穿心莲内酯通过下调miR-342-3p抑制结核分枝杆菌感染的巨噬细胞焦亡

【目的】探讨穿心莲内酯（Andro）是否通过下调miR-342-3p抑制结核分枝杆菌（Mtb）感染的巨噬细胞焦亡。【方法】构建Mtb H37Ra感染的小鼠RAW264.7巨噬细胞模型。实验分5组：Control组（对照组）为未作处理的巨噬细胞；Mtb组为经Mtb感染的巨噬细胞；Mtb+Andro组为巨噬细胞经Mtb感染后，给予Andro处理；Mtb+Andro+miR-NC组或Andro+Mtb+miR-342-3p组为巨噬细胞经Mtb和Andro联合处理后，分别转染miR-NC或miR-342-3p mimic。各组处理后，利用细胞流式术分析细胞凋亡，乳酸脱氢酶（LDH）释放试验检测LDH活性，酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞焦亡相关的炎性因子白细胞介素（IL）-6和IL-18含量，荧光实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法测定miR-342-3p表达，Western Blot法检测GSDMD、Caspase-1、核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧化酶1(HO-1)蛋白表达。【结果】与Control组比较，Mtb组和Mtb+Andro组的细胞凋亡率，LDH活力，IL-6...     

miR-20a靶向TLR4通路对巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染作用的影响

目的 探讨miR-20a能否通过靶向Toll样受体4(TLR4)通路影响巨噬细胞THP-1的抗结核分枝杆菌(Mtb)感染作用.方法 培养并诱导人源性THP-1单核细胞分化为THP-1巨噬细胞,H37Ra Mtb菌按照感染复数MOI=10对巨噬细胞THP-1进行感染,将感染细胞分为感染组、阴性转染组和miR-20a mi...     

miR-20a-5p通过下调BMPR2促进人脑微血管内皮细胞增殖和抑制凋亡

目的 探讨微小RNA-20a-5p（miR-20a-5p）是否通过下调骨形成蛋白2型受体（BMPR2）基因调控人脑微血管内皮细胞增殖和抑制凋亡。 方法 在永生化人脑微血管内皮细胞（hCMEC/D3）中分别转染miR-20a-5p mimics,BMPR2小干扰RNA(si-BMPR2)或过表达质粒（pcDNA-BMPR2）。实时定量PCR（qRT-PCR）测定miR-20a-5p表达,免疫印迹（Western Blot）检测BMPR2、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、活化的的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（Cleaved caspase-3）、磷酸化-磷脂酰肌醇-3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）蛋白水平,噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡。生物信息学预测与荧光素酶报告基因检测分析miR-20a-5p和BMPR2之间的关系。共转染miR-20a-5p mimics和pcDNA-BMPR2,利用上述方法评估其对细胞增殖、凋亡和PI3K/AKT信号通路的影响。 结果 过表达miR-20a-5p明显增加hCMEC/D3的细胞活性,CyclinD1、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平,显著减少细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白表达水平（P＜0.05）。低表达BMPR2明显提高hCMEC/D3的细胞活性、CyclinD1蛋白表达水平,显著减少细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白表达水平（P＜0.05）,高表达BMPR2时具有相反的效果。miR-20a-5p靶向BMPR2,并调控BMPR2蛋白的表达。高表达BMPR2可以逆转miR-20a-5p促hCMEC/D3增殖、PI3K/AKT信号通路活性和抑凋亡的作用。 结论 miR-20a-5p通过靶向BMPR2激活PI3K/AKT信号通路,促进人脑微血管内皮细胞的增殖,并抑制凋亡。     

