参芪补肺方对慢性阻塞性肺疾病稳定期大鼠Nrf2和γ-GCS表达的影响

目的探讨参芪补肺方对大鼠肺组织红系衍生核因子相关因子-2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(gamma-glutamylcysteines-ynthetase,γ-GCS)的mRNA及蛋白表达水平的影响。方法将40只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、中药组、富露施组,每组各10只。除空白组外,其余3组均采用香烟烟雾熏制和经鼻给予脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)制作慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠模型,且给予相应干预,连续灌胃30 d。于第38天对大鼠进行麻醉并提取肺组织,通过RT-PCR法检测Nrf2和γ-GCS的mRNA表达水平,通过免疫组化法、Western blot法检测Nrf2和γ-GCS蛋白表达水平。结果中药组、富露施组大鼠Nrf2、γ-GCS的mRNA和蛋白表达均低于模型组,差异有统计学意义(P0.05);中药组大鼠Nrf2、γ-GCS的mRNA和蛋白表达与富露施组组间比较差异无统计学意义(P0.05),疗效相当。结论参芪补肺方能够通过降低Nrf2、γ-GCS的mRNA及蛋白的表达,减轻COPD大鼠的氧化应激反应。     

通腑降浊方对便秘型肠易激综合征大鼠粪便菌群结构的影响

【目的】从调控肠道微生物角度探讨通腑降浊方对便秘型肠易激综合征(IBS-C)大鼠的效应机制。【方法】将49只雄性SD大鼠随机分为7组,即正常组,模型组,西沙必利组,益生元组,中药高、中、低剂量组,每组7只。采用冰水灌胃法复制IBS-C大鼠模型。造模成功后,西沙必利组给予西沙必利片(剂量为3.6 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,益生元组给予乳果糖口服溶液(剂量为1667.5 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,中药高、中、低组分别给予通腑降浊方颗粒(剂量分别为18.500、9.250、4.625 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃治疗,模型组和正常组给予等量生理盐水灌胃。治疗14 d后,留取大鼠粪便,通过16S rDNA扩增子测序技术,分析其菌群特征。采用苏木素—伊红(HE)染色法观察结肠组织病理变化。【结果】与正常组比较,模型组及各治疗组大鼠出现便秘、易激惹,粪便菌群结构紊乱、丰富度下降;与模型组比较,各治疗组大鼠粪便性状及情绪好转,粪便菌群结构接近正常组,其中中药高剂量组治疗后作用最明显。【结论】通腑降浊方可能通过提高IBS-C大鼠肠道微生物丰富度,调整菌群紊乱,稳定肠道微生态发挥对IBS-C大鼠的治疗作用。     

何氏养肾方对肾病综合征大鼠模型的抗炎作用

【目的】探讨何氏养肾方对阿霉素所致肾病综合征大鼠的抗炎作用。【方法】采用一次性尾静脉注射阿霉素建立肾病综合征大鼠模型。将59只造模成功的大鼠,随机分为模型组(N=11),阳性对照组(N=12),中药高、中、低剂量组(各组N=12),另选取10只正常大鼠为正常组。造模2周后,开始给药,正常组、模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃;阳性对照组给予贝那普利片水溶液灌胃,前15 d剂量为10 mg·kg-1·d-1,后15 d剂量为20 mg·kg~(-1)·d~(-1);中药高、中、低剂量组大鼠给予何氏养肾方水煎液灌胃,剂量分别为33.26、16.63、8.32 g·kg~(-1)·d~(-1);用药时间持续30 d。治疗期间观察大鼠一般情况;给药结束后,应用生化分析仪测定各组大鼠24 h尿蛋白定量、尿蛋白、尿肌酐水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠血清超敏C反应蛋白(Hs-CRP)表达水平,采用免疫组化法检测各组大鼠肾组织细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)表达。【结果】造模后大鼠体质量增长较正常组均显著减缓(P0.01)。与正常组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白定量、血清Hs-CRP、肾组织ICAM-1、VCAM-1表达水平均显著升高(P0.05或P0.01);与模型组比较,阳性对照组和中药高剂量组大鼠24 h尿蛋白定量显著降低(P0.05),阳性对照组和中药各治疗组大鼠血清HsCRP、肾组织ICAM-1、VCAM-1表达水平显著降低(P0.05或P0.01)。【结论】何氏养肾方对阿霉素肾病综合征大鼠有一定的抗炎作用,其机制可能与降低肾组织ICAM-1、VCAM-1表达有关,其中高剂量的何氏养肾方疗效更好。     

