5-氟尿嘧啶对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞的抑制及半数抑制浓度

目的：国内外一些学者使用传统抗代谢药物5-氟尿嘧啶防止纤维化，在治疗瘢痕疙瘩方面取得了一定的临床疗效，但对其药物作用机制以及临床药物应用的浓度尚无确切认定。实验拟进一步验证5-氟尿嘧啶对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的抑制以及半数抑制浓度。 方法：实验于2006—09／2007—07在安徽医科大学微生物教研室及安徽医科大学附属医院中心实验室完成。①实验材料：6例瘢痕疙瘩（耳垂、大腿各l例、胸前、上臂各2例）均为安徽医科大学附属医院整形外科手术病例，均无系统性疾病和激素、其他药物注射史，对用于实验的所取组织患者均知情同意。治疗方案经医院医学伦理委员会批准。②实验方法：成纤维细胞体外原代培养，待细胞融合后传代，实验所用细胞均为处于4-8代对数生长期的成纤维细胞。将不同浓度5-氟尿嘧啶（O．1，0．2，0．4，0．8，1．6g／L）分别对4～8代瘢痕疙瘩成纤维细胞进行干预72h。再选用接近IC50的5个浓度：0．2，0．3，0．4，0．5，0．6g／L，作为余下实验浓度。③实验评估：采用四甲基偶氮唑盐比色法检测各浓度药物对成纤维细胞的抑制率，计算5-氟尿嘧啶对瘢痕疙瘩成纤维细胞的半数抑制浓度（IC50）值。应用流式细胞术分析法观察5-氟尿嘧啶干预后瘢痕疙瘩成纤维细胞的细胞周期变化及细胞凋亡百分率；应用Hoechst33258荧光染色法观察凋亡成纤维细胞的形态学特征。 结果：6例瘢痕疙瘩标本原代培养成纤维细胞成活良好，均用于实验，进入结果分析。①O．1，0．2，0．4，0．8，1．6g／L 5-氟尿嘧啶干预72h后，细胞抑制率组间两两比较差异均有显著性（P〈O．01）。作图得半数抑制浓度IC50为（0．400±0．032）g／L。②0．2，0．3，0．4，0．5，0．6g／L5-氟尿嘧啶干预48h后，细胞凋亡率组间两两比较差?     

苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响

目的:研究苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(fibroblast,FB)作用的机制。方法:实验于2000-01/2004-06在武装警察部队总医院烧伤整形科实验室完成。将苦参碱以不同浓度梯度作用于体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,采用四唑盐比色法检测苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响,采用免疫组织化学检测增殖性细胞核抗原(proliferativecellnuclearantigen,PCNA)的表达,采用流式细胞仪对异硫氰荧光素-连接素V/碘化丙啶双染情况(FITC-AnnexinⅤ/PI)检测细胞凋亡率。结果:苦参碱在0.10～10g/L对人瘢痕疙瘩成纤维细胞呈剂量依赖性增殖抑制作用;增殖性细胞核抗原经苦参碱作用后表达明显减弱;FITC-AnnexinⅤ/PI示苦参碱组的凋亡率为40.7,对照组为1.6(P<0.01)。结论:苦参碱在体外能明显抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖活性,并促进其凋亡。     

钙通道阻滞剂对体外培养神经瘢痕成纤维细胞超微结构的影响

目的:钙通道阻滞剂可诱导瘢痕成纤维细胞向变圆且相互分离的方向改变,导致胶原蛋白的分泌减少.实验拟进一步观察钙通道阻滞剂对体外培养神经瘢痕成纤维细胞超微结构的影响.方法:实验于2006-03/06在吉林大学中日联谊医院中心实验室完成.①实验材料:2月龄清洁级Wistar大鼠10只,体质量200～220 g.②实验方法:制作双侧坐骨神经损伤模型,术后2周取损伤处神经瘢痕,按组织块法培养神经瘢痕成纤维细胞,实验所用细胞为4～8代,分两组,维拉帕米组加入含维拉帕米的DMEM培养液,浓度为100 μmol/L,对照组不加药.③实验评估:48 h后制备扫描电镜和透射电镜标本,观察细胞超微结构的变化.结果:维拉帕米组神经瘢痕成纤维细胞呈球形或椭圆形,细胞突起细小,胞间网状物质少,胞浆中粗面内质网萎缩且数量减少,囊泡丰富:对照组成纤维细胞呈梭形或多角形,细胞间基质较多,细胞浆内粗面内质网及核糖体丰富,囊泡少见.结论:钙通道阻滞剂能使体外培养神经瘢痕成纤维细胞形态趋于球形变,可能对胶原蛋白的合成和分泌具有抑制作用.     

