组蛋白去乙酰化酶3在HK-2细胞高糖缺氧复氧损伤中的作用及机制

目的:探究组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)在HK-2细胞高糖缺氧复氧损伤的作用并探讨其可能的作用机制。方法:随机将HK-2细胞分5组(n=6):低糖组(L组)、高糖组(H组)、低糖缺氧复氧组(LR组)、高糖缺氧复氧组(HR)、高糖缺氧复氧+HDAC3抑制剂(RGFP966)组(HR+RG)。采用50%葡萄糖注射液以葡萄糖终浓度为45mmol/L的高糖培养基培养细胞24 h建立高糖模型,于三气培养箱(含94%N2,5%CO2和1%O2)进行缺氧24 h,复氧4 h建立缺氧复氧模型。采用CCK-8和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞活性和LDH释放水平,超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)试剂盒检测SOD活性及MDA的含量,Western Blot法检测HK-2细胞HDAC3、P62和LC3蛋白的表达。结果:与L组比较,H组和LR组细胞上清LDH和MDA显著增高(P<0. 05);且HDAC3和P62蛋白表达水平显著增高(P<0. 05),LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白水平显著降低(P<0. 05);与LR组比较,HR细胞上清LDH和MDA显著增加(P<0. 05);HDAC3和P62蛋白表达水平显著增高(P<0. 05),LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白水平显著降低(P<0. 05)。与HR组相比,HR+RG细胞损伤减轻,细胞上清LDH、MDA显著减轻(P<0. 05);HDAC3和P62蛋白表达显著降低(P<0. 05),LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达升高(P<0. 05)。结论:HDAC3的表达增加介导高糖缺氧复氧引起的HK-2细胞损伤,且其与自噬功能降低密切相关;RGFP966通过抑制HDAC3蛋白的表达,促进自噬的恢复,从而减轻高糖缺氧复氧引起的损伤。     

内质网应激在大鼠肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤炎症反应中的作用

目的 观察大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E细胞)缺氧复氧损伤时内质网应激蛋白和炎症细胞因子表达的改变及其意义,以探讨缺氧复氧诱导大鼠肾小管上皮细胞内质网应激与炎症反应的关系.方法 NRK-52E细胞用含5%胎牛血清的DMEM液培养于37 ℃、5%CO2 恒温培养箱.将细胞分为正常对照组和缺氧/复氧损伤(hypoxia...     

Cu/Zn-SOD对肾小管上皮HK-2细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的:观察脂质体包裹Cu/Zn-SOD蛋白对肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧复氧损伤的影响。方法:制备脂质体包裹Cu/Zn-SOD,采用液体石蜡覆盖法构建HK-2细胞缺氧复氧模型,细胞随机分为5组(n=8):对照组、模型组、Cu/Zn-SOD组、脂质体组、SOD+脂质体组。用荧光染色法、流式细胞仪检测细胞凋亡,化学发光法检测线粒体膜电位。结果:SOD+脂质体组细胞增殖率和凋亡率均明显低于缺氧复氧模型组(P<0.05);Cu/Zn-SOD组和脂质体组线粒体膜电位高于其它3组(P<0.05)。结论:脂质体包裹Cu/Zn-SOD蛋白对HK-2细胞的抗凋亡作用可能与膜电位调控有关。     

异丙酚对大鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 探讨异丙酚不同给药时机对肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制研究.方法 噻唑蓝(MTT)法检测异丙酚不同给药时机对肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤后细胞活力的影响,流式细胞仪分析细胞凋亡的状况.RT-PCR法检测细胞中bcl-2mRNA表达.结果 ①缺氧/复氧组细胞死亡率和凋亡率与对照组相比明显增高,差异有显著性(P＜0.01).异丙酚预先和即时给药组明显降低细胞死亡率和凋亡率,差异有显著性(P＜0.01),而异丙酚延迟给药组此作用不明显,差异无显著性(P＞0.05).②缺氧/复氧后bcl-2mRNA的表达明显减少(P＜0.05),异丙酚预先和即时给药组上调bcl-2mRNA的表达,差异有显著性(P＜0.05),而异丙酚延迟给药组此作用不明显,差异无显著性(P＞0.05).结论 异丙酚预先和即时给药明显降低细胞死亡率和凋亡率,而异丙酚延迟给药此作用不明显.异丙酚预先和即时给药能上调bcl-2mRNA的表达,而异丙酚延迟给药此作用不明显.     

