蝉芩颗粒对神经生长因子介导的PM2.5所致大鼠气道神经源性炎症的影响

【目的】探讨蝉芩颗粒对神经生长因子(NGF)介导的PM2.5所致气道神经炎症的影响及其作用机制。【方法】将40只SD大鼠随机分为5组,即盐水对照组、PM2.5染毒组、抗NGF组、蝉芩颗粒组、惠菲宁组,每组8只。复制PM2.5大鼠气道滴注染毒模型。PM2.5染毒组大鼠染毒后给予等体积生理盐水灌胃,抗NGF组抗NGF干预染毒后给予生理盐水灌胃,蝉芩颗粒组染毒后予蝉芩颗粒(9.36 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,惠菲宁组染毒后予惠菲宁糖浆(8 mL·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,盐水对照组大鼠以生理盐水代替PM2.5气道灌注后给予等体积生理盐水灌胃,共2周。给药结束后,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠血清中P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)、速激肽A(NKA)、速激肽B(NKB)、NGF的含量,采用免疫组化法检测各组大鼠肺组织、背根神经节中SP、NGF的表达,分别采用免疫印迹(Western blot)法及实时荧光定量逆转录—聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测各组大鼠肺组织、背根神经节中NGF蛋白和m RNA的表达。【结果】与盐水对照组比较,染毒组大鼠血清中SP、CGRP、NKA、NKB、NGF值,肺组织NGF,背根神经节SP、NGF的免疫组化平均光密度值,肺组织中NGF蛋白和m RNA及背根神经节中NGF蛋白的表达水平均显著升高(P0.05);与染毒组比较,抗NGF组、蝉芩颗粒组、惠菲宁组上述指标均显著降低(P0.05),但3组比较,差异无统计学意义(P0.05)。【结论】蝉芩颗粒可通过抑制NGF的表达减轻PM2.5所致大鼠气道神经源性炎症。     

蝉芩颗粒通过下调COX-2抑制TRPV1通道减轻感染后咳嗽大鼠气道神经源性炎症

【目的】观察蝉芩颗粒不同剂量对感染后咳嗽大鼠气道神经源性炎症的作用机制。【方法】将SD大鼠随机分为空白组,模型组,蝉芩颗粒低、中、高剂量组及阿斯美组。除空白组,其他各组采用烟熏结合内毒素滴鼻及辣椒素刺激复制感染后咳嗽模型。造模成功后,各给药组对应灌胃给药,模型组给予等体积生理盐水,每天1次,连续14 d,空白组不做任何处理。以酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清中P物质(SP)含量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺组织和背根神经节中环氧化酶2(COX-2)、前列腺素E2受体亚型3(EP3)、瞬时受体电位类香草酸受体亚型1(TRPV1) m RNA水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测TRPV1通道蛋白表达的影响。【结果】(1)ELISA结果:蝉芩颗粒各剂量组、阿斯美组血清中SP含量较模型组下降(P 0.05)。(2)RT-PCR结果:蝉芩颗粒高剂量组肺组织和背根神经节中COX-2 mRNA表达水平低于模型组(P 0.05);蝉芩颗粒各剂量组、阿斯美组肺组织和背根神经节中EP3 m RNA表达水平低于模型组,但差异无统计学意义(P 0.05);蝉芩颗粒各剂量组、阿斯美组肺组织中TRPV1 m RNA表达水平低于模型组(P 0.01),蝉芩颗粒各剂量组背根神经节中TRPV1 mRNA表达水平低于模型组(P 0.05或P 0.01)。(3)Western Blot结果:蝉芩颗粒各剂量组、阿斯美组肺组织和背根神经节中TRPV1蛋白表达水平低于模型组(P 0.01)。【结论】蝉芩颗粒可减轻感染后咳嗽大鼠气道神经源性炎症,其机制可能与下调COX-2及TRPV1表达、减少速激肽SP的释放有关。     