转化生长因子-β1对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3,7mRNA表达的影响

目的探讨转化生长因子-β 1( TGF β 1)对瘢痕疙瘩成纤维细胞 (KFB)Smad3,7 mRNA表达的影响,以进一步明确 TGF β 1在瘢痕疙瘩的发生、发展过程中的重要作用.方法用 RT-PCR法分别检测 TGF β 1 不同含量( 0, 5, 50, 500 pmol/L;Smad3 mRNA 24 h, Smad7 mRNA 90 min)和 TGF β 1( 500 pmol/L)作用不同时间( Smad3 mRNA 1, 2, 4, 24, 48 h; Smad7 mRNA 0.5,1,1.5,2,4,24 h)对 Smad3,7mRNA表达的影响.结果不同含量 TGF β 1刺激 KFB后 ,随 TGF β 1含量的增加 ,Smad3 mRNA水平逐渐下降,并呈含量依赖性.与 Smad3相反, 5 pmol/L TGF β 1就能使 Smad7 mRNA水平明显升高 2.6倍( 46± 7, 对照组 13± 7, t=6.150, P=0.0005),并随 TGF β 1剂量加大而略有改变,说明 KFB的 Smad7 mRNA表达对 TGF β 1的刺激非常敏感.用 TGF β 1刺激细胞后, Smad3 mRNA水平随作用时间延长而逐渐下降,到作用 48 h后下降到最低( 53± 9,对照组 18± 8, t=6.011, P=0.0005),显示出时间依赖性;而 Smad7 mRNA在细胞受到 TGF β 1刺激后 120 min即达到对照组的 2.5倍( 73± 11,对照组 53± 9, t=5.215, P=0.003) ,24 h后回落到正常对照水平.结论 TGF β 1能使 KFB细胞 Smad3 mRNA发生配体依赖性的下调,而使 Smad7 mRNA表达迅速增加.     

人正常皮肤和瘢痕疙瘩成纤维细胞的培养及生物学差异

背景:成纤维细胞是创伤愈合过程中的主要效应细胞,对瘢痕疙瘩成纤维细胞进行培养可为体外研究瘢痕疙瘩提供基础.目的:比较体外培养的人正常皮肤和瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞生物学特性的差异,为体外研究瘢痕疙瘩提供平台.方法:应用组织微粒贴壁法,对人正常皮肤和瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞进行原代培养、传代培养、冻存及复苏,观察二者的生长增殖情况及差异.结果与结论:瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长增殖与正常皮肤来源的成纤维细胞无明显差异,二者进入对数生长期的时间大致相同;体外培养的成纤维细胞在液氮中冻存后,细胞复苏状态良好,接种后绝大部分细胞存活,与冻存前无明显差异.说明瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞及正常皮肤来源的成纤维细胞生长增殖无明显差异,且均可成功冻存和复苏.     

珍珠液对体外培养人瘢痕成纤维细胞生长的抑制

背景:研究发现,珍珠液有促组织细胞再生、消除瘢痕等功效.目的:观察珍珠液对人皮肤瘢痕成纤维细胞增殖的影响.设计、时间及地点:分组对比观察实验,于2008-09/12在广西医科大学医学实验中心完成.材料:瘢痕组织组织标本来自广西医科大学整形外科患者.珍珠液是珍珠的水解液,含有多种氨基酸、多肽、维生素、矿物质和天然酶等.购自北海国发生物有限公司.方法:参考Veelken方法进行成纤维细胞原代及传代培养,反复传代去除非成纤维细胞成分后,建立人皮肤瘢痕细胞系.取对数生长期的人皮肤瘢痕成纤维细胞3～5代,用胰蛋白酶消化成单细胞悬液,接种于96孔塑料培养板,密度为0.5×10~4/孔,每孔加入100μL的细胞悬液和100μL的DMEM培养基,常规培养24h后吸弃原培养液,实验分组:珍珠液组:加入已经配置的含珍珠液质量浓度为125.00,62.50,31.30,15.60,7.80,3.90,1.95,0.98mg/L的培养基200μL;对照组:每孔只加200μL的培养基.主要观察指标:MTT法检测成纤维细胞增殖情况,TUNEL法检测成纤维细胞凋亡情况.结果:珍珠液对成纤维细胞的半效抑制浓度IC_(50)为15mg/L,除0.98mg/L质量浓度外,其余质量浓度均能有效地抑制成纤维细胞的生长,且呈剂量依赖性抑制成纤维细胞的生长,珍珠液的浓度越高,对成纤维细胞的抑制率越大.剂量IC_(50)=15mg/L培养的成纤维细胞体积缩小、胞质少、密度变小,凋亡细胞多、呈棕黄色.对照组成纤维细胞体积大、胞质丰富、密度大.珍珠液作用后的细胞凋亡指数高于空白对照组(P＜0.01).结论:珍珠液能抑制体外培养皮肤瘢痕成纤维细胞的生长,并诱导其凋亡.     

