CD7抗原在急性髓系白血病微小残留病灶检测中的应用研究

目的研究CD7抗原在急性髓系白血病(AML)中的表达及CD7在AML微小残留病灶(MRD)检测中的意义。方法选取安阳地区医院2012年5月至2015年6月收治的186例初发AML患者,应用流式细胞术(FCM)进行免疫表型分析,观察CD7在骨髓原始细胞中的表达情况。对于完全缓解的CD7+AML患者,将其他多种髓系抗体与CD7构成组合,进行MRD检测;对于CD7-AML完全缓解患者,根据初发免疫表型进行多种髓系抗体组合,进行MRD检测。以MRD≥1.0×10~(-4)者计为阳性,MRD<1.0×10~(-4)计为阴性,跟踪随访3~24个月,记录MRD值、是否复发及骨髓确诊复发时间。结果 186例AML患者中检测出51例CD7+患者,对达完全缓解的33例患者,应用FCM进行MRD追踪检测,检测到26例MRD阳性患者中的21例骨髓复发,7例阴性患者中的3例骨髓复发。CD7+组MRD阳性复发率为63.6%。CD7-组135例,对达完全缓解的90例患者应用FCM进行MRD追踪,检测到35例MRD阳性患者中的20例复发,55例阴性患者中的17例骨髓复发,CD7-组MRD阳性复发率为22.2%。CD7+组MRD阳性患者复发率比CD7-组MRD阳性患者高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在CD7+AML患者MRD检测中,CD7抗原与其他髓系抗原组合能够很好区分正常细胞和白血病细胞。CD7抗原可以作为AML-MRD检测的重要指标,为调整AML治疗策略提供依据。     

CD123在儿童急性B淋巴细胞白血病中的表达及其在微小残留病检测中的应用

目的:检测细胞表面抗原CD123在儿童急性B淋巴细胞白血病(B-lineage acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)中的表达,并探讨其在儿童B-ALL微小残留病(minimal residual disease,MRD)检测中的应用及意义。方法:以健康儿童骨髓淋巴细胞为对照,应用多参数流式细胞术检测91例儿童B-ALL患者骨髓淋巴细胞免疫表型及CD123的表达,其中78例B-ALL患者进行了骨髓细胞染色体培养及细胞遗传学分析。用CD10/CD123/CD34/CD19等抗体组合对其中CD123阳性表达的65例B-ALL患者进行MRD标记的筛选和监测。结果:健康儿童骨髓淋巴细胞CD123为阴性表达,91例儿童B-ALL患者中65例骨髓淋巴细胞CD123阳性表达(阳性率71.43%),且表达水平与白血病细胞成熟度呈负相关,CD34高表达患儿CD123表达水平高于CD34低表达患儿;细胞遗传学分析超二倍体组患儿CD123表达水平高于非超二倍体组;筛选到47例(占51.65%)B-ALL患儿CD123高表达。结论:儿童B-ALL患者多数表达CD123,表达水平与细胞成熟度呈负相关,CD123可用作B-ALL患儿的MRD监测标记。     

三色流式细胞术在急性白血病免疫分型中的临床应用

目的　探讨建立利用CD4 5 /SSC组合及设门技术 ,直接溶血的三色流式细胞术 ,在急性白血病患者骨髓白血病细胞免疫分型的临床应用及其意义。方法　待测骨髓标本以CD4 5 -PC5和一组针对不同细胞抗原系列的单克隆抗体标记 ,用CD4 5 -PC5 /SSC设门 ,进行三色荧光染色后上流式细胞仪检测 ,分析白血病细胞的免疫表型。结果　CD4 5和SSC将白血病细胞从正常的淋巴细胞、单核细胞、粒细胞和有核红细胞中区分开 ,33例急性白血病患者骨髓中在原始细胞部位出现异常增高的原始细胞群 ,确定其免疫表型特点。结论　利用CD4 5 /SSC组合及设门技术 ,直接溶血的三色流式细胞术进行急性白血病免疫分型 ,该技术明显优于传统的前向散射对侧向散射设门的方法 ,有助于指导临床治疗及判断预后。     

流式细胞术在急性白血病微量残留测定中的应用分析

目的流分析式细胞术在急性白血病微量残留(MRD)检测中的应用价值。方法选取2012年1月至2014年7月河南省安阳地区医院收治的86例急性白血病患者,其中急性髓细胞白血病54例、急性淋巴细胞白血病32例,自诱导缓解后每次化疗前行骨髓穿刺检查,标本经流式细胞仪分析,根据初次免疫分型结果行MRD测定,MRD≥0.1%为MRD阳性标准。结果 MRD阳性患者复发率高于MRD阴性者,差异有统计学意义(P<0.05)。自发现急性白血病MRD阳性至疾病复发的时间为1~12个月,多数病例在发现急性白血病MRD阳性4个月左右出现细胞形态学复发。结论流式细胞术测定MRD能够预测疾病预后。     

