血吸虫病免疫病理研究进展

血吸虫病主要病理变化是宿主肝组织内虫卵的沉积诱发虫卵肉芽肿及其后的纤维化病变.在动物模型的相关研究已显示Th1细胞主要参与血吸虫虫体抗原的免疫调节反应,而虫卵衍生抗原主要介导Th2细胞免疫反应.研究证明Th1细胞、Th2细胞、巨噬细胞、Treg细胞和IL-17分泌型淋巴细胞对调节虫卵肉芽肿反应和肝脏的纤维化过程起重要作用.     

右美托咪啶通过HSP60-TLR4-NF-κB通路抑制热应激诱导的小胶质细胞活化

目的 热射病是一种死亡率极高的重症中暑,所导致的脑损伤是其防治的焦点。本研究拟探讨右美托咪啶（Dexmedetomidine, Dex）对热应激诱导小鼠小胶质细胞株BV2细胞活化的影响,以期为热射病脑损伤的防治研究提供实验依据。方法 采用体外培养BV2细胞,分为空白对照组、热应激组（43 ℃）、Dex处理组、热应激（43 ℃）联合药物处理组。采用MTT[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide]法检测细胞活力的改变。ELISA（enzyme linked immunosorbent assay）方法检测热休克蛋白60（heat shock protein 60, HSP60）和相关炎性因子如肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor- alpha , TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1 beta, IL-1β）、白细胞介素-6（interleukin-6, IL-6）的释放。Western-blot检测Dex对热应激活化的BV2细胞信号通路的作用。结果 本实验条件下,Dex以及热应激不会对细胞活力产生影响（P>0.05）。与空白对照组相比,热应激将导致HSP60及炎性因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）的释放增加,而Dex的预处理能够减轻HSP60及炎性因子的释放,差异均具有统计学意义（P<0.05）。与空白对照组相比,热应激将导致Toll样受体-4（Toll-like receptor- 4, TLR4）和核转录因子（nuclear factor kappa B, NF-κB）的表达上调,而Dex预处理能够减弱这样的表达上调,差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论 Dex可能通过抑制HSP60-TLR4-NF-κB信号通路阻止热应激导致的小胶质细胞活化。     

吡格列酮抗高糖诱导H9c2心肌细胞炎性损伤的机制研究

目的 探讨PPAR-γ激动剂吡格列酮（pioglitazone, PGZ）通过抑制p38MAPK/NF-κB信号通路减轻高糖诱导的H9c2大鼠心肌细胞炎性损伤。方法 离体培养的H9c2细胞随机分6组,分别为低糖组（5.5 mmol/L葡萄糖,NG组）、高糖组（35 mmol/L葡萄糖,HG组）、高糖+不同浓度PGZ组（HG+5 μmol/L PGZ 、HG+10 μmol/L PGZ、HG+15 μmol/L PGZ、HG+20 μmol/L PGZ）,采用CCK8法检测各组细胞干预24、48 h后细胞活性变化;据CCK8结果选取NG组、HG组、HG+10 μmol/L PGZ （Low组）、HG+20 μmol/L PGZ （High组） 4组细胞干预48 h,ELISA检测各组细胞炎性因子TNF-α、IL-1β的含量,Western-blot检测各组细胞p-p38、p-p65蛋白的表达。结果 CCK8检测结果显示,与NG组比较,24、 48 h后HG组明显活力下降（P<0.01）,表明高糖可诱导心肌细胞损伤;与HG组比较,48 h后HG+10 μmol/L PGZ、HG+ 15 μmol/L PGZ两组细胞活力均升高（P<0.05）,HG+20 μmol/L PGZ组细胞活力明显升高（P<0.01）,提示PGZ可对高糖环境下心肌细胞起保护作用。干预48 h后ELISA结果显示,HG组TNF-α、IL-1β含量与NG组比明显升高（P<0.01）,提示高糖环境可致心肌细胞发生炎性损伤;与HG组比较,Low组IL-1β含量降低（P<0.05）,High组TNF-α含量降低（P<0.05）,IL-1β含量明显降低（P<0.01）。提示PGZ可减轻高糖诱导心肌细胞炎性损伤。干预48 h后Western-blot结果显示,与NG组比较,HG组p-p65和p-p38蛋白表达水平均明显升高（P<0.01）;与HG组比较,Low组p-p65和p-p38蛋白表达均降低（P<0.05）,High组p-p65和p-p38蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）。提示PGZ可下调高糖诱导心肌细胞NF-κB/p38MAPK通路的表达。结论 PPAR-γ激动剂吡格列酮可以减轻高糖诱导H9c2大鼠心肌细胞的炎性损伤,其机制可能与抑制p38MAPK/NF-κB信号转导通路有关。     