温经止痛方对子宫内膜异位症模型大鼠自嗜基因Beclin-1、LC3表达的影响

【目的】探讨温经止痛方对子宫内膜异位症(EMS)模型大鼠子宫在位/异位内膜自噬基因Beclin-1、LC3表达的影响。【方法】将90只大鼠随机分为假手术组,模型组,中药高、中、低剂量组,西药组等6组,每组15只。中药高、中、低剂量组大鼠给予温经止痛方(剂量分别为74、37、18.5 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃;西药组大鼠给予孕三烯酮胶囊(剂量为0.5 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,每周2次;模型组及假手术组大鼠给予等量生理盐水灌胃。均给药8周。采用苏木素—伊红(HE)染色观察子宫内膜病理学变化,分别采用实时定量PCR(qPCR)法、免疫组化法检测在位、异位内膜中Beclin-1、LC3 m RNA及蛋白的表达。【结果】给药后中药高剂量组及西药组异位病灶较给药前缩小(P0.05)。模型组在位、异位内膜上Beclin-1、LC3 mRNA及蛋白表达水平低于假手术组(P0.01)。中药高剂量组及西药组的在位、异位内膜上的LC3及Beclin-1 m RNA及蛋白表达水平高于模型组(P0.01)。【结论】EMS的发生可能与Beclin-1、LC3表达失调有关。温经止痛方可有效缩小异位灶,调整Beclin-1、LC3的表达,抑制异位内膜生长。     

丁苯酞对肾间质纤维化的干预作用及机制研究

目的 探讨丁苯酞的肾保护机制及核因子E2相关因子2(Nrf2)-抗氧化还原反应元件(Nrf2-ARE)通路在肾间质纤维化中的作用.方法 清洁级CD-1小鼠分为4组:假手术组、模型组、治疗组、阳性对照组.假手术组、模型组均给予等量生理盐水灌胃.治疗组、阳性对照组分别给予丁苯酞、贝那普利灌胃.将各组小鼠分别于术后第3、7、14天处死,取梗阻侧肾组织,通过免疫组织化学染色、RT-PCR等实验手段检测肾组织Ⅰ型胶原蛋白、Nrf2及γ-GCS蛋白及mRNA的表达水平.并将Nrf2与γ-GCS及Ⅰ型胶原蛋白与γ-GCS进行相关性分析.结果 免疫组织化学及RT-PCR结果均显示模型组Ⅰ型胶原蛋白mRNA及蛋白较假手术组有明显升高,并且随着梗阻时间的延长表达逐渐增多.治疗组及阳性对照组小鼠在各时间点较模型组表达显著减少.动态观察Nrf2 mRNA的表达,结果显示:与同期假手术组相比,术后3、7、14d模型组小鼠肾组织中Nrf2、r-GCS、Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达均增加,给予丁苯酞干预后,Nrf2 mRNA在7、14 d时治疗组与模型组比较表达均显著增加(P＜0.05),治疗组Nrf2在各时间点表达均强于阳性对照组(P＜0.05).RT-PCR学检测γ-GCS mRNA变化趋势同于Nrf2,其肾保护效应随时间延长呈增强趋势.相关性分析显示:Nrf2与γ-GCS呈正相关(r=0.950,P＜0.05),γ-GCS与Ⅰ型胶原蛋白呈负相关(r=-0.629,P＜0.05).结论 丁苯酞有抗肾间质纤维化作用,机制可能与激活Nrf2-ARE信号通路,提高肾间质中Nrf2、抗氧化酶r-GCS活性水平有关.     