淋巴细胞指数在评估成人急性淋巴细胞白血病预后中的意义

目的探索成人急性淋巴细胞白血病（ALL）首次完全缓解（CR）时骨髓淋巴细胞指数检测及其在评估预后中的价值。方法回顾性分析近5年初治的经1～2个疗程诱导治疗达到完全缓解的205例ALL,按照首次CR时骨髓中原始细胞比例及淋巴细胞指数将其分为4组：A、B组骨髓原始细胞比例〈1%,A组淋巴细胞指数〈30,B组≤30;C、D组原始细胞比例≤1%,C组淋巴细胞指数〉30,D组≤30。分析原始细胞比例？淋巴细胞指数与持续缓解时间（CCR）的关系。C、D组作MRD检测。结果A组原始细胞及淋巴细胞指数高于B组,CCR短于B组。C组与D组原始细胞比例相近,但C组淋巴细胞指数高,MRD高于D组,CCR时间短。C组CCR与B组无差异。结论CR后骨髓淋巴细胞指数与急性淋巴细胞白血病患者的CCR密切相关,它较原始细胞比例更准确？全面反映体内白血病细胞残留水平。淋巴细胞指数的检测有助于判断预后及指导今后的治疗。     

CD10/CD19/TDT/CD45抗体组合检测急性B淋巴细胞白血病微小残留病的实验和临床研究

目的明确CD10/CD19/TDT/CD45抗体组合检测急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)微小残留病的意义。方法建立急性白血病微小残留病(MRD)的细胞模型,随访急性B淋巴细胞白血病患者,评价该表现型在监测急性B淋巴细胞白血病微小残留病中的意义。结果将BALL-1细胞株和正常人骨髓细胞按不同比例混和以建立急性白血病微小残留病模型,流式细胞仪可检出10-5比例的阳性细胞。利用流式细胞仪检测急性B淋巴细胞白血病患者CD10/CD19/TDT/CD45,提示复发比骨髓细胞形态学确认复发早约120天。结论 CD10/CD19/TDT/CD45可作为急性B淋巴细胞白血病微小残留病检测,复发早于形态学确认的白血病复发。     

慢性粒细胞白血病加速期及急变期的形态学与免疫学分型的相关研究

目的 探讨慢性粒细胞白血病(CML)加速期及急变期的细胞形态学和免疫学分型特征.方法 对73例慢性粒细胞白血病急变期(CML-BP)患者的骨髓标本分别进行光镜细胞形态学及相关细胞化学染色观察,确定其FAB类型;应用流式细胞仪检测免疫学一系列相关抗原.结果 73例CML-BP患者的FAB分型为慢性粒细胞白血病急髓变(CML-AML) 44例,急性淋巴细胞白血病(ALL)21例,急性混合细胞白血病(HAL)8例.流式细胞术行免疫表型分析,21例CML向急性淋巴细胞白血病转变(CML-ALL)患者中,其免疫表型B-ALL 19例,T-ALL 2例;且12例含髓系标志.8例CML向急性混合细胞白血病(HAL)转变(CML-HAL)患者中,免疫表型为B+My 6例;T+My 2例.44例CML-AML患者中,15例含T细胞标志,2例含B细胞标志,其他未见跨系表达.73例CML-BP患者中有29例在CML加速期行流式检查,其中16例急变为急性髓细胞白血病(AML),13例急变为非AML(ALL 9例,HAL 4例).非AML中2例加速期查见髓系原始细胞和前体淋巴细胞同时存在,余9例为髓系原始细胞或伴淋巴细胞标志.结论 流式细胞术对CML-BP的方向及鉴别诊断有一定的提示作用.     

