金黄色葡萄球菌临床分离株肠毒素基因的检测

[摘要]目的 检测临床分离的金黄色葡萄球菌肠毒素基因,了解肠毒素基因的携带情况。方法 根据Genbank的序列设计合成金黄色葡萄球菌肠毒素基因A-F的引物,采用聚合酶链反应方法对随机收集的124株金黄色葡萄球菌肠毒素基因进行检测,并进行序列分析。结果 在124株受检的金黄色葡萄球菌中,116株检出肠毒素基因,检出率为93.5%,其中SEA、SEB、SEC、SED和SEF的检出率分别为90.5%、6.9%、61.3%、5.2%和25.9%,未检测出SEE基因。同时检出2种及2种以上的肠毒素基因的菌株有78株（67.2%）,以携带SEA+SEC、SEA+SEF和SEA+SEC+SEF基因为主,检出率分别为33.6%,7.8%,13.8%。序列分析显示所检出的肠毒素基因与Genbank上登陆的参考序列的同源性为97%～100%。结论 金黄色葡萄球菌临床分离株肠毒素基因携带率高,其中以携带SEA、SEC、SEF基因为主。     

金黄色葡萄球菌临床分离株肠毒素基因的调查分析

摘要：目的检测临床分离的金黄色葡萄球菌（SA）肠毒素基因,了解肠毒素基因的携带情况与SA耐药的关系。方法采用聚合
酶链反应检测SA mecA基因和肠毒素基因,了解肠毒素基因在SA中分布的状况,并对其进行耐药性分析。结果67株甲氧西
林耐药的SA（MRSA）和57株甲氧西林敏感的SA（MSSA）肠毒素基因携带率（100% vs 83.5%）无明显差异（χ2=0.203,P>0.05）。
肠毒素基因检出率为93.5%（116株）,其中SEA、SEB、SEC、SED和SEF的检出率分别为90.5%、6.9%、61.3%、5.2%和25.9%,未
检测出SEE基因。同时检出2种及2种以上的肠毒素基因的菌株有78株（67.2%）,以携带SEA+SEC、SEA+SEF和SEA+SEC+
SEF基因为主,检出率分别为33.6%、7.8%和13.8%。与携带一种肠毒素基因的菌株耐药率相比,携带多种肠毒素基因的菌株耐
药率呈上升趋势,其中携带SEA+SEC+SEF的菌株对复方新诺明的耐药率为75.0%,高于单独携带SEA（28.6%）、SEA+SEC
（38.7%）的耐药率,具有统计学差异（P<0.05）。携带SEA+SEC+SEF、SEA+SEF、SEA的菌株对阿米卡星耐药率分别为75.0%、
77.0%和21.5%,前两者与携带SEA的菌株相比有显著差异（P<0.05）。结论临床分离的SA中携带多种肠毒素基因的菌株在耐
药率上高于只携带一种肠毒素基因的菌株,提示肠毒素在SA耐药中起重要作用。
     

一起由金黄色葡萄球菌和路邓葡萄球菌引发食物中毒病原分析

目的 通过一起疑似葡萄球菌引发食物中毒进行葡萄球菌肠毒素检测,并结合检测出致病性葡萄球菌病原学分析,为下一步食物中毒处置提供诊断依据。方法 根据流行病学调查和国家标准《食品微生物学检验》GB4789,对可疑食物及患者呕吐物、肛拭子等进行了几种常见致病原菌分离培养,并直接采用实时荧光PCR方法对金黄色葡萄球菌肠毒素A~E基因进行分型,用全自动微生物鉴定分析仪进行系统生化鉴定,并做血浆凝固酶试验。结果 在食用剩余汉堡中分离出1株金黄色葡萄球菌、2名患者肛拭子中分离出2株金黄色葡萄球菌,1名患者呕吐物中分离1株血浆凝固酶阴性路邓葡萄球菌,利用PCR方法分别对其进行了肠毒素基因分型,结果显示,食用剩余汉堡中1株和2株患者肛拭子的金黄色葡萄球菌肠毒素均为SEA型,为同一型;1株患者呕吐物的路邓葡萄球菌的肠毒素为SEC型。 结论 该起食物中毒主要是由金黄色葡萄球菌产生SEA型肠毒素所导致,血浆凝固阴性路邓葡萄球菌跟金黄色葡萄球菌一样,也能产生肠毒素同样具有致病性作用,提示路邓葡萄球菌不单纯只是人类皮肤共生菌,或许还跟金黄色葡萄球菌同样具有侵袭性、产肠毒素等致病性,在进行公共卫生流行调查诊断时不能被忽视。     

