PI3K/Akt信号通路对二氧化硅诱导人胚支气管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路在二氧化硅(SiO2)粉尘诱导的人胚胎支气管上皮细胞(HBE)表达转化生长因子(TGF)-β和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)中的作用.方法 将体外培养的HBE细胞分成5组:(1)空白对照组;(2)SiO2处理组;(3)Akt磷酸化抑制剂组;(4)同时用Akt磷酸化抑制剂和SiO2处理组;(5)Akt磷酸化抑制剂处理细胞24 h再用SiO2处理组;SiO2暴露浓度为100 μg/ml,磷酸化抑制剂Ly294002浓度为10 μmol/L;用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、TGF-β 、α-SMA表达水平.用免疫荧光技术检测上述处理过程中α-SMA蛋白在细胞中的定位和表达情况.结果 SiO2可以明显促使Akt磷酸化,48 h p-Akt表达增加了近l倍,72 h表达最高;TGF-β在12h明显增高,48 h达高峰;α-SMA表达在24 h开始增高,72h表达上调了1倍.Akt磷酸化抑制剂Ly294002可以有效抑制Akt的磷酸化,明显降低α-SMA的表达,尤其是先加抑制剂与细胞作用24 h后再加SiO2,p-Akt和α-SMA表达均明显下调,分别下调了1.5倍和7.6倍,对TGF-p表达则无明显影响.免疫荧光结果显示,SiO2可明显诱导HBE细胞内α-SMA的表达,而Akt磷酸化抑制剂Ly294002可以使HBE细胞内α-SMA蛋白的荧光强度明显减弱.结论 SiO2诱导HBE细胞表达α-SMA可能是通过PI3K/Akt信号通路实现的,Akt磷酸化抑制剂Ly294002可以有效抑制SiO2诱导的α-SMA表达.     

明日叶查尔酮对胰岛素抵抗细胞PI3K-Akt-GLUT4信号通路的影响

目的研究明日叶查尔酮(Angelica keiskei chalcones,AC)对胰岛素抵抗L6细胞磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶-葡萄糖转运体4(PI3K-Akt-GLUT4)信号通路的影响。方法采用高浓度胰岛素诱导的胰岛素抵抗L6细胞,分别加入5、10、20μmol/L终浓度的明日叶查尔酮共同培养24 h,葡萄糖氧化酶法测定细胞上清液中葡萄糖含量,逆转录聚合酶链式反应方法检测细胞PI3K和Akt的mRNA表达水平,蛋白印迹法检测GLUT4和Akt的蛋白表达水平。结果胰岛素抵抗组细胞培养液的葡萄糖含量显著高于空白对照组(P0.05),而PI3K mRNA、Akt mRNA和GLUT4、Akt蛋白表达水平则降低(P0.05);中、高剂量AC组细胞培养液葡萄糖含量均低于胰岛素抵抗组(P0.05),而PI3K mRNA、Akt mRNA和GLUT4、Akt蛋白表达水平则升高(P0.05)。结论明日叶查尔酮可上调L6细胞胰岛素抵抗模型PI3K-AktGLUT4信号通路的表达水平,增强其对葡萄糖的摄取利用,改善胰岛素抵抗。     

