蝎毒抗癌多肽对H22细胞株体内、体外的抑瘤作用

目的 观察蝎毒抗癌多肽（APBMV）对小鼠肝癌（H22）实体瘤及瘤细胞的抑制作用。方法 应用MTT法检测APBMV对H22瘤细胞的毒性作用；通过小鼠H22实体瘤模型，观察APBMV对肿瘤生长的抑制作用及对小鼠外周血白细胞（WBC）数和脾脏指数（SI）的影响。结果 APBMV对H22细胞具有一定的毒性作用，但剂量效应关系不明显（P＞0．05）。APBMV能明显抑制小鼠H22肿瘤的生长，抑制率最高可达40．30％（P＜0．01），带瘤小鼠外周血WBC和SI无明显变化或略高于对照组，而阳性对照5－Fu组小鼠WBC和SI均明显下降（P＜0．01）。结论 APBMV是东亚钳蝎蝎毒中的1种低毒有效的抗肿瘤成分，能抑制小鼠肝癌的生长。     

IL-21在肝癌细胞株H22细胞中的表达及其活性

摘 要　目的：构建小鼠IL-21（mIL-21）真核表达载体mIL-21-pcDNA3.1,转染肝癌H22细胞,探讨其生物学活性。方法：RT-PCR法扩增mIL-21基因,构建mIL-21真核表达载体mIL-21-pcDNA3.1,并经DNA测序证实。脂质体法介导mIL-21-pcDNA3.1转染H22细胞,RT-PCR和Western boltting鉴定其表达,MTT法检测mIL-21-pcDNA3.1对T细胞增殖和NK细胞杀伤活性的影响。结果：DNA序列分析证实构建的mIL-21-pcDNA3.1正确无误,RT-PCR和Western boltting证实转染的H22细胞中有mIL-21的表达。MTT法显示,转染mIL-21的H22细胞培养上清刺激T细胞增殖的刺激指数（stimulation index,SI）为3.412±0.312,联合ConA的刺激指数为4.673±0.450,均显著高于转染空质粒组的1.465±0.103和未转染组的1.447±0.245,(P<0.01）。转染mIL-21的H22细胞培养上清NK细胞杀伤率为(81.66±4.26)%,显著高于转染空质粒组的（34.74±5.52)%和未转染对照组的（33.61±1.42)%。结论：mIL-21-pcDNA3.1载体在H22细胞中的表达可显著增强T细胞增殖及NK细胞的杀伤功能,为其在抗肝癌治疗中的应用奠定了基础。     

大鼠肝癌高表达基因cDNA序列的克隆

目的克隆出大鼠肝癌高表达EST片段相关基因的cDNA完整表达序列,为进一步揭示其生物学功能奠定基础。方法通过基因芯片检测出DEN诱发的大鼠肝癌高表达的EST片段;其中部分高表达的EST片段,采用电子克隆与PCR相结合的方法,克隆出其cDNA完整表达序列。结果与正常大鼠肝组织比较,肝癌组织中明显高表达的EST片段有34个。采用EST电子克隆技术与PCR技术相结合的方法,成功克隆出4个EST片段的cDNA序列,经进一步BLAST对比分析,证明G15、G20、G36、G40等4个基因为新基因,并进行GenBank登录,登录号分别为DQ480746、DQ480747、DQ480744、DQ912022。结论利用大鼠基因芯片高通量地筛选出DEN诱发的肝癌组织高表达的有关基因,并在充分利用生物信息学资源的基础上,成功克隆出4个新基因的cDNA序列,为今后进一步深入观察这些基因的功能及其在肝癌发生、发展过程中的作用机制打下良好的研究基础。     

鼻咽癌组织中CD44V6 mRNA及其蛋白表达的临床意义

目的：探讨鼻咽癌（NPC）组织中CD44V6 mRNA及其蛋白表达的临床意义。方法：应用催化信号放大原位杂交和免疫组织化学方法，检测65例NPC组织中CD44V6mRNA及其蛋白的表达情况，结合临床病理因素及随访资料进行分析。结果：在NPC组织中CD44V6 mRNA及其蛋白表达阳性率分别为47．7％（31／65）和52．3％（34／65），CD44V6mRNA及其蛋白阳性表达与NPC原发病灶的分期和淋巴结转移均正相关，CD44V6mRNA及其蛋白阳性表达者5年内复发转移率高（P＜0．01），5年以上生存率低（P＜0．05），结论：CD44V6基因表达可作为预测NPC转移，复发和评估预后的重要生物学指标。     

