黄芪对高糖环境下肾间质成纤维细胞表达纤溶酶原激活物抑制剂的影响

目的:体外研究高糖刺激人肾间质成纤维细胞时纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的表达,以及黄芪延缓糖尿病肾病与其相关性。方法:将人肾间质成纤维细胞培养于不同浓度葡萄糖中,24 h 后采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测 PAI-1 mRNA 转录水平,免疫组化方法检测 PAI-1蛋白的表达。随即用黄芪药物血清刺激细胞,观察 PAI-1表达情况。结果:高浓度葡萄糖培养的细胞 PAI-1表达升高,并呈现剂量和时间依赖性。说明 PAI-1表达与高糖作用存在相关性。同时等渗甘露醇也可以诱导 PAI-1表达。黄芪含药血清可以显著抑制细胞表达 PAI-1。结论:高糖可诱导 PAI-1表达,抑制细胞外基质成分降解。黄芪通过抑制 PAI-1的产生,起到抗纤维化作用,从而延缓糖尿病肾病的进展。     

中医药防治肾间质纤维化的研究进展

肾间质纤维化 (renal interstitial fibrosis,RIF)是各种肾脏疾病发展到慢性肾功能衰竭的共同途径 ,主要病理特征为肾间质成纤维细胞的增生和细胞外基质如 、 、 、 型胶原、纤维连接蛋白、层粘蛋白的过度积聚。近年来中医药在肾间质纤维化防治方面亦开展了探索性的相关研究 ,并取得初步成果 ,现将此方面的进展综述如下。单味中药研究　 1　补益药　 1 .1　黄芪 :牟氏[1 ] 将人肾脏间质成纤维细胞分别培养于不同浓度的葡萄糖中 ,于 2 4 h后用 RT-PCR方法检测 HGFm RNA的转录水平 ,继而用不同浓度的肝细胞生长因子 (HGF)刺激细胞来观…     

保肾片诱导大鼠肾间质成纤维细胞凋亡的实验研究

采用血清药理学方法 ,通过保肾片对大鼠肾间质成纤维细胞的作用研究 ,探讨中药保肾片治疗、延缓慢性肾功能衰竭进展的作用机理。目的 :研究中药保肾片对大鼠肾间质成纤维细胞是否具有诱导凋亡作用。方法 :取SD大鼠肾间质成纤维细胞进行体外培养 ,采用血清药理学方法 ,取含药大鼠血清加入体外培养的细胞中 ,应用倒置显微镜、光镜、透射电镜及流式细胞仪等仪器观察研究保肾片对大鼠肾脏肾间质成纤维细胞的诱导凋亡作用。结果 :与正常大鼠血清对照组相比 ,含药大鼠血清能诱导成纤维细胞发生凋亡。结论 :保肾片延缓慢性肾衰进展的作用机理之一与诱导肾间质成纤维细胞发生凋亡有关。     

保肾片诱导大鼠肾间质成纤维细胞凋亡的实验研究

采用血清药理学方法，通过保肾片对大鼠肾间质成纤维细胞的作用研究，探讨中药保肾片治疗，延缓慢性肾功能衰竭进展的作用机理。目的：研究中药保肾片对大鼠肾间质成纤维细胞是否具有诱导凋亡作用。方法：取SD大鼠肾间质成纤维细胞进行体外培养，采用血清药理学方法，取含药大鼠血清加入体外培养的细胞中，应用倒置显微镜、光镜、透射电镜及流式细胞仪等仪器观察研究保肾片对大鼠肾脏肾间质成纤维细胞的诱导凋亡作用。结果：与正常大鼠血清对照组相比，含药大鼠血清能诱导成纤维细胞发生凋亡。结论：保肾片延缓慢性肾衰进展的作用机理之一与诱导肾间质成纤维细胞发生凋亡有关。     