蒿鳖养阴软坚方通过Nrf2/γ-GCS信号转导通路抑制酒精性肝纤维化作用及其机制

目的:研究不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对肝纤维化大鼠肝组织中Nrf2/γ-GCS信号转导通路的影响,探讨不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对大鼠肝纤维化的治疗作用。方法:健康Wistar 大鼠随机分为8组:正常组、模型对照组、先水后醇60%提取方案组(0.09 mg.kg^-1.d^-1)、先水后醇95%提取方案中、高剂量组(2.59 g.kg^-1.d^-1、8.2 g.kg^-1.d^-1)、水提醇沉中、高剂量组(2.59 g.kg^-1.d^-1、8.2 g.kg^-1.d^-1)及复方鳖甲软肝片组(0.09 mg.kg^-1.d^-1),每组10只大鼠。酒精性肝纤维化大鼠模型制备成功后,各组按相应药物剂量分别开始治疗,正常组和模型组给予同体积蒸馏水,每日1 次,造模10周后处死大鼠,留取标本。酸水解法测定肝组织中胶原蛋白含量; Western blotting 检测肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白的表达;光镜观察肝组织免疫组化染色结果。结果:(1) 肝组织中羟脯氨酸含量:与正常组比较,模型组大鼠肝组织胶原蛋白含量增高 (P<0.01);与模型组比较,先水后醇60%提取方案组、先水后醇中、高剂量组以及复方鳖甲软肝片组大鼠肝组织胶原含量均降低 (P<0.05)。(2) 肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白的表达:与正常组比较,模型组大鼠肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白表达增高 (P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白表达增高 (P<0.01)。(3) 肝组织免疫组化染色结果: 模型组的Nrf2和γ-GCS蛋白主要在细胞浆中表达,各用药组Nrf2和γ-GCS蛋白均多数在细胞浆和细胞核中表达,汇管区附近也有所表达,但表达量不及胞浆和胞核。结论:提取工艺优化后的蒿鳖养阴软坚方可能通过上调肝组织Nrf2/γ-GCS信号转导通路,增加Nrf2蛋白和γ-GCS蛋白的表达,降低大鼠肝组织肝纤维化程度从而发挥抗肝纤维化的作用。     

化瘀祛痰方对急性心肌缺血大鼠心肌组织RhoA、ROCK1 mRNA表达的影响

【目的】观察化瘀祛痰方对急性心肌缺血大鼠心肌组织RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)信号通路中RhoA、ROCK1 mRNA表达的影响,探讨其防治机制。【方法】将60只SPF级雄性SD大鼠随机分为6组,即空白组,模型组,西药组,中药低、中、高剂量组,每组10只。西药组予以单硝酸异山梨酯水溶液(剂量为3.125 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,中药低、中、高剂量组予以化瘀祛痰方水煎液(剂量分别为10.4、20.8、41.6 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,空白组和模型组予以等体积生理盐水灌胃,给药7 d。预灌胃7 d后,除正常组外,其余各组大鼠给予腹腔注射异丙肾上腺素(Iso)复制急性心肌缺血模型。观测大鼠心电图ST段总偏移值。采用苏木素—伊红(HE)染色法观察大鼠心肌组织结构,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清内皮素1(ET-1)含量,qPCR法检测心肌组织RhoA、ROCK1 mRNA的表达。【结果】与空白组比较,模型组心肌纤维大片断裂,间质出现明显出血,心电图ST段偏移值、血清ET-1含量、心肌组织RhoA与ROCK1 mRNA表达水平均升高(P0.05);与模型组比较,各给药组心肌纤维断裂情况改善,间质出血减少,心电图ST段偏移值、血清ET-1含量、心肌组织RhoA与ROCK1的mRNA表达水平均降低(P0.05)。【结论】化瘀祛痰方可改善心肌缺血状态,其机制可能与降低心肌组织RhoA、ROCK1 mRNA表达,从而抑制心肌收缩,改善心肌血流量有关。     