PI3K-Akt信号通路在尼古丁致牙周膜成纤维细胞细胞凋亡中的保护作用

目的探讨尼古丁诱导的牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)凋亡的信号转导机制。方法向7×104/ml的PDLFs细胞悬液中分别加入0(对照)、1、10、100μg/ml的尼古丁溶液培养24 h。采用RT-PCR法检测磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,Akt)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA的表达量,采用Western blot法检测Akt蛋白的Thr308、Ser473位点磷酸化和caspase-3蛋白的表达量。结果与对照组比较,各剂量尼古丁染毒PDLFs细胞的PI3K mRNA表达水平上调(P<0.05),Akt mRNA表达水平下调(P<0.05),PDLFs细胞Akt在Thr308、Ser473位点磷酸化水平均升高(P<0.01),caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平均升高(P<0.05,P<0.01)。且随着尼古丁染毒剂量的升高,PI3K mRNA的表达水平呈逐渐增高的趋势,Akt mRNA的表达水平呈逐渐降低的趋势,PDLFs细胞Akt在Thr308位点磷酸化水平呈逐渐增高的趋势,PDLFs细胞Akt在Ser473位点磷酸化水平呈先上升后降低的趋势,PDLFs细胞caspase-3 mRNA和蛋白表达水平呈逐渐增高的趋势。结论 PI3K-Akt信号通路在尼古丁致PDLFs细胞凋亡中具有抗凋亡的保护作用。     

明日叶查尔酮对糖尿病大鼠肝细胞PI3K和AktmRNA表达的影响

目的研究明日叶查尔酮(ashitabe chalcone,AC)对糖尿病大鼠肝细胞磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidy I inositol 3-kinase,PI3K)和蛋白激酶(serine-threonine kinases,Akt)mRNA表达的影响。方法高脂饲料喂养加链尿佐菌素腹腔注射诱发的2型糖尿病大鼠随机分为糖尿病对照组和高、低剂量AC组,每组10只,均喂饲高脂饲料,分别每日经口灌胃给予明日叶查尔酮0、30和10mg/kg BW。另设一个正常对照组为正常大鼠喂饲普通饲料,实验周期4周。用放射免疫分析法检测血清胰岛素水平,葡萄糖氧化酶法测血糖含量,逆转录聚合酶链式反应方法检测肝细胞PI3K和Akt mRNA表达水平,蛋白印迹法测肝细胞Akt磷酸化水平。结果高剂量AC组空腹血糖和血清胰岛素水平显著低于糖尿病对照组,而PI3K mRNA、Akt mRNA和磷酸化Akt蛋白表达水平均显著高于糖尿病对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论明日叶查尔酮可上调糖尿病大鼠PI3K和Akt mRNA的表达水平,改善胰岛素抵抗。     

PI3K/Akt信号通路对胃癌细胞SGC7901细胞化疗效果的影响

目的运用磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3-K)LY294002[2-(4-吗啉基)-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮]作用于胃癌细胞系SGC7901,探讨抑制PI3K/Akt信号转导通路对胃癌细胞化疗敏感性的影响。方法采用MTT比色法,流式细胞术检测5-FU、DDP及ADM单独或联合PI3K抑制剂LY294002对人胃癌细胞SGC7901的抑制率、凋亡率。并分析单独及联合应用LY294002对SGC7901细胞周期的影响。Western-blot检测单独及联合化疗药后P-Akt蛋白在SGC7901细胞中的表达水平。结果单独使用化疗药5-FU、DDP及ADM均可抑制SGC7901细胞增殖、诱导其凋亡。当化疗药与抑制剂联合应用,对细胞的抑制作用明显增强,促凋亡作用增强,与对照组比较(P0.05)。细胞周期同步分析显示,单独用药均可将SGC7901细胞阻滞于G0/G1期。联合使用抑制剂使处于G0/G1期细胞增加。Western blot显示化疗药上调P-Akt蛋白的表达,联合使用抑制剂后SGC7901细胞P-Akt蛋白的表达与未使用抑制剂比较减弱,差异有统计学意义(P0.05)。结论阻断PI3K/Akt信号通路可提高化疗药5-FU、DDP及ADM对胃癌细胞株SGC7901的抑制率,凋亡率并使阻滞于G0/G1期细胞增多;LY294002通过阻断PI3K/Akt信号通路,抑制P-Akt蛋白表达,增强化疗药的敏感性;LY294002阻断PI3K/Akt信号通路对5-FU、DDP、ADM治疗胃癌有一定的协同或增强作用。     