miRNA-193a-3p靶向TGF-β2基因诱导肝癌细胞凋亡的分子机制研究

目的：探讨微小RNA（microRNA,miRNA）-193a-3p在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞迁移及凋亡的影响和潜在分子机制。方法：利用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,qRT-PCR）检测miR-193a-3p在肝癌及其癌旁正常组织中的表达;将miR-193a-3p mimic转染肝癌HepG2细胞系（NC为对照组）,利用CCK-8（Cell Counting Kit-8）实验、Transwell实验以及流式细胞仪评估HepG2细胞的活性、迁移及凋亡情况;利用生物信息学分析、qRT-PCR及双荧光素酶报告实验确证miR-193a-3p对下游靶标转化生长因子（transforming growth factor,TGF）-β2的影响;在miR-193a-3p过表达的HepG2细胞中转染TGF-β2质粒,检测过表达TGF-β2对miR-193a-3p诱导HepG2细胞活性、迁移及凋亡的影响。结果：miR-193a-3p在肝癌组织中的表达显著低于正常肝脏组织,差异具有统计学意义（P< 0.01）;与NC组比较,miR-193a-3p组细胞的增殖活性及迁移数量减少,细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义（分别为：t = 6.11,8.90,11.53,均P< 0.05）,且以时间依赖性方式诱导HepG2细胞凋亡;miR-193a-3p与靶基因TGF-β2的互补结合序列在进化上高度保守,TGF-β2是miR-193a-3p的下游靶标;与miR-193a-3p+ 空质粒组比较,miR-193a-3p+ TGF-β2组肝癌细胞的增殖活性及迁移数量增多,细胞凋亡率显著减少,差异有统计学意义（分别为：t = 3.43,2.88,9.32,均P< 0.05）。结论：miR-193a-3p在肝癌组织中表达减少,miR-193a-3p通过靶向调控TGF-β2基因抑制HepG2细胞的活性和迁移,促进HepG2细胞的凋亡。     

淫羊藿通过miR-19a-3p对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及机制研究

目的探讨淫羊藿（Epimedium herb,EH）对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及其分子机制。方法以胰岛β细胞RINm5F为研究对象,建立高糖高脂损伤模型,分为对照组（5 mmol/L葡萄糖）、高糖高脂组[25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L棕榈树酸（PA）]、低剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+10 μmol/L EH）和高剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+100 μmol/L EH）,EH处理48 h后,分别采用噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法（Western blotting）检测细胞中细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平,实时定量PCR（qPCR）检测RINm5F细胞中miR-19a-3p表达。在高糖高脂损伤的RINm5F细胞转染anti-miR-19a-3p或在高剂量EH组细胞转染miR-19a-3p,观察细胞的增殖和凋亡情况。结果与对照组比较,高糖高脂组第48 h、72 h细胞增殖活性和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平明显下降（P < 0.05）,细胞凋亡率、miR-19a-3p表达量、P21和Bax蛋白表达量提高（P < 0.05）。不同剂量的EH干预可以明显提高高糖高脂环境下的细胞增殖能力和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平（P < 0.01）,减少细胞凋亡率和P21、Bax蛋白表达量（P < 0.01）,与抑制miR-19a-3p表达作用结果差异无统计学意义（P>0.05）。此外,过表达miR-19a-3p能逆转EH对高糖高脂刺激的RINm5F细胞增殖的促进作用和对细胞凋亡的抑制作用（P < 0.01）。结论EH通过miR-19a-3p保护高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤,提高细胞增殖活性,抑制细胞凋亡。     

