正常人外周血和胸腺T细胞中TCR DδX基因重排的特点

目的：分析正常人外周血和胸腺细胞中 ＴＣＲ ＤδＸ基因重排分布特点。方法：利用半巢式 ＰＣＲ扩增 １０例正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）、４例分选的外周血 ＣＤ３＋Ｔ细胞和 ７例正常人胸腺细胞 ＤＮＡ的 ＴＣＲ ＤδＸ基因与ＪδＸ、Ｄδ３和　Ｊａ重排的情况，从不同含量 ＤＮＡ的 ＰＣＲ分析，了解其重排分布频率。结果：ＴＣＲ ＤδＸ分别与 ＪδＸ、Ｄδ３和　Ｊａ的重排均可见于多数外周血Ｔ细胞和胸腺细胞中，对不同含量的ＤＮＡ的ＰＣＲ分析显示ＴＣＲ ＤδＸ重排的分布频率在外周血和胸腺细胞有所不同。结论：ＴＣＲ ＤδＸ－　Ｊａ的重排最常见于成熟和未成熟Ｔ细胞中，而ＴＣＲ　ＤδＸ－Ｄδ３则在未成熟Ｔ细胞中多见。     

正常人外周血和胸腺T细胞中TCR δRec151051—Jδ1和δRec151298—Jδ1基因重排的分布特点

目的 分析正常人外周血和胸腺细胞中TCR δRec151051-Jδ1和δRec151298-Jδ1基因重排分布特点。方法 利用半巢式和巢式PCR扩增10例正常人外周血单个核细胞（PBMCs）、4例分选的外周血CD3^ T细胞和7例正常人胸腺细胞DNA的TCR δRec基因与Jδ1、Dδ3和ψJa重排的基因片段,从不同含量DNA的PCR分析,了解其重排分布频率。结果 TCRδRec151051分别与Jδ1、Dδ3和ψJa的重排和TCR δRec151298-Dδ3重排见于大多数外周血T细胞和胸腺细胞中,而TCR δRec151298与Jδ1和ψJa的重排则多见于胸腺细胞中,对不同含量的DNA的PCR分析显示δRec重排的分布频率在外周血和胸腺细胞有所不同。结论 TCR δRec151051、TCR δRec151298与Jδ1、Dδ3和ψJa的重排均存在于多数正常人T细胞中,TCR δRec151051-Dδ3最常见于成熟和未成熟T细胞中,而TCR δRec151298-Jδ1和TCR δRec151298-ψJa则主要见于未成熟T细胞中。     

T—ALL中两种新的TCRδ基因重排δRec151051—Jδ1和δRec151298—Jδ1

目的 分析T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）细胞中TCRδ基因新的重排形式及其在正常人外周血和胸腺细胞中的分布情况。方法 利用半巢式PCR扩增2例T-ALL、10例正常人外周血和7例正常人胸腺细胞DNA的TCRδ基因组片段,了解其重排情况,克隆性PCR产物进一步进行苷酸序列分析确定重排位置,并进一步经PT-PCR检测其重排基因的表达情况。结果 在2例T-ALL病人白血病细胞发现两种新的TCR δRec-Jδ1基因重排方式,称为δRec151051-Jδ1和δRec151298^-Jδ1,该新的TCR δRec基因重排同时见于大多数正常人外周血和胸腺。RT-PCR显示该两种TCR δRec-Jδ1基因重排的产物可见于2例T-ALL中,而正常人为阴性。结论 本研究发现两种新的TCR δRec151051-Jδ1和δRec151298-Jδ1 基因重排。该重排基因表达于T-ALL中,而正常人不表达该重排基因,提示该重排形式可能与T细胞白血病的形成有一定的关系。     

正常人外周血和胸腺T细胞中TCR δRec151051-Jδ1和δ Rec151298-J δ 1基因重排的分布特点

目的分析正常人外周血和胸腺细胞中TCRδRec151051-Jδ1和δRec151298-Jδ1基因重排分布特点.方法利用半巢式和巢式PCR扩增10例正常人外周血单个核细胞(PBMCs)、4例分选的外周血CD3+T细胞和7例正常人胸腺细胞DNA的TCRδRec基因与Jδ1、Dδ3和ψJα重排的基因片段,从不同含量DNA的PCR分析,了解其重排分布频率.结果TCRδRec151051分别与Jδ1、Dδ3和ψJα的重排和TCRδRec151298-Dδ3重排见于大多数外周血T细胞和胸腺细胞中,而TCRδRec151298与Jδ1和ψJα的重排则多见于胸腺细胞中.对不同含量的DNA的PCR分析显示δRec重排的分布频率在外周血和胸腺细胞有所不同.结论TCRδRec151051、TCRδRec151298与Jδ1、Dδ3和ψJα的重排均存在于多数正常人T细胞中,TCRδRec151051-Dδ3最常见于成熟和未成熟T细胞中,而TCRδRec151298-Jδ1和TCRδRec151298-ψJα则主要见于未成熟T细胞中.     

