壳聚糖-聚乙二醇纳米粒介导的Survivin RNAi基因纳米复合物的制备及其特性研究

目的 制备壳聚糖-聚乙二醇纳米粒介导的survivin RNAi基因纳米复合物,并对其相关性质进行评价.方法 通过接枝共聚法制备出空白壳聚糖-聚乙二醇纳米粒;通过静电吸附作用连接基因质粒形成基因纳米复合物.并对基因纳米复合物的包封率进行测定;通过Dnase Ⅰ消化壳聚糖-聚乙二醇纳米-质粒结合物以观察纳米载体对质粒的保护作用;通过对比基因-纳米复合物与裸基因对基因-纳米复合物的转染效率进行评价.结果 经电镜检测表明壳聚糖-聚乙二醇纳米粒呈球形,粒度分布均匀,粒径集中在60 nm左右;琼脂糖凝胶电泳的结果显示纳米粒能有效地保护基因质粒;不同基因纳米比的基因-纳米复合物对质粒的保护作用不同;Dnase Ⅰ消化试验证实壳聚糖纳米载体对质粒DNA有保护作用.结论 制备出的壳聚糖-聚乙二醇纳米粒粒度均匀,并且能有效地连接上质粒并对其有保护作用.壳聚糖-聚乙二醇纳米粒介导的survivinKNAi基因纳米复合物克服了KNA干扰在肿瘤的基因治疗中作用短暂和不能持久作用的不足.     

结核杆菌ESAT-6抗原Th1优势表位与FL重组纳米疫苗的制备及其特性研究

目的:制备适当粒径的壳聚糖纳米粒,并连接质粒,评价该壳聚糖纳米粒对该质粒的结合能力与保护作用,为进一步研究重组纳米疫苗的免疫效果提供基础?方法:采用离子交联法制备成pIRES-TH-FL-壳聚糖纳米粒复合物,用紫外分光光度计检测纳米颗粒对质粒的包埋率;经琼脂糖凝胶电泳分析纳米载体与质粒的结合能力及对该质粒的保护作用;通过喷金电镜观察其大小形态;另用zata电位仪测定粒径和zeta电位;最后用Western blot实验鉴定其在真核细胞中的表达情况?结果:紫外分光光度计检测到该壳聚糖纳米质粒的包埋率为99.28%,琼脂糖凝胶电泳结果显示壳聚糖纳米粒能保护该质粒免受DNaseⅠ的降解?制得的壳聚糖纳米质粒粒径为300 nm左右,zeta电位为32.4 mV?Western blot证实,该纳米质粒能转染293T细胞并表达目的融合蛋白?结论:本实验成功制备了粒径适当且分布均匀的壳聚糖纳米质粒,并能够在体外实现有效表达?     

壳聚糖纳米基因载体的制备及特性的研究

目的 制备适当粒径的壳聚糖纳米粒,并连接上质粒,研究壳聚糖纳米粒对质粒DNA的结合能力及保护作用.方法 采用离子交联法制备壳聚糖纳米粒,通过喷金电镜观察其大小、形态及分布;经琼脂糖凝胶电泳分析纳米载体与DNA的结合能力及对DNA的保护作用;通过紫外分光光度计检测其包埋率.结果 喷金电镜证实壳聚糖纳米粒分布均匀,呈近似球形,平均粒径约5 nm.琼脂糖凝胶电泳结果显示壳聚糖纳米粒能有效地结合质粒,并保护DNA免受Dnase Ⅰ的降解,紫外分光光度计检测按不同比例结合质粒的壳聚糖纳米粒(纳米粒:质粒)的包埋率分别为98.7%(10:10),98.1%(10:20),96.7%(10:30),87.1%(10:40),74.6%(10:50).结论 成功制备了适当粒径且分布均匀的壳聚糖纳米粒.壳聚糖纳米粒能有效地结合质粒,并保护其免受Dnase Ⅰ的降解.     