miR0-34a通过调控SESN2表达促进耳蜗毛细胞凋亡的机制

目的 探讨miR-34a通过调控SESN2的表达促进耳蜗毛细胞（HEI-OC1）凋亡的机制。方法 双萤光素酶报告基因实验检测miR-34a与SESN2靶向相关性;分别构建对照组（NC组）、SESN2过表达组（SESN2组）、共转染SESN2过表达载体及miR-34a mimic组细胞（SESN2+miR 34a mimic组）。应用CCK-8、Annexin V-FITC/PI流式细胞术和ELISA实验分别检测各组HEI-OC1细胞增殖、凋亡及细胞内氧化应激因子表达的变化,WB检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax与caspase-3及AMPK信号通路中AMPK磷酸化及SIRT1蛋白表达的变化。结果 共转染miR-34a mimic与pGL3-PIK3CA-SESN2-WT后,细胞内萤光素酶活性受到显著抑制;与NC组相比,SESN2组细胞的增殖能力明显增加,而凋亡率显著降低,而SESN2+miR-34a mimic组细胞的增殖及凋亡均无明显变化,提示过表达miR-34a会削弱SESN2对HEI-OC1细胞的保护作用。同时,与NC组相比,SESN2组细胞中凋亡抑制蛋白Bcl-2与SIRT1、p-AMPK/AMPK蛋白相对表达量增加,抑制凋亡蛋白Bax、caspase-3表达,同时细胞内抗氧化应激因子SOD、CAT及GSH-Px表达量随SESN2增加而升高,MDA表达量减少,反之共转染miR-34a mimic能够逆转上述分子表达变化。结论 miR-34a可能通过靶向抑制SENS2表达,促进AMPK/SIRT1信号通路激活、加速细胞内氧化损伤发挥对HEI-OC1细胞凋亡的促进作用。     

MicroRNA-34a通过下调Notch1的表达促进心肌细胞凋亡

目的：探讨microRNA-34a（miR-34a）对心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法：体外培养大鼠心肌细胞H9C2,分别转染miR-34a mimics、miR-34a inhibitor、随机合成的miR-NC片段、Notch1的siRNA、随机合成的siRNA-NC片段,将实验分为6 组：normal组、miR-34a组、miR-inhibitor组、miR-NC组、miRinhibitor+siRNA-Notch1组和miR-inhibitor+siRNA-NC组。RT-qPCR检测各组miR-34a的表达量,Westernbolt技术检测各组中caspase-3 和Notch1的表达量,流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率。双荧光素酶报告实验鉴定Notch1为miR-34a的靶基因。结果：双荧光素酶报告实验证实miR-34a和Notch1间存在靶向关系。与miR-NC组比较,miR-34a组的miR-34a和caspase-3的表达量明显增多,Notch1的表达量明显减少,细胞凋亡率明显升高（P ＜0.01）。与miR-NC组比较,miR-inhibitor组的miR-34a和caspase-3的表达量明显减少,Notch1的表达量明显增多,细胞凋亡率明显减低（P ＜0.01）。与miR-inhibitor+siRNA-NC组比较,miRinhibitor+siRNA-Notch1组的Notch1的表达量明显降少,caspase-3的表达量明显减少,细胞凋亡率明显减低（P ＜0.01）。结论：miR-34a促进心肌细胞凋亡,其作用机制与靶向负调控Notch1有关。     

阿托伐他汀抑制脑胶质瘤细胞的增殖和促进凋亡：基于上调miR-146a表达与抑制PI3K/Akt信号通路

目的 探究阿托伐他汀（AVT）对人脑胶质瘤细胞生物学行为的影响及其对miR-146a/PI3K/Akt信号通路的作用。方法 将人脑胶质瘤细胞U251分为4组：对照组（Conrtrol）、AVT组、AVT+转染miR-146a无关片段组（AVT+miR-146a NC）、AVT+转染miR-146a干扰组（AVT+miR-146a inhibitor）。Control组不加任何药物,AVT组加入8.0 μmol/L 的AVT,AVT+miR-146a NC组转染miR-146a NC后加入8.0 μmol/L 的AVT,AVT+miR-146a inhibitor组转染miR-146a inhibitor后加入8.0 μmol/L 的AVT。RT-PCR检测miR-146a表达,MTT检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移情况,Western blot检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达。结果 药物干预48 h,与Control组相比,AVT组细胞miR-146a表达、细胞凋亡率均明显升高（P<0.01）,细胞增殖率、侵袭指数、迁移指数、p-PI3K和p-Akt蛋白表达均明显降低（P<0.01）。与AVT组相比,AVT+miR-146a inhibitor组细胞miR-146a表达、细胞凋亡率均明显降低（P<0.01）,细胞增殖率、侵袭指数、迁移指数、p-PI3K 和p-Akt蛋白表达均明显升高（P<0.01）,AVT+miR-146a NC组上述指标无显著性差异（P>0.05）。结论 AVT能够抑制人脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡,其机制与上调miR-146a表达,抑制PI3K/Akt信号通路相关。     