缺氧-复氧肾小管上皮细胞损伤的信号传导机制

目的 探讨肾小管上皮细胞在缺氧-复氧(H-R)损伤后的信号传导机制.方法 将不同方法处理的人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)分为对照组、模型组和PDTC组,模型组和PDTC组再分别分成缺氧6、12、24 h组、缺氧24 h后分别复氧6、12、24 h组;检测细胞成活率、NF-κB p65蛋白表达、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA及蛋白表达情况.结果 与对照组比较,模型组随缺氧时间延长细胞数量逐渐减少,24 h达高峰(P＜0.05),复氧后细胞数量略有增加;随缺氧时间延长NF-κB p65阳性蛋白表达增多,复氧6h组达高峰(P＜0.05);ICAM-1 mRNA及蛋白表达随H-R时间延长渐增高(P＜0.05).PDTC组中NF-κBp65蛋白和ICAM-1 mRNA及蛋白表达较模型组有明显下降(P＜0.05).结论 H-R诱导HK-2细胞中NF-κcB p65的活化,从而上调ICAM-1 mRNA及蛋白表达.     

大鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤模型的建立

目的 探讨建立大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E缺氧/复氧损伤模型的一种新方法. 方法 本实验使用大鼠NRK-52E细胞.实验分为对照组和实验组,实验组分为缺氧2,4,6 h及缺氧后复氧1,12和24 h组.缺氧时换用缺氧液,再置入N294% O2 1% CO2 5%缺氧环境;缺氧后换用含10%胎牛血清的EMDM/F12,置入95%空气 CO2 5%有氧环境,制作缺氧/复氧模型;台盼蓝摄取法进行细胞计数及检测细胞存活率,分光光度法检测培养基中的乳酸脱氢酶(LDH)含量. 结果 大鼠肾小管上皮细胞经过缺氧/复氧处理后,与对照组相比,台盼蓝摄取率显著提高,细胞存活率显著下降,LDH含量升高,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 采用三气孵箱法建立大鼠.肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤模型,较其他制模方法 操作简单、易行、可靠.     

脯氨酸羟化酶抑制剂对人肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤的影响

 目的 探讨脯氨酸羟化酶抑制剂——二甲基乙二酰基甘氨酸（DMOG）通过稳定人肾小管上皮细胞（HKC）中低氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达抗缺氧/复氧损伤（HRI）的作用及其机制。方法 无糖缺氧12 h,复氧6 h制作HKC细胞HRI模型,分别于缺氧前2、4、6、12 h给予DMOG预处理,四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）检测细胞增殖活性,试剂盒检测细胞培养液中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性,Annexin/PI染色流式细胞仪技术检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR方法检测bcl-2和bax mRNA的表达,Western印迹检测HIF-1α、bcl-2和bax蛋白的表达。结果 DMOG预处理使HKC中HIF-1α表达增加,细胞损伤明显改善,表现为细胞增殖活性提高,培养上清液中MDA含量下降、SOD活性增强,细胞凋亡率下降（P<0.05）;同时bax mRNA和蛋白表达下调（P<0.05）,bcl-2 mRNA和蛋白表达上调（P<0.05）。结论 DMOG可通过稳定HIF-1α,影响凋亡相关基因的表达,改善HRI诱导的HKC细胞损伤。     

NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路在 HK-2细胞高糖缺氧复氧损伤中的作用

目的 探讨Nod样受体蛋3炎性体(nod-like receptor protein-3, NLRP3)/半胱天冬酶-1(caspase-1)/白介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)信号通路介导的高糖缺氧复氧诱导人肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular cells,HK-2)的损伤。方法 采用数字表法将人肾小管上皮细胞(HK-2)随机分为5组(n=5),即低糖组(NG组)、低糖缺氧复氧组(NHR组)、高糖组(HG组)、高糖缺氧复氧组(HHR组)和高糖缺氧复氧+NLRP3抑制剂BAY11-7082(5μmol/L)组(HHR-BAY组)。采用高糖(30mmol/L)刺激72h建立高糖模型,缺氧4h复氧2h建立缺氧复氧模型。CCK-8检测细胞存活率;酶标仪测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性;荧光探针DCFH-DA法检测细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species, ROS)含量;ELISA法检测IL-1β含量和caspase-1活性;免疫印迹法和免疫荧光法检测细胞NLRP3蛋白的表达。结果 与NG组比较,NHR组与HG组ROS和IL-1β含量,caspase-1活性,NLRP3表达升高,细胞存活率,SOD活性降低(P均<0.05);分别与HG组和NHR组比较,HHR组ROS和IL-1β含量,caspase-1活性,NLRP3表达升高,细胞存活率,SOD活性降低(P均<0.05);而NLRP3抑制剂BAY11-7082预处理可显著抑制细胞损伤和氧化应激水平,下调NLRP3蛋白水平,caspase-1活性和IL-1β含量(P均<0.05)。结论 NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路参与了高糖缺氧复氧诱导的HK-2细胞损伤过程。     

人小肠上皮细胞缺氧复氧损伤的预防研究

应用原代培养人小肠上皮细胞（IEC），观察缺氧复氧（A／R）对体外培养人IEC的损伤作用。结果表明：A／R可使IEC细胞存活率下降和乳酸脱氨酶（LDH）漏出增加，二者呈显著的负相关，其变化程度与A／R时间有依从关系。在缺氧前或缺氧后复氧前联合应用超氧化物歧化酶和过氧化氢酶可减轻A／R诱发的细胞存活率下降和LDH漏出量增加，应用别嘌呤醇世有同样的保护作用。表明：人IEC在复氧时可产生超氧基并引起细胞损伤。     

胡黄连苷Ⅱ对大鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:研究胡黄连提取物对缺氧/复氧后肾小管上皮细胞氧化应激的保护作用和机制。方法:采用小鼠肾小管上皮细胞建立缺氧/复氧损伤模型,分别用不同梯度浓度胡黄连苷Ⅱ(1,10,100,1 000μg/ml)进行药物干预。MTT法检测细胞活性,BCA蛋白质分析试剂盒检测细胞培养液中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,免疫组化检测Bax蛋白的表达,Western Blot法检测高迁移率族蛋白(HMGB1)的表达,Realtime PCR检测Bax和Bcl-2mRNA表达。结果:与正常组相比,各缺氧/复氧组细胞内氧化应激水平增高,凋亡细胞或死亡细胞数量明显增加。与单纯缺氧/复氧组比较,不同浓度梯度的胡黄连苷Ⅱ可抑制细胞内的氧化损伤。胡黄连苷Ⅱ使肾小管上皮细胞增殖活性增强,细胞凋亡数量减少,培养液中MDA含量下降、SOD活性增强,Bax蛋白和HMGB1蛋白表达下调,Bax mRNA水平下调,Bcl-2mRNA水平上调。结论:缺氧/复氧导致肾小管上皮细胞内氧化应激增强,胡黄连苷Ⅱ能通过抑制肾小管细胞内氧化应激来改善缺氧/复氧后的细胞凋亡和坏死。     