壳聚糖纳米基因载体的制备和鉴定

目的 制备载基因壳聚糖纳米粒,研究纳米粒的结构特征以及对细胞的基因转染效率.方法 用表达绿色荧光蛋白的质粒(pGFP)作报告基因,采用复凝聚法制备壳聚糖-pGFP纳米粒.琼脂糖凝胶电泳分析壳聚糖和pDNA的结合能力,通过比色法检测其包封率,用纳米粒度仪和原子力显微镜对纳米粒的形态和粒径分布进行考察;通过荧光显微镜观察壳聚糖纳米粒介导pGFP在体外培养的人结肠腺癌细胞LoVo中的表达.结果 琼脂糖凝胶电泳分析结果表明,pDNA与壳聚糖之间通过静电作用而完全结合,包封率大于90%.制备的壳聚糖-pGFP纳米粒为结构紧密的不规则球形,平均粒径为209 nm,多分散指数为0.15.体外细胞转染的结果表明,壳聚糖-pGFP纳米粒能介导pGFP转染LoVo细胞并在细胞中表达绿色荧光蛋白.结论 壳聚糖可以有效凝聚pDNA,采用复凝聚法可制得100～500 nm范围荷正电的纳米粒,有较高的包封率.壳聚糖纳米粒在体外能将基因递送到细胞内,并且报告基因能在细胞内表达.因此,壳聚糖作为非病毒基因载体具有介导核酸类生物大分子的应用价值.     

多聚赖氨酸氧化铁纳米粒制备与体外转染实验研究

目的 评价多聚赖氨酸氧化铁磁性纳米粒作为基因载体在体外转染中的可行性.方法 应用改进的共沉淀法制备多聚赖氨酸氧化铁磁性纳米粒(poly-L-lvsine iron oxide nanoparticles,PLL-IONP).使用透射电镜检测PLL-IONP的形态和粒径.采用琼脂糖凝胶电泳分析PLL-IONP结合质粒pEGFP-C1及抵抗DNaseI消化的能力.以PLL-IONP作为基因栽体将质粒pEGFP-C1转染入SMMC-7721细胞中.结果 PLL-IONP分散性好,大小均,粒径在35nm左右.琼脂糖凝胶电泳显示,PLL-IONP在各种质量比均有良好的DNA结合能力.DNA保护实验显示PLL-IONP能有效保护DNA不被DNase Ⅰ降解.荧光显微镜观察到了绿色荧光蛋白在SMMC-7721细胞中表达.结论 成功制备了多聚赖氨酸氧化铁磁性纳米粒,该纳米粒在体外可作为基因载体,有效的介导质粒pEGFP-C1转染.     

载绿色荧光蛋白基因壳聚糖纳米粒载体的制备和转染的研究

目的 优化试验条件，制备合适的壳聚糖纳米粒，并连接上质粒，研究壳聚糖纳米粒对DNA的结合能力。方法 以离子交联法制备壳聚糖纳米粒，并送激光微粒度仪及扫描电子显微镜检测，了解粒径的分布与形态；通过静电吸附作用连接上增强型绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1(报告基因)；经琼脂糖凝胶电泳分析载体与：DNA结合能力，并通过紫外分光光度计检测其载药量和包埋率。结果 微粒度分析仪及电镜检测证实壳聚糖纳米粒呈均匀分散的球形颗粒，最小粒径为50nm，平均直径为95nm，琼脂糖凝胶电泳的结果显示壳聚糖纳米粒能有效地结合增强型绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1,紫外分光光度计检测不同比例结合(纳米粒：质粒)pEGFP-C1,质粒的壳聚糖纳米粒的包埋率分别为：100％(50：10)，100％(50：20)，92％(50．75)和65％(50．100)。结论 制备出粒径较小、均匀的壳聚糖纳米粒，并且壳聚糖纳米粒能有效地连接上质粒。     

聚乙烯亚胺修饰纳米金基因载体制备及体外实验研究

目的 制备聚乙烯亚胺修饰纳米金基因载体并研究其理化性质的表征参数和体外转染效率.方法 通过化学还原法制备聚乙烯亚胺修饰的纳米金基因载体,用绿色荧光蛋白质粒(pAcGFP-N1)做报告基因,纳米基因载体可通过静电吸附的方式结合质粒DNA.用紫外分光光度计检测其吸收光谱,用透射电镜观察其形态特征,激光粒度分析仪测定其粒度分布、表面电位(Zeta电位),1％琼脂糖凝胶电泳检测该基因载体与质粒DNA的结合稳定性,CCK-8实验检测聚乙烯亚胺修饰纳米金基因载体及DNA-纳米金复合物对HEK293细胞的细胞毒性作用,通过荧光显微镜观察聚乙烯亚胺纳米基因载体介导pAcGFP-N1在体外培养的HEK293细胞中的表达,并分析其转染效率.结果 聚乙烯亚胺还原氯金酸可以得到带正电荷的纳米颗粒,呈单分散球形分布,其粒径为(12.3 ±3.3)nm.在pH =7.2时,Zeta电位为+(29.7±5.1)mV.1％琼脂糖凝胶电泳结果表明,当纳米金/质粒DNA≥0.5时,质粒DNA可完全结合到纳米金表面.体外转染实验表明,聚乙烯亚胺修饰纳米金基因载体能介导pAcGFP-N1转染HEK293细胞并在细胞中表达绿色荧光蛋白,其转染效率可达25％.结论 聚乙烯亚胺修饰纳米金是一种新型非病毒基因载体,具有转染效率高、对细胞毒性小等优势.     

巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1 (+) -EGFP纳米粒的构建和对HeLa细胞体外转染活性的研究

目的 制备巯基化壳聚糖,构建巯基化壳聚糖-质粒DNA (pDNA) 纳米粒,并研究该纳米粒对HeLa细胞的体外转染活性.方法 1- (3-二甲胺基丙基) -3-乙基碳二亚胺盐酸盐 (EDAC) 催化巯基乙酸与壳聚糖反应生成巯基化壳聚糖,傅里叶变换红外光谱仪测量产物的红外光谱,5-5'-二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB) 法检测产物的巯基含量;以pcDNA 3.1 (+) -EGFP为报告基因,巯基化壳聚糖为载体,用复凝聚法制得巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1 (+) -EGFP纳米粒,Zeta电位和粒度分析仪检测该纳米粒的表面电位和粒径.纳米粒经DNase I处理、再在肝素作用下解聚,用琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性.评价巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1(+) -EGFP纳米粒对HeLa细胞的体外转染活性,MTT法测定该纳米粒对HeLa细胞的毒性.结果 红外光谱图显示壳聚糖在EDAC的作用下被巯基化.DTNB法显示1 g巯基化壳聚糖的巯基含量为 (202.85±3.05) μ moL (n=6) .Zeta电位及粒度分析仪的结果表明巯基化壳聚糖-pcDNA3.1 (+) -EGFP纳米粒的平均粒径为288.7nm,Zeta电位为+ (25.2±2.1) mV.DNase I保护实验证明该纳米粒能有效抑制DNase I对内部pDNA的降解.体外转染实验表明巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1 (+) -EGFP纳米粒能有效转染HeLa细胞系,且对HeLa细胞生长无抑制作用.结论 该制备工艺生产的巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1 (+) -EGFP纳米粒能将质粒DNA导入HeLa细胞,使报告基因有效地表达.所以巯基化壳聚糖是基因转运和基因治疗中有应用潜力的非病毒类载体.     

壳聚糖纳米粒基因载体的制备和体外转染实验研究

目的制备基因载体壳聚糖纳米粒,研究其结构特征及其体外对细胞的转染活性。方法以复凝聚法制备壳聚糖-pDNA纳米粒;电镜测定其形态、粒径;凝胶电泳阻滞实验观察壳聚糖和pDNA的结合力;紫外可见分光光度计测定其负载力、负载率;体外转染人人胚肾细胞293T,荧光显微镜观察转染效率,CCK8法评价细胞毒性。结果壳聚糖-pGFP纳米粒多呈球形,直径为（132±48）nm;凝胶电泳阻滞实验示pGFP被完全包裹在纳米粒内;其负载力（LC）为（48．2±2．0）％,负载率（LE）为100％;体外转染实验证明壳聚糖-pGFP纳米粒能介导pGFP转染293T细胞并在细胞中表达绿色荧光蛋白;壳聚糖-pDNA抑制率（26．08±4．28）％。结论采用复凝聚法制备的壳聚糖-pDNA纳米粒可有效转染至细胞内,但有一定的细胞毒性。     

阳离子氧化铁纳米粒作为基因载体的体外实验研究

目的 探讨阳离子氧化铁纳米粒(Cationic IONPs)的制备及其作为体外基因裁体的可行性.方法 改进的共沉淀法制备Fe3O4纳米粒,利用3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)进行表面修饰.利用原子力显微镜,激光粒度分析仪,琼脂糖凝胶电泳等手段对Cationic IONPs的形貌、粒径、Zeta电位、DNA结合能力等进行表征.以增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP-C1)作为靶基因,荧光显微镜和流式细胞仪分别观察和测定Cationic IONPs和脂质体体外转染效率. 结果 Cationic IONPs粒径为(32.1±1.8)nm,在pH=7条件下,Zeta电位为(13.5±1.6)mV,与质粒质量比为1:1时结合效率最高,可以携带pEGFP-C1进入细胞并获得表达,转染效率为(32.8±5.2)%,高于阳性对照组LipofectamineTM 2000转染效率(28.8±5.6)%.结论 氨基硅烷偶联剂修饰的氧化铁纳米粒是一种可用于体外转染的新型非病毒载体.     