强肌健力方对重症肌无力大鼠Th17/Treg平衡的影响

【目的】观察强肌健力方对实验性重症肌无力(MG)模型大鼠Th17/Treg平衡的影响。【方法】从70只雌性Lewis大鼠中随机选取7只作为正常组,余下63只给予皮下注射鼠源性AchR-α亚单位97-116多肽片段(R97-116)乳化剂复制MG大鼠模型。最终造模成功的大鼠30只,将其随机分为模型组(N=7),强肌健力方高剂量组(N=8)、中剂量组(N=7)、低剂量组(N=8)。强肌健力方高、中、低剂量组给予强肌健力方(剂量分别为23.4、15.6、7.8 g·kg-1·d-1)灌胃,正常组和模型组给予相同体积生理盐水灌胃,给药4周,期间每周2次观察、记录各组大鼠体质量及肌肉力量Lennon评分变化。给药结束后,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组大鼠脾脏组织维甲酸受体相关孤儿受体γt(RORγt)、叉头蛋白p3(Foxp3)、白细胞介素17A(IL-17A)及转化生长因子β(TGF-β)蛋白表达水平。【结果】与模型组比较,强肌健力方各剂量组能够显著提高MG大鼠体质量(P 0.05)及降低Lennon评分(P 0.01),降低RORγt、IL-17A的表达水平(P 0.01),升高Foxp3、TGF-β的表达水平(P 0.05),且其作用与强肌健力方给药剂量呈正相关。【结论】强肌健力方可能通过影响Th17、Treg细胞转录蛋白及其相关细胞因子的表达,调节二者平衡,从而对MG大鼠产生治疗作用。     

邓老冠心方对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块NOX4的影响

【目的】探讨邓老冠心方防治动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块发生发展的可能作用机制。【方法】以高脂饲料喂养雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))鼠12周,复制AS小鼠模型。将AS小鼠随机分成模型组,中药高剂量组、低剂量组,辛伐他汀组,每组10只。另设C57BL/6J小鼠10只作为正常对照组。中药高剂量组、低剂量组给予邓老冠心方(剂量分别为3 500、700mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,辛伐他汀组给予辛伐他汀(剂量为0.005 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,共给药12周。采用苏木素—伊红(HE)染色法观察小鼠胸主动脉组织病理学变化,采用实时定量PCR(qPCR)法检测各组小鼠胸主动脉组织尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶4(NOX4)mRNA的表达。【结果】与模型组比较,中药高、低剂量组及辛伐他汀组的斑块面积/管腔面积比值呈不同程度降低(P 0.05或P 0.01)。与正常对照组比较,模型组小鼠胸主动脉组织NOX4 mRNA表达水平明显升高(P 0.001);各药物处理组小鼠胸主动脉组织NOX4 mRNA表达水平较模型组均显著降低(P 0.01),其中中药高剂量组下降最明显,与辛伐他汀组、中药低剂量组比较,差异均有统计学意义(P 0.05)。【结论】邓老冠心方可增加斑块的稳定性,并具有剂量依赖性,其机制可能与降低AS小鼠胸主动脉组织中NOX4 mRNA的表达有关。     

胆舒胶囊对卵巢早衰豚鼠激素补充疗法治疗后胆汁分泌水平的影响

【目的】观察胆舒胶囊对卵巢早衰豚鼠激素补充疗法(HRT)治疗后胆汁分泌水平的影响,探讨其对HRT治疗后胆道疾病发生的预防作用。【方法】取动情周期稳定的性成熟雌性豚鼠30只随机分为4组:空白对照组(N=6),卵巢早衰组(N=8),HRT组(N=8),HRT+胆舒胶囊组(N=8)。采用环磷酰胺(CTX)腹腔注射法复制卵巢早衰豚鼠模型。HRT组给予补佳乐(剂量为0.3 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,HRT+胆舒胶囊组给予补佳乐(剂量为0.3 mg·kg~(-1)·d~(-1))、胆舒胶囊(剂量为0. 45 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,造模成功后,空白对照组、卵巢早衰组给予等量生理盐水灌胃,连续给药2个性周期,即32 d。给药结束后,采用循环酶法测定胆汁中总胆固醇、总胆汁酸的含量。【结果】与空白对照组比较,HRT组16、32 d总胆汁酸含量下降,总胆固醇含量上升(均P 0.05);HRT+胆舒胶囊组32 d总胆汁酸含量上升,16、32 d总胆固醇含量下降(均P 0.05)。【结论】胆舒胶囊可改善HRT所致卵巢早衰豚鼠胆汁成分含量的改变。用药周期越长,预防效果越明显。     