动力相关蛋白-1在缺氧/复氧诱导人肾小管上皮细胞焦亡机制中的作用

目的 观察人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤时线粒体动力相关蛋白1 (dynamin-related protein 1,Drp1)、Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor family pyrin domain containing 3,Nlrp3)以及炎性因子的表达改变和细胞焦亡情况,探讨Drp1在H/R诱导肾小管上皮细胞焦亡中的作用.方法 HK-2细胞用含10％胎牛血清的DMEM/F12液培养于37 ℃、5％ CO2和95％O2的恒温培养箱.将细胞分为正常对照组、H/R组、H/R+ Drp1抑制剂(H/R+Mdivi-1)组、H/R+siNlrp3腺病毒(H/R+siNlrp3)组、H/R+空腺病毒(H/R+ Scra)组.检测细胞培养液上清乳酸脱氢酶LDH活性,Western blot检测Drp1、Nlrp3、凋亡相关蛋白-l(caspase-1)、IL-1β表达,2',7 '-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞活性氧(ROS)水平,流式分析仪检测细胞焦亡情况.结果 与正常对照组比较,H/R组培养液上清LDH和细胞内ROS水平明显升高,Drp1、Nlrp3、caspase-1、IL-1β表达增高,细胞焦亡明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);与H/R组比较,H/R+Mdivi-1组培养液上清LDH和细胞内ROS水平明显降低,Nlrp3、caspase-1、IL-1 β表达降低,细胞焦亡明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在H/R条件下,Drp1通过激活Nlrp3炎性体诱导人肾小管上皮细胞焦亡.     

羟基红花黄色素A对肾小管上皮细胞冷缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 观察羟基红花黄色素A(HSYA)对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)冷缺氧/复氧(H/R)损伤的作用.方法 HK-2细胞常规培养后分3组:对照组(sham组)、冷H/R组即细胞冷缺氧4 h后复氧4 h、HSYA预处理组即缺氧前0.5 h给予不同剂量(15、25、35、45、55、65、75μmol·L-1)的HSY...     

丹参酮ⅡA对缺氧/复氧损伤肾小管上皮细胞的作用 及机制研究

目的：探讨丹参酮磺酸钠ⅡA（TanshinoneⅡA,TSNⅡA）对缺氧/复氧（hypoxia/reperfusion,H/R）肾小管上皮细胞（human kidney-2,HK-2）氧化应激和凋亡的影响。方法：取传代培养的HK-2细胞建立H/R诱导细胞模型,实验分为正常对照组,单纯H/R组,H/R+20 μg/mL TSN ⅡA组,H/R+10 μg/mL TSN ⅡA组,H/R+5 μg/mL TSN ⅡA组共5组。光镜下观察各组细胞的形态变化;CCK-8法测定H/R HK-2细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平;荧光显微镜观察细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）的产生;Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达。结果：与正常对照组比较,单纯H/R组HK-2细胞增殖活性明显减少,为（43.6±10.1）%;中低浓度TSN可提高H/R HK-2细胞的增殖活性,10 μg/mL浓度的TSNⅡA对H/R HK-2细胞的增殖具有最明显的保护作用,为（79.1±11.1）%,与单纯H/R组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。20 μg/mL浓度TSNⅡA组相对于10 μg/mL浓度组对细胞增殖有一定的抑制作用,为（51.0±10.4）%（P＜0.05）。与H/R组比较,共聚焦荧光显微镜下TSNⅡA减少细胞内活性氧产生。流式细胞术检测发现各浓度TSNⅡA均对H/R HK-2细胞凋亡有一定抑制作用,其中以20 μg/mL最为明显（P＜0.05）。Western blot结果提示TSNⅡA作用H/R HK-2细胞后凋亡抑制蛋白Bcl-2上调,而促凋亡蛋白Bax下调。结论：TSNⅡA可能通过抑制氧化应激反应减少细胞凋亡,对H/R HK-2细胞产生保护作用。     