T-ALL中两种新的TCRδ基因重排δRec_(151051)-Jδ1和δRec_(151298)-Jδ1

目的分析 T细胞急性淋巴细胞白血病 ( T- AL L )细胞中 TCRδ基因新的重排形式及其在正常人外周血和胸腺细胞中的分布情况。方法利用半巢式 PCR扩增 2例 T- AL L、10例正常人外周血和 7例正常人胸腺细胞 DNA的 TCRδ基因组片段 ,了解其重排情况 ,克隆性 PCR产物进一步进行核苷酸序列分析确定重排位置 ,并进一步经 RT- PCR检测其重排基因的表达情况。结果在 2例 T- AL L 病人白血病细胞发现两种新的 TCRδRec- Jδ1基因重排方式 ,称为 δRec1 51 0 51 - Jδ1和δRec1 51 2 98- Jδ1,该新的 TCRδRec基因重排同时见于大多数正常人外周血和胸腺。 RT- PCR显示该两种 TCRδRec- Jδ1基因重排的产物可见于 2例 T- AL L中 ,而正常人为阴性。结论本研究发现两种新的 TCRδRec1 51 0 51 - Jδ1和δRec1 51 2 98- Jδ1基因重排。该重排基因表达于 T- AL L中 ,而正常人不表达该重排基因 ,提示该重排形式可能与 T细胞白血病的形成有一定的关系     

非霍奇金淋巴瘤的IgH和TCRδ基因重排

目的：探讨非霍奇金淋巴瘤（NHL）免疫球蛋白重链（IgH）和T细胞受体δ链（TCRδ）基因重排情况。方法：用半重叠式聚合酶链反应（PCR）方法检测IgH及TCRδ基因重排。结果：57例NHL中41例（72％）发生IgH基因重排，30例（53％）出现TCRδ基因重排。结论：检测克隆性基因重排可以作为诊断NHL有效基因标志，NHL中存在系列不忠实现象。     

中线T细胞淋巴瘤的TCR—γ基因重排研究

目的对中线Ｔ细胞淋巴瘤的克隆性进行研究。方法用一组针对Ｔ细胞受体γ链基因Ｖ区片段的家族特异性引物和ＰＣＲ方法,对１１例（２２个标本）中线Ｔ细胞淋巴瘤病例进行了Ｔ细胞受体γ基因重排的检测。结果２２个标本中２１个有Ｔ细胞受体γ链基因的克隆性重排（９４４５％）。在９例原发灶的连续活检和１例原发灶及其转移灶的标本中均未发现增生的克隆家族的改变。结论中线Ｔ细胞淋巴瘤的病变组织中存在Ｔ细胞的单克隆性增生,为该肿瘤的Ｔ细胞起源提供了分子生物学的证据。在中线Ｔ细胞淋巴瘤的疾病过程中（包括转移灶）增生Ｔ细胞的家族未发生变化,支持肿瘤的单克隆起源学说     

重症肌无力T细胞受体基因重排的研究

<正>重症肌无力(MG)是抗体介导的自身免疫病,自身抗体的产生依赖于T细胞;T细胞受体(TCR)是T细胞表面识别特异抗原的结构.我们用限制性片段长度多态性(RFLP)方法检测MG患者TCR基因重排,以了解TCR分子的多样性程度,为寻找特异免疫疗法提供线索.1 材料与方法20例MG患者及15例正常对照,每例取抗凝外周血7ml,离心分离淋巴细胞,按常规用蛋白酶K方法分离总DNA.取10μg DNA分别以EcoRI、HindⅢ及Bg1Ⅱ酶切,经电泳分离并变性后转移到尼龙膜上,与TCR-α、β及γ探针进行Southern杂交.放射自显影.     