针刺保肝护脑对脑缺血再灌注肝损伤大鼠γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达的影响

【目的】探讨针刺保肝护脑对脑缺血再灌注大鼠γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的影响。【方法】将40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺对照组、针刺保肝护脑组。采用线栓法复制缺血再灌注大鼠模型,测试各组大鼠行为学,血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ-GCS,肝组织γ-GCS水平。【结果】模型组、针刺对照组和针刺保肝护脑组缺血2 h(电针治疗前)时神经功能缺损评分无显著差异;经10次电针治疗后,与模型组比较,针刺对照组和针刺保肝护脑组神经功能缺损评分显著降低(P<0.01);与针刺对照组比较,针刺保肝护脑组神经功能缺损评分降低更为显著(P<0.05)。电针治疗前,与假手术组比较,模型组血清ALT、AST水平显著增高(P<0.01),而血清、肝组织γ-GCS水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,针刺对照组和针刺保肝护脑组血清ALT、AST水平显著降低(P<0.01),同时血清、肝组织γ-GCS水平显著升高(P<0.01);与针刺对照组比较,针刺保肝护脑组血清ALT、AST、γ-GCS和肝组织γ-GCS水平改善更为显著(P<0.05)。【结论】针刺保肝护脑对脑缺血再灌注大鼠的治疗效果较单纯针刺更为显著,其治疗机理可能与促进肝组织γ-GCS的表达相关。     

绞股蓝皂苷降低2型糖尿病并非酒精性脂肪性肝病大鼠血糖、血脂的机理研究

目的:研究绞股蓝皂苷(Gypenosides,GPS)降低2型糖尿病(Type 2 diabetes Mellitus,T2DM)并非酒精性脂肪性肝病(nonalcohol fatty liver disease,NAFLD)大鼠血糖、血脂的机理。方法:65只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白对照组(N组,n=7),NAFLD模型组(NM组,n=7),T2DM并NAFLD模型组(模型组,n=51)。分别建立NAFLD模型和T2DM并NAFLD大鼠模型。T2DM并NAFLD模型大鼠分别给予GPS[1 g/(kg.d)]干预(JH组,n=9),GPS[0.5 g/(kg.d)]干预(JL组,n=9),以纯净水灌胃作为对照(M组,n=9)。定量PCR技术检测肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ),检测血糖(Blood sugar,BS)、甘油三酯(Triglycerides,TG)、总胆固醇(Total cholesterol,TC)变化,肝组织切片HE染色观察肝脏病理学。结果:GPS干预显著降低T2DM并NAFLD模型大鼠BS、TG、TC,上调肝组织PPARγ表达水平,减轻肝脏脂肪浸润程度,并呈剂量依赖性。结论:GPS能降低T2DM并NAFLD大鼠BS、TG、TC,可能通过上调肝组织PPARγ表达干预BS、TG、TC代谢。     

滋阴凉血汤对IgA肾病大鼠的肾脏保护机制研究

【目的】观察滋阴凉血汤对IgA肾病大鼠蛋白尿、血尿、尿甘露糖结合凝集素(MBL)及肾小球、肾小管损害的影响,探讨其对肾脏的保护机制。【方法】将30只SD大鼠分为正常组、模型组、中药组、西药组及中西药结合组等5组,每组6只。模型组和3个治疗组采用牛血清白蛋白+脂多糖+四氯化碳的方法复制IgA肾病大鼠模型,在造模完成后1周,中药组给予滋阴凉血汤(剂量为11.5 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,西药组给予贝那普利水溶液(剂量为2.5 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,中西药结合组用上述半剂量滋阴凉血汤水溶液与贝那普利水溶液灌胃,正常组与模型组均给予等体积生理盐水灌胃,每日1次。根据上述方案灌胃4周后,观察大鼠一般状况,采集大鼠尿液、静脉血,检测其尿红细胞数目、24 h尿蛋白定量、尿MBL及血生化指标。应用直接免疫荧光法测定其肾小球IgA沉积强度,苏木素—伊红(HE)染色法和高碘酸—无色品红(PAS)染色法观察肾小球及肾小管改变。应用电镜观察肾组织超微结构。【结果】中药组大鼠尿红细胞数目,尿蛋白、尿MBL含量较模型组显著减少,差异有统计学意义(P0.05);中药组大鼠肾小球及肾小管病变较模型组明显改善。【结论】滋阴凉血汤能减少IgA肾病大鼠尿红细胞数目、尿蛋白、尿MBL,改善肾小球内系膜基质、细胞增生和肾小管萎缩及炎症反应等病理改变,对IgA肾病大鼠肾脏具有保护作用。     