晚期血吸虫病患者肝内T细胞亚群的免疫组织化学检测

采用免疫组织化学技术检测了22例晚期血吸虫病（下称晚血）患者肝内T细胞亚群。发现晚血患者肝内T细胞可集中分布于虫卵肉芽肿外层或者散在分布于非肉芽肿部位的虫卵附近，广泛纤维化的区域无T细胞浸润。肉芽肿和非肉芽肿部位的T细胞均以CD8 T细胞（抑制性／细胞毒T细胞）为主。晚血患者肝脏病变以汇管区纤维化为主，浸润细胞不多，仅27．27％（6／22）患者肝内存在已被免疫调节了的慢性虫卵肉芽肿。提示晚血患者肝内细胞免疫反应很弱，肝内的CD 8T细胞可能主要是抑制性T细胞（Ts）。     

扶正解毒化瘀颗粒对多器官损伤小鼠血清细胞因子的影响

目的 观察扶正解毒化瘀颗粒对克雷伯杆菌肺炎所致多器官损伤小鼠不同感染时相血清TNF-α、IL-1β、IFN-γ、IL-6及IL-10水平的动态变化,探讨其对促炎/抗炎细胞因子表达的影响。方法 将128只小鼠随机分为对照组、模型组、西药组和中药组,每组32只。采用气管插管法直接注入肺炎克雷伯杆菌制备多器官损伤模型,分别于造模后第1、3、5、7天每组各取8只小鼠,摘眼球采集血液,分离血清。采用ELISA法,检测不同感染时相小鼠血清中细胞因子TNF-α、IL-1β、IFN-γ、IL-6及IL-10水平。结果 与对照组比较,模型组小鼠在感染后第1天血清TNF-α、IL-1β、IFN-γ和IL-6含量分别为（202.07±22.82）、（502.11±29.44）、（186.50±10.32）、（204.98±8.15）pg/mL,其含量水平显著增高,差异有统计学意义（P<0.05）。IL-10在感染后第1、3、5天含量有所增高,但差异无统计学意义（P>0.05）,在感染后第7天含量为（134.34±0.46）pg/mL,差异有统计学意义（P<0.05）;中药组小鼠在感染后第1天血清TNF-α、IL-1β、IFN-γ和IL-6含量分别为（147.18±22.67）、（262.09±43.44）、（142.00±0.84）、（177.29±8.03）pg/mL,均显著低于模型组,差异有统计学意义（P<0.05）,在感染第3天后有所下降,但差异无统计学意义（P>0.05）。感染后第1、7天血清IL-10含量为（140.46±4.07）pg/mL和（136.48±0.10）pg/mL均显著增高,有统计学意义（P<0.05）;西药组小鼠在感染后第1天血清IL-6的含量（180.97±8.86）pg/mL、IFN-γ含量（144.39±14.67）pg/mL较模型组均显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 扶正解毒化瘀颗粒能够降低促炎细胞因子的表达,提高抗炎细胞因子的表达,通过调节促炎/抗炎细胞因子的表达,抑制机体炎症反应可能是其治疗多器官损伤的主要机制之一。     