糖肾方含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖作用及对TGF-β1、HO-1干预作用的研究

[目的]探讨糖肾方含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖作用及对转化生长因子(TGF)-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血红素氯合酶-1(HO-1)干预作用。[方法]制备小鼠含药血清;培养肾小管上皮细胞分为:空白对照组、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、空白血清组(30 mmol/L葡萄糖+10%空白血清)、糖肾方低剂量血清组(30 mmol/L葡萄糖+10%低剂量含药血清)、糖肾方高剂量血清组(30 mmol/L葡萄糖+10%高剂量含药血清)。使用4-甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测糖肾方含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖的影响。运用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测肾小管上皮细胞中TGF-β1、HO-1和α-SMA蛋白的表达。[结果]高糖诱导下,肾小管上皮细胞呈成纤维细胞样的长梭形,细胞核呈梭形改变。MTT检测:与空白组比较,高糖组光度值明显增高(P0.05);与高糖组比较,高低剂量含药血清组在培养24 h后吸光度值均有下降,吸光度差异有统计学意义(P0.05),且高剂量组光度值下降强于低剂量组(P0.05)。Western blotting及RT-PCR测定实验结果显示:与空白对照组细胞对比,高糖组中TGF-β1、α-SMA含量增加;经过含药血清干预后,高糖诱导的HK-2细胞TGF-β1、α-SMA含量降低,差别有统计学意义(P0.05);糖肾方高、低剂量组血清比较,在降低TGF-β1方面,高剂量组效果较好(P0.05),在降低α-SMA方面没有统计学差异(P0.05)。HO-1在高糖诱导后含量稍升高,与空白对照组对比,差异有统计学意义(P0.05);在经过糖肾方含药血清干预后,含量升高,与高糖组对比,差异有统计学意义(P0.05),糖肾方高低剂量组血清比较,升高HO-1含量方面没有统计学差异(P0.05)。[结论]糖肾方通过抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖和干预TGF-β1、α-SMA、HO-1相关分子的表达,可以抑制细胞外基质成分沉积,减少氧化应激反应,减轻细胞损伤,逆转上皮-间质转分化,从而抑制肾间质纤维化,延缓糖尿病肾病病情进展。     

肾复康Ⅱ号胶囊含药血清对骨髓间充质干细胞分泌肾脏保护性生长因子的作用

目的:探讨肾复康Ⅱ号胶囊含药血清对大鼠MSCs分泌肾脏保护性生长因子HGF、BMP-7的作用。方法:灌胃法制备肾复康Ⅱ号胶囊含药血清。采用密度梯度离心法分离和培养大鼠MSCs,取第三代MSCs,分别加入肾复康Ⅱ号胶囊含药血清和对照血清体外对MSCs进行培养,至第10d,应用RT-PCR法检测两组MSCs分泌HGF、BMP-7的mRNA表达情况进行比较。结果:培养10d后,肾复康Ⅱ号胶囊含药血清组培养的MSCs分泌HGF、BMP-7的mRNA表达高于对照组。结论:肾复康Ⅱ号胶囊含药血清可上调MSCs分泌肾脏保护性生长因子HGF、BMP-7的表达,从而对肾间质纤维化发挥修复作用。     

保肾片对大鼠肾间质成纤维细胞作用的实验研究

目的 :从细胞水平上探讨对慢性肾功能衰竭疾病治疗有效的中药复方保肾片对体外培养的大鼠肾间质成纤维细胞的影响。方法 :本实验取SD大鼠肾间质成纤维细胞进行体外培养 ,以保肾片喂服SD大鼠后的含药血清加入到培养细胞中 ,应用MTT法和流式细胞仪检测细胞的增殖和凋亡。结果 :喂服中药保肾片的大鼠血清 ,与不喂药的大鼠血清对照组相比 ,显著抑制细胞增殖 (P <0 .0 5 ) ,并且能诱导细胞发生凋亡。结论 :保肾片延缓慢性肾衰进展的作用机理可能与抑制肾间质成纤维细胞增殖和诱导其发生凋亡有关     

黄芪汤通过AMPK-Camkkβ(LKB1)信号通路对足细胞的保护作用研究

目的通过体外实验研究,探讨AMPK-Camkkβ(LKB1)信号通路在黄芪汤改善糖尿病肾病中的作用。方法以高糖刺激足细胞为模型,黄芪汤进行干预。采用CCK8检测高糖状态下黄芪汤对足细胞存活率的影响。通过蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组足细胞AMPK、p-AMPK、Camkkβ、p-Camkkβ、LKB1、p-LKB1、ACC、p-ACC蛋白的表达量。结果黄芪汤可浓度依赖性的改善高糖刺激下足细胞的活性,并浓度依赖性的上调高糖刺激下足细胞中p-AMPK、p-Camkkβ、p-LKB1、p-ACC蛋白表达水平,从而激活Ⅱ型糖尿病肾病诱导的AMPK-Camkkβ(LKB1)信号通路下调。结论黄芪汤可有效活化AMPK-Camkkβ(LKB1)信号通路,改善Ⅱ型糖尿病模型诱导的糖尿病肾病。     