瘢痕疙瘩成纤维细胞生长与小干扰RNA分子抑制细胞周期蛋白D1表达的影响

目的:细胞周期蛋白是细胞周期调控的决定性因子,RNA干涉是一种高效特异的基因沉默技术,能诱使细胞表现出特定基因缺失表型.通过RNA干扰阻断细胞周期蛋白D1基因表达,观察瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和细胞周期的影响.方法:实验于2006-07/2007-05在南方医科大学基因工程研究所(BSL-2级)完成.①实验材料:小干扰性RNA设计采用软件是ambion公司的在线软件siRNA target finder,合成采用化学合成法,委托上海吉凯基因有限公司合成,再经过变性退火处理后得到双链小干扰性RNA;瘢痕疙瘩成纤维细胞标本取自南方医院整形外科瘢痕疙瘩患者(均获得患者或其家属同意).②实验过程及分组:将瘢痕疙瘩成纤维细胞应用脂质体法将针对细胞周期蛋白D1基因的小干扰RNA分子转染为实验组,细胞用等量脂质体处理为脂质体组,未处理组作为对照.③实验评估:于转染后24,48,72 h,光学显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术分析细胞周期;MTT法检测成纤维细胞的活性并绘制细胞生长曲线.结果:①转染特异性小干扰RNA后,细胞形态发生了异常改变,细胞由正常的长梭形变为圆形或椭圆形,提示可能是凋亡或坏死细胞.②转染后细胞周期G1期延长,S期缩短.转染特异性小干扰RNA 24,48,72 h后G1期细胞高于未处理组(依次为60.13%,66.22%,67.53%,54.53%);S期细胞低于未处理组(依次为18.25%,17.11%,11.15%,22.31%),表明细胞阻滞在G1期,进入S期细胞减少.③小干扰RNA-细胞周期蛋白D1转染后MTT法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞增值明显受到抑制,细胞生长曲线图表明,转染特异性小干扰RNA组细胞生长明显减缓.结论:特异性小干扰RNA分子能够抑制细胞周期蛋白D1基因的表达,使细胞阻滞于G1期,并诱导细胞凋亡.     

5-氟尿嘧啶对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad7和转化生长因子βⅠ型受体表达的影响

背景:很多实验已证明5-氟尿嘧啶应用于瘢痕疙瘩治疗可收到良好的效果.但作者所查针对5-氟尿嘧啶经由转化生长因子β信号通路作用于瘢痕疙瘩分子机制的报道较少.目的:实验拟观察5-氟尿嘧啶对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad7和转化生长因子βⅠ型受体表达的影响.设计、时间及地点:细胞观察实验,于2007-02/10在安徽医科大学微生物教研室完成.材料:标本分别取自因瘢痕疙瘩入院的6例整形手术患者.方法:①瘢痕疙瘩组织成纤维细胞原代培养,取4～6代传代细胞加入5个不同浓度5-氟尿嘧啶(10,20,40,80,160 μmol/L)干预24,48,72 h.②待细胞长至80%汇合时,加入5-氟尿嘧啶配成10,20,30 μmol/L 3个药物干预浓度组,每组再加入转化生长因子β1继续培养.设空白对照和单纯加转化生长因子β1(5 μg/L)的阳性对照.主要观察指标:①利用四甲基偶氮唑盐法测定瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖能力.②蛋白免疫印迹检测各组瘢痕疙瘩成纤维细胞中Smad7和转化生长因子βⅠ型受体的表达.结果:①5-氟尿嘧啶浓度为10,20 μmol/L 作用24 h 时未发现成纤维细胞死亡,与空白对照组相比差异无显著性意义(P > 0.05);其他浓度下作用各组均有显著的成纤维细胞死亡现象(P < 0.01).②与空白对照组相比,转化生长因子β1组Smad7表达明显减弱,转化生长因子βⅠ型受体表达则显著增强(P均 < 0.01).③加入5-氟尿嘧啶干预后可显著增强Smad7的表达,且在5-氟尿嘧啶浓度为20 μmol/L 时的表达最强(P < 0.01).④不同浓度5-氟尿嘧啶对转化生长因子βⅠ型受体表达无明显影响.结论:5-氟尿嘧啶浓度为10～20 μmol/L 时无细胞毒性,与转化生长因子β1共同培养成纤维细胞,能够提高该细胞转化生长因子β1诱导的Smad7表达,但对于转化生长因子βⅠ型受体的表达没有明显影响.     