miR-146a-5p靶向调控Notch2促进人晶状体上皮细胞线粒体损伤诱导的细胞凋亡

目的 探讨miR-146a-5p在人晶状体上皮细胞线粒体损伤中的调控作用,以及miR-146a-5p靶向调控Notch2表达对细胞凋亡的影响。方法 采用实时定量PCR (qRT-PCR)检测miR-146a-5p在白内障患者晶状体上皮中的表达。将miR-146a-5p模拟物转染人晶状体上皮细胞系SRA01/04,流式细胞术检测细胞凋亡。Western blotting检测凋亡相关蛋白caspase 9和caspase 12、线粒体损伤相关蛋白基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9、细胞色素c的表达。qRT-PCR检测NDUFS8、COX5b和ATP5a1 mRNA的表达。免疫荧光检测活性氧（ROS）释放。荧光素酶报告基因实验检测miR-146a-5p和Notch2的3’非翻译区靶向结合。Western blotting检测Notch2下游蛋白。结果 miR-146a-5p增加了SRA01/04细胞ROS的产生,诱发凋亡。miR-146a-5p过表达通过激活caspase 9,阻断线粒体能量代谢,促进线粒体介导的细胞凋亡。Notch2被确认为miR-146a-5p的靶点。结论 miR-...     

血管内皮细胞来源外泌体miR-214对H2O2诱导血管内皮细胞损伤的影响

探讨血管内皮细胞来源外泌体miR-214对过氧化氢(H2O2)诱导的血管内皮细胞损伤的影响。方法 体外培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）,并转染miR-214抑制物（in-miR-214）及其阴性对照（in-miR-NC）,分离并鉴定外泌体,同时检测miR-214表达。再次培养HUVEC,分为正常对照组（Control组）、氧化损伤组（H2O2组）、空白外泌体+氧化损伤组（exo NC+H2O2组）、in-miR-NC外泌体+氧化损伤组（exo in-miR-NC+H2O2组）和in-miR-214外泌体+氧化损伤组（exo in-miR-214+H2O2组）。qRT-PCR检测细胞中miR-214表达水平;MTT和流式细胞术检测细胞增殖、凋亡;划痕愈合实验检测细胞迁移;Western blot检测细胞增殖、凋亡、迁移相关蛋白水平。结果 成功从HUVEC 细胞中分离出外泌体,且转染in-miR-214可抑制外泌体中miR-214表达（P＜0.05）。H2O2诱导后,HUVEC细胞增殖活力和划痕愈合率降低,凋亡率增高;同时,细胞中miR-214表达水平增高,Cyclin D1、PCNA、Bcl2、MMP2和MMP9蛋白水平降低,Bax蛋白水平增高（P＜0.05）。添加HUVEC外泌体和外泌体来源的in-miR-214可部分削弱H2O2 对HUVEC细胞的损伤,且后者的效果要明显优于前者（P＜0.05）。结论 HUVEC来源外泌体通过低表达miR-214保护HUVEC免受H2O2诱导的细胞损伤     