宫颈癌细胞株survivin mRNA表达的分子信标检测

目的：探讨宫颈癌细胞株中survivin mRNA表达分子信标荧光显像的检测。方法：体外培养宫颈癌细胞株HeLa和SiHa,滴加100nM的survivin mRNA分子信标,荧光显微镜下观察荧光强度,并用western blot及免疫组化方法对其表达进行验证。结果：两种Survivin mRNAMB在HeLa和SiHa中观察到了强荧光信号,且SiHa荧光信号强于Hela。结论：分子信标技术可成功检测宫颈癌细胞survivin mRNA的表达,为宫颈癌的早期诊断提供了又一可能的手段。     

宫颈癌细胞株survivin mRNA表达的分子信标检测

目的:探讨宫颈癌细胞株中survivin mRNA表达分子信标荧光显像的检测。方法:体外培养宫颈癌细胞株HeLa和SiHa,滴加100nM的survivin mRNA分子信标,荧光显微镜下观察荧光强度,并用western blot及免疫组化方法对其表达进行验证。结果:两种Survivin mRNAMB在HeLa和SiHa中观察到了强荧光信号,且SiHa荧光信号强于Hela。结论:分子信标技术可成功检测宫颈癌细胞survivin mRNA的表达,为宫颈癌的早期诊断提供了又一可能的手段。     

叶绿酸抗细胞恶变相关cDNA序列的克隆

目的:克隆叶绿酸抑制人支气管上皮细胞系(16HBE)恶性转化的相关差异表达cDNA序列。方法:以叶绿酸及反式-BPDE共同处理的16HBE细胞为实验细胞,以反式-BPDE单独处理的16HBE细胞为对照细胞,采用cDNA代表性差异分析法,比较2种细胞基因表达的差异,分离叶绿酸抗反式-BP-DE作用的相关差异表达cDNA片段。分离的片段分别与pGEM-T载体连接并转化入JM109细菌中,对质粒DNA进行测序。以BLASTN程序进行GenBank的同源性检索。结果:克隆的5条cDNA序列中,有3条为新基因序列,另2条分别与类S18/S6人核糖体蛋白及alpha-烯醇酶等有同源性。结论:克隆的5条cDNA序列所在的基因可能与叶绿酸抗细胞恶性转化分子机制密切相关。     

睾丸肿瘤抗原MAGE-C2基因cDNA的克隆、表达与纯化

目的　克隆人睾丸肿瘤抗原MAGE- C2基因的c DNA,并在大肠杆菌中进行表达与纯化,以便为研究其生物学功能及制备肿瘤疫苗奠定基础。方法　从人胶质瘤细胞系BT- 32 5中提取总RNA,用RT- PCR从中扩增出MAGE- C2的c DNA片段,将MAGE- C2的c DNA片段插入载体p GEM- T easy中,经全自动序列分析仪测序正确后,再克隆至表达载体p GEX- 4 T- 2中,构建重组表达载体p GEX- 4 T- 2 - MAGE- C2 ,并转化大肠杆菌,用IPTG进行诱导后,收集细菌,菌体裂解后,利用GST亲和层析柱对表达蛋白进行纯化,并进行SDS- PAGE及Western- blot检测。结果　从人胶质瘤细胞系BT- 32 5中克隆到长4 0 0 bp的MAGE- C2的c DNA,测序正确;经Xho I和Bam H I酶切鉴定证实,MAGE- C2 c DNA成功克隆到表达载体p GEX- 4 T- 2中;构建的表达载体p GEX- 4 T- 2 - MAGE- C2在大肠杆菌中表达出Mr4 10 0 0的融合蛋白,经谷胱甘肽(GST)亲和层析后的融合蛋白纯度达到90 % ,该融合蛋白具有MAGE- C2抗原特性。结论　成功地克隆并表达了MAGE- C2 c DNA,并对融合蛋白进行了初步纯化,为大规模获得MAGE- C2抗原创造了条件。     