钙通道阻滞剂对体外培养神经瘢痕成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响

目的:钙通道阻滞剂可抑制瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原蛋白的分泌,减少瘢痕的增生.实验拟进一步观察钙通道阻滞剂对体外培养神经瘢痕成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响.方法:实验于2006-03/06在吉林大学中日联谊医院中心实验室完成.①实验材料:Wistar大鼠10只;盐酸维拉帕米注射液为上海禾丰制药有限公司产品.②实验过程及分组:制作大鼠双侧坐骨神经损伤模型,术后2周取损伤处神经瘢痕,按组织块法培养神经瘢痕成纤维细胞,实验所用细胞为4～8代,分4组,其中3组培养基中维拉帕米药物浓度分别为10,50及100 μmol/L,1组为空白对照组.③实验评估:分别用四甲基偶氮唑盐法观察细胞增殖能力、羟脯氨酸比色法测定细胞上清液中的胶原含量和胞浆中的胶原含量.结果:①四甲基偶氮唑盐法观察细胞增殖结果:钙通道阻滞剂对神经瘢痕成纤维细胞的生长增殖具有明显抑制作用,且呈现剂量依赖性(P ＜ 0.05).②羟脯氨酸比色法测定胶原含量:钙通道阻滞剂可使分泌到细胞培养上清中的胶原含量明显减少,以100 μmol/L浓度组作用最为显著(P ＜ 0.05);胞浆中的胶原含量增加,具有明显剂量依赖性,以100μmol/L浓度组作用最为显著(P ＜ 0.05).结论:钙通道阻滞剂可以抑制神经瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原分泌.     

三七总甙对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的作用

目的:观察三七总甙对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的作用,以寻找治疗人瘢痕疙瘩的有效药物。方法:体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,分别应用噻唑蓝(MTT)比色法和H3-脯氨酸掺入法检测三七总甙作用后细胞增殖及胶原合成的变化。结果:与空白对照组相比,三七总甙含量在0.5,1.0和1.5g/L时均能够显著抑制成纤维细胞增殖及胶原合成(P<0.01),但在1.5g/L时对细胞具有毒性作用。结论:三七总甙具有体外抗纤维化作用,可能成为治疗瘢痕疙瘩的有效药物。     

苏拉明对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学特性的影响

目的探讨苏拉明（suramin）对立体培养条件下瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFb）的药物学作用。方法建立以人纤维蛋白原为支架的KFb三维培养系统，分别通过测定细胞的生长曲线。细胞的胶原合成量及I型前胶原mRNA的表达情况来观察苏拉明对KFb影响及其与转化生长因子(TGF－β1)的相互作用。结果苏拉明对KFb的生长及胶原合成均有抑制作用，且能明显抑制TGF－β1对KFb胶原合成的诱导作用。结论苏拉明能明显抑制KFb的生物学功能且对TGF－β1有明显的拮抗作用，这可能使其成为治疗瘢痕疙瘩的有效药物之一。     

