中央空调冷却塔水嗜肺军团菌PFGE分子分型

目的 了解中山市中央空调冷却塔水血清1型（LP1）及血清7型（LP7）嗜肺军团菌脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型情况。方法 对2012—2014年从中山市部分酒店、娱乐场所、商场、医院等公共场所中央空调冷却塔水样本中分离出的41株LP1型嗜肺军团菌和12株LP7型嗜肺军团菌进行脉冲场凝胶电泳,运用Bio Numerics6.6软件进行聚类分析。结果 按照100%的相似程度,41株LP1型嗜肺军团菌分为26种PFGE型别,每个带型包括1~6株菌,菌株之间的相似系数为16.6%~100%;12株LP7型嗜肺军团菌分为10种PFGE型别,每个带型包括1~2株菌,菌株之间的相似系数为19.3%~100%。不同地区和不同年份分离的菌株存在相同的PFGE型别;同一场所可存在相同的PFGE型别,也可跨月份或年份存在不同的型别。按照90%以上的相似程度, LP1型嗜肺军团菌有4个克隆群,包含的菌株数和PFGE带型占其血清型别分离株总数以及PFGE型别总数的51.2%（21/41）和30.8%（8/26）;LP7型嗜肺军团菌有2个克隆群,包含的菌株数和PFGE带型占其血清型别分离株总数以及PFGE型别总数的50.0%（6/12）和40.0%（4/10）。克隆群在空间和时间分布上无明显差异。结论 中山市中央空调冷却塔水中LP1型及LP7型嗜肺军团菌分离株存在广泛的PFGE基因型别,未形成某一优势基因群的地区优势及时间趋势。     

深圳市龙岗区空肠弯曲菌的流行状况及分子分型

目的了解并分析深圳市龙岗区腹泻患者粪便、禽肉类等样品中空肠弯曲菌的流行状况及同源性。方法对2016年5—12月深圳市龙岗区某医院腹泻患者粪便或肛拭子样品和来自养鸡场、农贸市场、超市等地的禽畜类等样品进行空肠弯曲菌分离培养,菌株经镜检和生化鉴定后再使用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)对其进行全基因组分子分型。最后应用Bio Numerics软件进行聚类分析。结果 41份腹泻患者样品分离出5株空肠弯曲菌,分离率为12.2%,全部阳性样品均来自11岁以下儿童。53份来自食品和外环境样品分离出14株空肠弯曲菌,分离率为26.4%,其中来自农贸市场的分离率为57.1%(8/14),来自不同超市样品空肠弯曲菌的分离率为11.1%(4/36)。18株菌呈现15种PFGE带型,其中来自市场1的3株菌株带型完全一致,且与病例1只有一条带的差异;来自市场2与病例5的带型完全一致且与病例4的带型只有一条带的差异。结论深圳市龙岗区腹泻患者空肠弯曲菌感染率较高,感染可能是由于食用了来自市场未煮熟的食物或接触了来自市场被空肠弯曲菌污染的食物,农贸市场存在空肠弯曲菌的交叉污染,该地区空肠弯曲菌呈现多样性。     

江苏省张家港市2017年人源沙门菌血清型特征及分子分型

目的 分析2017年张家港检出的92株人源沙门菌的血清学特征,用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术对优势血清群进行分子分型研究,为该地区沙门菌菌型库积累数据。方法 收集和提取2017年张家港地区人源沙门菌患者血清学特征,对优势群B群沙门菌进行PFGE分子分型检测,利用PulseNet China网络获得相关性指纹图谱并进行聚类分析。结果 92株沙门菌分离株分布7个血清群和16个血清型,以B群为主（33.70％）,30株B群沙门菌PFGE指纹图谱可分为26个基因型（相似值100% 为同一PFGE 型别）,19个克隆系（相似度在0.85~1.00的为同一PFGE的克隆系）。其中9株德尔卑沙门菌可分为5个克隆系7个基因型,7个基因型相似度60.92％~100％;7株阿贡那沙门菌PFGE指纹图谱5个克隆系6个基因型,6个基因型相似度0~100%;6株鼠伤寒沙门菌可分为3个克隆系5个基因型,5个基因型相似度48.51％~100％。结论 张家港市人源沙门菌血清型多样化分布,B群沙门菌为优势血清群。沙门菌PFGE带型较多,基因多态性较高,同一血清型可获得不同PFGE指纹图谱。其中德尔卑沙门菌亲缘关系近,鼠伤寒部分菌株存在较近的亲缘关系,阿贡那沙门菌各克隆系存在明显差异,亲缘关系较远。     