六味地黄丸含药血清减低高糖诱导的肾小管上皮细胞的氧化损伤和凋亡的研究

目的观察六味地黄丸含药血清对高糖环境下培养的肾小管上皮细胞的保护作用,以及对高糖诱导的线粒体氧化损伤和凋亡的影响。方法制备不同剂量大鼠六味地黄丸含药血清,并培养高糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2),采用四甲基偶氮唑盐法和乳酸脱氢酶释放实验确定药物最适作用浓度。六味地黄丸含药血清处理高糖诱导的HK-2细胞24和48h后,2,7-二氯氢化荧光素二酯染色检测细胞内ROS含量,流式细胞仪测定线粒体膜电位变化,real-time PCR方法检测线粒体DNA的拷贝数,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡,以及使用分光光度法检测细裂解液中Caspase-3和Caspase-9酶的活性。结果与正常对照组比较,高糖组在培养的24、48 h内HK-2细胞的ROS含量、线粒体膜电位、mt DNA拷贝数、细胞凋亡率、Caspase-3和Caspase-9酶活性显著上调(P0.01)。与高糖组比较,10%六味地黄丸含药血清均能逆转上述变化(P0.05),且抑制作用呈一定的时间依赖关系。结论六味地黄丸可能通过调控高糖环境下肾小管上皮细胞的线粒体ROS生成、改善线粒体膜电位和mt DNA拷贝数、抑制Caspase蛋白的级联激活反应,降低肾小管上皮细胞的氧化损伤和细胞凋亡,从而有利于延缓糖尿病肾病的间质纤维化的进展。     

通络益肾滋阴方对糖尿病肾病大鼠血清TGF-β_1、HGF的影响

目的：从抗纤维化角度探讨通络益肾滋阴方对糖尿病肾病大鼠的作用机制。方法：采用左侧肾脏切除术＋STZ腹腔注射复制糖尿病肾病大鼠模型。分为假手术对照组（正常对照组）、病理对照组、通络益肾滋阴方治疗组、西药治疗组（洛汀新＋糖适平）,观察各组大鼠血清TGF-β1、HGF指标的变化。结果：经通络益肾滋阴方治疗70d后,血清TGF-β1表达显著下调,HGF表达显著增加（P〈0.01）。通络益肾滋阴方治疗组与西药治疗组相比,二者无明显差异（P〉0.05）。结论：通络益肾滋阴方能延缓糖尿病肾病的病理进展,其作用机理可能与抑制血清TGF-β1的表达,促进HGF表达有关。     

丹参注射剂体内外对糖尿病状态下肾小管AT1表达的影响

目的 探究丹参注射剂体内外对糖尿病状态下肾小管AT1表达的影响.方法 采用高糖培养基培养NRK-52E,Western blot检测AT1蛋白表达.高糖高脂联合STZ建立糖尿病大鼠模型,大鼠随机分为正常组、模型组、氯沙坦组(20 mg/kg)、丹参注射液组(2 mL/kg),腹腔注射丹参注射剂,1次/d,给药6周.BCA法检测尿蛋白水平、自动生化仪分析检测血尿素氮(BUN)和血清肌酐(Scr)水平,HE染色观察肾脏结构,IHC和Western blot检测AT1蛋白表达.结果 丹参注射液可以抑制高糖环境下NRK-52E和糖尿病大鼠肾小管AT1表达的上调(P<0.05,P<0.01),改善糖尿病大鼠24h尿蛋白排泄(P<0.01),降低血尿素氮(BUN)和血清肌酐(Scr)水平(P<0.01),减轻糖尿病大鼠肾小管病变.结论 丹参注射液对糖尿病肾病改善作用可能与抑制AT1表达及改善肾素-血管紧张素系统有关.     