PI3K/Akt信号通路在虾青素调节LX-2细胞活化中作用

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在虾青素调节人肝星状细胞(LX-2细胞)活化中的作用。方法实验设对照组、低、中、高剂量虾青素组(5、10、20μmol/L)、抑制剂组(25μmol/L LY294002)、抑制剂+虾青素组(25μmol/L LY294002+20μmol/L虾青素),作用48 h后检测LX-2细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(col1a1)mRNA表达水平、各组细胞Akt及其磷酸化水平。结果与对照组比较,虾青素组LX-2细胞中α-SMA和col1a1 mRNA表达明显降低,并呈剂量依赖关系(P0.05);与对照组比较,抑制剂组LX-2细胞中磷酸化Akt水平(0.42±0.05)、α-SMA和col1a1 mRNA表达水平[分别为(0.23±0.05)、(0.35±0.06)]均明显降低(P0.05);与对照组比较,虾青素组LX-2细胞中磷酸化Akt水平(0.60±0.07)、α-SM A和col1a1 mRNA表达水平[分别为(0.48±0.07)、(0.61±0.04)]均明显降低(P0.05);与抑制剂组比较,抑制剂+虾青素组LX-2细胞中磷酸化Akt水平(0.18±0.04)、α-SMA和col1a1 mRNA表达水平[分别为(0.11±0.05)、(0.20±0.03)]均明显降低(P0.05)。结论虾青素可通过PI3K/Akt信号通路抑制肝星状细胞活化,发挥抗非酒精性脂肪肝纤维化作用。     

同型半胱氨酸通过PI3K/Akt信号通路诱导人主动脉平滑肌细胞增殖

目的探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)促进人主动脉平滑肌细胞(HASMC)的增殖作用及其分子机制。方法透射电镜观察HASMC增殖的形态学变化;MTT法测定Hcy对HASMC的增殖作用;Western blot法和荧光定量反转录PCR法分别检测PI3K、p-Akt和Egr-1蛋白及mRNA的表达水平。结果 Hcy处理HASMC 48 h后,细胞内均出现空泡增多、内质网扩张和线粒体固缩的现象,对照组细胞形态正常。随着Hcy浓度的增高,与对照组比较,OD值逐渐增高,当Hcy浓度固定时,48 h OD值较24 h升高,差异有统计学意义(P0.05)。PI3K、p-Akt和Egr-1蛋白相对表达水平随着Hcy浓度的增加而逐渐升高,差异有统计学意义(P0.05)。PI3K、p-Akt和Egr-1 mRNA表达水平较对照组均显著升高,差异有统计学意义(P0.05),且PI3K和Akt mRNA表达水平的增加与Hcy呈浓度依赖性(P0.05)。结论 Hcy可通过增强PI3K/Akt信号通路关键蛋白和分子表达,促进早期生长反应因子Egr-1的转录及翻译,诱导人主动脉平滑肌细胞迁移、增生,加速动脉粥样硬化发生。     

Id-1介导E2-2对PI3K/Akt信号通路及内皮祖细胞增长的影响

目的探讨分化抑制因子1(Id-1)和转录因子E2-2(E2-2)对PI3K/Akt通路的影响情况,并明确其在内皮祖细胞(EPCs)增长中的作用。方法采用免疫共沉淀检测Id-1及E2-2是否存在相互作用。在EPCs细胞模型中,过表达及干扰Id-1及E2-2,采用CCK-8法检测细胞增长情况,RT-PCR和Western blot技术检测PI3K及Akt表达水平。结果免疫共沉淀检测发现,Id-1及E2-2之间存在蛋白-蛋白相互作用。过表达Id-1可显著下调E2-2表达水平,上调PI3K/Akt表达水平,细胞增长能力增强;过表达E2-2后PI3K/Akt表达降低,细胞增长减弱;共转染Id-1及E2-2则发现,二者可协同影响PI3K/Akt表达水平。结论 Id-1和E2-2之间存在相互作用,Id-1对PI3K/Akt起促进作用,而E2-2则发挥抑制效应,二者协同调控PI3K/Akt信号通路,进而影响EPCs的增长。     