上海市宝山区2015—2018年腹泻病人沙门菌血清分型和分子分型

目的 揭示上海市宝山区腹泻病人分离沙门菌的血清型和分子分型分布特征。方法 对2015—2018年分离的118株沙门菌进行血清分型和脉冲场凝胶电泳（pulsed-field gel electrophoresis,PFGE）分型,通过构建聚类树揭示不同血清型菌株的分子分型特征。结果 118株沙门菌分为25种血清型,前三位为肠炎沙门菌（45株,38.1%）、鼠伤寒沙门菌（26株,22.0%）、伦敦沙门菌（11株,9.3%）。其余22种血清型分别只包含1~3株菌。118株沙门菌通过PFGE分为71个PFGE带型,每个带型分别包含1~19株菌。45株肠炎沙门菌分为8个PFGE带型,相似度为75.0%~100.0%,在聚类树上形成一个簇;26株鼠伤寒沙门菌分为21个PFGE带型,相似度为48.0%~100.0%,在聚类树上形成两个簇;11株伦敦沙门菌分为8个PFGE带型,相似度为80.0%~100.0%,在聚类树上形成一个簇。结论 肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌是上海市宝山区腹泻病人沙门菌优势血清型,但近年伦敦沙门菌有增多的趋势。肠炎沙门菌在本地区传播流行过程中的遗传变异相对比较保守,鼠伤寒沙门菌基因型多态性大,而且存在两个克隆。     

广东省中山市2018—2019年沙门菌血清型分布、耐药性及分子分型

目的 了解中山市沙门菌的血清型分布、分子分型特征以及对抗生素的耐药情况。方法 对2018—2019年中山市哨点医院以及食物中毒事件采集检出的沙门菌进行血清型分型,采用微量肉汤稀释法（MIC）对15种药物进行药物敏感试验,应用脉冲场凝胶电泳法（pulse-field gel electrophoresis, PFGE）对3种优势血清型沙门菌进行分子分型。结果 509株沙门菌共鉴定出44种血清型,优势血清型为鼠伤寒沙门菌单相变种（173/509,34.0%）、鼠伤寒沙门菌（107/509,21.0%）、肠炎沙门菌（93/509,18.3%）和斯坦利沙门菌（21/509,4.1%）。179株沙门菌中耐药菌株占93.9%（168/179）,多重耐药菌株占85.5%（153/179）。共产生82种耐药谱,最常见的耐药谱为AMP-AMS-TET-CHL-SXT-CFZ-Sul和AMP-TET-CHL-SXT-Sul。暂未检出对亚胺培南耐药的菌株,对其余14种试验药物均存在耐药现象,其中对氨苄西林、四环素、磺胺异噁唑、氯霉素、复方新诺明耐药率均超过60%。耐受10种及以上抗生素的菌株有22株,占12.3%（22/179）。42株鼠伤寒沙门菌单相变种分出40个PFGE带型,各型别相似度为52.2%~100.0%;32株鼠伤寒沙门菌分出24个PFGE带型,各型别相似度为48.9%~100.0%;21株肠炎沙门菌分出9个PFGE带型,各型别相似度为55.5%~100.0%。结论 中山市沙门菌血清型主要为鼠伤寒沙门菌单相变种、鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌,多重耐药现象严重,PFGE分子分型结果呈多样性。     

广州地区食品分离空肠弯曲菌的病原及分子分型分析

目的了解广州地区食品中空肠弯曲菌的污染状况及菌株分子型别特征。方法采用传统生化鉴定、荧光免疫分析及PCR方法分离和鉴定所分离的菌株,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对菌株进行分子分型分析。结果从100份检材中分离到10株空肠弯曲菌,不同方法得到一致的鉴定结果。10株菌经PFGE分析共得到3个聚类群。结论传统生化鉴定与PCR方法相结合能有效地从食品中进行空肠弯曲菌的分离和鉴定,食品分离的空肠弯曲菌中存在PFGE型的多态性。     