PICK1经TGF-β/Nodal信号通路介导RSV感染小鼠的免疫抑制及气道高反应

目的 探究蛋白激酶Cα相互作用蛋白1（protein interacting with Cα kinase 1,PICK1）通过TGF-β/Nodal信号通路干预呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）感染小鼠支气管哮喘（bronchial asthma,BA）模型中免疫抑制及气道高反应的机制研究。方法 30只小鼠随机分为3组（n=10）,分别为对照组、BA组和FSC231组。BA组和FSC231组通过RSV建立BA模型,FSC231组小鼠同时腹腔注射PICK1抑制剂FSC231干预。通过HE染色观察各组小鼠肺组织病理学变化。通过肺功能仪检测气道阻力,计数肺泡灌洗液中EOS数目。通过酶联免疫吸附法检测IL-17、IL-10和IgE水平。流式细胞术检测血液中Th17和Tregs水平。结果 BA组肺泡结构紊乱,支气管狭窄,管壁增厚,出现炎性浸润。FSC231组支气管和肺泡结构严重损坏,并且支气管壁充血、增厚,支气管内阻塞,出现严重的炎性浸润现象。BA组的BALF中EOS计数、血清IgE水平、气道阻力、肺组织Nodal水平、Th17细胞比例和血清IL-17均高于对照组（P<0.05）,而FSC231组的BALF中EOS计数、血清IgE水平、气道阻力、肺组织Nodal水平、Th17细胞比例和血清IL-17则高于BA组（P<0.05）。相反,BA组的Treg细胞和IL-10低于对照组（P<0.05）,而FSC231组的Treg细胞和IL-10则低于BA组（P<0.05）。结论 抑制PICK1可能通过促进TGF-β/Nodal信号通路引起Th17细胞升高和Treg的降低,从而加重免疫抑制,进一步提高BA小鼠气道高反应。     

晚期血吸虫病患者肝内T细胞亚群的免疫组织化学检测

采用免疫组织化学技术检测了２２例晚期血吸虫病（下称晚血）患者肝内Ｔ细胞亚群。发现晚血患者肝内Ｔ细胞可集中分布于虫卵肉牙中外层或者菜知分布于非肉芽肿部位的虫卵附近，广泛纤维化的区域无Ｔ细胞浸润。肉芽肿和非肉芽肿部位的Ｔ细胞均以ＣＤ８＾＋Ｔ细胞（抑制性／细胞毒Ｔ细胞）为主。晚血患者肝脏病变以汇管区纤维化主，浸润细胞不多，仅２７．２７％（６／２２）患者肝内存在已被免疫调节了的慢性虫卵肉芽肿。提示晚血患者     

心脏MRI-T2*评价重型β-地中海贫血铁过载

目的 探讨心脏MRI-T2*评估重型β-地中海贫血铁过载的临床意义。方法 收集2010年8月—2015年9月中山大学孙逸仙纪念医院重型β-地中海贫血患者91例分别行心脏、肝脏MRI-T2*及血清铁蛋白（SF）、左室射血分数（LVEF）测定及肝组织活检,统计分析心脏MRI-T2*与肝脏MRI-T2*、SF、LVEF、肝铁沉积程度及肝纤维化水平的相关性。结果 91例重型β-地中海贫血患儿中28例(30.8%)发生心肌铁超负荷,其中重度13例（14.3%）,中度6例（6.6%）,轻度9例（9.9%）;肝脏铁过载81例(89.0%),其中重度23例（25.3%）,中度37例（40.7%）,轻度21例（23.1%）;SF>1 000 μg/L的84例（92.3%）,LVEF≤60%的30例（33.0%）。心脏和肝脏两脏器铁过载发生率对比差异有统计学意义（χ²=64.25,P<0.01）,但重度铁过载发生率对比差异无统计学意义（χ²=3.059,P>0.05）;28例心脏铁过载患者中发生重度心脏铁过载13例（46.4%）,81例肝铁过载患者中发生重度心铁过载的患者为11例（13.6%）,重度心脏铁过载发生率对比差异有统计学意义（χ²=13.076,P<0.01）。心脏MRI-T2*与SF呈低度负相关（r=-0.307,P=0.003）,与肝脏MRI-T2*呈低度正相关（r=0.367,P<0.001）,与LVEF呈正相关（r=0.429,P<0.001）,心脏MRI-T2*、LVEF与肝活检铁沉积程度、肝纤维化水平均无相关性（P>0.05）。结论 心脏MRI-T2*在重型β-地中海贫血患者铁过载检测中具有重要意义,可作为心脏等重要脏器铁过载的主要诊断指标。     