T细胞性淋巴瘤诊断中TCR基因重排检测的应用

目的：探讨T细胞受体( T cell receptors, TCR)基因重排检测对T细胞性淋巴瘤诊断的价值。方法收集T细胞性淋巴瘤30例和淋巴反应性增生组织30例,提取DNA,应用BIOMED-2引物系统中的56条引物进行PCR扩增,核酸分子异源双链凝胶电泳分析结果。结果30例T细胞性淋巴瘤标本中TCRβ、TCRγ、TCRδ的检出率分别为83．3%(25/30)、93．3%(28/30)、13．3%(4/30),三者联合检测的检出率为96．7%(29/30),30例淋巴反应性增生组织中均未检测出TCR基因重排。结论利用BIOMED-2引物系统检测TCR 基因重排可作为T细胞性淋巴瘤的辅助诊断工具。     

TCR基因重排检测在T细胞淋巴瘤病理诊断中的作用

基因重排现象是每个淋巴细胞在早期经历的一个正常的过程,由于机体每个淋巴细胞的重排基因都是特有的,使每个淋巴细胞都有独特的重排形式。如若机体在某些致瘤因素的作用下失去对某个基因重排细胞的控制,则该细胞就会出现无控制的、单克隆性增生,最终导致淋巴瘤的形成。所以淋巴瘤所具有的是单克隆性重排。因此通过聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术进行T细胞抗原受体（T cell receptor,TCR）基因克隆性重排分析,尤其在常规HE形态学与免疫组化结果都不能确诊时,显得尤为重要。该文对其在T细胞淋巴瘤病理诊断中的作用作一综述。     

蕈样肉芽肿皮损和外周血T细胞受体-γ基因重排的研究

蕈样肉芽肿 (ＭＦ)是一种低度恶性的皮肤Ｔ细胞淋巴瘤。应用ＰＣＲ方法我们已经证明ＭＦ及可疑ＭＦ皮损中存在Ｔ细胞受体 γ基因重排 (ＴＣＲ γ)。但血液的Ｔ细胞单克隆性的存在与皮损的Ｔ细胞单克隆性存在的关系 ,及与预后的关系尚不十分清楚。14例ＭＦ(二期 )患者 ,临床、组织病理及免疫组化均符合疾病的诊断标准 ;17例可疑ＭＦ患者 (最后发展成为ＭＦ患者 ) ;8例湿疹患者 ;8例神经性皮炎患者。所有标本来源于中国医科大学第一临床学院皮肤科门诊及病房 ,标本均在切取皮损的同时取外周抗凝血。正常皮肤 5份 ,来源于整形外科切取的外观正…     

T-ALL患者外周血TCRγ/δ T细胞的分布和增殖特点

目的:了解T细胞急性淋巴白血病(T-cell acute lymphocytic leukemia,T-ALL)患者外周血TCR Vγ和Vδ亚家族T细胞的分布和克隆情况。方法:利用RT-PCR扩增9例T-ALL患者和10例正常人外周血单个核细胞中3个TCR Vγ和8个Vδ亚家族基因的互补决定区3(CDR3),了解TCR亚家族Vγ和Vδ亚家族细胞的分布;阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性。结果:9例T-ALL患者3个Vγ亚家族的表达率都明显低于正常人Vγ亚家族的表达率(P<0.05);Vδ亚家族中只有Vδ1和Vδ3的表达率低于正常人(P<0.05)。3例T-ALL患者出现克隆性增殖的γ/δT淋巴细胞。结论:T-ALL患者外周血TCR Vγ和部分Vδ亚家族谱系出现限制性表达和克隆性增殖。同时存在克隆性增殖γδ T细胞提示可能为γδ 白血病性T细胞克隆。     

活动性肺结核患者α/β TCR基因重排及CDR3谱型分析

目的:建立多重PCR方法扩增α/β TCR全长序列,分析活动性肺结核患者病变局部T淋巴细胞α/β TCR基因重排特点及CDR3谱型.方法:分离结核患者肺泡灌洗液中的淋巴细胞,提取RNA后用SMART方法逆转录,运用根据现有文献设计的α和β TCR扩增引物,进行多重PCR扩增以获得其全长序列,构建重组质粒并测序,利用DNAstar及网上TCR资源分析序列.结果:3例患者共获得24个α链序列,13个β链序列.α链以AV1S2(54%)、AV12S3(41%)、AV12S2(5%)为主;β链以BV2(38%)、BV29S1(46%)、BV14(3%)、BV4S2(3%)为主.同一病例及不同病例之间CDR3区呈现多样性,但是标本1、标本3各有一条β链的CDR3氨基酸序列相同:SVGTGTLHQETQY;标本2和标本3的各有2条α链CDR3序列相同:AVRDWAGNMLT;标本2的一个α链和标本3的一个α链的CDR3均有:AV…DNN…RLM序列.结论:建立了TCRα和β链全长序列的多重PCR扩增方法.结核患者病变局部克隆性增殖的TCR α和β链谱型呈限制性取用,克隆增生的T淋巴细胞来自不同的亚群,但是相同的CDR3序列对于识别MTB多肽可能具有特异性.     