广东省中山市2017年沙门菌耐药菌谱及分子分型分析

目的 了解中山市2017年沙门菌的耐药特征及分子分型,为临床合理用药和食源性疾病的溯源提供科学依据。方法 对中山市2017年食源性疾病监测（3个哨点医院）的沙门菌分离株采用微量肉汤稀释法进行14种抗生素药敏试验,运用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术对肠炎沙门菌进行分子分型。 结果 中山市2017年食源性疾病监测检出的285株沙门菌对14种抗生素敏感性试验结果显示,237株（占83.16％）沙门菌对13种抗生素呈现不同程度的耐药性,未发现对亚胺培南（IPM）耐药菌株。耐药抗生素最多的种类达到11种,耐药率较高（40 %以上）的抗生素为氨苄西林（AMP）、四环素（TET）、氨苄西林/舒巴坦（SAM）、氯霉素（CHL）;共有87类耐药谱型,其中多重耐药谱型75类（86.21%）,多重耐药菌株数为176株（61.75%）。25株肠炎沙门菌的PFGE分为5种带型,相似度为63.9%~100.0%。结论 中山市2017年食源性疾病监测显示沙门菌耐药状况较为严重,呈多重性和多态性,应采取综合措施控制耐药性;肠炎沙门菌PFGE的相似度较高,存在优势带型。     

深圳市龙岗区空肠弯曲菌感染状况及耐药性分析

目的了解深圳市龙岗区腹泻人群中空肠弯曲菌的感染状况及其耐药性。方法收集2016年9月-2017年3月深圳市龙岗区某医院腹泻患者粪便或肛拭子样品和来自龙岗中心城养鸡场、农贸市场、超市等地的活禽与肉类等样品进行空肠弯曲菌分离培养和鉴定,并对分离得到的菌株进行耐药性分析。结果 51份腹泻患者样品分离出6株空肠弯曲菌,阳性率为11.76%,全部阳性样品均来自11岁以下儿童。60份食品和外环境的样品分离出21株空肠弯曲菌,阳性率为35.00%,其中来自农贸市场的阳性率为57.14%(8/14),来自不同超市的阳性率为25.58%(11/43)。空肠弯曲菌对萘啶酸、环丙沙星、四环素的耐药率在90%以上,食品来源和人源的阳性菌株对萘啶酸、环丙沙星或四环素全部耐药。人源菌株对5种抗生素产生耐药的占16.67%。食品来源菌株中有47.62%对6种抗生素产生耐药作用,其中有9.52%的菌株对11种抗生素全部耐药。结论深圳市龙岗区空肠弯曲菌感染率较高,所分离的菌株耐药现象较为严重且均具有多重耐药性,人源和食品来源的耐药谱相一致,应对抗生素在临床治疗和禽畜类养殖中的使用进行长期系统的监测,并加强用药管理。     

惠州市熟肉制品中金黄色葡萄球菌污染状况及PFGE分型

目的 研究惠州市熟肉制品中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, SA)污染状况及脉冲场凝胶电泳（pulsed-field gel electrophoresis, PFGE）分型及分布特点,建立本地区SA的PFGE分型数据库。为开展食品安全风险评估和预防控制相关食源性疾病提供科学依据。方法 按照GB 4789.10《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》方法,对惠州市熟肉制品进行SA检测并对检出的菌株进行葡萄球菌肠毒素测定;应用PFGE分型技术对检出的菌株进行电泳分析获得指纹图谱,并用BioNumerics软件进行聚类分析。结果 惠州市2014—2017年共监测572份熟肉制品,检出金黄色葡萄球菌污染41份,检出率7.17%,其中含葡萄球菌肠毒素17株,检出率为41.46%;41株SA经聚类分析得到34个PFGE型别,菌株间相似性系数在51.70%~100.00%之间。结论 惠州市熟肉制品存在一定程度SA污染,且SA的PFGE分型型别较多,菌型分散,部分菌株之间存在一定程度的相关性,未发现单个型别的菌株流行的迹象。PFGE对SA同源性分析,评价SA的流行趋势、分布特点和相关食源性疾病的溯源工作具有重要的意义。     

广东省东莞市2012—2018年黄金海岸沙门菌临床分离株的病原学特征

目的 通过分析2012—2018年东莞市黄金海岸沙门菌临床分离株的病原学特征,为早期发现该罕见血清型沙门菌引起的聚集病例的及时干预和控制提供病原学依据。方法 对东莞市2012—2018年食源性疾病监测中分离的30株黄金海岸沙门菌临床分离株进行复核鉴定、血清分型、抗生素敏感性试验和脉冲场凝胶电泳（PFGE）的分子分型。结果 30株黄金海岸沙门菌抗原式均为6,8∶r∶l,w,每年菌株数量的构成比有随年度增加而增高的趋势,且差异有统计学意义（χ²=19.67,P<0.05）。东莞市黄金海岸沙门菌对磺胺异噁唑、四环素、复方新诺明、氯霉素、链霉素的耐药率较高,分别为90.0%、90.0%、80.0%、80.0%和76.7%;对头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟、亚胺培南的敏感率达到100%;对3类及3类以上抗生素耐药的菌株数达到25株,占比为83.33%。30株黄金海岸沙门菌共分为12个PFGE 型,其中2种PFGE型包含条带的相似率为100%的谱型分别为DG-GC06型15株和DG-GC12型3株。结论 东莞市黄金海岸沙门菌的构成比在2012—2018年间呈逐年上升趋势,多重耐药现象严重,且存在潜在暴发现象,应加强暴发发现、流行病学调查及耐药监测。     