金黄色葡萄球菌肠毒素的检测和耐药性分析

目的了解临床分离的金黄色葡萄球菌(SA)产肠毒素(SE)的情况及耐药现状。方法对从临床标本中分离出的260株SA,用反向间接血凝试验检测其肠毒素,按2005年美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)的标准,用K-B法对260株SA进行药物敏感性试验,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检测分别用检测头孢西丁及乳胶凝集检测PBP2a方法进行。结果260株SA中有172株携带肠毒素,占66.2%,主要为SEA型10.8%(28/260)、SEB型14.6%(38/260)、SEC型10.0%(26/260),同时携带二种或二种以上肠毒素的占23.8%(62/260);其中MRSA134株,全部携带肠毒素,且以SEA、SEB和SEC为主,分别为19.4%、16.4%和13.4%;甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)126株,携带肠毒素率为30.0%(38/126),以SEB为主,占9.5%。用头孢西丁及检测PBP2a的方法检测MRSA,检出率无显著意义(P>0.05);SA对临床常用的抗菌素除万古霉素及替考拉宁较敏感(100.0%敏感),其它的抗菌素存在多重耐药性,且MRSA的耐药性比MSSA的强。结论临床分离的SA株大部分都携带肠毒素,MRSA的带毒率及耐药性均高于MSSA;临床应重视SA肠毒素和MRSA的检测,合理使用抗菌素。     

金黄色葡萄球菌肠毒素基因定位研究

对40株产1种或1种以上肠毒素的金黄色葡萄球菌（以下简称金葡菌）进行分析，结果全部金葡菌肠毒素A（SEA，12/12）、金葡菌肠毒素C（SEC，19／19）、大部分金葡菌肠毒素B（SEB，23／28）的产生不因质粒的消除而消失，说明SEA、SEC的基因位点在染色体上。有5株金葡菌因质粒消除而失去产SEB的能力，其基因位点，可能在质粒或染色体上。4株金葡菌亦均因质粒消除失去产金葡菌肠毒素D的能力，其基因位点可能在质粒上。     

山东省2017—2020年血流感染金黄色葡萄球菌耐药监测

目的 分析山东省50家医院儿童及成人血培养来源金黄色葡萄球菌耐药性,了解金黄色葡萄球菌血流感染的药敏特征,为临床经验用药提供参考。方法 依托于山东省儿童细菌＆真菌耐药监测研究协作网,对2017—2020年山东省50家医院由血培养分离的金黄色葡萄球菌分布和耐药性进行分析,同时对儿童组（<14岁）和成人组（≥14岁）金黄色葡萄球菌药敏特征进行比对分析。参考美国临床和实验室标准化协会（CLSI）2021年M100文件标准判断结果,采用Whonet 5.6和SPSS 22.0对数据进行分析。结果 共收集山东省50家医疗机构非重复血培养来源金黄色葡萄球菌 3 661株,其中2017年675株、2018年870株、2019年1 080株、2020年1 036株。血培养来源甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）组与甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）组多种抗菌药物耐药率差异有统计学意义（P<0.05）;成人组与儿童组比较多种抗菌药物耐药率差异有统计学意义（P<0.05）。MRSA总体检出率为27.5%,未发现对万古霉素、利奈唑胺、替加环素耐药的金黄色葡萄球菌菌株。结论 MRSA菌株检出率持续下降,2020年有所升高;成人组MRSA检出率低于儿童组MRSA检出率,提示我们应该重视儿童组细菌耐药监测,重视多重耐药菌管理,合理使用抗菌药物。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药基因及毒力基因分析研究