神经生长因子调控哮喘神经源性炎症Ras-MAPK信号转导通路

目的：探讨神经生长因子调控哮喘气道神经源性炎症的信号转导通路。方法：36只SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘组及抗NGF组。制作卵蛋白致敏大鼠哮喘模型，采用免疫组织化学方法观察正常大鼠和哮喘大鼠背根节和肺组织中pan-Ras，pERK，c-fos蛋白的表达，并以抗NGF抗体干预，了解其对哮喘大鼠pan-Ras，pERK，c-fos蛋白表达的影响。应用MAPK特异性抑制剂PD98059以及蛋白激酶C特异性激动剂PMA作用正常人支气管上皮细胞（NHBEC），免疫印迹法半定量检测Ras-MAPK信号转导途径中total-ERK，pERK及c-fos蛋白表达变化。结果：哮喘大鼠背根节及肺组织中pan-Ras，pERK，c-fos免疫反应较正常对照组大鼠明显上调（P〈0．01），经抗NGF干预后背根节和肺组织中pan-Ras，pERK，c-fos免疫反应较哮喘组大鼠明显减弱（P〈0．01）。免疫印迹结果显示NGF组磷酸化的ERK1／2蛋白及c-fos蛋白水平较正常对照组显著增高。PD98059可明显抑制ERK1／2的活化及c-fos蛋白的产生。PMA可刺激NGF诱导NHBEC表达磷酸化ERK1／2及c-fos蛋白。结论：NGF可能调控了哮喘神经源性炎症Ras-MAPK信号转导通路。     

Raf-1蛋白激酶、磷酸化丝裂原细胞外激酶1和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2在肝癌中的表达与预后分析

目的 探讨Raf-1蛋白激酶(Raf-1)、磷酸化丝裂原细胞外激酶1(pMEK1)和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(pERK1/2)在肝癌中的表达与肝癌预后的关系.方法 应用免疫组织化学PV6000法检测原发性肝癌组织中Raf-1、pMEK1、pERK1/2蛋白的表达差异性与肝癌预后之间的关系.结果 Raf-1、pMEK1和pERK1/2在肝癌中的过表达率分别为38.3%、46.7%和38.3%,三者过表达率呈正相关(P＜0.05).Raf-1、pMEK1和pERK1/2过表达与性别、年龄、甲胎蛋白、乙肝表面抗原表达状态、肿瘤分化程度、TNM分期、是否存在癌栓、肿瘤大小等各临床病理因素无关(P＞0.05).单因素及多因素分析均显示Raf-1过表达与肝癌预后相关(P＜0.05).结论 Raf-1的过表达是肝癌预后不良的显著标记,可能为肝癌的靶向治疗提供理论依据.     

BRAF及其细胞外信号调节激酶1/2信号通路蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的:研究B F基因及其丝裂原活化蛋白/胞外信号调节激酶的激酶(mitogen-activated protein/extracellular signal-regulated kinase kinase,MEK)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路与甲状腺乳头状癌发生的相关性及部分作用机制。方法:收集73例散发的甲状腺乳头状癌患者及16例同期甲状腺瘤患者(对照组)的临床资料及标本。采用免疫组织化学和免疫印迹法检测两组标本组织中的大鼠肉瘤蛋白(ratsarcoma,S),B F,MEK1/2和ERK1/2表达状况。结果:甲状腺乳头状癌组S,B F,pMEK1/2和pERK1/2表达水平明显高于甲状腺瘤组(P<0.05或P<0.01);甲状腺乳头状癌患者S,B F,pMEK1/2和pERK1/2表达与肿块大小、淋巴结转移以及临床分期相关(P<0.05或P<0.01)。结论:S,B F,pMEK1/2及pERK1/2可能与甲状腺乳头状癌发生及其淋巴结转移、临床分期相关;B F可能通过激活MEK/ERK信号通路而发挥其生物作用。     

PM2.5对大鼠心肌神经生长因子表达的影响及β受体阻滞剂的干预作用

目的:探讨可吸入颗粒物(PM2.5)对大鼠心肌神经生长因子(NGF)表达水平的影响及β受体阻滞剂的干预作用.方法:60只SD雄性大鼠,随机分为实验组、对照组和普萘洛尔组,每组20只.实验组大鼠按25mg/kg剂量经气管内缓慢注入颗粒物悬液,每周染毒2次,连续4周;对照组以生理盐水注入;普萘洛尔组大鼠在染毒的同时给予普萘洛尔50mg/kg/d,溶于饮用水中.所有大鼠于末次染毒后次日处死取双侧心耳和双心室前壁,采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分别检测心肌NGF mRNA和蛋白表达.结果:3组大鼠之间左右心耳NGF mRNA和蛋白表达无显著性差异(P＞0.05).与对照组比较,实验组大鼠心脏左室前壁和右室前壁心肌NGF mRNA和蛋白表达显著增加(均P＜0.05).普萘洛尔组大鼠心脏左室前壁心肌NGF mRNA和蛋白表达较实验组显著降低(均P＜0.05),且显著高于对照组(P＜0.05);右室前壁心肌NGF mRNA和蛋白表达均较实验组显著降低(均P＜0.05).结论:PM2.5可导致大鼠心脏左室前壁和右室前壁心肌NGF表达水平增强,可能是PM2.5致交感神经重构的重要机制之一.普萘洛尔能通过抑制心肌NGF表达,从而拮抗PM2.5导致的交感神经重构.     