艾滋病合并肺结核患者IL-6、hs-CRP、TNF-α水平和危险因素分析

目的 探究艾滋病（AIDS）合并肺结核的危险因素及患者白介素-6（IL-6）、超敏C-反应蛋白（hs-CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平检测的临床意义。方法 在2010年1月—2020年12月发现515例AIDS患者中,选择73例AIDS合并肺结核患者为研究组,分析其感染性特点及临床特征。并以同期51例AIDS未合并肺结核患者为对照组,分别采用Logistic回归、ROC曲线分析AIDS患者合并肺结核的危险因素及各危险因素对其出现肺结核的预测价值;比较研究组及对照组的IL-6、hs-CRP、TNF-α水平,分析其与AIDS患者合并肺结核的关系。结果 研究组和对照组基线CD4⁺T细胞≤200个/μL、吸烟和结核病患者接触史比例分别为57.5%（42/73）和33.3%（17/51）、38.4%（28/73）和19.6%（10/51）、46.6%（34/73）和23.5%（12/51） ,而卡介苗接种史比例分别为24.7%（18/73）和45.1%（23/51） ,差异均有统计学意义（χ²=7.050,4.965,6.834,5.668,P<0.05）;基线CD4⁺T细胞≤200个/μL、有结核病患者接触史为导致AIDS患者合并肺结核的危险因素,有卡介苗接种史为保护因素（P<0.05）;基线CD4⁺T细胞、吸烟、结核病患者接触史、卡介苗接种史联合检测预测AIDS患者合并肺结核的AUC大于各指标单独检测（P<0.05）;研究组IL-6、hs-CRP、TNF-α水平高于对照组（P<0.05）。结论 AIDS合并肺结核患者IL-6、hs-CRP、TNF-α水平显著升高,基线CD4⁺T细胞≤200个/μL、有结核病患者接触史为导致AIDS患者合并肺结核的危险因素,且各危险因素联合检测对AIDS患者合并肺结核具有预测价值。     

实验动物肉芽肿及血吸虫虫卵肉芽肿

血吸虫病是在人类中流行最广泛的一种寄生虫病。世界卫生组织专家 Wright 推算在71个国家约有1.25亿人患该病,有5.2亿人受到感染的威胁,每年因患此病而降低生产率所造成的损失估计有6.4亿美元(此尚不包括公共卫生规划、医疗的补偿费用(1)。虫卵性肉茅肿是血吸虫病的主要病理损害,主要发生在肝脏、肠道、肺、脑及泌尿系统。该病的病理过程主要是由于虫卵释放可溶性虫卵抗原(SEA)所引起的,以细胞免疫反应为主的免疫病理过程,表现为迟发型超敏反应。虫卵肉芽肿的最后结局是导致肝脏广泛的干线型纤维化,肝硬化和门脉系统高压,临床表现为严重的血吸虫病性肝脾综合症。     

Enhanced expression of the decoy receptor IL-13Rα2 in macrophages of Schistosoma japonicum-infected mice