结核分枝杆菌19 kDa脂蛋白诱导THP-1细胞凋亡的研究

目的：观察结核分枝杆菌19 kDa脂蛋白（Mtb P19）对THP-1细胞凋亡的影响。方法：从培养的结核杆菌H37Ra制备Mtb P19,以5、10、20μg/ml Mtb P19作用于佛波醇酯（PMA）分化的THP-1细胞,37℃、5%CO2孵箱孵育4 h。Wright-Giemsa染色观察细胞形态变化;AnnexinV-FITC染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：终浓度为5μg/ml的Mtb P19即可诱导THP-1细胞凋亡,且凋亡率随Mtb P19作用浓度的升高而增加（P〈0.01）;Wright-Giemsa染色镜下可见部分细胞体积变小、圆缩,核固缩,核断裂。结论：结核分枝杆菌P19以剂量依赖方式诱导THP-1细胞凋亡。     

miR-34a-5p通过调控CDK6表达和PI3K/AKT信号通路调节滋 养层细胞的增殖、浸润和凋亡

目的 探讨miR-34a-5p及CDK6对滋养层细胞增殖,浸润和凋亡的作用和下游机制以及二者的调节关系。方法 培养滋养 层细胞HTR-8/Svneo和人绒毛膜癌细胞系BeWo和JEG-3HTR-8/Svneo,使用RTqPCR法检测3种细胞中miR-34a-5p的表达差 异。根据对HTR-8/Svneo细胞的不同处理进行如下分组：无处理的HTR-8/Svneo细胞（对照组）;miR-34a-5p拟似物mimic转染 细胞（mimic组）,pcDNA-CDK6和mimic共转染HTR-8/Svneo细胞（pcDNA-CDK6+mimic组）,miR-34a-5p抑制剂inhibitor转 染HTR-8/Svneo细胞（inhibitor组）。MTT法检测细胞增殖,ELISA法测定caspase 3活性检测细胞凋亡水平,Transwell实验检 测细胞浸润能力;Western blot 检测细胞周期依赖性蛋白激酶CDK6,凋亡标记物cleaved-caspase 3,浸润标记物MMP-9的表达; 荧光素酶报告基因实验确认miR-34a-5p对CDK-6的直接靶向关系。结果 过表达miR-34a-5p抑制HTR-8/Svneo细胞的增 殖活性（P=0.000）和浸润能力（P=0.049）,下调细胞中MMP-9（P=0.004）和CDK6（P=0.014）的表达水平,上调caspase 3活性 （P=0.018）和cleaved caspase 3的表达水平（P=0.003）;CDK6是miR-34a-5p的靶基因,过表达CDK6削弱miR-34a-5p对细胞 增殖（P=0.000）、凋亡（P=0.015）和浸润（P=0.046）的作用;使用IFG-1激活PI3K/AKT通路部分逆转miR-34a-5p对细胞增殖 （P=0.011）、凋亡（P=0.004）和浸润（P=0.002）的作用。结论 miR-34a-5p通过调控CDK6表达和PI3K/AKT信号通路激活调节滋 养层细胞的增殖,浸润和凋亡。     

miR-20a-5p通过下调HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖

目的 探讨miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖的分子机制。方法 转染HOXB13过表达质粒与HOXB13 siRNA到肺癌细胞系A549,通过qRT-PCR及Western blot实验检测HOXB13 mRNA及蛋白的表达水平;CCK-8及EdU实验检测HOXB13对肺癌细胞系A549细胞增殖的影响;利用生物信息学分析筛选HOXB13可能结合的miRNA;通过qRT-PCR检测转染miR-20a-5p mimic与miR-20a-5p inhibitor到肺癌细胞系后miR-20a-5p的表达水平;Western blot实验检测HOXB13在肺癌细胞系中的表达情况;CCK-8及EdU实验检测miR-20a-5p肺癌细胞系A549细胞增殖的影响;在A549细胞中共转染miR-20a-5p mimic及HOXB13过表达质粒,CCK-8及EdU实验检测A549细胞增殖能力。结果 HOXB13促进了A549细胞的增殖（P<0.05）;生物信息学筛选出HOXB13可能结合的miRNA为miR-20a-5p;在肺癌细胞系中过表达miR-20a-5p后,HOXB13蛋白表达量降低（P<0.05）;而干扰miR-20a-5p表达后,HOXB13蛋白的表达量升高（P<0.05）;细胞增殖实验结果显示,miR-20a-5p与HOXB13对细胞增殖的影响相反,miR-20a-5p及HOXB13同时过表达,细胞增殖情况介于单独过表达miR-20a-5p及单独过表达HOXB13组之间（P<0.05）。结论 miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549的增殖。     

