硫辛酸通过抑制NF-κB-iNOS-NO信号保护氧化应激诱导的PC12细胞损伤

目的研究硫辛酸对氧化应激的PCI2细胞NF-κB—iNOS-NO信号通路的影响。方法用终浓度为0．4mmol·L^-1的H2O2损伤PC12细胞,用MTT法测定细胞存活率;用激光共聚焦法（LSCM）检测细胞内一氧化氮的动态变化;用RT-PCR法检测iNOS mRNA和NF-κBp65 mRNA表达量的变化。结果0．4mmol·L^-1的H2O2处理PC12细胞4h,细胞存活率为27．9％（P〈0．01）,硫辛酸10mg·L^-1可以提高H2O2损伤的PC12细胞存活率（65．4％,P〈0．01）;LSCM检测显示,DAF-2荧光强度的比值（F1/F0）的最大值由损伤模型组的5．34下降到1．80;和模型组比较,iNOS mRNA和NF柚p65mRNA的表达明显下调（P〈0．05或P〈0．01）。结论硫辛酸可能通过抑制NF-κB-iNOS—NO信号减轻氧化应激诱导的PC12细胞损伤。     

秦皮素抑制NF-κB/COX-2信号通路改善PC12细胞损伤

目的研究秦皮素(fraxetin)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致大鼠嗜铬细胞瘤细胞株(PC12细胞)损伤的作用并考察炎症反应中相关蛋白的变化。方法采用MTT法研究秦皮素对PC12细胞活力的作用,筛选合适给药浓度。试验共分为3组即对照组(Control组)、LPS模型组和秦皮素保护组(fraxetin+LPS组)。采用四甲基偶氮唑盐比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞活性变化;采用倒置显微镜和4′,6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride(DAPI)荧光核染色法观察细胞形态学变化;采用real-time PCR法检测细胞因子IL-1、IL-6、TNF-α及环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA水平;采用western blot法检测COX-2和NF-κB-p65蛋白表达水平。结果与模型组比较秦皮素保护组细胞存活率显著升高(P<0.01)。LPS模型组炎症因子IL-1、IL-6和TNF-αmRNA水平,NF-κB-p65和COX-2蛋白表达水平相对于对照组均明显升高(P<0.01)。与此同时秦皮素治疗组其炎症细胞因子mRNA水平,NF-κB和COX-2蛋白的表达水平均显著下调。结论秦皮素对LPS所致PC12细胞损伤有保护作用,其效应可能与抑制NF-κB/COX-2信号通路,降低炎症反应有关。     

α-硫辛酸注射液对过氧化氢致PC12细胞损伤的保护作用

目的 研究α-硫辛酸注射液(抗氧化剂)对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用.方法 600 μmol·L-1H2O2与细胞共同孵育4 h,建立PC12细胞氧化应激损伤模型,用MTT法,测定细胞生长抑制率;培养介质中的LDH测定,用紫外分光光度法,用流式细胞术测定细胞凋亡率和线粒体膜电位.结果 与模型组相比,3个剂量(10,1 μmol·L-1)α-硫辛酸注射液能提高H2O2损伤的PC12细胞的存活率,减少LDH的漏出,降低细胞凋亡率,抑制线粒体膜电位的下降(P＜0.05,P＜0.01).结论 α-硫辛酸注射液对H2O2致PC12细胞损伤模型具有较好的保护作用.     

Exendin-4体外通过抑制NF-κB-iNOS-NO信号减轻氧化应激诱导的小鼠MIN6胰岛β细胞凋亡

探讨胰高血糖素样肽-1受体激动剂Exendin-4(Ex-4)在氧化损伤诱导胰岛β细胞凋亡中的保护作用.培养的MIN6胰岛β细胞,通过AO-EB染色观察细胞凋亡形态,Annexin-V-PI染色流式技术测定凋亡率,Griess法检测细胞内一氧化氮水平,Western blotting检测胞浆iNOS蛋白、胞浆及胞核核因子-κBp65(NF-κBp65)蛋白表达水平.Ex-4可抑制叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的β细胞凋亡,Ex-4(100nmol·L-1)预处理较单独t-BHP处理,其凋亡率减少约67%(P<0.001).Ex-4同时减少NO水平的增高,并抑制t-BHP诱导的β细胞NF-κBp65活化及iNOS蛋白表达水平.Ex-4可能通过抑制细胞内NF-κB活化、胞浆iNOS表达来抑制NO水平,最终减轻氧化损伤诱导的β细胞凋亡.     

