芪甲苷的含量

目的探讨应用高效液相色谱法测定黄芪中黄芪甲苷含量的方法。方法高效液相色谱法,色谱柱：Hypersil ODS2 5μm,4．6mm×200mm;流动相：乙腈-水（32：68）,流速1．0ml／min：检测波长203nm;柱温：室温。结果黄芪甲苷的进样量在2．2～13．2μg范围内有良好的线性关系,r=0．9999,加样回收率为96．6％,RSD为1．82％。结论本法分离度好,干扰小,重复性和稳定性好,是黄芪中黄芪甲苷含量检测的可行有效的分析方法。     

黄芪甲苷干预的EPC-Exos对高糖诱导损伤间充质干细胞向内皮分化的影响＊

目的 探讨黄芪甲苷（Astragaloside Ⅳ，AS-Ⅳ）干预的人内皮祖细胞外泌体（Endothelial progenitor cells derived exosomes，EPC-Exos）对高糖诱导损伤人脐血间充质干细胞（Human umbilical cord blood mesenchymal stem cells，hUCBMSCs）向内皮分化的影响。方法 体外分离和培养人内皮祖细胞（Endothelial Progenitor Cells，EPCs），同时体外分离和培养hUCBMSCs，取P4代细胞分别进行成骨、成软骨和成脂诱导分化鉴定。将鉴定成功的EPCs分别用100mg·L^-1的黄芪甲苷和等量的PBS干预，培养24 h后收集两组细胞上清液中外泌体。采用透射电子显微镜观察EPC-Exos的形态，利用纳米粒子追踪分析（Nanoparticle Tracking Analysis，NTA）技术检测EPC-Exos的粒径，Western blot技术进行外泌体特征性标志物CD9、CD63和TSG101的检测。将hUCBMSCs用30 mmol·L^-1的葡萄糖预处理120h后，随机分为实验组和对照组，同时设置正常组。三组细胞培养24 h后，通过Matrigel体外成管实验研究EPC-Exos对hUCBMSCs成管分化的影响。免疫荧光检测hUCBMSCs表达 CD31、vWF等内皮细胞特异标志物的情况。结果 光镜下hUCBMSCs边缘清楚，形态均一，排列呈漩涡状，3系细胞分化为典型图像。透射电镜观察分离及提纯后黄芪甲苷干预EPC-Exos为包膜完整的圆形或椭圆形微囊泡结构；NTA技术检测97.6%人EPC-Exos为直径在81.4-142.1nm之间的微囊泡；EPC-Exos表面特异标志物CD9、CD63、TSG101呈阳性，以上实验证实成功提取EPC-Exos。Matrigel成管实验显示，与对照组相比，实验组MSCs细胞体外成管能力显著增强，差异显著（P<0.001）。免疫荧光检测显示，与对照组相比，实验组MSCs表达内皮细胞特异性标志物CD31、vWF能力显著增强，差异显著（P均<0.01）。结论 黄芪甲苷干预的EPC-Exos可有效恢复高糖受损人间充质干细胞的成管功能且显著改善其向内皮分化能力。     

黄芪甲苷对大鼠心肌基因表达谱的影响

目的:观察黄芪甲苷连续给药对大鼠心肌基因表达谱的影响。方法:雄性Wistar大鼠以黄芪甲苷5mg.kg^-1 .d^-1 腹腔注射,连续2周。对照组给予相同容积的黄芪甲苷溶剂。取黄芪甲苷给药组大鼠心肌组织和相同部位的溶剂对照组大鼠心肌组织进行基因芯片对照检测,扫描仪扫描芯片荧光信号,用相应软件分析差异表达基因和基因功能。结果:黄芪甲苷组显示72个上调基因,其中39个基因生物学特性明确。经基因功能分析,黄芪甲苷对血管发育功能的影响最大;其次是对心肌发育功能和与细胞骨架表达及细胞收缩相关功能有影响。结论:黄芪甲苷对促进血管和心肌发育、增强心肌功能等基因上调的作用最为明显。     

黄芪丸中黄芪甲苷含量测定

黄芪丸为传统中成药 ,收载于《全国医药产品大全》［１］,处方由沙苑子、黄芪、川楝子、制川乌、制小茴香、青小豆、地龙、乌药、防风组成。具有补气温肾、祛湿散风之功效。主要用于肾脏虚冷 ,头面浮肿 ,腰腿冷痛 ,小便频数 ,遍身麻木等症。黄芪甲苷为方中主药黄芪的有效成分。尚未见有该丸测定黄芪有效成分的报道。本文采用双波长薄层扫描法对其进行含量测定 ,效果满意。现报道如下。１仪器与材料仪器 :ＣＳ -９０００双波长薄层扫描仪（日本岛津） ;ＰＢＱ -Ｉ型薄层自动铺板器（重庆南岸新力实验电器厂） ;点样用定量毛细管（Ｄｒｕｍｍ…     

不同产地黄芪中黄芪甲苷含量比较研究

目的：改进黄芪含量测定方法，提高黄芪甲苷回收率，评价不同产地黄芪药材质量。方法：采用HPLC-ELSD对各种黄芪中的黄芪甲苷含量进行测定，并对其进行质量评价。结果：此方法回收率较高，各产地黄芪中黄芪甲苷的含量差别较大。结论：山西、内蒙古、黑龙江、甘肃各省产地的药材含量较高，可考虑在此进行规范化种植，为优质黄芪药材种植选址提供重要参考。