丹参提取物对感染性骨缺损大鼠炎症水平的影响

目的 分析丹参提取物对感染性骨缺损大鼠炎症水平的影响。方法 选取50只SPF级SD大鼠,10只大鼠作为对照组,另外40只建立感染性骨缺损模型,将30只建模成功大鼠分为模型组、药物对照组、丹参提取物组各10只;观察各组大鼠病理组织学检测、骨密度、骨灰度、血管内皮生长因子(VEGF)、骨生长因子、炎症因子水平、降钙素基因相关肽(CGRP)/磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)通路相关mRNA表达量、CGRP/PI3K/Akt通路。结果 与对照组相比,模型组、药物对照组、丹参提取物组骨密度、骨灰度、VEGF、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)、CGRP、PI3K、Akt mRNA表达量、CGRP、PI3K、Akt表达量降低,白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)、核因子κB(NF-κB)升高(P<0.05);与模型组相比,药物对照组、丹参提取物组骨密度、骨灰度、VEGF、IGF-1、FGF-2、CGRP、PI3K、Akt mRNA表达量、CGRP、PI3K、Akt表达量升高,IL-10、TNF-ɑ、...     

PI3K抑制剂对肝星状细胞PI3K/AKT通路及Ⅲ型胶原表达的影响

目的探讨PI3K抑制剂(PI103)对肝星状细胞(HSC)PI3K/AKT通路及Ⅲ型胶原表达的影响,为肝纤维化的治疗提供理论基础。方法将液氮保存下的HSC株,于37℃,5%CO2孵育箱中复苏传代培养,同步化后将细胞分为3组:空白对照组、CCl4组、CCl4+PI3K抑制剂组。QPCR方法检测PI3K、AKT信号分子mRNA水平的变化;免疫细胞化学方法测定HSC的PI3K、AKT信号分子和Ⅲ型胶原表达情况。结果 CCl4组和空白对照组比较,PI3K、AKT信号分子mRNA水平和蛋白表达均增多,Ⅲ型胶原生成增多,差异有统计学意义(P0.05)。CCl4组和CCl4+PI103组比较,PI3K、AKT信号分子mRNA水平和蛋白表达均减少,III型胶原生成减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论 PI3K抑制剂可降低PI3K、AKT信号分子及Ⅲ型胶原的表达,进而阻断肝纤维化进程。     

Zinc has an insulin-like effect on glucose transport mediated by phosphoinositol-3-kinase and Akt in 3T3-L1 fibroblasts and adipocytes

Zinc has insulin-like effects on cells, including promotion of both lipogenesis and glucose transport. The relationship between zinc and the stimulation of glucose transport is unclear. We hypothesize that zinc affects the insulin-signaling pathway. In this study, the effect of zinc on glucose transport and insulin signaling was examined in 3T3-L1-preadipocytes and -adipocytes. Treatment of cells with up to 200 micromol/L zinc significantly increased glucose transport (P < 0.05). The effect of zinc on adipocytes was greater than on preadipocytes, and the effect of zinc plus insulin was greater than that of either insulin or zinc alone. Cytochalasin D, which disrupts actin filaments, attenuated the increase of glucose transport induced by zinc or insulin (P < 0.05). At 100 nmol/L, wortmannin, the phosphoinositide (PI) 3-kinase inhibitor, decreased basal glucose transport and blocked zinc-stimulated glucose transport in both cell types (P < 0.05). H7, an inhibitor of protein kinase C, did not reduce basal glucose transport but decreased zinc-induced glucose transport (P < 0.05). Zinc increased tyrosine phosphorylation of the insulin receptor beta subunit of both preadipocytes and adipocytes after 5-10 min of treatment (P < 0.05). Zinc at 200 micromol/L did not affect tyrosine phosphorylation of insulin receptor substrate (IRS)-1 or -2; further, there was no effect of zinc on the association of the p85 subunit of PI 3-kinase and IRS-1. Zinc significantly increased serine-473 phosphorylation of Akt in both preadipocytes and adipocytes (P < 0.05). The PI 3-kinase inhibitor, wortmannin, totally blocked the effect of zinc on Akt activation. Hence, it appears that zinc can induce an increase in glucose transport into cells and potentiate insulin-induced glucose transport, likely acting through the insulin-signaling pathway.     