Exendin-4体外通过抑制NF-κB-iNOS-NO信号减轻氧化应激诱导的小鼠MIN6胰岛β细胞凋亡

探讨胰高血糖素样肽-1受体激动剂Exendin-4(Ex-4)在氧化损伤诱导胰岛β细胞凋亡中的保护作用。培养的MIN6胰岛β细胞，通过AO-EB染色观察细胞凋亡形态，Annexin-V-PI染色流式技术测定凋亡率，Griess法检测细胞内一氧化氮水平，Western blotting检测胞浆iNOS蛋白、胞浆及胞核核因子-κBp65(NF-κBp65)蛋白表达水平。Ex-4可抑制叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的β细胞凋亡，Ex-4(100 nmol·L^-1)预处理较单独t-BHP处理，其凋亡率减少约67%(P<0.001)。Ex-4同时减少NO水平的增高，并抑制t-BHP诱导的β细胞NF-κBp65活化及iNOS蛋白表达水平。Ex-4可能通过抑制细胞内NF-κB活化、胞浆iNOS表达来抑制NO水平，最终减轻氧化损伤诱导的β细胞凋亡。     

天麻素通过抑制细胞凋亡保护谷氨酸诱导的PC12细胞损伤

目的：研究天麻素（Gastrodin）对谷氨酸诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤的影响及可能机制。方法：以谷氨酸建立体外培养PC12细胞损伤模型并采用MTT比色法测定细胞存活率;AO/EB双染法经荧光显微镜观察细胞凋亡形态;采用流式细胞术检测细胞内活性氧含量以及Annexin V/PI染色后的细胞凋亡率;Western blot法检测细胞内Caspase-3蛋白表达。结果：天麻素可明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,在0.1～10μmol/L剂量呈一定的量效关系;同时,天麻素可明显抑制谷氨酸引起的活性氧（ROS）的累积,降低谷氨酸诱导的活性Caspase-3蛋白的表达,降低PC12细胞的凋亡率,在0.1～10μmol/L剂量呈量效相关性。结论：在一定剂量范围内,天麻素对谷氨酸损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能与减少ROS的生成,阻止氧化损伤的发生,抑制Caspase-3途径依赖的细胞凋亡相关。     

心肌片通过抑制NF-κB p65信号通路发挥心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察心肌片对缺血再灌注引起的心肌损伤的保护作用,研究其分子作用机制。方法结扎大鼠冠状动脉左前降支40min,再灌注2h,建立心肌缺血再灌注模型。cTnT、CK-MB、IL~(-1)、IL-6、TNF-α、MPO和ICAM-1的活性按照试剂盒说明书测定。采用蛋白质免疫印迹法检测心肌组织细胞浆和细胞核内NF-κB p65蛋白的表达情况。结果与模型组相比,心肌片预处理减轻了心肌损伤,降低了炎症因子水平,而这些保护作用可能与阻断NF-κB p65蛋白核转移有关。结论心肌片通过阻断NF-κB p65蛋白核转移从而减轻缺血再灌注引起的心肌炎症反应。     

知母皂苷通过调节NF-κB-iNOS-NO信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞功能

目的研究知母皂苷(SAaB)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞功能的影响,以及对NF-κB-诱导型一氧化氮合酶(iNOS)-NO信号通路的调节。方法以LPS刺激RAW264.7细胞构建体外炎症细胞模型,采用Griess法和ELISA法分别检测SAaB干预下,RAW264.7炎症细胞中的NO、iNOS、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的含量;Western blot检测RAW264.7细胞NF-κB p65蛋白的表达水平。结果 RAW264.7细胞在LPS(10 mg·L~(-1))诱导下,NO、iNOS、TNF-α、IL-6的含量以及NF-κB p65蛋白表达水平与正常对照组比较均明显增高。SAaB(0.3、3、30 mg·L~(-1))可明显降低RAW264.7炎症细胞中NO、iNOS、TNF-α和IL-6的含量(P<0.01),且明显下调NF-κB p65的蛋白表达水平(P<0.01)。结论 SAaB可通过调节NF-κB-iNOS-NO信号通路,抑制LPS诱导的RAW264.7细胞功能。     

丹皮酚通过抑制NF-κB信号通路诱导Tca8113细胞凋亡

目的 研究丹皮酚对核因子κB（NF-κB）信号通路的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制。方法 将丹皮酚以不同浓度及不同时间作用于人舌鳞癌Tca8113细胞,应用MTT法观察不同浓度丹皮酚在不同作用时间下对Tca8113细胞增殖的抑制作用,Hoechst 33342荧光染色及流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2,以及NF-κB信号通路组分中IκBα和p-IκBα的表达情况,并采用凝胶电泳迁移率检测（EMSA）对NF-κB活性进行测定。结果 经丹皮酚作用后,Tca8113细胞生长受到明显抑制,并呈明显的时间、剂量依赖效应关系。丹皮酚有明显诱导Tca8113细胞凋亡的作用,Western Blot 以及EMSA检测结果显示,丹皮酚上调Tca8113细胞中Bax与IκBα的表达,下调Bcl-2的表达,并能下调IκBα磷酸化及NF κB活性。结论 丹皮酚能够抑制NF-κB信号转导通路,进而抑制Tca8113细胞的增殖并诱导其凋亡。     