2型糖尿病肾病患者血清HGF水平的变化及意义

目的 探讨血清肝细胞生长因子(HGF)在糖尿病肾病(DN)的发生、发展过程中的变化及其临床意义.方法 糖尿病患者71例均无各种急慢性感染性疾病,结缔组织病等.根据尿白蛋白排泄率分为三组:①正常白蛋白尿患者27例为NA组,②微量白蛋白尿患者24例为MA组,③临床白蛋白尿患者20例为ODN组.设健康对照组20例,均无各种急慢性疾病.所有受检者均测FBG、PBG、BUN、Cr、血压、BMI、WHR、UAER等指标.采用酶联免疫吸附法测定血清HGF水平.结果 NA、MA、ODN三组患者血清中HGF水平与对照组相比明显增高;ODN组较MA组有所下降.结论 血清HGF在早期对肾脏有保护作用,后期不明确.     

参附注射液对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏肝细胞生长因子及骨形态发生蛋白-7表达的影响

目的探讨单侧输尿管梗阻后大鼠肾间质纤维化发生过程中肝细胞生长因子（HGF）和骨形态发生蛋白-7（BMP-7）的表达以及参附注射液对其的影响。方法采用单侧输尿管结扎（UUO）制造梗阻性肾病模型,将56只大鼠随机分为假手术组、手术组（UUO）和治疗组（UUO＋参附注射液处理）,术后第7、14日观察肾组织病理改变,应用免疫组织化学方法检测肾组织HGF和BMP-7的表达。结果（1）与假手术组相比,手术组肾间质明显纤维化,HGF的表达在术后第7日明显增加,第14日较第7日减弱;与手术组相比,治疗组肾间质纤维化明显减轻,而且HGF的表达在术后第7日明显上调,第14日较第7日上调更明显,差异显著。（2）与假手术组相比,手术组肾间质BMP-7的表达在术后第7、14日逐渐减弱;与手术组相比,治疗组BMP-7的表达在术后第14日明显上调,差异显著。结论参附注射液可以上调肾组织HGF和BMP-7的表达,减轻肾小管-间质纤维化,发挥肾保护作用。     

黄芪对缺血性急性肾功能衰竭的保护作用

目的:观察黄芪对缺血性急性肾功能衰竭(ARF)时血清肝细胞生长因子(HGF)水平、肾功能及肾组织病理学改变的影响,探讨黄芪肾脏保护作用的机制。方法:通过切除大鼠右肾,夹闭左肾动脉60min后再灌注(I/R),建立IARF模型。治疗组术前3d连续给予黄芪ip,其他组(假手术组及I/R0、4、12h组)应用生理盐水。测量各组血清HGF、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平,并通过光镜下肾小管评分来评价肾组织病理学改变。结果:I/R4h对照组血清HGF水平与假手术组无显著差异(P>0.05);黄芪组血清HGF水平较I/R4h对照组明显升高(P<0.01);I/R对照组血清BUN、Cr水平较假手术组明显升高(P<0.01),黄芪组可以减少血清BUN、Cr水平升高的程度(P<0.05);同时也可以使肾组织病理损伤显著改善(P<0.05)。结论:在IARF模型,黄芪预处理可以减轻肾脏损伤,改善肾功能。黄芪诱导HGF生成增加可能是其肾脏保护作用的机制之一。     

肝细胞生长因子对糖尿病肾病不同阶段的治疗作用

目的通过检测转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA、CTGFmRNA、c-metmRNA的表达及其病理变化,研究肝细胞生长因子（HGF）对2型糖尿病肾病不同阶段的治疗作用。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组、糖尿病肾病组、治疗组（HGF组）,HGF组于注射链尿佐菌素后2个月和6个月时给予HGF500μg/（kg.d）,连续1个月,处死。取一侧肾脏HE染色作病理切片,另一侧肾脏用反转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测TGF-β1mRNA、CTGFmRNA、c-metmRNA的表达。结果在3个月和7个月时,HGF组c-metmRNA表达较DN组高,TGF-β1及CTGFmRNA表达较DN组低（P〈0.05）。结论HGF可抑制早期糖尿病肾病进一步发展,减轻临床糖尿病肾病的蛋白尿,使肾小球系膜明显变薄和系膜基质降解从而改善并逆转临床糖尿病肾病大鼠肾脏的功能和形态的变化。     