己酮可可碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

背景:近年来发现己酮可可碱有广泛的抗纤维化作用,但己酮可可碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的抑制作用却少见报道,且其最大抑制剂量尚无定论.目的:观察己酮可可碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用,并筛选己酮可可碱的最大抑制浓度.方法:以人瘢痕疙瘩组织作成纤维细胞原代培养,传至第5～8代后将细胞分为实验组和对照组,实验组加入质量浓度为0.1,0 25,0.5,1.0,2.0,3.0 g/L的己酮可可碱,利用MTT比色法检测成纤维细胞的增殖活性.结果与结论:与对照组相比,实验组成纤维细胞增殖抑制率较高(P＜0.05),质量浓度在0.1～2.0 g/L范围内呈明显的量效、时效关系,96 h处于较高水平.实验组最大抑制率为53.37%,最大抑制质量浓度为2.0 g/L.结果表明己酮可可碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖有明显的抑制作用,最适抑制质量浓度为2.0 g/L,发挥抑制作用最强的时间为给药后96 h.     

圆盘状受体反义寡核苷酸对瘢痕疙瘩成纤维细胞中圆盘状受体表达和胶原合成的抑制作用

目的:观察硫代修饰和脂质体包埋的反义寡核苷酸(ASODN)抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞圆盘状受体基因表达及其对瘢痕疙瘩胶原抑制的影响。方法:实验于2005-03/2006-01进行。收集解放军第二军医大学长海医院整形外科手术切除的4例瘢痕疙瘩(供体知情同意),采用组织块培养法进行细胞培养。并将经脂质体包埋并全硫代修饰后的圆盘状受体ASODN加入培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞中,实验分6组,ASODN 5,10,20 μmol/L组、无寡核苷酸组、单纯脂质体及空白对照组。采用反转录-聚合酶链反应技术及[3H]-脯氨酸掺入法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞中圆盘状受体1 mRNA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达相对量及其对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成分泌的影响。结果:①圆盘状受体1 mRNA表达相对量:ASODN 5,10,20 μmol/L组低于空白对照组(1.91±0.19,1.19±0.37,0.49±0.14,2.61±0.47,P<0.01),ASODN 20 μmol/L组低于ASODN 5,10 μmol/L组(P<0.01)。②Ⅰ型胶原mRNA表达相对量:ASODN 5,10,20 μmol/L组低于空白对照组(1.91±0.59,1.46±0.17,0.19±0.27,3.31±0.53,P<0.01),ASODN 20 μmol/L组低于ASODN 5,10μmol/L组(P<0.01)。③Ⅲ型胶原mRNA表达相对量:ASODN 10,20 μmol/L组低于空白对照组(0.73±0.36,0.61±0.23,1.16±0.43,P<0.01)。④Ⅰ型胶原mRNA/Ⅲ型胶原mRNA:空白对照组为4.50±0.12,ASODN 5,10,20 μmol/L组均低于空白对照组(2.40±0.11,2.00±0.06,1.50±0.07,P<0.05,0.01),ASODN 20 μmol/L组低于ASODN 5,10μmol/L组(P<0.01)。⑤胶原合成分泌量:ASODN 10,20 μmol/L组低于空白对照组(P<0.01)。ASODN 20 μmol/L组低于ASODN 5 μmol/L组(P<0.01)。结论:圆盘状受体-ASODN能明显抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中圆盘状受体表达,显著抑制Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达,调整Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原比例,并抑制胶原合成和分泌。     

体外培养不同代次人成纤维细胞的衰老程度

目的：探讨体外培养不同代次人成纤维细胞的衰老程度，为组织工程化皮肤提供合适的种子细胞。方法：实验于2000-09／2002—06在潍坊医学院整形外科研究所完成。取6—8岁正常男性儿童20例包皮环切术切除的健康包皮组织，将包皮二倍体成纤维细胞进行传代培养，以不同代次（P0，R5，P10，…，P65）的细胞为实验对象，通过倒置相差显微镜、透射电镜、衰老相关β-半乳糖苷酶染色一系列检测方法，对不同代次成纤维细胞的衰老程度进行观察。结果：①成纤维细胞的形态学：P45以内成纤维细胞生长迅速，两三天即呈汇合状态，细胞排列紧密，多呈放射状、编织状或漩涡状走行，有的交叉重叠生长。P46以后细胞排列不规则，体积较大，形状扁平，胞浆区域增大，胞质突起多而大，胞内出现颗粒和空泡，边界不清，形态不规则；成批的细胞出现固缩、脱落，有离壁漂起的现象。②透射电镜结果：P0-P40：成纤维细胞胞质内有丰富的粗面内质网；细胞核大，核仁明显；细胞表面有许多短小突起，可见微绒毛和胞浆皱褶。P41～P65：细胞核／浆比例减小，细胞表面突起和微绒毛减少；核膜内折，有凋亡现象。③细胞生物学行为的改变：P60增殖速度较P10明显减慢。P10最大增殖数为47．3&;#215;10^5，对数生长期在3～6d，细胞倍增时间为2．18d；P60最大增殖数为8．5&;#215;10^4，对数生长期在4．0—7．5d，群体倍增时间为3．86d。④衰老相关β-半乳糖苷酶染色结果：与P10相比，P60中阳性细胞率大为增强（阳性细胞率为4％和60％）；直线相关分析结果显示，β-半乳糖苷酶染色的阳性率和细胞代龄之间呈显著正相关（r=-0．92，P〈0．01）。结论：各代成纤维细胞老化程度不同，46代后的细胞老化明显，不适合作为组织工程化皮肤的种子细胞。     