目的 通过全基因组测序技术（whole genome sequencing,WGS）检测耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant Klebsiella pneumonia, CRKP）的耐药基因及毒力基因,了解本院CRKP的分布及耐药情况,为临床治疗和预防耐药菌的产生提供理论依据。方法 收集甘肃省肿瘤医院2019年6月至2021年6月临床分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌,用全自动细菌鉴定仪进行细菌鉴定和抗菌药物敏感试验,用改良碳青霉烯灭活试验（mCIM）确认所筛选出的菌株是否产碳青霉烯酶,通过全基因组测序分析研究CRKP菌株的耐药基因种类和分布情况以及毒力基因类型和毒力基因位点。结果 23株CRKP分离自4个不同的临床科室,标本主要来源于痰液和血液,药敏结果显示所有菌株对碳青霉烯类、头孢菌素类、青霉素类及含β-内酰胺酶抑制剂类抗菌药物均耐药,对环丙沙星、阿米卡星和复方新诺明部分耐药。基因组测序分析显示：23株CRKP中,17株为ST11型,6株为ST23型。CRKP的荚膜型（KL）均为KL64,一致性均在99.9%以上。23株CRKP均携带bla_KPC-2,此外还有3株菌同时携带bla_NDM-1;还检测出了不同型别的β-内酰胺类（TEM、SHV、CTX-M等）、氨基糖苷类（rmtB）、磷霉素类（fosA）、喹诺酮类（qnr）、四环素（tet）、磺胺类（sul）、甲氧嘧啶（dfrA）等耐药基因;检测出5株耐碳青霉烯高毒力肺炎克雷伯菌,携带耐碳青霉烯酶基因同时携带高毒力质粒及多种亚型;23株CRKP中毒力质粒相关的毒力因子rmpA和rmpA2的携带率分别为21.7%和60.9%。结论 23株 CRKP菌株以重症医学科和呼吸肿瘤内科检出率最高;标本类型以痰液和血液为主,提示呼吸道和血流感染为 CRKP 感染的防控重点;23 株 CRKP 均携带 bla_KPC-2;CRKP 菌株 MLST 分型以 ST11为主,占73.9%;荚膜K抗原类型均为KL64。     

河北省2016—2021年血标本分离金黄色葡萄球菌的临床分布特点及耐药性变迁

目的 分析河北省细菌耐药监测网75家医院2016—2021年血标本分离金黄色葡萄球菌临床分布特点及耐药性变迁,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法 应用WHONET 5.6和SPSS 24.0软件对2016年1月至2021年12月河北省血标本分离金黄色葡萄球菌的科室分布及耐药性变迁进行回顾性分析。结果 2016—2021年河北省血标本剔除重复后共检出4 950株金黄色葡萄球菌。患者中位年龄为57岁,男女比例为1.42∶1。肾脏内科送检血标本检出739株金黄色葡萄球菌,占比为14.9%（739/4 950）,检出数量位居第一,重症医学科（666株）次之,占比为13.5%（666/4 950）。监测期间,血标本分离金黄色葡萄球菌对红霉素、环丙沙星、克林霉素、利福平、青霉素G、庆大霉素、四环素、左氧氟沙星、苯唑西林、莫西沙星的耐药率均出现不同程度的降低,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检出率从2016年的48.2%（329/682）下降至2021年的32.3%（340/1 053）,下降了15.9%。来源于重症医学科的金黄色葡萄球菌对阿米卡星、环丙沙星、利福平、庆大霉素、四环素、左氧氟沙星、苯唑西林、莫西沙星耐药率最高;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌6年平均检出率为51.7%（334/646）,明显高于其他科室。老年人（≥65岁）分离金黄色葡萄球菌对阿米卡星、环丙沙星、庆大霉素、四环素、左氧氟沙星、莫西沙星的耐药率较高。结果 近6年河北省血标本分离金黄色葡萄球菌的耐药率总体呈下降趋势,不同人群及科室分离的金黄色葡萄球菌耐药率存在差异,临床经验用药时需结合上述因素谨慎选择抗菌药物,同时密切关注重症医学科血标本分离金黄色葡萄球菌的耐药状况。     

福建省2021年血流感染细菌耐药情况分析

目的 了解福建省血流感染病原菌的分布及耐药现状,为临床合理用药提供参考依据。方法 对福建省31所医疗机构按统一方案对血培养标本分离菌株进行细菌鉴定和抗菌药物敏感性试验,参照美国临床实验室标准化协会（CLSI）2021年药敏执行标准,采用WHONET5.6软件对数据进行统计分析。结果 剔除重复菌株后,共收集到 10 356株细菌,革兰阳性菌3 668株（占35.4%）,革兰阴性菌6 688株（占64.6%）。排前5位的细菌为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌。本研究甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）检出率为24.5%,甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）检出率为76.8%。未发现对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺耐药的葡萄球菌。青霉素耐药肺炎链球菌的检出率为3.2%。万古霉素耐药粪肠球菌、屎肠球菌检出率分别为0.8%、1.1%。大肠埃希菌对碳青霉烯类药物的耐药率为0.8%,对左氧氟沙星的耐药率达41.9%;肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物的耐药率为15.0%。鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物的耐药率为45.1%;铜绿假单胞菌则仅为14.2%,且对大多数药物保持了较高的敏感性。结论 福建省血流感染多由大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和葡萄球菌引起,部分菌种的耐药情况不容乐观,应继续加强抗菌药物的临床应用管理,正确合理使用。     