形态学分型困难的白血病24例免疫分型

目的: 应用流式细胞仪对24例临床形态学诊断困难的急慢性白血病进行快速、有效地免疫分型,以指导临床化疗. 方法: 采用单克隆抗体双色直接免疫荧光标记法及多参数流式细胞术(FCM),分型根据抗体积分系统,并与FAB分型进行比较. 结果: ① 9例临床诊断慢性淋巴细胞白血病经FCM免疫分型确诊为B淋巴细胞性白血病;② 5例临床诊断急性淋巴细胞白血病(L2)的患者经FCM免疫分型确诊1例为B淋巴细胞性白血病;2例为T淋巴细胞性白血病,且1例伴红系异常改变; 1例为未分化型白血病;1例为淋巴细胞白血病B,T双表达;③ 5例急性非淋巴细胞性白血病经FCM免疫分型确诊2例为髓系白血病;3例为红白血病(M6);④ 1例MDS伴骨髓纤维化经FCM免疫分型确诊为M6;⑤ 4例疑似粒-淋双表型白血病经FCM免疫分型确诊为粒-淋双表型白血病. 免疫分型与FAB分型的符合率为79.2%. 结论: 流式细胞仪多参数白血病免疫表型分析,可以弥补FAB分型的不足,为临床诊断提供重要依据,并为白血病治疗措施的个体化提供依据.     

三色流式细胞术在检测儿童急性淋巴细胞白血病免疫表型中的应用

目的:探讨三色荧光标记流式细胞术CD45辅助设门检测儿童急性淋巴细胞白血病(CALL)免疫表型的临床应用及意义。方法:采用流式细胞仪和几组三色荧光标记抗体检测25例FAB分型为ALL的儿童骨髓或外周血免疫表型。结果:25例ALL儿童中,B型淋巴细胞白血病14例,T型淋巴细胞白血病6例,双标记5例,在T-ALL中,淋系抗原阳性率表达顺序为CD7>CD3>CD5,在B-ALL中,淋系抗原阳性率表达顺序为CD19>CD10>CD22>CD20,在T-ALL、B-ALL及双标记中还可同时表达髓系抗原(CD13、CD14、CD15、CD33),且髓系标记抗原在T-ALL与B-ALL中出现的频率相同。结论:三色荧光标记流式细胞术CD45/SSC设门技术检测儿童急性淋巴细胞白血病免疫表型,可准确将幼稚细胞从正常细胞群中分离出来并专门对异常细胞群进行免疫表型分析,将淋巴细胞白血病分为B型和T型白血病及双标记,并能反映髓系抗原阳性的ALL(M y+ALL),对指导临床治疗有重要价值。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓细胞的免疫表型分析

目的　了解骨髓增生异常综合征 (MDS)患者骨髓细胞的分化抗原的表达情况。方法　采用流式细胞术的CD45 -侧向散射光 (SS)设门的方法 ,检测 14例骨髓增生异常综合征患者 ,16例急性髓系白血病 (AML)和 5例骨髓形态学正常的非血液病患者的骨髓和干 /祖系分化抗原。结果　MDS患者原始细胞群所占比例为 (11 2± 7 3 ) % ,明显高于对照组而低于AML组。该群细胞的髓系和干 /祖系分化抗原 ,MDS及AML组均存在较高的阳性表达 ;71 4%的MDS患者低SS表达的粒细胞群明显增加 ;2 8 6%的MDS患者髓系细胞群的部分细胞表达淋系抗原CD7。结论　MDS患者骨髓细胞存在复杂异常的分化抗原表达 ,通过免疫表型分析有助于MDS的诊断。     

流式细胞术免疫分型在形态学诊断困难的白血病中的应用

目的：应用流式细胞仪对11例临床形态学诊断困难的急慢性白血病进行快速、有效地免疫分型,协助临床诊断,以指导临床化疗。方法：采用单克隆抗体三色（FITC、PE、Per-CP）直接免疫荧光标记法及多参数流式细胞术（FCM）检测,分型根据抗体积分系统,并与FAB分型进行比较。结果：①2例临床形态学拟诊断毛细胞白血病,经FCM免疫分型表达为B淋巴细胞性白血病,得以确诊;1例慢性淋巴细胞白血病经FCM免疫分型诊为T淋巴细胞性白血病;②4例临床诊断急性淋巴细胞白血病（L2、L3）的患者经FCM免疫分型确诊为B淋巴细胞性白血病;③3例临床形态学诊断困难急性非淋巴细胞性白血病经FCM免疫分型确诊3例为髓系白血病。结论：流式细胞仪多参数白血病免疫表型分析,可以弥补FAB分型的不足,为临床诊断提供重要依据,并为白血病治疗措施的个体化提供依据。     