当归四逆汤对奥沙利铂神经毒性大鼠背根神经节TRPs通道的影响

目的探讨当归四逆汤对奥沙利铂神经毒性大鼠背根神经节TRPs通道的影响。方法使用奥沙利铂腹腔注射造成慢性神经毒性大鼠模型,60只大鼠分空白组、模型组、及当归四逆汤高、中、低剂量组。通过大鼠疼痛行为学、机械疼痛阈值测定检测当归四逆汤对奥沙利铂神经毒性的缓解作用,并进一步通过RT-PCR、Western blot观察大鼠背根神经节TRPs(TRPV1、TRPA1、TRPM8)mRNA及蛋白表达水平变化。结果大鼠行为学测定显示,与空白组比较,模型组、当归四逆汤低、中剂量组机械疼痛阈值下降(P0.05),而高剂量组未出现明显的下降(P0.05)。与空白组比较,其余各组大鼠背根神经节TRPA1、TRPM8、TRPV1蛋白表达量显著增加(P0.01)。与模型组比较,当归四逆汤低剂量组可降低TRPM8蛋白表达(P0.05),中剂量组可降低TRPA1(P0.01)、TRPM8(P0.01)、TRPV1(P0.05)蛋白表达,高剂量组明显降低三者蛋白表达量(P0.01)。与空白组比较,其余各组大鼠背根神经节TRPV1、TRPA1、TRPM8mRNA表达显著增加(P0.01),与模型组比较,当归四逆汤各组均可显著下调三者表达(P0.01)。结论当归四逆汤可以预防奥沙利铂慢性神经毒性,减缓大鼠机械疼痛阈值下降程度,其机制可能与下调TRPs通道蛋白表达有关。     

PM2.5诱导大鼠肺组织miRNAs表达谱失调及相关信号通路变化研究

目的 探讨PM2.5诱导大鼠血清miRNAs表达谱失调及相关信号通路变化。方法 将40只6周龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组和PM2.5干预组［低剂量组(2.5 mg/kg)、中剂量组(10 mg/kg)、高剂量组(20 mg/kg)］，每组10只。麻醉满意后，PM2.5干预组大鼠分别经气管内滴注PM2.5混悬液2.5、10、20 mg/kg，对照组注射50 μL生理盐水，每3 d一次，连续干预70 d。实验结束后处死大鼠，收集肺组织进行病理学检查，并进行miRNA的RNA-seq 高通量测序。培养人支气管上皮细胞16 HBE，用100 μg/mL浓度的PM2.5处理16 HBE细胞24～48 h，模拟慢性暴露。利用miR-296-5p inhibitor及其阴性对照转染16 HBE细胞12 h后，进行PM2.5干预。Western blot检测Notch信号通路的改变。结果 与对照组比较，PM2.5干预组大鼠肺组织差异表达 miRNAs有67个，其中上调48个，下调的19个，表达量差异倍数高于5倍的有 4 个，即miR-296-5p、miR-27a、miR-182、miR-92a-1-p5，其中miR-296-5p上调了7.85倍，是表达差异最大的miRNA。与对照组比较，经PM2.5干预后，细胞中的Notch1蛋白、HES1蛋白表达量降低，Beclin1蛋白、cleaved-Caspase3蛋白表达量升高(P＜0.05)；与miRNA阴性对照组相比较，转染miR-296-5p inhibitor后，细胞中的Notch1蛋白，HES1蛋白、Beclin1蛋白的相对表达量均明显升高(P＜0.05)。结论 暴露于PM2.5环境中，大鼠肺组织中miRNAs的表达谱发生了紊乱，以miR-296-5p的表达失衡最明显，且miR-296-5p的表达失衡可通过Notch信号通路发挥效应，影响肺上皮细胞功能。     