清络通痹颗粒对类风湿关节炎患者RANKL表达的影响

目的:观察清络通痹颗粒(QLT)含药血清对类风湿关节炎(RA)患者核因子κB受体活化子配体(RANKL)表达的影响。方法:原代培养RA患者成纤维样滑膜细胞(FLS),取3-5代FLS分组加药,收集上清及细胞;分离RA患者外周血淋巴细胞(PBL),分组加药,收集上清及细胞。运用ELISA法检测上清中RANKL的表达及运用实时定量RT-PCR检测细胞RANKL的表达。结果:ELISA检测结果表明QLT含药血清作用后,淋巴细胞及滑膜细胞上清中RANKL含量降低。实时定量RT-PCR结果表明QLT含药血清作用后,淋巴细胞及滑膜细胞RANKL表达降低。结论:QLT含药血清可抑制RA患者RANKL的表达,并减少RANKL的分泌,这可能是清络通痹颗粒治疗RA的重要机制之一。     

抗纤灵抗大鼠肾间质纤维化的实验研究

目的探讨中药复方抗纤灵治疗大鼠单侧输尿管结扎（unilateral ureteral obstruction,UUO）所致肾纤维化的作用及机理。方法雄性SD大鼠18只随机分为3组,每组6只。用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,抗纤灵治疗2周后检测血肌酐、尿素氮含量等指标;HE染色和六胺银染色观察肾组织病变;采用RT-PCR和Western印迹分别检测转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）mRNA和α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、TGF-β1受体（TβRⅠ及TβRⅡ）及肝细胞生长因子受体（C-Met）蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血肌酐、尿素氮均有明显上升;肾小球毛细血管基底膜明显增厚;肾组织TGF-β1 mRNA及α-SMA、TβRI、TβRⅡ、C-Met蛋白袁达显著上调,而HGF mRNA水平显著下调。中药干预后,血尿素氮含量显著降低,肾小球和肾小管基底膜仅见轻度增厚;肾组织α-SMA、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达明显减少,HGF mRNA水平明显上调。结论抗纤灵可抑制肾组织α-SMA、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达并增加肾纤维化保护性因子HGF mRNA的表达,从而改善梗阻性大鼠的肾间质纤维化及肾功能。     

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??OBJECTIVE To study the protective effects of ferulic acid on apoptosis of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) induced by high-glucose and its mechanisms. METHODS HUVECs cells were cultured, survival rate of HUVECs cells was determined by MTS colorimetric method. Cell intracellular ROS were detected with fluorescence probe DCFH-DA.Expressions of VPO1, Bax and Bcl-2 were detected by Real-time PCR and Western Blot. RESULTS Compared with normal control group, the survival cell number in the high glucose-treated group were obviously decreased, the expressions of VPO1 and Bax were obviously up-regulation and the expressions of Bcl-2 were obviously down-regulation. Compared with high-glucose group,the level of intracellular ROS and the expression lever of VPO1 and Bax were obviously down-regulation,HUVECs proliferation rate and the expression of Bcl-2 significantly increased after incubated with ferulic acid. CONCLUSION Ferulic acid can protect HUVECs against the apoptosis induced by high-glucose in vitro, and its mechanism could be related with the reduced VPO1 expression and the inhibition of the oxidative stress.     

疏肝活血方合药血清对大鼠骨髓源性内皮祖细胞血管新生相关基因表达的影响

目的：观察疏肝活血方含药血清对大鼠骨髓来源的内皮祖细胞（EPCs）血管新生相关基因VEGF、HGF和HIF-1α表达的影响。方法：从大鼠骨髓中获取单个核细胞,体外培养1周后,采用免疫荧光细胞化学和激光共聚焦显微镜鉴定,于培养体系中加入疏肝活血方及其拆方的含药血清,培养24h,Real—TimePCR方法检测EPCs中VEGF、HGF和HIF-1α的mRNA表达。结果：贴壁细胞培养诱导后具有内皮细胞的形态学和免疫学特征,Real—TimePCR检测结果发现,疏肝活血方含药血清能明显提高EPCs中VEGF、HGF、HIF—1α的mRNA表达量,与对照相比差异具有显著意义（P〈0．01）。结论：疏肝活血方能促进EPCs中血管新生相关基因VEGF、HGF和HIF-1α的表达,是该方促血管新生的机制之一。