Involvement of the PI3K/Akt/Nrf2 Signaling Pathway in Resveratrol-Mediated Reversal of Drug Resistance in HL-60/ADR Cells

Resistance to chemotherapy drugs, such as adriamycin (ADR), is a common problem in acute myeloid leukemia (AML) patients. We hypothesized that the natural compound resveratrol (Res) may reverse AML drug resistance through the PI3K/Akt/Nrf2 pathway. We investigated the in vitro effect of Res using human promyelocytic leukemia cells (HL-60) and the ADR-resistant cell line (HL-60/ADR) and treated with either Res or ADR?+?Res. Cellular proliferation inhibition rate, auto-fluorescence intensity of ADR in HL-60/ADR cells and HL-60 cells, mRNA expression of Nrf2 and the drug-resistant gene MRP1, and protein expression of PI3K, Akt, p-Akt, Nrf2, and MRP1 were measured. Results showed ADR?+?Res had a more significant inhibitory effect than ADR alone on HL-60/ADR cells. Auto-fluorescence intensity of ADR in HL-60/ADR cells treated with ADR?+?Res significantly increased. No difference of the auto-fluorescence intensity of ADR was observed in HL-60 cells treated with ADR and ADR?+?Res. mRNA expression of Nrf2 and MRP1 significantly decreased in HL-60/ADR cells treated with both Res and ADR?+?Res; protein expression of PI3K, p-Akt, Nrf2, and MRP1 significantly decreased in HL-60/ADR cells treated with PI3K inhibitor, Res and ADR?+?Res. In conclusion, Res reverses the drug resistance of AML HL-60/ADR cells through regulation of the PI3K/Akt/Nrf2 signaling pathway and MRP1 expression.     

煤焦沥青烟提取物致BEAS-2B恶性转化细胞中姊妹染色单体分离相关蛋白的改变

目的 通过检测姊妹染色体凝集和分离相关蛋白染色体结构维持蛋白(SMC)1、SMC3、分离酶(Separase)和保全素(Securin)在煤焦沥青致BEAS-2B癌变细胞中的变化,探讨其在煤焦沥青接触者肺癌发生中的作用.方法 用中温煤焦沥青烟提取物作为诱导剂,建立永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B的恶性转化模型,用实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测相关基因的mRNA表达水平;细胞爬片免疫组化半定量法检测其蛋白表达改变.以二甲亚砜(DMSO)溶剂组和未染毒的正常传代的BEAS-2B细胞为对照组.结果 与正常对照组和DMSO溶剂对照组比较,煤焦沥青烟提取物诱导转化细胞中,SMC1基因和蛋白表达水平的差异无统计学意义(P＞0.05);煤焦沥青烟诱导组SMC3和Separase的基因和蛋白表达水平明显升高(基因:SMC3:2.54±0.20、Separase:2.42±0.22,蛋白:SMC3:0.27±0.02、Separase:0.25±0.02),Securin的基因和蛋白表达水平明显降低(基因:0.30±0.04,蛋白:0.17±0.01),与其他两组(DMSO溶剂对照组:基因:SMC3:1.13±0.12、Separase:1.00±0.04、Securin:0.90±0.11,蛋白:SMC3:0.10±0.03、Separase:0.18±0.02、Securin:0.22±0.02;正常对照组:基因:SMC3:1.00±0.11、Separase:1.00±0.08、Securin:1.00±0.11,蛋白:SMC3:0.09±0.01、Separase:0.18±0.01、Securin:0.23±0.02)相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在煤焦沥青致支气管上皮细胞恶性转化过程中,姊妹染色单体凝集和分离相关蛋白SMC3和Separase升高,Securin表达水平降低,参与了细胞恶性转化过程.     