急性髓细胞白血病形态学及免疫学分型相关研究

目的利用细胞染色形态学方法及流式细胞术研究急性髓细胞白血病中形态学与免疫学对其分型研究的价值。方法对收集到的59例急性髓细胞白血病骨髓标本分别采用细胞染色形态学观察以及流式细胞术免疫分型检测技术的方法,分析比较两者的结果。结果 58例病例中,无法根据形态学表现进行急性髓细胞白血病亚型分型者高达46例;经流式细胞仪检测,58例急性白血病中有一例无法确定为是急性髓细胞白血病还是骨髓异常综合征,其余57例结合临床及细胞形态学、细胞遗传学、基因检测等综合判断结果为M0型11例,M2型4例,M3型6例,M4型8例,M5型11例,M6型9例,M7型3例,其中M2型中有2例更详细的分为了AML-M2b,其余5例只能排除其为非淋系白血病,具体分型无法知晓。从确诊分型率等来看,流式细胞术免疫分型检测方法明显优于形态学分型,前者达到了84.2%,而后者仅为19.2%。将形态学分型的确定结果与流式细胞术免疫分型结果进行比较,两者的分型相符率为26.2%,另外有一例骨髓增生异常综合征采用塑料冷包埋免疫组化技术处理后,镜下观察符合骨髓增生异常综合征之骨髓活组织图像。研究样本中M5型急性髓细胞白血病FBA形态学分型与流式细胞术免疫分型结果存在显著差异,采用χ2检验,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 (1)单纯形态学分型对具有典型表现的病例有较好辨别性;而当其分型诊断非典型急性髓细胞白血病是结果则较差。(2)流式细胞术免疫分型检测方法应用于急性髓细胞白血病的分型检测中,明显优于单纯形态学分型,流式细胞术免疫分型对急性髓细胞白血病有极高的诊断价值。(3)流式细胞术免疫分型检测方法在对急性髓细胞白血病分型中有其独特的临床价值,为临床急性髓细胞白血病的分型诊断提供参考价值,进一步指导临床治疗方案。     

TRX-2基因表达在急性白血病微小残留病灶监测中的作用

目的: 探讨硫氧还蛋白-2(TRX-2)基因表达在急性白血病(AL)微小残留病灶(MRD)监测中的价值。方法: 采用实时荧光定量聚合酶反应(RQ-PCR)检测AL初发组(68例)、血液学完全缓解(CHR)组(57例)和复发组(25例)TRX-2基因表达的变化,25名骨髓捐献者作为正常对照组,TRX-2基因表达量的上限(91)为参考值上限,回顾分析复发组在CHR期(骨髓原始细胞计数<5%)TRX-2基因表达的水平,比较其与流式细胞术(FCM)检测的MRD的相关性。结果: TRX-2基因表达在完全缓解组与初治组和复发组之间差异有统计学意义(P<0.01);复发患者CHR期(骨髓原始细胞<5%),21例(21/25)TRX-2基因呈高表达(>91),与流式细胞术检测的MRD具有相关性(r=0.874, P=0.0005)。结论: TRX-2基因为急性白血病新的广谱标志,适用于MRD的监测。     

流式细胞仪四色荧光标记技术在急性白血病免疫分型中的临床应用

目的：利用CD45／SSC组合及设门技术,直接溶血的四色流式细胞术,在急性白血病患者骨髓白血病细胞免疫分型的临床应用及其意义。方法：待测骨髓标本以CD45-PC5和一组针对不同细胞抗原系列的单克隆抗体标记,用CD45-PC5／SSC设门,进行荧光染色后上流式细胞仪检测,分析白血病细胞的免疫表型。结果：利用流式细胞仪对15例急性白血病患者骨髓免疫表型分析,确定其免疫表型特点,其中急性淋巴细胞白血病5例,急性髓系白血病10例。结论：利用CD45／SSC组合及设门技术,直接溶血的四色流式细胞术进行急性白血病免疫分型,能快速、多参数、客观地定性或定量测定单个细胞膜上的多种抗原表达或同时测定膜、浆的抗原,可更深入了解白血病的异质性,准确判断细胞的来源和所处的分化阶段,这些都与治疗方案的制定和预后判断有关,有助于指导临床治疗及判断预后。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓单个核细胞免疫表型的测定

骨髓增生异常综合征(MDS)是一组难治的以血细胞质、量异常和极易发展为急性髓系白血病为特征的恶性克隆性造血干细胞疾病。对MDS的髓系免疫表型的研究已有报道。笔者从1997年开始应用流式细胞仪对12例MDS患者的骨髓单个核细胞淋巴细胞、髓细胞等进行了免疫表型的检测,现将结果报道如下。     