食管鳞癌中SERPINE1 mRNA的表达及其临床意义

目的:检测SERPINE1 mRNA在食管鳞癌中的表达并评价其临床意义.方法:采用组织微阵列和RNAscope原位杂交技术检测236例食管鳞癌组织及其配对手术切缘正常组织中SERPINE1 mRNA的表达水平,分析其表达与临床病理指标及预后的相关性.结果:在23.7％(56/236)的食管鳞癌组织中有SERPINE1 mRNA的高表达,而在癌旁正常组织中无表达.SERPINE1 mRNA表达水平与性别、肿瘤分级、浸润深度及临床分期均显著正相关(r分别为7.939、6.618、10.939、6.671,均为P<0.05).Kaplan-Meier生存曲线显示SERPINE1 mRNA高表达患者的生存时间显著短于低表达患者(P<0.05).多因素Cox回归分析表明,SERPINE1 mRNA高表达是食管鳞癌患者不良预后的独立预测因素.结论:SERPINE1 mRNA在食管鳞癌组织中表达升高,其高表达与食管鳞癌患者预后不良相关,有可能作为食管鳞癌预后评估的分子标志.     

稳定表达RFX6基因肝癌细胞株的建立

目的:建立稳定表达RFX6基因的肝癌细胞株。方法:构建人源RFX6基因的重组质粒(pLNCX2-RFX6),pVSV-G质粒分别与pLNCX2-RFX6和空载体pLNCX2共转染至GP2-293细胞中进行包装,并用包装的逆转录病毒感染人肝癌QGY-7703细胞株,G418筛选出阳性克隆。RT-PCR和蛋白质印迹法验证稳定细胞株RFX6基因表达情况。采用Image J软件进行灰度值分析比较两株细胞系的差异。结果:在QGY-7703-pLNCX2-RFX6和QGY-7703-pLNCX2细胞中,RFX6/18SmRNA电泳条带灰度比值分别为5.044 0±1.384 0和0.357 2±0.407 9,QGY-7703-pLNCX2-RFX6细胞RFX6/18S是QGY-7703-pLNCX2细胞的14.1倍,差异有统计学意义,t=4.143,P<0.05;而在两细胞株中,RFX6/GAPDH的蛋白质印迹条带灰度值分别为1.391 4±0.141 3和0.127 8±0.037 3,QGY-7703-pLNCX2-RFX6细胞RFX6/GAPDH是QGY-7703-pLNCX2细胞的10.9倍,差异有统计学意义,t=14.966,P<0.05。结论:成功构建稳定表达RFX6基因的肝癌细胞株,为研究RFX6基因在肝癌细胞中的功能奠定了基础。     

人肿瘤细胞中Th2类细胞因子的强势表达

目的观察人肿瘤细胞中Ｔｈ１／Ｔｈ２类细胞因子的漂移。方法以ＩＬ－２、ＩＦＮγ代表Ｔｈ１类细胞因子,ＩＬ－４、ＩＬ－１０和ＩＬ－１３代表Ｔｈ２类细胞因子,用逆转录聚合酶链反应和ＲＮＡ斑点杂交检测人肿瘤细胞中Ｔｈ１／Ｔｈ２类细胞因子的基因表达。结果肿瘤发生时,机体的细胞因子网络发生了相应变化,在检测的２０种人肿瘤细胞株中,１１株实体瘤和９株血液系统肿瘤均呈现明显的Ｔｈ２类细胞因子偏移趋势。结论人肿瘤细胞中Ｔｈ２类细胞因子的强势表达可能与肿瘤的免疫逃逸有关     

Decorin mRNA和p57KIP2 mRNA在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的检测Decorin mRNA和p57~(KIP2) mRNA在非小细胞肺癌中的表达情况,并分析它们与非小细胞肺癌的病理、临床特征及预后的关系。方法选取石蜡包埋的59例非小细胞肺癌及12例癌旁正常肺组织的标本制作组织芯片。利用原位杂交法检测Decorin mRNA和p57~(KIP2) mRNA的表达情况。结果Decorin mRNA在癌旁正常肺组织和非小细胞肺癌组织中的表达率分别为66.7%(8/12)和20.3%(12/59),正常组织中Decorin mRNA的表达高于肺癌组织(P<0.05)。大细胞肺癌中Decorin mRNA的表达高于鳞癌(P<0.05)。鳞癌中p57~(KIP2) mRNA的阳性表达率为63.2%(12/19),高于腺癌、大细胞癌和小细胞癌(P<0.05)。在无淋巴结转移的非小细胞肺癌标本中Decorin mRNA和p57~(KIP2) mRNA的表达呈增高趋势,与有淋巴结转移的标本比较其差异具有统计学意义。Decorin mRNA和p57~(KIP2) mRNA的表达无相关性(P>0.05)。结论Decorin和p57~(KIP2)的表达可能与非小细胞肺癌的组织学类型和转移有关,有望成为监测非小细胞肺癌患者病情发展及评价预后的有用指标。     