Genetic and Antibiotic Resistance Characteristics of Campylobacter jejuni Isolated from Diarrheal Patients,Poultry and Cattle in Shenzhen

Objective To investigate genetic and antibiotic resistance characteristics of Campylobacter jejuni(C. jejuni) isolated from Shenzhen. Methods Multilocs sequence typing and agar dilution methods were used to define the genotype and antibiotic resistance of C. jejuni, respectively. Results In total, 126 C. jejuni strains were isolated. The prevalence of C. jejuni was 5.3% in diarrheal patients. The prevalence in poultry meat(36.5%) was higher than that in cattle meat(1.1%). However, the prevalence in poultry cloacal swabs(27.0%) was lower than that in cattle stool(57.3%). Sixty-two sequence types were obtained, among which 27 of the STs and 10 alleles were previously unreported. The most frequently observed clonal complexes were ST-21(11.9%), ST-22(10.3%), and ST-403(7.1%). ST-21, ST-45, ST-354, ST-403, and ST-443 complexes overlapped between isolates from patients and cattle, whereas ST-45 and ST-574 complexes overlapped between isolates from patients and poultry. All C. jejuni were resistant to at least one antibiotic. The highest resistance rate was toward ciprofloxacin(89.7%), followed by tetracycline(74.6%), and nalidixic acid(69.0%). Conclusion This is the first report of the genotypes and antibiotic resistance of C. jejuni in Shenzhen. Overlapping clonal complexes were found between isolates from patients and cattle, and between patients and poultry.     

广东省东莞市脑膜炎奈瑟菌多位点序列分型研究

目的 对东莞市2004—2017年分离的41株脑膜炎奈瑟菌（Neisseria meningitidis,Nm）进行基因分型研究,了解菌株间的遗传进化关系。方法 采用多位点序列分型（MLST）技术、进化分析软件BioNumerics 7.5及聚类分析软件eBURST V3对菌株进行核酸序列分析。结果 41株脑膜炎奈瑟菌分为A、B、C、W135四个群,其中1株A群、9株B群、23株C群、8株W135群。共有11个不同STs,分别属于ST-4821、ST-11、ST-5、ST-41/44克隆群及4个无序列分类（UA）,另有1株B群及1株C群菌株无法得到ST型。其中ST-4821 Complex及ST-11 Complex为主要克隆群,分别占61.54%、23.08%。不同血清群其STs/ST-Complex 有明显不同：C群菌株以ST-4821 Complex为主,有 ST-4821、ST-4831、ST-4833、ST-5798型,其中ST-4821型有3种基因序列;W135群全为ST-11 Complex,有ST-11和ST-5412型,ST-11集中在2015年分离出的菌株,均同源;A群仅有1株ST-5型;B群较分散。eBURST V3 聚类分析发现,东莞市ST-11 Complex基因型相对稳定,ST-4821Complex 基因型已具遗传多样性。结论 东莞市Nm 分子型具有基因多样性,以C群（ST-4821/ST-4821 Complex）和W135群（ST-11/ST-11 Complex）两大克隆群占绝对优势,B 群呈分散状态出现在不同的ST克隆群中,可能不同血清群之间已产生荚膜转换,提示B群出现基因重组进化特征。     

广东省茂名市2017—2018年空肠弯曲菌食品分离株病原特征

目的 采集2017—2018年茂名市禽类和畜类食品（仅宰杀切割）,了解空肠弯曲菌携带率,分析其病原学特征。方法 对茂名市禽类和畜类食品（仅宰杀切割）监测过程中分离的空肠弯曲菌进行了抗生素敏感性检测、耐药基因检测和全基因组测序,并基于全基因测序进行遗传进化分析。结果 2017—2018年共检出空肠弯曲菌食品分离株14株,对链霉素、环丙沙星、克林霉素、萘啶酸、阿奇霉素、强力霉素、四环素等抗生素高度耐药,携带着多种耐药基因;基于全基因组的遗传进化分析显示,茂名市检出的12株空肠弯曲菌分离株处在不同进化分支上,显示出多样遗传性。结论 在茂名地区,家禽和畜牧类食品的空肠弯曲菌感染率很高,具有多种抗药性,对畜牧农场和饲料中这种细菌抗药性的监测需要加强,以便为有效防治空肠弯曲菌引起的相关疾病提供参考。     

Relationship between pathogenesis of Guillain-Barre syndrome and Penner's serotypes of Campylobacter jejuni.