NF-κB核转位的转基因细胞模型的建立

目的建立NF-κB转基因细胞模型。方法 RT-PCR方法扩增P65基因片段;分子克隆技术构建哺乳动物细胞表达载体;脂质体法转染不同细胞;Western blotting验证蛋白表达;利用荧光可视化技术观察p65核转位的情况。结果成功获得与绿色荧光蛋白(GFP)融合的载体;并建立p65转基因细胞模型;转基因组中p65蛋白表达量明显高于对照组,给予LPS刺激BV-2后能够促进p65向细胞核转位;而转染后的PC12细胞,p65的核定位现象则呈现不均一性。结论:成功建立p65转基因细胞模型,针对不同细胞建立的模型,可用于相关化合物的筛选。     

松果菊苷对过氧化氢损伤的PC12细胞的保护作用及机制研究

目的研究松果菊苷(echinacoside,ECH)对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及机制。方法用终浓度为0.4 mmol.L-1的H2O2损伤PC12细胞,测定细胞存活率和Na+,K+-ATP酶的活性;用激光共聚焦法(LSCM)检测线粒体膜电位(MMP);用RT-PCR法检测Bcl-2和p53 mRNA表达量的变化。结果10 mg.L-1松果菊苷可以提高H2O2损伤的PC12细胞存活率和Na+,K+-ATP酶的活力、升高线粒体膜电位、降低p53 mRNA水平但增高Bcl-2 mRNA水平(P<0.05或P<0.01)。结论松果菊苷可保护H2O2诱导的PC12细胞损伤,升高MMP、下调p53mRNA和上调Bcl-2 mRNA可能是其作用机制。     

建立NF-κB核转位的转基因细胞模型

目的建立NF-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)转基因细胞模型。方法 RT-PCR方法扩增p65基因片段;分子克隆技术构建哺乳动物细胞表达载体;脂质体法转染不同细胞;Western blot验证蛋白表达;利用荧光可视化技术观察p65核转位的情况。结果成功获得与绿色荧光蛋白(GFP)融合的载体;并建立p65转基因细胞模型;转基因组中p65蛋白表达量明显高于对照组,给予LPS刺激BV-2后能够促进p65向细胞核转位;而转染后的PC12细胞,p65的核定位现象则呈现不均一性。结论成功建立p65转基因细胞模型,针对不同细胞建立的模型,可用于相关化合物的筛选。     

大黄素调控NF-κB信号通路抗缺氧缺糖/复氧复糖诱导的PC12细胞损伤

目的 研究大黄素对缺氧缺糖/复氧复糖诱导的PC12细胞损伤的影响和机制.方法 PC12细胞分成Normal(空白对照)、Model(缺氧缺糖/复氧复糖)、EMO L(30 mmol/L的大黄素,缺氧缺糖/复氧复糖)、EMO M(60 mmol/L的大黄素,缺氧缺糖/复氧复糖)、EMO H(90 mmol/L的大黄素,缺...     

迷迭香酸通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对高糖诱发大鼠神经细胞损伤的保护机制

目的 分析迷迭香酸(RA)通过Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对高糖诱发大鼠神经细胞损伤的保护机制。方法 取大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤高分化PC12细胞作为神经元细胞模型,采用不同浓度的D-葡萄糖处理后,通过MTT法观察细胞活性变化筛选最佳葡萄糖浓度。收集对数生长期PC12细胞随机分为对照组、高糖组,在高糖组基础上分别加入不同浓度RA及TLR4激活剂-脂多糖(LPA),记为RA低浓度组(30μmol/L RA)、RA高浓度组(60μmol/L RA)、RA高浓度+LPA组(60μmol/L RA+2μg/ml LPA),MTT检测各组细胞存活率;Hoechst33258观察细胞凋亡变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测5组细胞中TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及凋亡蛋白-Bax的表达水平。结果 100 mmol/L D-葡萄糖为本研究的最佳浓度。与对照组比较,高糖组细胞核严重皱缩,细胞形态发生明显变化,细胞活力明显下降,细胞凋亡率、Bax、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p...     