正常人外周血和脐血中TCR Vβ亚家族sjTRECs的检测情况

目的:检测TCR23个Vβ亚家族sjTRECs在正常人外周血中的存在特点,从而进一步了解正常人胸腺近期各Vβ亚家族初始T细胞的输出情况。方法:采用半巢式PCR对4例胸腺、10例脐血和10例正常人外周血分别在2×105、5×104、1×104和1×103个单个核细胞中的23个Vβ亚家族sjTRECs进行扩增。结果:在细胞数相同的情况下,各Vβ-Dβ1sjTRECs的检出率胸腺细胞最高,其次是脐血,正常人最低。当细胞数为2×105、5×104和1×104时,正常人Vβ2、Vβ4、Vβ7、Vβ11和Vβ19亚家族sjTRECs的检出率以及检出sjTRECs的亚家族数量均显著低于脐血。当细胞数为2×105和5×104时,正常人可检测到绝大多数Vβ亚家族的sjTRECs,随着细胞数的降低,部分Vβ亚家族的sjTRECs则检测不到,而少部分Vβ亚家族的sjTRECs则在1000个细胞时仍能检测到。结论:成功建立了半定量检测23个Vβ亚家族sjTRECs的检测方法;在2×105细胞中约可以检测到80%左右的Vβ亚家族初始T细胞,而在5×104细胞中约有半数的Vβ亚家族初始T细胞可检测到,提示不同Vβ亚家族初始T细胞的出现频率有所差异。     

γ/δT细胞简介

γ/δT细胞是近 10多年来人们新认识到的一种T细胞亚群 ,该细胞有许多独特特征 ,在抗感染、抗过敏、肿瘤监测及自身免疫病中起着一定作用。本文对该细胞亚群的受体基因、抗原特异性、分布、作用等进行了综述。     

T 细胞受体δ、γ基因在小儿急性白血病中的变化

本文在细胞形态,表面抗原分析的基础上,对20例小儿急性白血症细胞进行TCRδ和γ基因结构的分析。11例属分化早期的白血病中有9例发生TCRδ基因的重排和缺失,其中5例也有TCRγ基因的重排。在5例属非淋巴细胞系的白血病中有3例发生TCRδ基因的重排.3例粒细胞性白血病细胞的TCR基因(δ和γ)均为胚系。有一例细胞表型仅有CD_2表达的白血病细胞,其TCR 基因(δ和γ)也为胚系。结果还显示:TCRδ基因结构发生变化的白血病细胞均有CD_(10)抗原表达。研究提示:TCRδ基因的重排不显示严格的细胞特异性,但是TCR 基因的变化与淋巴细胞系白血病细胞某些表面抗原的表达存在某种联系。     

利用Fine-tiling aCGH分析TCR基因重排鉴定T细胞白血病克隆

目的:建立基于分析T细胞受体(TCR)基因重排而确定T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)克隆的新方法,为研究T-ALL中涉及TCR基因位点的染色体易位提供基础。方法:提取1例T-ALL患者外周血单个核细胞(PBMC)的总DNA,利用精细定位的寡核苷酸阵列比较基因组杂交(fine-tiling aCGH)分析样本与对照组基因组DNA的差异,了解不同染色体上可能的断裂点和具体的位点,根据所提供的初步结果,从断裂点涉及的基因序列设计特异引物,采用连接介导PCR(LM-PCR)和序列分析等方法去找出与之发生重排的基因序列。并进一步通过RT-PCR检测TCR基因表达。结果:该例T-ALL患者fine-tiling aCGH结果显示14染色体TCRα/δ基因座出现4个断裂点,分别对应TCR Vδ1、Vδ2、Jδ1和Jδ2基因位点。通过LM-PCR、测序及序列分析,该例T-ALL患者的PBMC中TCR基因涉及Vδ1Dδ2Dδ3 Jδ1、Vδ2Dδ3 Jδ2重排。RT-PCR的结果也验证T-ALL表达该TCR基因重排。结论:结果表明,利用fine-tiling aCGH及LM-PCR技术可以找出TCR基因重排,并且该方法是可靠的,也是发现一些涉及TCR位点的融合基因的一条途径。     

检测T细胞受体重排切除环的意义及应用研究

T细胞受体重排切除环是T细胞受体基因重排过程中切除的DNA环 ,可作为新近从胸腺迁出者的标记 ,应用于胸腺功能的评价。近年来由于免疫重建研究的缘故 ,检测T细胞受体切除环受到了重视。本文拟从T细胞受体切除环产生及应用的意义、方法上作一综述。