海南某三甲医院2018—2020年血培养分离细菌分布及耐药性变迁

目的 了解海南某三甲医院血培养近三年分离细菌分布情况及其对临床常用抗菌药物的耐药性及敏感性。方法 回顾性分析海南省人民医院2018年1月1日—2020年12月31日门急诊及住院患者血液标本细菌分离情况及其药物敏感试验结果,药物敏感试验采用最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration, MIC）法,依据2020年美国临床实验室标准化协会（CLSI）标准判定试验结果。采用WHONET 5.6软件统计药敏结果。结果 2018—2020年血液标本共分离出2 488株非重复菌株,其中革兰阴性菌（1 378株,55.4%）,革兰阳性菌（1 110株,44.6%）。排前5位的细菌依次为凝固酶阴性葡萄球菌（606株,24.4%）、大肠埃希菌（458株,18.4%）、肺炎克雷伯菌（245株,9.9%）、金黄色葡萄球菌（182株,7.3%）、铜绿假单胞菌（139株,5.6%）。2018—2020年,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的检出率分别为16.7%、20.0%、16.9%,30.8%、35.8%、37.8%。未检出耐万古霉素、替考拉宁、替加环素的葡萄球菌。肠球菌属中的粪肠球菌对大多数抗菌药物的耐药率均低于屎肠球菌。肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素高度敏感（敏感率>90.0%）。鲍曼不动杆菌的耐药情况较严重且对碳青霉烯类药物的耐药率逐年递增。 结论 该院近3年血液标本主要分离菌以革兰阴性菌为主,分离菌构成及排序无明显波动。分离菌对常用抗菌药物均有不同程度的耐药且耐药性呈总体上升趋势,应加强细菌耐药性监测,合理使用抗菌药物。     

呼吸机相关性肺炎常见病原菌分布及耐药性分析

目的 了解呼吸机相关性肺炎病原菌分布和耐药性,为临床早期、合理、有效地使用抗生素提供可靠的依据,避免多重耐药的发生。方法 分析临床确诊为呼吸机相关性肺炎患者51例痰标本分离的病原菌112株。采用法国梅立埃鉴定和药敏测定系统进行病原菌鉴定和药物敏感性检测。结果 112株病原菌中以革兰氏阴性杆菌为主,占75.89%,主要为鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯、嗜麦芽寡养单胞菌和大肠埃希菌。革兰氏阳性菌占16%,以金黄色葡萄球菌为主。真菌占11%,以白色念珠菌为主。鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌耐药严重,鲍曼不动杆菌对头孢类、青霉素类、喹诺酮类、碳青霉烯类耐药率大于50%,铜绿假单胞菌对氨苄西林/舒巴坦耐药率为100%。结论 呼吸机相关性肺炎病原菌多重耐药或泛耐药比例较高,临床应根据耐药性监测数据合理使用抗生素。     

不同标本类型分离的金黄色葡萄球菌药敏试验结果比较

目的 了解不同标本类型分离的金黄色葡萄球菌的药敏性,并了解本院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)的耐药情况。 方法 选取2013年7月—2015年6月接收的均检出金黄色葡萄球菌的皮肤分泌物、痰液、引流物、血液和尿液标本共405例,检测金黄色葡萄球菌对抗菌药物的敏感率,比较MSSA和MRSA的检出率及对抗菌药物的敏感率。 结果 不同标本检出的金黄色葡萄球菌对青霉素、万古霉素和替考拉宁的敏感率的差异均无统计学意义(P均>0.05);不同标本检出的金黄色葡萄球菌对阿莫西林/舒巴坦、头孢唑林、头孢呋辛等的敏感率差异均有统计学意义(P均<0.05)。405株金黄色葡萄球菌中共检出108株MRSA (26.67%);痰液的MRSA检出率最高(58.33%),皮肤分泌物的MRSA检出率最低(15.07%);不同标本的MRSA检出率的差异有统计学意义(P<0.05)。MSSA对抗菌药物的敏感率均显著高于MRSA,差异均有统计学意义(P均<0.05)。 结论 不同标本类型分离的金黄色葡萄球菌有不同的药敏性和MRSA检出率,临床治疗中应根据药敏试验结果合理选用抗菌药物。      