体外培养不同代次人成纤维细胞的衰老程度

目的:探讨体外培养不同代次人成纤维细胞的衰老程度,为组织工程化皮肤提供合适的种子细胞。方法:实验于2000-09/2002-06在潍坊医学院整形外科研究所完成。取6～8岁正常男性儿童20例包皮环切术切除的健康包皮组织,将包皮二倍体成纤维细胞进行传代培养,以不同代次(P0,P5,P10,…,P65)的细胞为实验对象,通过倒置相差显微镜、透射电镜、衰老相关β-半乳糖苷酶染色一系列检测方法,对不同代次成纤维细胞的衰老程度进行观察。结果:①成纤维细胞的形态学:P45以内成纤维细胞生长迅速,两三天即呈汇合状态,细胞排列紧密,多呈放射状、编织状或漩涡状走行,有的交叉重叠生长。P46以后细胞排列不规则,体积较大,形状扁平,胞浆区域增大,胞质突起多而大,胞内出现颗粒和空泡,边界不清,形态不规则;成批的细胞出现固缩、脱落,有离壁漂起的现象。②透射电镜结果:P0～P40:成纤维细胞胞质内有丰富的粗面内质网;细胞核大,核仁明显;细胞表面有许多短小突起,可见微绒毛和胞浆皱褶。P41～P65:细胞核/浆比例减小,细胞表面突起和微绒毛减少;核膜内折,有凋亡现象。③细胞生物学行为的改变:P60增殖速度较P10明显减慢。P10最大增殖数为47.3×105,对数生长期在3～6d,细胞倍增时间为2.18d;P60最大增殖数为8.5×104,对数生长期在4.0～7.5d,群体倍增时间为3.86d。④衰老相关β-半乳糖苷酶染色结果:与P10相比,P60中阳性细胞率大为增强(阳性细胞率为4%和60%);直线相关分析结果显示,β-半乳糖苷酶染色的阳性率和细胞代龄之间呈显著正相关(r=0.92,P<0.01)。结论:各代成纤维细胞老化程度不同,46代后的细胞老化明显,不适合作为组织工程化皮肤的种子细胞。     

氦氖激光抑制培养瘢痕成纤维细胞生长的实验研究

目的　探讨氦氖激光体外照射对培养的瘢痕成纤维细胞生长的抑制作用。方法　以6 32 .8nm波长氦氖激光 (功率密度 5 0mW /cm2 ) ,3J/cm2 ,30J/cm2 ,90J/cm2 ,180J/cm2 剂量 ,分别照射培养的人瘢痕成纤维细胞 1次 ,3次和 5次 ,每日 1次 ,然后进行细胞计数和细胞周期分析。结果180J/cm2 重复照射 3次和 5次 ,细胞总数都明显少于同期对照组 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。细胞周期分析表明 ,180J/cm2 照射细胞 3次和 5次后 ,S期细胞数从 5 1%降低到 2 0 %和 14% ,G0 /G1期细胞从 2 8%分别上升到 5 5 %和 6 0 % ,Sub -G2 期细胞百分比分别为 6 .7%和 9.8%。结论　一定剂量 (180J/cm2 )氦氖激光重复照射能抑制培养的瘢痕成纤维细胞生长 ,原因可能是由于氦氖激光引起G0 /G1期细胞停滞和细胞凋亡所致