细颗粒物PM2.5对大鼠IL-10、IL-22表达的影响及百令胶囊的干预作用

目的观察细颗粒物(PM 2.5)对大鼠肺损伤的影响,探讨中药百令胶囊对肺损伤的保护作用。方法2019年9—10月于河北省人民医院动物研究中心进行实验。将40只Wistar雄性大鼠按随机数字表法分为空白对照组、PM2.5染毒组及PM2.5+百令胶囊低、中、高剂量组5组。除空白对照组外,其余4组每3天将PM2.5混悬液(10 m g/kg)经大鼠气管内滴入进行PM2.5染毒,共10次。在PM2.5染毒基础上,百令胶囊组分别以低(0.25 g/kg)、中(0.5 g/kg)、高(1 g/kg)3种不同剂量的百令胶囊悬液每日连续给予大鼠灌胃,共28 d;通过HE染色观察各组大鼠肺组织炎性病理变化,并应用ELISA法测定血清中白介素10(IL-10)、IL-22蛋白含量,利用实时荧光定量PCR法检测大鼠肺组织IL-10、IL-22 mRNA的表达。结果大鼠肺组织病理检查发现,PM2.5染毒组可见大量慢性炎性细胞浸润,百令胶囊干预各组较PM2.5染毒组炎性细胞浸润情况明显减轻。与空白对照组比较,PM2.5染毒组大鼠血清IL-10水平明显降低(t/P=27.758/0.000),血清IL-22水平明显升高(t/P=28.190/0.000)。与PM2.5染毒组比较,百令胶囊干预各组随剂量的增加,血清IL-10水平逐渐升高(F/P=224.867/0.000),而血清IL-22水平则逐渐下降(F/P=149.115/0.000)。Pearson相关分析表明:血清IL-10与IL-22水平呈负相关(r=0.960,P<0.05)。实时荧光定量PCR法检测法结果显示,与空白对照组比较,PM2.5染毒组肺组织IL-10 mRNA表达水平明显降低(t/P=61.342/0.000),肺组织IL-22 mRNA水平明显升高(t/P=55.298/0.000);与PM2.5染毒组比较,百令胶囊干预各组随剂量的增加,肺组织IL-10 mRNA水平逐渐升高(F/P=1131.931/0.000),而IL-22 mRNA水平则逐渐下降(F/P=604.257/0.000)。结论PM 2.5短期暴露可造成大鼠肺部炎性损害,百令胶囊可通过促进IL-10的分泌及表达,以及抑制IL-22的生成,对肺部起到保护作用。     

N-乙酰半胱氨酸对大气细颗粒物致大鼠肺损伤的拮抗作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对大气细颗粒物(PM2.5)急性暴露致大鼠肺炎性损伤及氧化应激损伤的拮抗作用。方法 48只雄性Wistar大鼠随机分为6组,分别为2个对照组:空白对照组及滴水对照组,4个实验组:PM2.5染毒组及低、中、高剂量NAC干预组。空白对照组不给予任何干预措施,滴水对照组给予气管滴注灭菌注射用水(1 ml/kg)1次/周,共4次,PM2.5染毒组大鼠给予气管滴注7.5 mg/kg的PM2.5悬液1次/周,共4次,低、中、高剂量NAC干预组分别给予125、250、500 mg/kg NAC灌胃6 d,第7天气管滴注7.5 mg/kg的PM2.5悬液,重复此过程3次。所有大鼠于4周后处死。苏木精-伊红染色观察大鼠肺组织病理变化。酶联免疫吸附试验检测大鼠血清中C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α,肺组织匀浆的TNF-α、白细胞介素1β(IL-1β)。标准比色法测定血清及BALF中的乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)。结果肺组织病理切片光镜下观察PM2.5染毒导致大鼠肺组织破坏,随着NAC干预剂量增加肺组织破坏程度减轻,两个对照组大鼠肺组织病理未见明显异常。PM2.5组、低、中、高剂量NAC干预组的血清CRP及TNF-α水平、BALF中的TNF-α水平、肺组织中的TNF-α及IL-1β水平均高于两个对照组(均P0.05),给予NAC干预后血清CRP及TNF-α水平、BALF中的TNF-α水平,肺组织匀浆中的TNF-α及IL-1β水平低于PM2.5组(均P0.05);PM2.5组、低、中、高剂量NAC干预组血清及BALF中的LDH活力、MDA水平均高于两个对照组(均P0.05),给予NAC干预后血清及BALF中的LDH活力、MDA水平低于PM2.5组(均P0.05)。结论 NAC可拮抗PM2.5导致的大鼠肺炎性损伤和氧化应激损伤。     