广州市96株血流感染金黄色葡萄球菌的基因分型及耐药性分析

目的 分析血流感染中分离金黄色葡萄球菌的分子分型特征和药物敏感试验结果,为耐药性金黄色葡萄球菌防治提供基础依据。方法 对中山大学附属第一医院2013—2017年血流感染分离的96株金黄色葡萄球菌应用MLST和spa技术进行分子分型,同时进行药物敏感试验分析血流感染中金黄色葡萄球菌对万古霉素、奎奴普丁/达福普汀、利奈唑胺等14种抗生素的药敏特征。结果 96株金黄色葡萄球菌中40株为甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（Methicillin resistant Staphylococcus aureus, MRSA）,其主要型别为ST59-t437型7株（占17.5%）,ST1-t114型4株（占10.0%）,ST239-t030型3株（占7.5%）,ST239-t037、ST45-t116、ST5-t2595和ST7-t091型均为2株（均占5.0%）;56株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（Methicillin susceptible Staphylococcus aureus, MSSA）,其主要型别为ST188-t189型14株（占25.0%）,ST7-t803型3株（占5.4%）,ST188-t2883、ST6-t701、ST30-t338和ST59-t437型均2株（均占3.6%）。spa分型中发现4个新型,分别为t17040、t17041、t17044、t17046。40株MRSA菌株对红霉素和克林霉素耐药率分别为82.9%和51.2%,对万古霉素、利奈唑胺、奎奴普丁/达福普汀耐药率均为0;56株MSSA对所试验抗生素敏感率均较高,对奎奴普丁/达福普汀、万古霉素、利奈唑胺、呋喃妥因、替加环素的敏感率为100.0%,复方新诺明的敏感率为94.5%,对庆大霉素和利福平的敏感率均为96.4%。结论 血流感染中金黄色葡萄球菌分子分型型别较多,应重视金黄色葡萄球菌的感染控制。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引起老年人呼吸道感染的探讨

目的了解老年人呼吸道感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分离率及耐药情况。方法对我院60岁以上的老年患者痰标本分离出的金黄色葡萄球菌进行MRSA的鉴定,并对其发生率及耐药性展开讨论。结果老年患者痰标本分离出的金黄色葡萄球菌178株,其中MRSA检出164株,检出率为90.2%。MRSA对多种抗生素的耐药率均在以上,对复方新诺明和四环素的耐药率均为24%,对万古霉素100%敏感。结论老年人呼吸道感染金黄色葡萄球菌的发生率较高,尤其MRSA检出率极高。结合老年患者的临床特点,并根据流行病学调查及药物敏感试验数据合理应用抗生素,可有效控制MRSA的暴发流行。     

食品中金黄色葡萄球菌污染状况及其毒素检测

目的了解食品中金黄色葡萄球菌污染状况、产肠毒素特性及耐药性,为制定HACCP(Hazard Analysis andCritical Control Point,危害分析与关键控制点)防止由金黄色葡萄球菌引起的食源性疾病及临床用药提供依据。方法从各大商场超市、农贸市场、酒店饭店等销售的食品中随机采集6类不同品种食品共361份,按照GB/T 4789.10-2008的方法进行金黄色葡萄球菌检测,并对检出的金黄色葡萄球菌阳性菌株进行产肠毒素检验及药敏试验。结果 361份样品共检出金黄色葡萄球菌22株,检出率6.09%,其中豆制品检出率最高(30.0%),其次为凉拌食品(10.4%),膨化食品及婴幼儿食品未检出。采自农贸市场的食品金黄色葡萄球菌检出率最高(11.1%)。由于资源有限,只对其中13株阳性菌株检测肠毒素,6株检出肠毒素,产毒力为46.15%;6株含肠毒素金黄色葡萄球菌对苯唑西林、青霉素G、阿莫西林、红霉素、阿奇霉素产生耐药性,表现出多种耐药谱。结论食品中金黄色葡萄球菌有一定的污染,尤其在豆制品、凉拌食品中比较严重;食源性金黄色葡萄球菌产肠毒素能力较强;食品中金黄色葡萄球菌对多种药物耐药,临床治疗应建立在体外药敏试验基础上,有针对性选择抗菌药物。