阿魏酸钠对高糖诱导肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的观察阿魏酸钠（sodiumferulate,SF）对高糖培养的人近端肾小管上皮细胞（humanproximaltubularepithelialcells,HKC）增殖和凋亡的影响。方法选用对数期生长的肾小管上皮细胞,分为对照组、高糖组、高糖加阿魏酸钠组。四甲基偶氮唑盐（microculturetetrazolium,MTT）法观察细胞增殖能力的变化,测定细胞培养液中的乳酸脱氢酶（1actatedehydrogenase,LDH）的含量以判断细胞损伤情况,Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡。结果与对照组比较,高糖组MTT吸光度值（OD值）随培养时间延长明显降低,而高糖加阿魏酸钠组OD值与高糖组比较有明显升高（P〈O．05）。随培养时间的延长,高糖组培养基中LDH水平明显升高,在12h和24h分别为（17．55±2．45）和（28．72±3．11）U／L,而高糖加阿魏酸钠组12h和24hLDH水平降至（11．84±2．18）和（19．984-3．67）U／L,和同时间点高糖组比较均有明显降低（P〈0．05）。高糖处理组培养液中的丙二醛（malondiadehycle,MDA）水平较对照组明显增加（P〈0．01）,超氧化物歧化酶（superoxidedismutase,SOD）活性明显降低（P〈0．01）,阿魏酸钠组培养液中MDA水平明显降低（P〈0．01）,SOD活性明显增加（P〈0．05,P〈0．01）。Hoechst33258荧光染色显示,对照组和高糖加阿魏酸钠组仅见个别凋亡形态细胞,高糖组典型凋亡形态细胞明显增多,细胞凋亡率为34．17％,显著高于正常对照组（5．20％）和高糖加阿魏酸钠组（7．39％,P〈0．01）。结论高糖培养可诱导人近端肾小管上皮细胞的损伤和凋亡,并抑制其增殖。阿魏酸钠对人肾小管上皮细胞系（humankidneycell,HKC）的保护作用可能是通过抑制HKC的损伤和凋亡,以及提高增殖能力实现的。     

高糖减弱肾组织干细胞条件培养液对缺氧损伤肾小管上皮细胞的修复作用

目的： 评估高糖对肾组织干细胞（kidney stem cells,KSC）条件培养液修复缺氧损伤肾小管上皮细胞（renal tubular epithelium cells,RTEC）作用的影响。方法： 分离肾乳头处的KSC,分别用正常糖浓度（简称“正糖”,5.6 mmol/L）和高糖（30 mmol/L）培养基对KSC进行预处理后制备KSC条件培养液。建立大鼠RTEC缺氧/复氧模型,比较高糖与正糖刺激后KSC条件培养液对缺氧/复氧RTEC修复作用的差异。结果： （1）缺氧4 h/复氧2 h为RTEC缺氧/复氧模型的最佳时间。（2）缺氧后,RTEC早期凋亡率和晚期凋亡率均升高,采用KSC条件培养液干预12 h和24 h后,与缺氧/复氧对照组相比,正糖缺氧/复氧组和高糖缺氧/复氧组RTEC的凋亡率均明显降低（P<0.01）。正糖组和高糖组比较,干预24 h后,正糖组RTEC的总体凋亡率显著低于高糖组（P=0.02）。（3）缺氧后,RTEC上清液的乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平明显升高（P<0.01）,超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）水平明显降低（P<0.01）。采用KSC条件培养液干预12 h和24 h后,与缺氧/复氧对照组相比,正糖缺氧/复氧组和高糖缺氧/复氧组的LDH和MDA水平均显著降低（P<0.01）,SOD水平均显著升高（P<0.01）。正糖组和高糖组比较,高糖组的LDH和MDA水平要显著高于正糖组（P<0.05）,SOD水平要显著低于正糖组（P<0.01）。结论： KSC条件培养液对缺氧损伤的RTEC有修复作用,这种作用主要是通过减少氧化应激、抑制细胞凋亡来实现的,而经高糖预处理的KSC条件培养液的抗氧化应激、抗凋亡作用减弱。     

肾损伤分子-1在肾小管上皮细胞缺氧损伤中的保护作用

目的 观察肾损伤分子-1(KIM-1)对肾小管上皮细胞缺氧损伤时增殖及凋亡的影响,证实KIM-1对肾缺氧损伤的保护作用.方法 以人近端肾小管上皮细胞HK-2为研究对象,用pcDNA-hKIM-1质粒转染HK-2细胞,获得稳定表达KIM-1的pcDNA-hKIM-1-HK2细胞株.观察pcDNA-hKIM-1-HK2细胞(A组)和KIM-1抗体预处理pcDNA-hKIM-1-HK2细胞(C组)在缺氧损伤后细胞活力、凋亡指标及凋亡相关信号分子表达,以未转染缺氧HK-2细胞(B组)作为对照.结果 A组细胞活力指数高于B组(0.427±0.046 vs.0.210±0.036,P＜0.05),细胞凋亡数量及流式细胞仪检测的缺氧早、晚期凋亡指数明显低于B组(P＜0.05).A组细胞缺氧时磷酸化ERK、磷酸化Akt表达较C组明显升高(P＜0.05).结论 KIM-1对肾小管上皮细胞缺氧损伤具有保护作用,其机制与激活PI3K-Akt/PKB和ERK信号通路抑制凋亡有关.     