细颗粒物(PM2.5)对大鼠心肌梗死和心肌组织中MG53蛋白表达的影响

目的 探讨细颗粒物(fine particulate matter,PM2.5)对SD大鼠心肌梗死(myocardial infraction,MI)的影响及心肌组织中Mitsugumin 53(MG53)蛋白表达的变化.方法 将40只体质量210～250 g的雄性SD大鼠分为假手术(Sham)组、MI组、Sham+ PM2.5组、MI+ PM2.5组(n=10).通过结扎左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型.Sham+ PM2.5组及MI+ PM2.5组经气道滴灌PM2.5混悬液(10 mg/mL,40 μL/次,3次/周,共4周),Sham组及MI组同法滴灌等量PBS缓冲液作为对照.4周后观察各组大鼠肺组织病理变化、心肌梗死面积、心功能情况、大鼠生存率及心肌组织中MG53蛋白表达的变化.结果 HE染色显示气道滴灌PM2.5的大鼠肺组织可见细颗粒物沉积,表明滴灌成功.MI+PM2.5组与MI组大鼠相比,4周后心肌梗死面积明显增大[(17.78±2.13)％ vs(11.49±2.23)％,P＜0.05],射血分数(EF％)显著降低[(37.14±5.14)％ vs (47.13±4.09)％,P＜0.05],生存率下降,心肌梗死区MG53蛋白的表达也明显降低.结论 PM2.5会加重大鼠心肌梗死的程度,其原因可能与PM2.5抑制心肌受损的膜修复因子MG53蛋白的表达有关.     

枸杞多糖对P38MAPK介导2型糖尿病大鼠背根神经节细胞凋亡的保护作用

目的探讨枸杞多糖对氧化应激激活P38MAPK信号转导通路诱导2型糖尿病大鼠背根神经元细胞凋亡的保护作用及其机制。方法取SD大鼠高脂高糖喂养8周后,腹腔小剂量注射STZ(35 mg/kg)诱导2型糖尿病大鼠模型后,分为模型组、枸杞多糖小剂量组、大剂量组及α-硫辛酸对照组,治疗10周后通过免疫组化方法检测大鼠背根神经节中pP38MAPK及其诱导的凋亡指标Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达。结果经图像分析处理,枸杞多糖大剂量组对糖尿病大鼠背根神经节中Bcl-2蛋白的表达有上调作用,对pP38MAPK、Bax和Caspase-3蛋白的表达有抑制作用,其平均光密度值与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论枸杞多糖可调节机体内的氧化应激状态,通过抑制P38MAPK途径,上调背根神经元细胞中Bcl-2表达,抑制Bax及Caspase-3的表达,从而保护神经细胞免受氧化应激损伤导致的凋亡,这可能是其保护DPN的作用机制之一。     

PM2.5影响MMPs/TIMPs致雌鼠胚胎着床失败机制探讨

【目的】探究大气细颗粒物(fine particulate matter,PM2.5)是否通过影响子宫基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)及特异性基质金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPs)表达,继而损害雌性大鼠生育力。【方法】将生理盐水、低、中、高剂量PM2.5混悬液以及苯并芘[benzo(a)pyrene,Ba P]溶液对SD大鼠分组染毒,染毒时间为孕前15 d至孕后6 d。在孕(gestational day,GD)6.5 d处死大鼠,记录胚胎个数、子宫及胚胎总质量,检测子宫组织中MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2、TIMP3的m RNA及蛋白表达变化。【结果】与生理盐水组相比,PM2.5染毒组大鼠胚胎个数减少,Ba P组无变化。PM2.5染毒组MMP2、MMP9、TIMP2、TIMP3 m RNA表达增加(P<0.05);TIMP1 m RNA表达减少。PM2.5染毒组MMP2、MMP9、TIMP2、TIMP3蛋白表达增加(P<0.05);TIMP1蛋白表达减少。MMP2/TIMP2 m RNA比值与胚胎个数呈正相关。【结论】PM2.5可能通过影响基质金属蛋白酶家族MMPs/TIMPs功能平衡损害雌性大鼠生育力。     

双歧杆菌脂磷壁酸通过激活小鼠腹腔巨噬细胞MEK/ERK通路促进TNF-α的表达

目的:本研究分析激活的MEK/ERK信号通路在双歧杆菌脂磷壁酸促进小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)增强表达中参与的机制.方法:分离小鼠腹腔巨噬细胞并随机分为3组:对照组、脂磷壁酸组和脂磷壁酸+PD98059组(n=6).酶联免疫吸附测定法检测各组巨噬细胞中TNF-α的含量,Western Blotting检测各组巨噬细胞中MEK/ERK信号通路的关键蛋白Ras、Raf、pMEK/MEK、pERK1/2及ERK1/2的表达.结果:与对照组相比,脂磷壁酸组小鼠巨噬细胞的TNF-α水平明显增高,差异具有统计学意义(P＜0.01);MEK/ERK信号通路相关蛋白Ras、Raf、pMEK/MEK、pERK1/2及ERK1/2的表达明显上调,差异具有统计学意义(P＜0.01),而PD98059可以明显抑制上述蛋白的异常(P＜0.01).结论:双歧杆菌脂磷壁酸通过激活小鼠腹腔巨噬细胞MEK/ERK通路促进TNF-α的上调表达.     