煤焦沥青烟提取物致BEAS-2B恶性转化细胞端粒蛋白的变化

目的 通过检测端粒保卫蛋白复合体中端粒保卫蛋白1 (POT1)、端粒重复序列结合因子1(TRF1)和TRF2在煤焦沥青烟致永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)癌变细胞中的表达变化,探讨其在煤焦沥青烟致肺癌发生中的作用。方法 用中温煤焦沥青烟提取物作为诱导剂,建立BEAS-2B的恶性转化模型,用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测POT1、TRF1和TRF2基因mRNA表达水平;细胞爬片免疫组化半定量法检测其蛋白表达改变。结果 BEAS-2B恶性转化细胞POT1和TRF1基因mRNA表达水平（分别为：0.63-0.04,0.36-0.01）和蛋白表达水平(分别为：0.36±0.05,0.09±0.03)均下调,与正常对照组(mRNA：POT1：1.00±0.04,TRF1：1.01±0.16;蛋白：POT1:0.55±0.07,TRF1：0.27±0.07)和二甲亚砜溶剂对照组(mRNA:POT1:0.89±0.12,TRF1：0.90±0.08;蛋白：POT1:0.55±0.10,TRF1:0.26±0.04)相比,差异均有统计学意义(P＜0.05)。BEAS-2B恶性转化细胞TRF2基因mRNA表达水平( 1.45±0.07)和蛋白表达水平(0.88±0.06)均上调,与正常对照组(mRNA:1.00±0.07,蛋白：0.48±0.06)和二甲亚砜溶剂对照组（mRNA:1.00±0.06,蛋白：0.50±0.06）相比,差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 在煤焦沥青烟致支气管上皮细胞恶性演化过程中,POT1、TRF1和TRF2基因和蛋白表达水平发生变化。     

噎膈血瘀证患者血清对食管癌EC9706细胞增殖 及PI3K/Akt信号通路蛋白表达的影响

摘要:目的　通过观察血瘀型噎膈患者血清对食管癌EC9706细胞增殖、形态变化及PI3K/Akt介导的信号通路蛋白表达的影响,探讨食管癌瘀血内结证候形成的分子机制。方法　将EC9706细胞于37℃,5%饱和湿度的CO2培养箱孵育24 h,饥饿24 h,分别加入倍比梯度的血瘀证、脾气虚证患者和健康人血清,MTT染色法检测细胞增殖变化;光镜下观察各组间细胞形态;Western blotting法检测PI3K/Akt信号通路蛋白表达差异。结果　血瘀型噎膈患者血清刺激细胞的50%增殖率为711 μl/10 ml培养液体积,光镜观察,该型噎膈患者血清刺激细胞呈长梭形改变,细胞连接成网状;在PI3K/Akt信号通路中,血瘀型噎膈患者血清对EC9706细胞蛋白EGFR、PI3K、Akt、p-Akt和 NF-κB的表达具有特征性促表达作用,与其他各血清干预的细胞比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论　噎膈血瘀证患者血清提供利于细胞增殖的微环境,该证候的分子机制与PI3K/Akt信号通路蛋白超标达密切相关。     