MMP7蛋白及mRNA在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义

目的 探讨MMP7在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义。方法 采用免疫组化方法及原位杂交方法检测10例正常卵巢组织、10例良性上皮性卵巢肿瘤组织和54例上皮性卵巢癌组织中MMP7蛋白的表达。结果 正常卵巢组织及良性卵巢肿瘤组织中,MMP7蛋白不表达;上皮性卵巢癌组织中,MMP7阳性表达率为88.89%。MMP7的表达与上皮性卵巢癌的临床分期和病理分级有关,与淋巴结转移无关。MMP7的mRNA与蛋白表达呈正相关(P＜0.0001)。结论 上皮性卵巢癌组织中,MMP7蛋白高度表达。MMP7蛋白在上皮性卵巢癌的发生过程中发挥着重要的作用,MMP7蛋白及mRNA表达水平可以作为判断卵巢癌预后的指标。     

紧密连接分子Occludin mRNA在胃癌中的表达和分布

目的：检测紧密连接分子Occludin在胃癌组织中的分布及表达水平,探讨其在胃癌中的表达意义及其与胃癌多药耐药性之间的关系。方法：利用原位杂交技术,对Occludin在胃癌组织中的分布和表达进行检测。结果：Occludin mRNA定位在胃腺体细胞的胞浆中,为蓝色小颗粒,呈弥漫性分布。Occludin mRNA的表达水平与组织的分化水平相关,随着胃腺癌分化程度的降低,Occludin mRNA的表达率也下降。Occludin mRNA在胃癌耐药细胞系SGC7901／VCR中的阳性信号明显高于SGC7901。胃癌与癌旁组织、胃癌与正常胃黏膜组织相比,Occludin mRNA的阳性表达率差异均有显著性（P＜0．05）。Occludin mRNA在癌旁组织（54．8％）、正常胃黏膜组织（60．9％）、高分化腺癌（56．3％）和中分化腺癌组织（28．6％）中的阳性表达率无显著差别,但高分化腺癌与低分化腺癌组织（10．0％）差异有显著性（P＜0．05）。结论：Occludin的表达水平与肿瘤的分化水平呈正相关,并可能参与了体内胃癌多药耐药现象。     

胃癌nm23基因mRNA原位杂交和免疫组化研究

目的 :探讨胃癌mn2 3 H1基因表达与淋巴结转移倾向的相关性。方法 :采用地高辛标记cD NAnm2 3 H1探针 ,原位杂交检测 2 1例胃癌及癌旁组织 ;应用单克隆抗体 (NM30 1)SP法检测 131例胃癌及 60例非胃癌胃粘膜nm2 3/NDPK表达。结果 :原位杂交阳性率 57.1% ( 12 /2 1) ;免疫组化阳性率为87.8% ( 115/131) ,其中非转移组阳性率为 97.1% ( 34 /35) ,转移组阳性率 84 .4 % ( 81/96) ,P <0 .0 5。结论 :胃癌nm2 3 H1基因表达与淋巴结转移倾向呈负相关 ,与PCNA分级呈正相关     

脑膜瘤中c-myc和c-fos mRNA的表达及作用

为探讨ｃ－ｍｙｃ和ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ在脑膜中的作用，作者采用原位杂交结合图像分析的方法对１４例脑膜瘤中ｃ－ｍｙｃ和ｃ－ｆｏｓ的ｍＲＮＡ表达进行了定位，定量研究，结果表明杂交阳性信号均位于肿瘤细胞核周胞质中，ｃ－ｍｙｃ和ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ在脑膜瘤中的表达率分别为６４．３％和３５．７％，说明这两种癌基因表达增高在脑膜瘤发生，发展中具有重要作用。     

In situ Localization of the Human Multidrug-resistance Gene mRNA Using Thymine-Thymine Dimerized Single-stranded cDNA