不同时间针刺足三里穴对炎性大鼠脊髓、背根神经节中TRPV4蛋白表达的影响

目的研究不同时间针刺足三里穴对炎性大鼠脊髓及背根神经节中香草酸瞬时电位受体4(TRPV4)蛋白表达的影响。方法将54只清洁级的雄性SD大鼠驯化7 d后,进行基础痛阈筛选,然后按痛阈结果随机分组为造模组36只、空白组18只,造模组在右足足垫部皮内注射完全弗氏佐剂0.1 mL,空白对照组注射0.1 mL生理盐水。造模成功的大鼠又按照基础痛阈随机分为模型组18只和针刺组18只,每组按照不同的处理时间又分为ZT8(15:00)、ZT16(23:00)2个时间亚组,每组9只。在2个时间点进行处理,针刺组在相应时间点手针针刺患侧足三里30 min,其间每5 min捻转1 min,频率为120次/min,模型组、空白组捆绑固定30 min,不做其他处理,1次/d,共治疗7 d。在第7天治理结束后检测相应时间点大鼠的痛阈,痛阈检测后取材,提取大鼠腰椎4～6的脊髓及背根神经节,采用免疫组化的方法检测大鼠背根神经节以及脊髓中TRPV4的表达。结果①在ZT8时间点:模型组大鼠与空白组相比,背根神经节中TRPV4表达量显著增加(P<0.01);脊髓组织TRPV4蛋白表达量明显上调(P<0.05)。针刺组大鼠与模型组相比,针刺组背根神经节TRPV4表达量显著下降(P<0.01),脊髓组织TRPV4蛋白表达量无明显差异(P>0.05)。②在ZT16时间点:与空白组相比,模型组大鼠背根神经节TRPV4表达量明显增加(P<0.05),脊髓组织TRPV4蛋白表达量明显上调(P<0.01)。与模型组相比,针刺组大鼠背根神经节TRPV4表达量无明显差异(P>0.05),脊髓组织TRPV4蛋白表达量降低(P<0.05)。结论炎性痛能够诱发大鼠脊髓和背根局部神经节TRPV4蛋白表达的上调;针刺足三里穴能够调节炎性痛大鼠脊髓与背根神经节TRPV4的蛋白含量。     

盆痛灵方对子宫内膜异位症大鼠神经生长因子及其受体表达的影响

目的:探讨盆痛灵方对子宫内膜异位症(EMs)大鼠异位内膜神经生长因子(NGF)及其受体酪氨酸激酶受体A(TrkA)和神经营养因子受体p75(p75NTR)表达的影响。方法:采用自体内膜移植法建立大鼠EMs模型。取造模成功的大鼠随机分为模型组、消炎痛组和盆痛灵低、中、高剂量组,每组10只;另设假手术组10只(仅切除单侧结扎段子宫)。消炎痛组大鼠给予3 mg·kg~(-1)·d~(-1)消炎痛混悬液,盆痛灵低、中、高剂量组大鼠分别给予10.2、20.4、40.8 g·kg~(-1)·d~(-1)盆痛灵方水煎液,各组均采用直肠给药方式,每日1次,连续4周;模型组和假手术组给予等体积0.9%NaCl溶液。末次给药后,采集各组大鼠的子宫内膜组织。PCR检测各组大鼠异位内膜NGF、p75NTR、TrkA的mRNA表达,Western blot和免疫组化法检测异位内膜NGF、p75NTR、TrkA蛋白表达。结果:①PCR检测显示,模型组大鼠内膜组织NGF、TrkA、p75NTR的mRNA表达较假手术组显著升高(P0.01);与模型组相比,消炎痛组和盆痛灵中、高剂量组NGF和TrkA的mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01),消炎痛组和盆痛灵高剂量组p75NTR的mRNA表达亦明显降低(P0.01);与盆痛灵低剂量组相比,高剂量组大鼠的内膜组织NGF、TrkA、p75NTR的mRNA表达均显著降低(P0.01),中剂量组TrkA mRNA表达亦明显降低(P0.05);与盆痛灵中剂量组相比,高剂量组p75NTR mRNA表达明显降低(P0.01)。②Western blot检测显示,模型组大鼠内膜组织NGF、TrkA、p75NTR蛋白表达水平较假手术组显著升高(P0.01);与模型组相比,消炎痛组及盆痛灵高、中、低剂量组NGF、TrkA、p75NTR蛋白表达水平均明显降低(P0.01);与盆痛灵低剂量组相比,中、高剂量组大鼠子宫内膜NGF、TrkA、p75NTR蛋白表达水平均显著降低(P0.01);与盆痛灵中剂量组相比,高剂量组NGF、TrkA、p75NTR蛋白表达水平亦显著降低(P0.01)。③免疫组化检测显示,与假手术组相比,模型组NGF及其受体p75NTR、TrkA在异位内膜的腺上皮细胞与间质细胞胞浆呈高表达,仅少量表达于胞核;与模型组相比,消炎痛组及盆痛灵中、高剂量组NGF、p75NTR、TrkA的阳性表达明显减弱;与盆痛灵低剂量组相比,盆痛灵中、高剂量组NGF、p75NTR、TrkA的阳性表达明显减弱。结论:盆痛灵方可能通过降低异位内膜NGF及其受体p75NTR、TrkA的表达,对子宫内膜异位症起治疗作用,且其作用具有一定的剂量依赖性。     