Background Type 2 cytokine interleukin （IL）-13 and its decoy receptor, IL-13 receptor （R）a2 appear to play a major role in tissue fibrosis of schistosomiasis and asthma. IL-13 is a key regulator of the extracellular matrix （ECM）. It is known to signal to cells by binding to the IL-13Rα1, which then heterodimerizes with IL-4Rα. In contrast, IL-13Rα2 binds IL-13 with high affinity but does not signal. IL-13Rα2 is known to down-regulate granulomatous inflammation and prolong host survival in Schistosoma mansoni （S. mansoni） infection, but little is known about the location and expression level of IL-13Rα2 in the context of S. japonicum infection. Methods We established S. japonicum-infected mouse models. Kinetic serum levels of IL-13Rα2 were examined with ELISA. IL-13Rα2 mRNA and protein of liver tissues were determined by PCR and immunoblotting analysis, respectively. Detection of IL-13Rα2 expression and location in macrophages was performed by TaqMan PCR and fluorescent immunocytochemistry technique, respectively. Results A marked elevation of mRNA and protein expression of IL-13Rα2 was observed in mice during S. japonicum infection. An enhanced expression of IL-13Rα2 was further demonstrated in primary macrophages of murine schistosomiasis. Conclusions IL-13Rα2 in macrophages may be a critical contributor to pathogenesis of schistosomiasis. The data highlight the potential importance of cell signaling and antifibrotic gene therapeutics in T helper 2 cell （Th2）-mediated diseases.     

Th_2细胞因子在日本血吸虫小鼠肝脏中的变化及其与肝纤维化的比较

为探讨Ｔｈ２细胞因子在感染日本血吸虫小鼠肝脏中的变化及其在肝纤维化中的意义，采用ＡＢＣ免疫组化法，ＶＧ染色及多媒体病理图文定量分析，研究感染后ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１０和肝内胶原纤维的变化。结果发现：小鼠肝脏ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１０随感染时间延长而明显升高，肝内胶原纤维化程度随感染时间延长而逐渐增多和加强，与Ｔｈ２细胞因子表达呈显著正相关。提示小鼠肝脏是感染血吸虫后机体免疫应答场所之一，Ｔｈ２细胞因子在血吸虫肝脏肉芽肿及纤维化形成中起重要介导作用。     

Effects of HDAC4 on IL-1β-induced matrix metalloproteinase expression regulated partially through the WNT3A/β-catenin pathway

Background:Histone deacetylase 4 (HDAC4) regulates chondrocyte hypertrophy and bone formation. The aim of the present study was to explore the effects of HDAC4 on Interleukin 1 beta (IL-1β)-induced chondrocyte extracellular matrix degradation and whether it is regulated through the WNT family member 3A (WNT3A)/β-catenin signaling pathway.Methods:Primary chondrocytes (CC) and human chondrosarcoma cells (SW1353 cells) were treated with IL-1β and the level of HDAC4 was assayed using Western blotting. Then, HDAC4 expression in the SW1353 cells was silenced using small interfering RNA to detect the effect of HDAC4 knockdown on the levels of matrix metalloproteinase 3 (MMP3) and MMP13 induced by IL-1β. After transfection with HDAC4 plasmids, the overexpression efficiency was examined using Real-time quantitative polymerase chain reaction (qRT-PCR) and the levels of MMP3 and MMP13 were assayed using Western blotting. After incubation with IL-1β, the translocation of β-catenin into the nucleus was observed using immunofluorescence staining in SW1353 cells to investigate the activation of the WNT3A/β-catenin signaling pathway. Finally, treatment with WNT3A and transfection with glycogen synthase kinase 3 beta (GSK3β) plasmids were assessed for their effects on HDAC4 levels using Western blotting.Results:IL-1β downregulated HDAC4 levels in chondrocytes and SW1353 cells. Furthermore, HDAC4 knockdown increased the levels of MMP3 and MMP13, which contributed to the degradation of the extracellular matrix. Overexpression of HDAC4 inhibited IL-1β-induced increases in MMP3 and MMP13. IL-1β upregulated the levels of WNT3A, and WNT3A reduced HDAC4 levels in SW1353 cells. GSK-3β rescued IL-1β-induced downregulation of HDAC4 in SW1353 cells.Conclusion:HDAC4 exerted an inhibitory effect on IL-1β-induced extracellular matrix degradation and was regulated partially by the WNT3A/β-catenin signaling pathway.     