OBJECTIVE To investigate the relationship between the pathogenesis of Guillain-Barre syndrome (GBS) and Campylobacter jejuni (C. jejuni) in China.

METHODS C. jejuni strains were isolated from fresh stools of 47 GBS patients in Beijing area from 1995 to 1997 by modified Skirrow's method. Serotyping of C. jejuni was performed with Penner's method in 47 GBS patients and 171 patients with C. jejuni enteritis in our hospital during the same period. The stools from which no C. jejuni strains could be isolated were typed by PCR-RFLP (restriction fragment length polymorphism) method.

RESULTS Six C. jejuni strains were isolated by Skirrow's method, including 3 strains of Penner serotype 2, 1 Penner serotype 4, 1 Penner serotype 19 and 1 Penner serotype 26. Three strains of DNA-I, which was equal to the same type of Penner serotype 19, were found by PCR-RFLP method.

CONCLUSIONS C. jejuni isolated from Beijing area are similar to those reported in literature, which once more confirms the molecular mimicry pathogenetic theory of GBS caused by C. jejuni infection in China. The similarities of serotypes between C. jejuni strains from GBS patients and those from C. jejuni enteritis patients may explain the high incidence of GBS following C. jejuni infection in China.

     

深圳市市售家禽空肠弯曲菌带菌状况调查

目的了解深圳市当前三鸟市场鸡、鸭、鹅的空肠弯曲菌带菌情况,为进一步开展食品安全性研究,制定防控食源性空腑弯曲菌病的措施提供科学依据。方法从三鸟批发市场采取三鸟肛拭标本,依据GB/T4789．19—2003方法进行细菌检验。结果50份鸡肛拭子共检出空肠弯曲菌20株,阳性率为40％;20份鸭肛拭子共检出空肠弯曲菌2株,阳性率为10％;30份鹅肛拭子共检出空肠弯曲菌6株,阳性率为20％。检出的空肠弯曲菌均为空肠亚种。结论深圳市活禽空腑弯曲菌感染或带菌率较高,如果在销售或加工过程中卫生质量不良,会对消费者的健康构成潜在威胁。     

广东省茂名市副溶血弧菌涉水产品分离株病原学特征

目的 了解茂名市涉水产品中副溶血弧菌分离株的病原学特征。方法 对茂名市食品安全风险监测中分离到的副溶血弧菌进行血清分型、抗生素敏感性实验、毒力基因检测、脉冲场凝胶电泳( PFGE) 分子分型和多位点序列分型（MLST）。结果 2017—2018年共分离到涉水产品中副溶血弧菌分离株44株,O型共分7个血清型,无明显优势血清型。44株分离株除对氨苄西林和头孢唑林表现出高度的耐药性外,对其它抗生素均敏感,未发现有分离株携带tdh和trh基因。44株分离株分成44种不同的PFGE带型,MLST分型发现有30个新的ST型,呈现一定的遗传多样性。结论 广东省茂名市涉水产品中副溶血弧菌分离株血清型别多样,对大部分的抗生素敏感,均未发现携带tdh和trh 基因,且呈现一定的遗传多态性,需要继续加大监测的力度和范围。     

深圳市甲型副伤寒PulseNet数据库的建立与应用

目的建立深圳市甲型副伤寒PulseNet数据库,用于甲型副伤寒的实时监测和分子流行病学调查。方法采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术,对深圳市2002-2007年散发和爆发的243株甲型副伤寒沙门菌的染色体DNA进行酶切电泳,用BioNumerics软件对PFGE分型图谱电子化数据分析,建立分子分型数据库。结果深圳市甲型副伤寒菌株各年间差异较小,用Xba酶切仅呈现6种PFGE图谱。同一起甲副暴发的临床分离株具有相同的PFGE图谱。各区和各年代的分离株都存在有相同的PFGE带型。结论深圳市甲型副伤寒沙门菌变异较小,呈长期流行趋势,甲型副伤寒PulseNet数据库的初步建立,对直观地分析各起疫情之间的相互关系,对疫情的控制和传染来源的追踪具有重要意义。