黄芪黄酮对糖尿病周围神经病变大鼠背根神经节的保护作用及机制

目的 探讨黄芪黄酮对糖尿病周围神经病变大鼠背根神经节氧化应激及细胞凋亡的影响及机制.方法 将40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、黄芪黄酮组和阳性对照组,每组10只.模型组、黄芪黄酮组和阳性对照组腹腔注射2％的链脲佐菌素制备糖尿病周围神经病变大鼠模型,正常对照组腹腔注射等量枸橼酸盐缓冲液.造模成功后,分别给予黄芪黄酮组、阳性对照组大鼠灌胃黄芪黄酮、金芪降糖片,给予其他两组灌胃等量蒸馏水.造模30 d时,采用血糖仪及Von Frey仪分别测量各组大鼠血糖及机械痛阈值.取各组大鼠的背根神经节组织,检测细胞凋亡率、膜电位水平,并测定背根神经节组织的活性氧簇(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛含量以及细胞色素C(Cyt-C)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved Caspase3)、p38和磷酸化p38(p-p38)的蛋白表达水平.结果(1)造模30 d时,与正常对照组比较,模型组大鼠的血糖水平、背根神经节细胞凋亡率升高,背根神经节组织的ROS和丙二醛含量以及Cyt-C、Bax、cleaved Caspase3、p38、p-p38蛋白表达水平均增加,而机械痛阈值及背根神经节组织的膜电位水平、SOD含量、Bcl-2蛋白表达水平均降低(均P<0.05).(2)造模30 d时,与模型组比较,黄芪黄酮组和阳性对照组大鼠的血糖水平、背根神经节细胞凋亡率均降低,背根神经节组织的ROS和丙二醛含量以及Cyt-C、Bax、cleaved Caspase3、p38、p-p38蛋白表达水平均下降,机械痛阈值及背根神经节组织的膜电位水平、SOD含量、Bcl-2蛋白表达水平均升高(均P<0.05);且与阳性对照相比,黄芪黄酮组背根神经节细胞凋亡率下降,背根神经节组织的ROS和丙二醛含量以及Cyt-C、Bax、p38、p-p38蛋白表达水平均降低,机械痛阈值、背根神经节组织的膜电位水平、SOD含量均升高(均P<0.05).结论 黄芪黄酮可抑制糖尿病大鼠背根神经节组织氧化应激反应、细胞凋亡以及p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路,从而减轻周围神经损伤.     

肠吉泰对肠易激综合征内脏高敏感大鼠TRPV1表达的影响

目的:探讨中药制剂肠吉泰对内脏高敏感性模型大鼠的调节作用。方法:选择新生SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药物Capsazepine组及肠吉泰低、中、高剂量组,每组10只。采用Al-chaer直肠醋酸刺激法建立内脏高敏感性大鼠模型。造模期间阳性药物组给予腹腔注射瞬时感受器电位香草素受体-1(TRPV1)阻断剂Capsazepine,其余各组(除空白组外)均给予相同体积的溶剂腹腔注射;造模结束2周后,肠吉泰各剂量组每日分别给予相应剂量的中药浸膏灌胃,空白组、模型组和阳性药物组分别给予等体积去离子水灌胃。干预4周后,大鼠腹外斜肌埋植电极,外接Power Lab记录仪,采用结直肠气囊扩张法记录大鼠腹外斜肌电压变化以评估内脏敏感性;使用Real-time PCR法检测下丘脑、背根神经节和结肠组织TRPV1mRNA含量。结果:当气囊压力在60 mm Hg时,模型组大鼠腹外斜肌电压值较空白组明显升高(P0.05),肠吉泰高剂量组的电压较模型组明显降低(P0.01)。模型组大鼠下丘脑、背根神经节和结肠组织的TRPV1mRNA表达较空白组均明显增高(P0.05);肠吉泰中、高剂量组背根神经节与下丘脑的TRPV1mRNA表达,以及肠吉泰各剂量组结肠的TRPV1mRNA表达均明显低于模型组(P0.05或P0.01)。结论:肠吉泰可降低内脏敏感性,其作用可能与降低下丘脑、结肠和背根神经节TRPV1mRNA表达有关。     