CTAB@SiO2纳米复合物作为基因转染载体的研究

目的 制备由十六烷甲基溴化铵(CTAB)包覆的阳性二氧化硅(SiO2)纳米粒,研究CTAB@SiO2纳米复合物对脑胶质瘤细胞U251的细胞毒性,探讨该复合物与内皮抑素基因结合后对基因的保护作用.方法 通过微乳法制备SiO2纳米粒,利用静电结合作用及疏水键合作用将CTAB包覆在SiO2表面.MTT法测定纳米复合物对U251的细胞毒性.琼脂糖凝胶电泳研究该复合物能否运载DNA及保护DNA不被核酸酶降解.结果 CTAB@SiO2纳米粒粒径为101.7 nm,zeta电位为+27.9 mV.MTT实验,CTAB@SiO2纳米粒细胞毒性介于SiO2纳米粒和游离CTAB之间.琼脂糖凝胶电泳试验表明该复合物能与DNA结合,防止DNA被核酸酶降解.结论 CTAB@SiO2纳米复合物适合作为基因转染的非病毒载体.     

聚乙烯亚胺载基因纳米颗粒的制备及其相关特性的研究

目的 制备聚乙烯亚胺载基因纳米颗粒并研究其理化性质和体外转染活性.方法 通过自由基聚合法制备出聚乙烯亚胺空载纳米粒后,用绿色荧光蛋白(PEGFP-C1)质粒做报告基因,以静电吸附的方式将PEGFP-C1质粒DNA和聚乙烯亚胺结合形成聚乙烯亚胺裁基因纳米粒,用透射电镜观察其形态特征,激光粒度分析仪测定其粒度分布、表面电位(Zeta电位),MTT试验检测聚乙烯亚胺纳米载体HepG2和L-02的细胞毒作用,用体外基因转染实验评价纳米粒的转染活性,用流式细胞仪测定转粢效率.结果 聚乙烯亚胺与聚甲基丙烯酸甲酯形成表面带正电荷的纳米粒,呈单分散球形,平均粒径为102.62 nm,Zeta电位为+46.2 mV.当PEGFP-C1质粒DNA与纳米粒的N/P为3.2:1以上时,两者方可完全结合形成复合物.PEI纳米粒可携带质粒DNA进入COS7细胞,并突破吞噬小泡释放质粒于细胞质,最终质粒聚集于细胞核内进行表达.结论 聚乙烯亚胺纳米粒可以用作基因递送的非病毒栽体系统,值得进一步研究.     

稳定表达GFP-LC3的RAW264.7细胞系的建立

目的:建立稳定表达GFP-LC3的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞系.方法:构建pcDNA3.1-GFP-LC3真核表达载体,应用转染技术将该质粒导入RAW264.7细胞,用G418筛选稳定表达的细胞系.真核细胞中GFP-LC3的表达分别用荧光显微镜与Western blot方法检测,并利用该稳定表达细胞系观察内质网应激时细胞发生自噬的情况.结果:成功获得2株转染并经G418反复筛选的RAW264.7细胞系,在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光的表达率在95%以上,Western blot结果证实了GFP-LC3融合蛋白的表达.激光共聚焦显微镜和Western blot均证明内质网应激可以诱导自噬的发生.结论:用peDNA3.1-GFP-LC3转染的RAW264.7细胞经G418筛选,可成功建立GFP-LC3稳定表达系,从而为后续功能实验提供有用的细胞研究模型. ern blot方法检测,并利用该稳定表达细胞系观察内质网应激时细胞发生自噬的情况.结果:成功获得2株转染并经G418反复筛选的RAW264.7细胞系,在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光的表达率在95%以上,Western blot结果证实了GFP-L 3融合蛋白的表达.激光共聚焦显微镜和Western blot均证明内质网应激可以诱导自噬的发生.结论:用peDNA3.1-GFP-LC3转染的RAW264.7细胞经G418筛选,可成功建立GFP-LC3稳定表达系,从而为后续功能实验提供有用的细胞研究模型.     