普罗布考对肾小管上皮细胞氧糖剥夺/复氧损伤的影响及其机制研究

背景　肾缺血-再灌注损伤的主要病理生理基础是肾小管上皮细胞发生脂质过氧化损伤,而肾小管上皮细胞损伤直接影响尿液的形成。普罗布考是具有很强抗氧化作用的降血脂药,其可以通过提高细胞内抗氧化酶活性降低脂质过氧化水平,具有较好的组织或细胞保护作用。但目前尚未见关于普罗布考对氧糖剥夺/复氧（OGD/R）引起的人肾小管上皮细胞株（HK-2）损伤影响的报道。目的　探讨普罗布考对HK-2 OGD/R损伤的影响及其机制,为老药新用开辟新思路。方法　2017年12月—2018年9月,取HK-2,常规培养至完全贴壁后将其分为正常对照组、OGD/R组、OGD/R+25 μmol/L普罗布考组、OGD/R+50 μmol/L普罗布考组、OGD/R+100 μmol/L普罗布考组。正常对照组不予处理,OGD/R组、OGD/R+25 μmol/L普罗布考组、OGD/R+50 μmol/L普罗布考组、OGD/R+100 μmol/L普罗布考组进行OGD/R模型的建立,之后OGD/R组不予处理,OGD/R+25 μmol/L普罗布考组、OGD/R+50 μmol/L普罗布考组、OGD/R+100 μmol/L普罗布考组分别加入25、50、100 μmol/L普罗布考;分别于12、24、48 h时,计算各组细胞增殖活性,确定普罗布考最佳作用时间与浓度,用于后续实验。取HK-2,常规培养至完全贴壁后将其分为正常对照组（不予处理）、OGD/R组（建立OGD/R模型）、普罗布考组（给予最佳作用浓度的普罗布考）、OGD/R+普罗布考组（建立OGD/R模型后给予最佳作用浓度的普罗布考）;于普罗布考最佳作用时间,观察各组细胞形态,检测各组乳酸脱氢酶（LDH）活性、丙二醛（MDA）水平、谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）活性、谷胱甘肽（GSH）水平、GPX4水平。结果　OGD/R组、OGD/R+25 μmol/L普罗布考组、OGD/R+50 μmol/L普罗布考组、OGD/R+100 μmol/L普罗布考组12、24、48 h时细胞增殖活性低于正常对照组（P<0.05）;OGD/R+50 μmol/L普罗布考组、OGD/R+100 μmol/L普罗布考组24、48 h时细胞增殖活性高于OGD/R组、OGD/R+25 μmol/L普罗布考组（P<0.05）。OGD/R+50 μmol/L普罗布考组、OGD/R+100 μmol/L普罗布考组24、48 h时细胞增殖活性高于本组12 h时（P<0.05）。由于用药原则为在相似的作用下,一般选择较低浓度及较短作用时间,因此采用50 μmol/L普罗布考作用24 h进行后续实验。OGD/R组悬浮细胞增多,细胞皱缩体积减小,失去正常形态,折光性减弱;普罗布考组细胞形态结构正常,贴壁完整;OGD/R+普罗布考组悬浮细胞减少,细胞折光性较好。OGD/R组、OGD/R+普罗布考组LDH活性高于正常对照组（P<0.05）;普罗布考组、OGD/R+普罗布考组LDH活性低于OGD/R组（P<0.05）;OGD/R+普罗布考组LDH活性高于普罗布考组（P<0.05）。OGD/R组、OGD/R+普罗布考组MDA水平高于正常对照组（P<0.05）;普罗布考组、OGD/R+普罗布考组MDA水平低于OGD/R组（P<0.05）;OGD/R+普罗布考组MDA水平高于普罗布考组（P<0.05）;OGD/R组GPX活性低于正常对照组（P<0.05）;普罗布考组、OGD/R+普罗布考组GPX活性高于OGD/R组（P<0.05）;OGD/R+普罗布考组GPX活性低于普罗布考组（P<0.05）。OGD/R组GSH水平低于正常对照组（P<0.05）;普罗布考组、OGD/R+普罗布考组GSH水平高于OGD/R组（P<0.05）。OGD/R组GPX4水平低于正常对照组（P<0.05）;普罗布考组、OGD/R+普罗布考组GPX4水平高于OGD/R组（P<0.05）。结论　普罗布考对OGD/R引起的HK-2损伤具有保护作用,可能机制是通过激活GPX,尤其是提高GPX4水平,直接或间接抑制脂质过氧化物的过度产生。     