P13K／Akt—Nrf2信号通路调节大鼠气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达的研究

目的观察香烟烟雾提取物（CSE）通过磷酯酰肌醇-3-激酶（PBK）／Akt—Nrf2（Nuclearfactor—E2relatedfactor）信号通路对大鼠气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的影响。方法用浓度为10％的CSE对体外原代培养的大鼠气道上皮细胞进行不同时间处理及使用P13K特异抑制剂LY294002进行干预。观察CSE在不同的时间及使用LY294002干预后对Nrt2的核转位及γ-GCS的影响,用细胞免疫化学、流式术、免疫荧光及Westernblot方法检测Nrf2、p-Akt及γ-GCS的表达水平;用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测γ-GCSmRNA的表达水平;检测还原型谷胱甘肽（GSH）的含量及γ-GCS的活性。结果暴露CSE后1h,GSH含量明显低于对照组,在暴露CSE后3h和6h,GSH含量明显增高。Nrf2蛋白质在对照组主要表达在胞浆,其蛋白质表达增强,而在CSE1h、CSE3h和CSE6h组主要在胞核中表达,其蛋白质表达增强。p-Akt蛋白质在暴露CSE后1h增强,3h最强,6h减弱。p-Akt阳性细胞百分比变化趋势与其蛋白质变化趋势相同。γ—GCSmRNA和蛋白质在CSE1h、CSE3h、CSE6h组表达逐渐增强。γ—GCS活性在CSE1h、CSE3h、CSE6h组逐渐增强。预先使用LY292002,p-Akt阳性细胞百分比及蛋白质表达明显弱于CSE3h组,Nrf2胞浆蛋白质表达增强,胞核表达减弱,吖-GCSmRNA、蛋白质和活性及GSH含量均明显低于CSE3h组。相关性分析显示Nri2与γ-GCS、γ-GCS活性呈正相关（r=0．81,0．77,P〈0．05）,p-AM与γ-GCS、γ-GCS活性、GSH及Nrf2呈正相关（r=0．373,0．44,0．63,0．56,P〈0．05）。结论P13K／Akt信号通路可能参与Nrf2核转位及其对抗氧化基因γ-GCS的调控。     

个旧矿粉诱导的肺癌细胞中分化抗原9的表达及基因突变分析

目的探讨分化抗原9（CD9）在个旧矿粉诱导永生化人支气管上皮细胞（BEAS-2B）恶性转化为肺癌细胞过程中的异常表达和基因突变。方法以BEAS-2B为对照组（20瓶），以个旧矿粉体外诱导BEAS-2B所产生的恶性转化细胞为实验组（20瓶）。采用免疫细胞化学技术检测CD9蛋白在BEAS-2B和恶性转化细胞中的表达。采用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测CD9mRNA在BEA-2B和恶性转化细胞中的表达；并对其RT-PCR产物进行DNA序列测定。结果CD9蛋白在BEAS-2B中的表达率（100％，20／20）与其在恶性转化细胞中的表达率（35％，7／20）差异有统计学意义（P〈0．01）。CD9mRNA在BEAS-2B中的表达强度（0．91±0．09）明显高于其在恶性转化细胞中的表达强度（0．34±0．14），差异有统计学意义（P〈0．01）。DNA序列测定显示，在BEAS-B的恶性转化细胞中CD9基因存在2处点突变，在第231位置发生G—T转换；在第119位置发生T→A转换，而且这2处的替代引起的错译突变均导致了编码氨基酸的改变，第40位氨基酸由谷胺酰胺（Gin，Q）变为组氨酸（His，H）；第3位氨基酸由缬氨酸（Va1，V）变为天冬氨酸（Asp，D）。结论CD9的表达缺失或下调以及基因突变在个旧矿粉诱导BEAS．2B恶性转化为肺癌细胞的过程中可能发挥重要作用。     