载ACEshRNA表达质粒壳聚糖纳米转染培养的大鼠血管内皮细胞实验性研究

目的研究载血管紧张素转化酶短发卡RNA(ACEshRNA)表达质粒壳聚糖纳米颗粒对体外培养大鼠血管内皮细胞的转染效率。方法采用离子交联法制备壳聚糖纳米粒,喷金扫描电子显微镜鉴定;通过静电吸附复合ACEshRNA表达质粒,采用琼脂糖凝胶电泳分析载体与DNA结合能力;用体外培养大鼠血管内皮细胞转染实验,评价体外壳聚糖颗粒的转染能力。结果体外对培养的大鼠血管内皮细胞的转染实验显示,绿色荧光蛋白的表达,说明该壳聚糖有一定的转染效率,且在壳聚糖与质粒体积比为1∶3时转染率最高。结论本研究制备的载ACEshRNA表达质粒壳聚糖纳米载体,能在体外培养的大鼠血管内皮细胞实现有效转染,并且为进一步转染条件的优化奠定实验基础。     

聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒基因载体的制备及相关性质的体外研究

目的优选制备可载带质粒DNA的聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(PBCA-NPs)的工艺条件,并研究其体外生物学特性.方法选用乳化聚合法制备PBCA-NPs,采用正交实验法,以激光粒度分析仪及原子力显微镜(AFM)综合分析实验结果来确定最优化的制备条件.用阳离子表面活性剂十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)对纳米粒进行表面修饰后连接质粒DNA,并分析PBCA-NPs及CTAB修饰的PBCA-NPs的细胞毒性效应、DNA装载效率、PBCA-NPs-DNA抗超声破坏和抗DNaseI的降解作用及其在体外的基因转染能力.结果激光粒度分析仪及原子力显微镜结果表明,PBCA-NPs粒形圆整,大小均匀,平均粒径106nm.琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度计测定DNA装载量达93%.该纳米粒能显著提高质粒DNA抵抗核酸酶降解和超声波剪切的能力.细胞转染实验表明,该纳米粒传递质粒DNA进入HepG2和3T3细胞的效率较高.结论利用该制备工艺生产出的具备良好生物学特性的PBCA-NPs是基因转运和基因治疗中极具应用潜力的非病毒载体.     

壳聚糖季铵盐作为基因递送载体的初步研究

目的考察壳聚糖季铵盐体外基因转染活性,寻求一种新的非病毒基因载体递送系统。方法凝胶阻滞实验分析壳聚糖季铵盐包裹质粒的能力,DNase I的保护实验分析载基因纳米粒的抵抗核酸酶降解的能力,体外基因转染实验评价纳米粒的体外转染活性,用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪测定转染结果。通过考察转染液中有无牛血清和递送不同剂量的基因对转染效率的影响,寻求本递送系统较好的转染条件。另外,用MTT法测定壳聚糖季铵盐的细胞毒性。观察壳聚糖季铵盐和pcDNA 3．1-EGFP以何种比例结合形成的纳米粒、转染液中有无牛血清,质粒的量为多少时对人胚肾T细胞的转染效率是最高的;不同浓度的壳聚糖季铵盐对细胞生长的影响。结果壳聚糖季铵盐纳米粒能转入人胚肾T细胞,虽然转染效率略逊于聚乙烯亚胺,但是细胞毒性明显小于聚乙烯亚胺。壳聚糖季铵盐纳米粒转染细胞72h后效率较高,经综合分析,当pcDNA质量为2μG,壳聚糖季铵盐和peDNA以质量比为5结合形成的纳米粒,在无血清条件下对人胚肾T细胞进行转染,转染效率是最高的。结论壳聚糖季铵盐纳米粒能将基因递送到细胞内,并且报告基因能在细胞内表达。因此,壳聚糖季铵盐用做基因递送的载体系统值得进一步的研究。     