Long non-coding RNA plasmacytoma variant translocation 1 linked to hypoxia-induced cardiomyocyte injury of H9c2 cells by targeting miR-135a-5p/forkhead box O1 axis

BackgroundMyocardial infarction occurs due to insufficient (ischemia) blood supply to heart for long time; plasmacytoma variant translocation 1 (PVT1) is a long non-coding RNAs (lncRNAs) involved in the pathogenesis of various diseases, including heart disease; However, few studies have explored its role. The present study evaluated the effects of lncRNA PVT1 on hypoxic rat H9c2 cells.MethodsHypoxic injury was examined by measuring cell viability and apoptosis by using cell counting kit-8 activity and flow cytometry assays. Gene expressions after hypoxia were estimated by quantitative real time polymerase chain reaction and the signaling pathway were explored by Western blot analysis. RNA immunoprecipitation and luciferase reporter assays were applied to examine the interactions among genes. Data were analyzed using t-test with one-way or two-way analysis of variance.ResultsThe lncRNA PVT1 is up-regulated in hypoxia-stressed H9c2 cells and knockdown of PVT1 mitigates hypoxia-induced injury in H9c2 cells. PVT1 acts as a sponge for miR-135a-5p and knockdown of PVT1 attenuated the increased hypoxia-induced injury by up-regulating miR-135a-5p. Forkhead box O1 (FOXO1) was identified as a target of miR-135a-5p, and the expression was negatively regulated by miR-135a-5p. The exploration of the underlying mechanism demonstrated that knockdown of FOXO1 reversed PVT1/miR-135a-5p mediated hypoxia-induced injury in H9c2 cells.ConclusionsPVT1 plays a crucial role in hypoxia-injured H9c2 cells through sponging miR-135a-5p and then positively regulating FOXO1.     

基于CiteSpace针灸干预孤独症谱系障碍可视化分析

目的 探讨高血压脑出血术后床头抬高度数选择及其对神经功能、颅内压和脑灌注压的影响。方法 前瞻性选定2020年1月至2022年1月在诸暨市人民医院接受血肿清除术治疗的高血压脑出血患者192例作为研究对象。所有患者依次采用不同的床头抬高度数,包括0°、15°、30°、45°,每个体位角度保持10min,分别记录患者生命体征[体温、心率（heart rate,HR）、收缩压（systolic blood pressure,SBP）、舒张压（diastolic blood pressure,DBP）、平均动脉压（mean arterial pressure MAP）、脉搏血氧饱和度（percutaneous arterial oxygen saturation,SpO2）、脑组织血氧饱和度（cerebral tissue oxygen saturation,rSO2）]、颅内压以及脑灌注压的变化情况。不同体位维持1h后检测患者神经功能相关指标情况[神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase,NSE）、S100β蛋白、髓鞘碱性蛋白（myelin alkaline protein,MBP）]。结果 比较不同床头抬高度数患者的体温、HR、SBP、DBP、MAP、SpO2、rSO2,差异无统计学意义（P>0.05）。抬高度数为0°、15°、30°时患者NSE、S100β蛋白、MBP水平均高于45°,0°、15°时高于30°,0°的颅内压高于15°,差异均有统计学意义（P<0.05）。抬高度数为0°、15°、30°时,患者颅内压均高于45°,脑灌注压水平均低于45°,0°、15°时颅内压均高于30°,脑灌注压水平均低于30°,0°时颅内压高于15°,脑灌注压水平低于15°,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 高血压脑出血术后患者床位抬高30°、45°有助于降低颅内压,稳定脑灌注压,改善神经功能。     