PI3K/Akt-Nrf2信号通路调节大鼠气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达的研究

目的 观察香烟烟雾提取物(CSE)通过磷酯酰肌醇-3-激酶(PI3K)/Akt-Nrf2(Nuclear factor-E2 related factor)信号通路对大鼠气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的影响.方法 用浓度为10%的CSE对体外原代培养的大鼠气道上皮细胞进行不同时间处理及使用PI3K 特异抑制剂LY294002进行干预.观察CSE在不同的时间及使用LY294002干预后对Nrf2的核转位及γ-GCS的影响,用细胞免疫化学、流式术、免疫荧光及Western blot方法检测Nrf2、p-Akt及γ-GCS 的表达水平;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测γ-GCS mRNA的表达水平;检测还原型谷胱甘肽(GSH)的含量及γ-GCS的活性.结果 暴露CSE后1h,GSH含量明显低于对照组,在暴露CSE后3 h和6 h,GSH含量明显增高.Nrf2蛋白质在对照组主要表达在胞浆,其蛋白质表达增强,而在CSE1h、CSE3h和CSE6h组主要在胞核中表达,其蛋白质表达增强.p-Akt蛋白质在暴露CSE后1h增强,3 h最强,6 h减弱.p-Akt阳性细胞百分比变化趋势与其蛋白质变化趋势相同.γ-GCSmRNA 和蛋白质在CSE1h、CSE3h、CSE6h组表达逐渐增强.γ-GCS活性在CSE1h、CSE3h、CSE6h组逐渐增强.预先使用LY292002,p-Akt阳性细胞百分比及蛋白质表达明显弱于CSE3h组,Nrf2胞浆蛋白质表达增强,胞核表达减弱,γ-GCS mRNA、蛋白质和活性及GSH含量均明显低于CSE3h组.相关性分析显示Nrf2与γ-GCS、γ-GCS活性呈正相关(r=0.81,0.77,P<0.05),p-Akt与γ-GCS、γ-GCS活性、GSH及Nrf2呈正相关(r=0.373,0.44,0.63,0.56,P<0.05).结论 PI3K/Akt信号通路可能参与Nrt2核转位及其对抗氧化基因γ-GCS的调控.     

二氧化硅对人呼吸道上皮细胞及巨噬细胞内IL-8和TNFα的诱导作用

[目的]探讨二氧化硅对人支气管上皮细胞（BEAS-2B）、Ⅱ型肺泡上皮细胞（A549）及巨噬细胞（THP-1）内白细胞介素-8（IL-8）和肿瘤坏死因子（TNFα）基因表达的诱导作用。[方法]将100μg/mL二氧化硅悬液与上述3种细胞分别温育4h,提取总RNA,用定量PCR技术测定生理盐水（对照组）与二氧化硅染毒组细胞内IL-8及TNFα mRNA表达水平。[结果]与对照组相比,在同一实验剂量及刺激时间（100μg／mL,4h）下,二氧化硅刺激可致THP-1内IL-8及TNFα mRNA表达水平分别升高至76．79倍及4．49倍;BEAS-2B内IL-8及TNFα mRNA表达水平分别升高至3．46倍及2．33倍;A549内IL-8及TNFα mRNA表达水平分别升高至1．64倍及1．52倍。[结论]二氧化硅可提高矽肺发病相关细胞因子IL-8及TNFα基因的表达水平。二氧化硅的上述作用,以对THP-1内IL-8 mRNA的诱导作用为最强。     

青石棉诱导呼吸道上皮BEAS-2B细胞表达白细胞介素-8的研究

目的研究青石棉纤维作用于呼吸道上皮BEAS-2B细胞后白细胞介素-8(IL-8)蛋白和基因的表达水平及酪氨酸激酶抑制剂PD98059对IL-8表达的影响。方法用定量聚合酶链反应法测定青石棉纤维诱导BEAS-2B细胞后的IL-8mRNA水平;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定BEAS-2B细胞培养上清液中IL-8蛋白水平。结果不同浓度青石棉刺激BEAS-2B细胞后,细胞培养上清液中IL-8释放量明显增加,同样BEAS-2B细胞中IL-8mRNA表达显著上升,使用酪氨酸激酶抑制剂PD98059可明显抑制IL-8的蛋白及mRNA表达水平。结论青石棉可诱导IL-8的高表达,而这种表达可为PD98059所抑制,提示IL-8的表达受丝裂原活化蛋白激酶信号通路中磷酸化ERK蛋白表达的控制。