急性白血病完全缓解微小残留病检测的意义

目的：探讨急性白血病（AL）患者骨髓微小残留病（MRD）的监测对疾病预后和疗效评价的临床意义．方法对2009年1月2012年12月在玉溪市人民医院血液科正规治疗的43例急性白血病患者采用骨髓液,利用流式细胞术（FCM）进行MRD检测,从首次诱导缓解治疗结束后第14天开始,每1～3月检测1次,并动态监测,分为阴性（MRD〈10-4）、阳性（MRD〉10-4）,2组进行比较分析．结果阴性、阳性2组3 a的复发率分别为0、80%,2组复发率的差异有统计学意义（＜0.05）．而在形态学完全缓解时,MRD阳性组复发率明显高于阴性组（＜0.05）．结论采用FCM检测AL患者的MRD,MRD〉10-4患者复发率高于MRD〈10-4患者,MRD阳性比传统骨髓形态学复发出现早,连续对完全缓解AL患者进行MRD监测对指导治疗及早期预测复发具有重要的临床意义．     

CD45作门的三色流式细胞术在白血病免疫分型中的应用

目的介绍一种直接裂解骨髓样本进行急慢性白血病分型的三色流式细胞术.方法将这种方法应用于115例急性白血病和10例慢性白血病的免疫分型.利用CD45和侧向散射将白血病细胞从正常的淋巴细胞、单核细胞、粒细胞和有核红细胞中区分出来后,用双参数流式细胞术进行分析.结果流式细胞术测定得到的幼稚细胞比例在很大程度上与形态学计数相关.不同的FAB亚型白血病在CD45/SS图中的形式也不完全相同.当PC5标记的CD45与异硫氰酸荧光黄和藻红蛋白标记的其它抗体联合应用时,可以在对白血病细胞作门的基础上,同时进行白血病细胞表型表达的双参数分析.结论在白血病免疫分型时,这种作门技术明显优于传统的前向散射对侧向散射作门方法.     

CD45作门的三色流式细胞术在白血病免疫分型中的应用

目的 介绍一种直接裂解骨髓样本进行急慢性白血病分型的三色流式细胞术。方法 将这种方法应用于115例急性白血病和10例慢性白血病的免疫分型。利用CD45和侧向散射将白血病细胞从正常的淋巴细胞，单核细胞，粒细胞和有核红细胞中区分出来后，用双参数流式细胞术进行分析。结果 流式细胞术测定得到的幼稚细胞比例在很大程度上与形态学计数相关，不同的FAB亚型白血病在CD45/SS图中的形式也不完全相同，当PC5标记的CD45与异硫氰酸荧光黄和藻红蛋白标记的其他抗体联合应用时，可以在对白血病细胞作门的基础上，同时进行白血病细胞表型表达的双参数分析。结论 在白血病免疫分型时，这种作门技术明显优于传统的前向散射对侧向散射作门方法。     

多参数流式细胞术分析骨髓增生异常综合征患者原始细胞的免疫表型特点

目的:探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者原始细胞免疫表型特点及其在诊断、分型及预后中的临床意义.方法:应用多参数流式细胞术,对41例MDS患者和24例非MDS患者原始细胞免疫标志的表达率进行检测.结果:MDS组与非MDS(non-MDS)组相比,CD34、CD123和CD133在原始细胞群表达显著增高(P＜0.01)...     

35例慢性淋巴细胞白血病MIC研究

目的 探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)的免疫表型特征并分析免疫表型和细胞形态学及遗传学的关系.方法 应用一组系列相关的单克隆抗体射门的三色流式细胞术对35例CLL免疫表型进行检测.以常规R显带及荧光原位杂交(FISH)检测13q14.3(D13S272),11q22(ATM)位点缺失.结果 35例CLL中,B-CLL 29例,T-CLL 4例,CLL/PLL(慢淋-幼淋混合型)2例.35例CLL均表达CD5,其中B-CLL主要CD19 ,CD20 ,T-CLL主要CD2 ,CD3 ,CD7 ,CD8 ,2例CLL/PLL混合型CD5-.细胞形态学显示33例CLL骨髓及外周血中以成熟淋巴细胞增多为主,2例CLL/PLL型,11%＜幼淋巴细胞＜50%.35例CLL中,13例有细胞遗传学异常,6例为数目异常,涉及三体3、三体12、三体14、三体18;5例为结构异常,2例为复杂异常.对17例CLL的13q14.3(D13S272),11q22(ATM)位点进行FISH检测,结果7例有位点缺失.结论 慢性淋巴细胞白血病的诊断和免疫表型、形态学及遗传学分析密切相关.