乌头汤对糖尿病周围神经病变大鼠背根神经节PI3K/AKT信号通路影响研究

目的研究乌头汤对糖尿病周围神经病变大鼠背根神经节PI3K/AKT信号通路影响。方法采用抓阄法将150只雄性Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,乌头汤低、中、高剂量组,每组30只。正常组普通饲料喂养,其他4组高脂饲料喂养8周后尾静脉注射2%链脲佐菌素(STZ)25 mg/kg建立糖尿病大鼠模型,4周后建立糖尿病周围神经病变模型,中药低、中、高剂量组分别按生药4.5、9、18 g/(kg·d)给药12周,正常组及模型组予等量生理盐水灌胃。实验结束后测量各组大鼠血糖、体质量、血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、血清甘油三酯(total triglyceride,TG)、甩尾时间、50%缩足反应阈值,取双侧坐骨神经HE染色后观察大鼠坐骨神经形态学,Western blot法检测双侧L4～6背根神经节胞内磷脂酰肌醇激酶3-蛋白激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase-protein kinase,PI3K)、磷酸化的胞内磷脂酰肌醇激酶3-蛋白激酶(Phosphorylated Phosphatidylinositol 3-kinase-protein kinase,p-PI3K)、丝氨酸/苏氨酸激酶(Serine/threonine Kinase,AKT)、磷酸化的丝氨酸/苏氨酸激酶(Phosphorylated Serine/threonine Kinase,p-AKT)蛋白表达水平。结果与正常组相比,模型组的血糖显著升高(P0.01),体质量明显降低(P0.01),TC、TG显著升高(P0.01),甩尾时间显著延长(P0.01),50%缩足反应阈值明显增大(P0.01),神经纤维松散而混乱,PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达明显减少(P0.01);与模型组相比,乌头汤低、中、高剂量组血糖未见明显降低(P0.05),乌头汤低、中剂量组体质量较模型组降低(P0.05),乌头汤高剂量组体质量与模型组差异无统计学意义(P0.05),乌头汤低、中剂量组TC较模型组明显降低(P0.01),乌头汤高剂量组TC未见明显降低(P0.05),乌头汤中剂量组TG较模型组明显降低(P0.05),乌头汤低、高剂量组TG未见明显降低(P0.05),乌头汤低、中、高剂量组甩尾时间显著缩短(P0.01),50%缩足反应阈值明显减小(P0.01),神经纤维整齐且紧密,病理损伤均有很大程度的改善,乌头汤低、中、高剂量组PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达明显增多(P0.01)。结论乌头汤通过上调PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达,减轻糖尿病周围神经病变组织损伤。     

当归四逆汤对奥沙利铂神经毒性大鼠背根神经节TRPs通道的影响

目的 探讨当归四逆汤对奥沙利铂神经毒性大鼠背根神经节TRPs通道的影响。方法 使用奥沙利铂腹腔注射造成慢性神经毒性大鼠模型,60只大鼠分空白组、模型组、及当归四逆汤高、中、低剂量组。通过大鼠疼痛行为学、机械疼痛阈值测定检测当归四逆汤对奥沙利铂神经毒性的缓解作用,并进一步通过RT-PCR、Western blot观察大鼠背根神经节TRPs（TRPV1、TRPA1、TRPM8）mRNA及蛋白表达水平变化。结果 大鼠行为学测定显示,与空白组比较,模型组、当归四逆汤低、中剂量组机械疼痛阈值下降（P<0.05）,而高剂量组未出现明显的下降（P＞0.05）。与空白组比较,其余各组大鼠背根神经节TRPA1、TRPM8、TRPV1蛋白表达量显著增加（P<0.01）。与模型组比较,当归四逆汤低剂量组可降低TRPM8蛋白表达（P<0.05）,中剂量组可降低TRPA1（P<0.01）、TRPM8（P<0.01）、TRPV1（P<0.05）蛋白表达,高剂量组明显降低三者蛋白表达量（P<0.01）。与空白组比较,其余各组大鼠背根神经节TRPV1、TRPA1、TRPM8 mRNA表达显著增加（P<0.01）,与模型组比较,当归四逆汤各组均可显著下调三者表达（P<0.01）。结论 当归四逆汤可以预防奥沙利铂慢性神经毒性,减缓大鼠机械疼痛阈值下降程度,其机制可能与下调TRPs通道蛋白表达有关。