补肾活血化痰开窍方对耳鸣模型大鼠血液肾虚相关指标的影响

【目的】探讨补肾活血化痰开窍方对耳鸣模型大鼠肾虚相关指标的影响。【方法】将60只大鼠随机分为正常组,模型组,中药低、中、高剂量组,西药组,每组10只。除正常组外,其余组别大鼠采用水杨酸钠腹腔注射联合"饮水抑制"大鼠行为学实验复制耳鸣模型。造模成功后,正常组、模型组大鼠给予2 m L生理盐水灌胃;中药低、中、高剂量组给予补肾活血化痰开窍方(剂量分别为5.5、11、22 g·kg~(-1)·d·~(-1))灌胃;西药组大鼠给予卡马西平(剂量为5 mg·kg~(-1)·d·~(-1))灌胃。每天1次,持续给药8周。采用全自动生化仪测量大鼠血清钙、磷、铁,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血浆多巴胺、皮质醇、环磷酸腺苷(c AMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)。【结果】造模成功率为88%。与正常组比较,模型组大鼠血液中钙、铁、皮质醇、多巴胺、cAMP含量,cAMP/cGMP比值下降,磷、cGMP含量增加(均P0.05);与模型组比较,中药各剂量组上述指标明显改善(P0.05)。【结论】补肾活血化痰开窍方可改善耳鸣大鼠肾虚相关指标。     

补肾活血化痰开窍方对耳鸣大鼠耳蜗螺旋神经节神经元NMDA受体亚型表达的影响

【目的】观察补肾活血化痰开窍方对耳鸣大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(SGN)中N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚型1、2A、2B(NR1、NR2A、NR2B)表达的影响,并探讨其作用机制,以期为临床应用补肾活血化痰开窍方治疗耳鸣提供实验依据。【方法】将60只大鼠随机分为正常组,模型组,中药低、中、高剂量组,西药组6组,每组10只。采用大鼠腹腔注射水杨酸钠联合"饮水抑制"法建立大鼠耳鸣模型。造模成功后,中药低、中、高剂量组给予补肾活血化痰开窍方(剂量分别为5.5、11、22 g·kg-1·d-1)灌胃,西药组给予卡马西平(剂量为5 mg·kg-1·d-1)灌胃,模型组和正常组给予2 m L生理盐水灌胃,每天1次,连续治疗8周。采用免疫印迹法和实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测其耳蜗SGN中NR1、NR2A、NR2B在耳鸣大鼠的表达情况。【结果】与正常组比较,模型组NR1、NR2A、NR2B在模型组中表达升高,差异具有统计学意义(均P0.05);与模型组比较,中药各剂量组耳蜗SGN中NR1、NR2A、NR2B的表达均明显降低(均P0.05)。【结论】补肾活血化痰开窍方可有效缓解大鼠耳鸣,其机制可能与降低耳鸣大鼠耳蜗SGN中增高的NMDA受体亚型NR1、NR2A、NR2B表达有关。     

独活寄生汤改善佐剂性关节炎大鼠氧化应激机制探讨

【目的】探讨独活寄生汤对佐剂性关节炎(AIA)大鼠抗氧化能力及对核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路的影响。【方法】采用弗式完全佐剂成功诱导大鼠佐剂性关节炎模型。将90只大鼠随机分为正常组,模型组,甲氨喋呤组(剂量为0.5 g·kg~(-1),日2次),独活寄生汤低、中、高剂量组(剂量分别为0.75、1.5、3.0 g·kg-1,日2次),每组15只,连续给药24 d。采用荧光定量聚合酶链反应(q PCR)法检测各组大鼠滑膜组织超氧化物歧化酶(SOD)mRNA、丙二醛(MDA)mRNA、HO-1 mRNA表达变化,采用分光光度法检测各组大鼠滑膜组织SOD、MDA含量,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组大鼠滑膜组织胞核、胞质Nrf2和全细胞HO-1蛋白表达。【结果】独活寄生汤高、中剂量可上调模型大鼠滑膜组织SOD表达,降低MDA的表达,降低胞质Nrf2含量,升高胞核Nrf2含量,提高Nrf2核转位率,增强滑膜组织HO-1的表达,与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。【结论】独活寄生汤具有增强抗氧化应激的能力,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号途径,促进Nrf2核转位,进而促进下游抗氧化因子HO-1的表达有关。     