MicroRNA-219a-5p和AFAP1L2对胰腺癌细胞的作用研究

目的 探讨microRNA-219a-5p（miR-219a-5p）和肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2（AFAP1L2）对胰腺癌细胞的作用。方法 分别采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blotting法检测胰腺癌细胞株（PANC-1、BXPC-3、SW1990、Capan-1）及正常胰腺导管上皮细胞（HPDE）miR-219a-5p、AFAP1L2的表达，采用siRNA及过表达质粒下调或上调AFAP1L2表达，CCK-8法观察胰腺癌细胞株增殖变化。采用mimics或inhibitor上调或下调miR-219a-5p表达，CCK-8法观察胰腺癌细胞株增殖变化。流式细胞术检测不同干预条件下细胞凋亡和细胞周期。生物信息学预测两者可能具有靶向调控关系。qRT-PCR和Western blotting法检测AFAP1L2 mRNA及蛋白表达，荧光素酶实验观察二者碱基配对关系，进一步验证miR-219a-5p对AFAP1L2具有靶向调控作用。结果 与HPDE细胞比较，胰腺癌细胞株中miR-219a-5p表达较低（P <0.05）。AFAP1L2 mRNA及蛋白在胰腺癌细胞株中的表达高于在HPDE细胞中的表达（P <0.05）。Capan-1或SW1990细胞培养48 h后，与空白对照组（NC组）比较，pCMV-EGFP-AFAP1L2组光密度（OD）值升高（P <0.05），siAFAP1L2组OD值下降（P <0.05），AFAP1L2对胰腺癌细胞增殖具有正向调控作用。Capan-1及SW1990细胞培养48 h后，与miR-NC组比较，miR-219a-5p mimics组OD值下降（P <0.05），miR-219a-5p inhibitor组OD值升高（P <0.05），miR-219a-5p表达对胰腺癌细胞增殖具有负向调控作用；上调miR-219a-5p表达，可诱导细胞S期阻滞，导致细胞凋亡增加。miR-219a-5p负向调控AFAP1L2表达；荧光素酶实验显示，miR-219a-5p与AFAP1L2的3''-URT互补结合，miR-219a-5p与AFAP1L2存在靶向调控关系。结论 miR-219a-5p通过靶向调控AFAP1L2表达负向介导胰腺癌细胞增殖及凋亡。     

结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因的克隆与序列分析

目的：克隆结核分枝杆菌减毒株H37Ra培养滤液蛋白10（CFP10）基因,并对其进行序列分析。方法：自结核菌H37Ra株抽提基因组DNA为模板,以已知结核菌H37Ra株CFPIO基因设计引物。通过聚合酶链反应（PCR）技术扩增出结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因,将其克隆至pTG19-T载体后,经PCR和双酶切鉴定后进行DNA序列测定,并以BLAST在线软件进行序列比对分析。结果：PCR产物电泳显示扩增片段约为300bp,测序获得的片段开放编码框由303bp组成,与H37Rv株CFP10基因同源性为100％,推导出编码氨基酸序列同源性为100％。结论：成功克隆结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因,其基因序列与H37Rv株CFPIO基因序列无差异。     

MicroRNA-199a-3p对人骨肉瘤细胞凋亡的影响

目的:探讨microRNA-199a-3p (miR-199a-3p)对人骨肉瘤细胞凋亡的影响?方法:用合成的成熟miR-199a-3p序列模拟物(miR-199a-3p mimics)转染人骨肉瘤细胞(U2-OS),以阴性对照物序列(NC mimics)转染细胞作为阴性对照?转染后应用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞miR-199a-3p的表达量,Western blot法检测各组细胞中髓样细胞白血病-1(MCL-1)蛋白的表达水平及多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的剪切情况,利用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,并对实验结果进行统计学分析?结果:与对照组相比,转染miR-199a-3p mimics的实验组细胞中,miR-199a-3p的表达量明显升高,MCL-1蛋白的表达降低,PARP蛋白的剪切水平增加,细胞的凋亡率增高,差异均有统计学意义(P < 0.05)?结论:miR-199a-3p可以有效促进骨肉瘤细胞的凋亡?