根皮苷对过氧化氢诱导损伤PC12细胞的保护作用

目的探讨根皮苷对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法以H_2O_2损伤PC12细胞建立氧化损伤模型,随机分为空白对照组、模型组(400μmol·L~(-1) H_2O_2)、阳性对照(20μmol·L~(-1)N-乙酰半胱氨酸)组和不同浓度根皮苷(16、32、64μmol·L~(-1))预处理组。采用MTT法检测细胞活力,显微镜观察细胞形态,ELISA检测细胞活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力,Western blot检测NF-E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达。结果模型组细胞活力较空白对照组显著降低,ROS和MDA含量增加,SOD活力下降,Nrf2和HO-1蛋白表达下降(均P<0.05)。根皮苷低、中、高浓度(16、32、64μmol·L~(-1))组较模型组细胞存活率均显著提高,ROS和MDA含量降低,SOD活力升高,Nrf2和HO-1蛋白表达上调(均P<0.05)。结论根皮苷能够抑制H_2O_2对PC12细胞的氧化损伤,其保护作用可能与抑制氧化应激引起的细胞死亡并调控Nrf2信号通路有关。     

川芎嗪对H_2O_2诱导PC12细胞凋亡的保护作用研究

目的探讨盐酸川芎嗪对H2O2诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法采用川芎嗪预处理PC12细胞后,制备H2O2细胞损伤模型,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性及细胞活性氧(ROS)水平来反映细胞损伤程度,流式细胞术和蛋白印迹法分析细胞凋亡发生机制。结果川芎嗪预处理后,PC12细胞的存活数提高,LDH释放及ROS水平显著降低(P<0.05),总凋亡率降低,caspase-3活性降低,Bax/Bcl-2比值降低。结论川芎嗪预处理后可以降低H2O2诱导的PC12细胞凋亡。     

芳香烃受体通过p38MAPK/p65NF-κB信号通路调节绿脓菌素诱导的巨噬细胞中炎症因子的表达

目的探讨芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)对绿脓菌素(pyocyanin PCN)诱导的巨噬细胞RAW264.7中炎性因子表达的影响及其信号通路的调控机制。方法分别采用不同浓度的PCN处理RAW264.7细胞24 h,用CCK8法检测PCN对细胞活性的影响,确定最适PCN浓度制造感染模型。将细胞分为对照组(给予0.1%dimethyl sulfoxide,DMSO)、PCN组、PCN+AhR抑制剂(CH223191)组、PCN+AhR激动剂(FICZ)组,应用免疫荧光法检测AhR的表达情况;ELISA法检测炎症因子(IL-6、IL-1β和TNF-α)的表达水平;Western blot法检测AhR、p-p38MAPK和p-p65NF-κB的蛋白表达情况。结果PCN诱导的RAW264.7细胞中AhR的表达与PCN的浓度具有明显的量效关系;与对照组相比,CH223191使PCN诱导的炎症因子分泌增加,并增强p38MAPK和p65NF-κB的磷酸化能力;FICZ降低了PCN诱导的炎症因子的产生并降低了p38MAPK和p65NF-κB的磷酸化能力。结论AhR能够调节PCN诱导的RAW264.7细胞炎症因子的表达,且p38MAPK/p65NF-κB信号通路可能是AhR参与免疫调节的重要途径。     

氧化应激致PC12细胞凋亡的信号传导途径的研究进展

PC12细胞被广泛用于神经细胞功能、分化、凋亡和神经递质分泌,以及潜在的分子机制的研究。氧化应激可导致PC12细胞凋亡,其作用方式为激活对氧化还原反应敏感的细胞信号传导,主要与丝裂原活化蛋白激酶、线粒体凋亡及NF-κB信号传导途径有关。本文综述了氧化应激致PC12细胞凋亡的信号传导途径,旨在为神经系统氧化应激相关疾病的抗氧化剂药物治疗和凋亡信号途径药物干预治疗提供理论依据。     

NF-κB在细胞凋亡中调节作用的研究进展

细胞凋亡是由基因控制的细胞自主有序的主动死亡过程,主要有3条通路参与引起细胞凋亡,即细胞内的线粒体通路、内质网通路和细胞外的死亡受体通路。近年研究表明,NF-κB与细胞凋亡关系密切,具有抑制凋亡和促进凋亡的双向调节作用,其在细胞凋亡中调节作用与凋亡抑制蛋白家族、B细胞淋巴瘤/白血病-2家族、肿瘤坏死因子受体相关因子家族、c-Jun氨基端激酶、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体和Fas相关死亡域蛋白样白细胞介素1β转化酶抑制蛋白等有关。探索NF-κB在细胞凋亡中的调控机制,对凋亡相关疾病的药物开发具有重要意义。本文就NF-κB在细胞凋亡中的调节作用进行综述。