黄连温胆汤改善代谢综合征大鼠糖脂代谢的作用及机制研究

【目的】探讨黄连温胆汤改善代谢综合征(MS)大鼠糖脂代谢的作用及其机制。【方法】将40只大鼠随机分为正常组(N=10)、造模组(N=30)。造模组大鼠采用高脂高糖膳食诱导MS模型。成功造模后,中药组(N=9)给予黄连温胆汤(剂量为18.0 g·kg-1·d-1)灌胃,西药组(N=9)给予阿托伐他汀钙片(剂量为15.0 mg·kg-1·d-1)灌胃,正常组和模型组(N=9)给予等体积的生理盐水灌胃,给药8周。给药结束后,检测各组大鼠的体质量,Lee’s指数,收缩压(SBP),血脂[总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)],空腹血糖(FBG),血清胰岛素(Fins),胰岛素抵抗指数(HOMAIR),葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4),瘦素,游离脂肪酸(FFA),肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素6(IL-6)的水平。【结果】与正常组比较,模型组大鼠的体质量、Lee’s指数、SBP、TC、TG、LDL、FBG、Fins、HOMA-IR、瘦素、FFA、TNF-α、IL-6明显升高(P 0.05),HDL、GLUT-4明显降低(P 0.05);与模型组比较,中药组大鼠的体质量、Lee’s指数、SBP、TC、TG、LDL、FBG、Fins、HOMA-IR、瘦素、FFA、TNF-α、IL-6明显降低(P 0.05),HDL、GLUT-4明显升高(P 0.05)。【结论】黄连温胆汤可能是通过减轻胰岛素抵抗和炎症反应,抑制瘦素、FFA的表达,上调GLUT-4的水平从而改善MS。     

肾炎消白颗粒对肾小球肾炎蛋白尿大鼠Nephrin mRNA动态表达的影响

【目的】观察肾炎消白颗粒对肾小球肾炎蛋白尿模型大鼠肾脏组织中Nephrin mRNA动态表达的影响,探讨其作用机理。【方法】将100只Wistar雄性大鼠随机分为空白组、模型组、洛汀新组、中药低剂量组、中药高剂量组,每组20只。采用一次性尾静脉注射阿霉素复制肾小球肾炎蛋白尿大鼠模型。洛汀新组大鼠给予洛汀新(剂量为0.90 mg·kg-1·d-1)灌胃,中药高、低剂量组给予肾炎消白颗粒(剂量分别为3.60、1.80 g·kg-1·d-1)灌胃,每天1次,1周连续给药6次,共给药7周。每周测量1次大鼠体质量,于第3、5、7周分别采用苏木素—伊红(HE)染色法观察各组大鼠肾组织病理学改变,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)法检测各组大鼠肾组织Nephrin mRNA表达。【结果】(1)体质量:与空白组比较,模型组大鼠体质量出现明显的异常增加,尤以造模3周后更明显(P0.05);与模型组比较,洛汀新组大鼠各时间点体质量的异常增加均得到有效控制(P0.05),中药高剂量组在造模3周后也得到有效控制(P0.05),且造模3周后中药高剂量组的控制效果优于洛汀新组(P0.05)。(2)尿白蛋白/尿肌酐比值:与空白组比较,模型组大鼠各时间点尿白蛋白/尿肌酐比值显著升高(P0.01);与模型组比较,洛汀新组大鼠各时间点尿白蛋白/尿肌酐比值显著降低,中药高剂量组大鼠在第3、4、5、6、7周尿白蛋白/尿肌酐比值显著降低(P0.05);与洛汀新组比较,中药高剂量组大鼠在第5、6、7周尿白蛋白/尿肌酐比值降低(P0.05)。(3)Nephrin mRNA:与空白组比较,模型组大鼠第3周肾组织Nephrin mRNA表达显著升高,于第5、7周显著降低(P0.05);与模型组比较,中药高剂量组大鼠各时间点肾组织Nephrin mRNA表达显著升高(P0.05);与同组第3周比较,中药高、低剂量组大鼠第5、7周肾组织Nephrin mRNA表达显著降低(P0.05)。【结论】肾炎消白颗粒可通过上调肾小球肾炎蛋白尿模型大鼠肾组织中Nephrin mRNA表达,修复损伤的足细胞,高剂量治疗效果更明显。     