短链脂肪酸通过抑制HDAC8/9促进PD小鼠肠道细胞炎症反应

目的 探索短链脂肪酸（short-chain fatty acids,SCFA）对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahy dropyridine,MPTP）诱导的帕金森病（Parkinson’s disease,PD）模型小鼠肠道炎症的影响。方法 构建MPTP诱导的亚急性PD模型小鼠;利用高效液相色谱（high-performance liquid chromatography,HPLC）方法检测不同组小鼠纹状体内神经递质的含量。同时利用实时定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)分析肠道炎症因子干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ)、白介素-4(interferon-4,IL-4)和组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylases,HDAC）的表达。通过四甲基偶氮唑盐比色法（methyl thiazolyl tetrazolium assay,MTT）选择SCFA体外实验的安全浓度,检测不同SCFA对S...     

日本血吸虫感染致肝纤维化家兔肝脏微循环病变观察

目的 研究日本血吸虫感染致肝纤维化家兔的肝脏微循环病变。方法 对30只日本血吸虫感染致肝纤维化家兔和10只正常家兔取肝组织行光镜和电镜观察肝脏微循环病变。结果 HE染色示汇管区可见虫卵沉积，虫卵周围炎性细胞浸润。Mallory三色染色见肝内门静脉、肝动脉管壁纤维结缔组织增多，中膜平滑肌增殖肥大。透射电镜下见肝窦内皮受损严重，细胞大多崩解、破裂，窦内可见炎性细胞浸润，毛细胆管扩张，肝细胞肝窦面的微绒毛减少或断裂，肝窦呈毛细血管化。结论 肝脏微循环障碍是形成血吸虫肝纤维化门脉高压的发病基础之一。     

T Helper 1 and T Helper 2 Cytokines Differentially Modulate Expression of Filaggrin and its Processing Proteases in Human Keratinocytes

Background:

Atopic dermatitis (AD) is characterized by defective skin barrier and imbalance in T helper 1/T helper 2 (Th1/Th2) cytokine expression. Filaggrin (FLG) is the key protein to maintaining skin barrier function. Recent studies indicated that Th1/Th2 cytokines influence FLG expression in keratinocytes. However, the role of Th1/Th2 cytokines on FLG processing is not substantially documented. Our aim was to investigate the impact of Th1/Th2 cytokines on FLG processing.

Methods:

HaCaT cells and normal human keratinocytes were cultured in low and high calcium media and stimulated by either interleukin (IL)-4, 13 or interferon-γ (IFN-γ). FLG, its major processing proteases and key protease inhibitor lymphoepithelial Kazal-type-related inhibitor (LEKTI) were measured by both real-time quantitative polymerase chain reaction and Western blotting. Their expression was also evaluated in acute and chronic AD lesions by immunohistochemistry.

Results:

IL-4/13 significantly reduced, while IFN-γ significantly up-regulated FLG expression. IL-4/13 significantly increased, whereas IFN-γ significantly decreased the expression of kallikreins 5 and 7, matriptase and channel-activating serine protease 1. On the contrary, IL-4/13 significantly decreased, while IFN-γ increased the expression of LEKTI and caspase-14. Similar trends were observed in AD lesions.

Conclusions:

Our results suggested that Th1/Th2 cytokines differentially regulated the expression of major FLG processing enzymes. The imbalance between Th1 and Th2 polarized immune response seems to extend to FLG homeostasis, through the network of FLG processing enzymes.