载基因壳聚糖-聚乙二醇纳米粒的制备和体外评价

目的 制备壳聚糖-聚乙二醇(CS-PEG)载基因纳米粒,并对其体外的相关性质进行初步研究.方法 用接枝共聚法制备壳聚糖-聚乙二醇纳米粒;用复凝聚法制备载基因纳米粒;通过其形态、粒径、ζ电位、栽药量、包封率和基因保护实验考察其理化特性以及基因转染效果;逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法和Western blot法检测转染Mcl-1 siRNA质粒后肝癌细胞中Mcl-1的表达.结果 CS-PEG纳米粒粒径为(68.9±12.3)nm,ζ电位为(32.0±6.4)mV;栽基因纳米粒粒径为(111.4±16.9)nm,ζ电位为(7.5±6.4)mV,包封率为(86.8±9.7)%,载药量为(31.2±5.3)%,对基因有较好的保护作用;载基因纳米粒的最大转染效率为转染后72h的(81.39±3.57)%,强于脂质体组且持续作用时间长(P<0.05);对肝癌细胞中Mcl-1的表达明显抑制.结论 制备出低细胞毒性的CS-PEG纳米载体,载基因后粒径小,带正电荷,有很好的基因保护功能、较高的包封率和栽药量,能高效率转染至细胞并有效抑制肝癌细胞中Mcl-1的表达,降低癌细胞的生存能力.     

PEI-氧化铁磁性纳米颗粒作为基因载体的实验观察

目的:评价氧化铁磁性纳米颗粒(MNPs)作为体外基因载体的可行性及外加磁场对于其转染效率的影响.方法:以FeCl3水溶液作原料,采用部分还原沉淀法制备纳米磁性颗粒,并用聚乙烯亚胺(PEI)对其进行表面修饰.利用电镜、X-射线衍射、琼脂糖凝胶电泳等手段对MNPs的形貌、粒度分布、物相组成、DNA结合能力等进行表征.应用荧光素酶报告基因系统,检测MNPs-PEI将外源基因转染至不同细胞系的转染特性以及外加磁场对基因载体效率的影响.结果:MNPs-PEI可将外源基因转染至多个细胞系并高效表达.不同细胞系的转染效率和时间各不相同.外加磁场可使转染效率提高4～5倍.结论:PEI修饰的磁性纳米颗粒是一种可用于体外转染的新型非病毒基因载体,外加磁场可提高其转染效率.     

葡聚糖磁性纳米颗粒在基因转染中的应用

目的:评价葡聚糖磁性纳米颗粒作为基因载体在体外转染中的可行性。方法:用紫外分光光度计及琼脂糖凝胶电泳法分析检测葡聚糖磁性纳米颗粒结合DNA的能力,再将葡聚糖磁性纳米颗粒作为基因载体连接绿色荧光蛋白pEGFP-C1质粒报告基因在体外转染人膀胱肿瘤细胞BIU87和人树突状细胞,并在转染后72 h采用MTT比色法测定这种载体对细胞增殖和功能的影响以了解其细胞毒性。结果:在葡聚糖磁性纳米颗粒表面修饰多聚赖氨酸后,以静电引力作用结合DNA,其DNA结合率可达到75.6%,修饰多聚赖氨酸的葡聚糖磁性纳米颗粒可作为基因载体将报告基因转染至各类型细胞内并成功表达,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光细胞。与相同条件下脂质体为对照,转染后的细胞增殖活性及功能略优于对照组,有效地证明了葡聚糖磁性纳米颗粒的细胞毒性稍低于脂质体的细胞毒性。结论:葡聚糖磁性纳米颗粒可作为有效的基因载体之一。     

壳聚糖-碳纳米粒的制备及其体外性质的研究

目的 制备壳聚糖-碳纳米颗粒并研究其理化性质和体外活性。方法 首先，用溶胶法制备出分散性良好的碳纳米粉末，再通过正负电荷相互吸引制备出壳聚糖-碳纳米颗粒；其次，用绿色荧光蛋白（PEGFP-C1）质粒DNA作报告基因，以静电吸附的方式将PEGFP-C1质粒DNA与壳聚糖-碳纳米颗粒结合形成载基因纳米粒；再次，用扫描电镜观察其形态特征，激光粒度分析仪测定其粒度分布及表面电位（Zeta电位），MTT试验检测壳聚糖-碳纳米载体对HepG2细胞和COS7细胞的毒性作用，凝胶阻滞实验确定该基因载体的DNA携带率，DNase Ⅰ保护实验研究其对所携带基因的保护作用，体外纳米粒导入实验定性评价纳米粒进入在体外进入细胞的活性，并用荧光显微镜观察导入效果。结果 壳聚糖-碳纳米粒表面携带正电荷，聚合指数〈0．3；与DNA结合后效率较高，且可保护DNA免受DNase Ⅰ的降解；经FITC标记后能够成功地进入到COS7细胞和HepG2细胞。结论 壳聚糖-碳纳米颗粒能进入到细胞内部，且导入效率较高，可以用作基因递送的非病毒载体系统，值得进一步研究。