人参皂苷对波动性高血糖大鼠肾脏Nrf2/ARE信号通路的影响

[目的]探讨人参皂苷对波动性高血糖大鼠肾脏氧化应激及转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/应答元件(ARE)信号通路的影响。[方法]实验以32只雄性SD大鼠为研究对象,分为正常对照组(NC组,n=8只)和波动性高糖模型组(n=24只),高脂饲料喂养模型组2周后,链脲佐菌素(STZ)35 mg/kg腹腔注射诱导建立糖尿病大鼠模型,错时注射葡萄糖和胰岛素,建立血糖波动组模型,2周后,将波动性高糖模型组随机分为3组,分别为波动性高血糖组(FHG组,n=8),人参皂苷低剂量组(LG组,n=8),人参皂苷高剂量组(HG组,n=8)。予人参皂苷低高剂量[14、56mg/(kg·d)]干预相对应的模型组8周后,切取肾脏组织,用蛋白免疫切迹方法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测血红素加氧酶-1(HO-1)、Nrf2、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)蛋白及m RNA表达。[结果]与NC组相比,FHG组Nrf2的蛋白及m RNA的表达明显增加(P0.05),而HO-1、γ-GCS的表达明显降低(P0.05);但人参皂苷治疗后,LG组及HG组HO-1、γ-GCS、和Nrf2蛋白及m RNA表达明显增高(P0.05)。[结论]人参皂苷能够进一步促进波动性高糖状态下Nrf2下游HO-1、γ-GCS蛋白及m RNA表达,增加抗氧化蛋白的含量,提高机体的抗氧化应激能力,对波动性高糖所致的肾脏损伤有一定的保护作用。     

从Wnt/β-catenin通路研究滋肾降糖丸对糖尿病大鼠骨质疏松的防治作用

【目的】观察滋肾降糖丸对糖尿病大鼠骨代谢指标、骨密度及骨组织形态的影响及其对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路的调控作用,探讨其对糖尿病介导的骨量减少及骨质疏松形成的防治机制。【方法】采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法建立糖尿病大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、中药组、西药组,另设正常组,每组10只。中药组大鼠给予滋肾降糖丸浓缩液(剂量为5.85 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,西药组大鼠给予雷奈酸锶浓缩液(剂量为0.9 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,正常组与模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃。干预3个月后,观察各组大鼠生化指标的变化;采用苏木素—伊红(HE)染色法观察各组大鼠骨组织形态变化;采用实时定量PCR(qPCR)方法检测骨组织Wnt3α、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP-5)、β-catenin、Runt相关转录因子2(RUNX-2)、Dickkopf相关蛋白1(DKK-1)、硬化蛋白(SOST)基因表达水平。【结果】(1)与模型组比较,中药组大鼠空腹胰岛素(Fins)、血钙(BC)、血磷(BP)、骨特异性碱性磷酸酶(B-ALP)、骨钙素(OC)、骨密度(BMD)水平均升高(P0.01),空腹血糖(FBG)、β-I型胶原羧基端肽(β-CTX)、1型前胶原酶N端肽(P1NP)、骨保护素(OPG)水平均明显降低(P0.01),骨组织Wnt3α、LRP-5、β-catenin、RUNX-2基因表达量升高(P 0.01),而DKK-1及SOST基因表达量无显著性差异(P 0.05)。(2)中药组骨组织结构紊乱较模型组明显减轻,基本接近正常。【结论】滋肾降糖丸可能通过上调Wnt/β-catenin信号通路中重要分子Wnt3α、LRP-5、β-catenin、RUNX-2的基因表达,促进成骨细胞的分化,抑制骨破坏,改善骨组织形态,增加骨密度,调节骨代谢紊乱,进而发挥对糖尿病大鼠骨量减少和骨质疏松形成的防治作用。