异丙酚预处理对HK-2细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制

目的探讨P38MAPK对异丙酚预处理的HK-2细胞缺氧/复氧损伤的保护作用的影响。方法取离体培养的HK-2细胞,随机分成5组:对照组(A组)。CoCl2组(B组):加入300μMCoCl2处理1h,然后更换正常的培养基培养24h,之后更换无血清的培养基培养。异丙酚组(C组)培养孔中加入25μmol/L异丙酚预处理1h后加入300μM的CoCl2处理1h,然后更换正常的培养基培养24h,之后更换无血清的培养基培养。脂肪乳剂组(D组):加入10%脂肪乳剂90μL预处理1h后加入300μMCocl2。SB组(E组),培养孔中加入10mol/LSB203580预孵育10min后处理同C组。MTT法测定细胞增殖,流式细胞技术测定细胞的凋亡。RT-PCR技术检测Bcl-2,Caspase-3和P38mRNA表达。结果脂肪乳剂组与CoCl2组比较,差异无统计学意义,25μmol/L异丙酚预处理可以明显增加HK-2细胞的增殖能力,减少凋亡(P<0.05或P<0.01)。预处理上调P38mRNA的表达,同时可以上调凋亡抑制基因Bcl-2的表达,下调促凋亡基因caspase-3的表达,而这些调节作用可被SB203580抑制(P<0.05或P<0.01)。结论25μmol/L异丙酚预处理对缺氧/复氧后的HK-2细胞有保护作用,P38MAPK和凋亡相关基因在预处理中起到重要的作用。     

AP-1活化在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的探讨转录活化蛋白-1（activator protein-1,AP-1）在高糖诱导的肾小管上皮细胞表型转化中的作用。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞（human kidney proximal tubular epithelial cell,HK2）分为正常对照组、高糖组、AP-1阻断组。光镜、透射电镜观察细胞形态的改变,免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）和细胞角蛋白（cytokeratin,CK）的表达,用凝胶电泳迁移率改变分析法（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）检测HK2细胞AP-1的改变,RT—PCR法检测CKmRNA的表达,Westernblot检测α-SMA蛋白的表达。结果高糖作用48h后,HK2细胞由椭圆形贴壁生长变为长梭形,胞体拉长,透射电镜下,细胞表面微绒毛明显减少,胞质内粗面内质网丰富,而AP-1阻断组较高糖组明显减轻;EMSA结果分析表明,在高糖刺激下,AP-1结合活力较正常对照组增加79．22％（P〈0．05）,而AP-1阻断剂可明显抑制AP—1的活化,较高糖组降低51．19％（P〈0．05）;免疫细胞化学和RT—PCR检测显示,高糖组和AP-1阻断组CKmR—NA和蛋白水平明显降低（P〈0．05）,而AP—1阻断组显著高于高糖组（P〈0．05）;免疫细胞化学和Westernblot检测显示,高糖组和AP-1阻断组α—SMA蛋白表达明显高于正常组（P〈0．05）,而AP-1阻断组显著低于高糖组（P〈0．05）。结论高糖能够导致肾小管上皮细胞AP-1活化,诱导其表型转化。