In order to detect the mRNA transcribed from the multidrug-resistance gene (MDR1), thymine-thymine (T-T) dimerized single-stranded DNA probes have been utilized for hybridization with mRNA either on nitrocellulose filters or in cells and tissues. S1 nuclease digestion rather than sonication was used to obtain short T-T dimerized single-stranded DNA (300–400 bases) so that they could penetrate well into the cytoplasm. The hybridized T-T DNA was detected immunohisto-chemically using rabbit anti-T-T DNA antibody (Ab) and peroxidase-labeled goat anti-rabbit IgG Ab. Employing this system, MDR1 mRNA could be localized clearly in the human multidrug-resistant cell lines K562/ADM, CEM/VLB, 2780 ^ad , and KBC4 cells as well as in human fetal kidney and gastric carcinoma. Furthermore, our system successfully detected the expression of MDR1 mRNA in cell lines of increasing resistance. These results paralleled results obtained at the protein level by immunohistochemistry. The analysis of MDR1 RNA expression by this in situ hybridization technique should be useful in the study of normal human tissues and tumor samples expressing the MDR1 gene.     

食管鳞癌组织中RECK和MMP-9基因mRNA检测与分析

目的 :探讨RECK和MMP-9在食管鳞状上皮细胞癌中的作用及其与临床病理因素的关系。 方法 :收集河南省安阳市肿瘤医院食管癌标本62例、癌旁不典型增生组织31例及正常食管粘膜组织62例。应用原位杂交方法检测每例食管标本RECK和MMP-9mRNA的表达情况。应用χ²检验,Speannan等级相关分析在SPSS13.0统计软件上作相关统计。 结果 :在食管鳞癌癌变过程中RECK在食管鳞癌组织、癌旁不典型增生组织及正常食管粘膜组织中mRNA的表达率依次增高,分别为45.2%(28/62)、61.3%(19/31)、82.3%(51/62),组间比较差异有统计学意义(χ²=19.186,P<0.05);不同分化程度、不同浸润深度及有无淋巴结转移的食管鳞癌组织之间RECKmRNA阳性表达率差异均有统计学意义(χ²分别为6.799、7.862、9.121,P均<0.05)。食管鳞癌组织及癌旁不典型增生组织中MMP-9mR-NA表达均高于正常食管粘膜组织,表达率分别为71.0%(44/62)、54.8%(17/31)、48.4%(30/62),组间比较差异有统计学意义(χ²=6.876,P<0.05);食管鳞癌组织中MMP-9mRNA表达与癌组织的分化程度、不同浸润深度及有无淋巴结转移密切相关(χ²分别为7.458,11.737,3.916,P均<0.05)。RECK和MMP-9mRNA表达率均与食管癌患者的性别、年龄无显著相关关系(P均>0.05)。RECK和MMP-9的mRNA的表达呈负相关关系(γ=-0.348,P<0.01)。 结论 :RECK mRNA表达率降低与MMP-9mRNA表达率升高可能与食管鳞癌的发生、发展及浸润转移有关。     

DAB2IP基因及蛋白在结直肠癌组织中的表达研究

目的 从mRNA和蛋白两个水平上探讨DAB2IP 在结直肠癌组织中的表达及意义。方法 应用核酸原位杂交和免疫组织化学两种方法分别检测127例结直肠癌组织和36例癌旁正常黏膜组织中DAB2IP的表达情况,分析DAB2IP基因及其蛋白表达与结直肠癌淋巴结转移、分化程度及Dukes分期等临床病理特征的关系。结果 结直肠癌组织中DAB2IP mRNA与蛋白的阳性表达率分别为85.04％、79.53％,低于癌旁正常组织的100.00％、94.45％,差异有统计学意义（P均＜0.001）。高、中分化到低分化结直肠癌组织中,DAB2IP的阳性表达率均逐渐下调,3组间差异有统计学意义 （P＜0.01）。结直肠癌无淋巴结转移组中的DAB2IP阳性表达率高于淋巴结转移组,且其mRNA与蛋白表达水平与淋巴结转移呈负相关（r=-0.2361,r=-0.3060;P均＜0.01）。DAB2IP的表达水平与Dukes分期有关,从A期到D期DAB2IP表达逐渐下调,差异有统计学意义（P＜0.01）; 但DAB2IP表达与结直肠癌患者的年龄、性别、发生部位及肿瘤大小均无关（P＞0.05）。结论 DAB2IP在结直肠癌的发生、发展中具有重要作用,且其表达水平与淋巴结转移呈负相关,可作为预测结直肠癌转移潜能及判断预后的一个重要指标。     

甲状腺肿瘤端粒酶逆转录酶mRNA的表达

目的　探讨端粒酶活性在甲状腺肿瘤中的诊断价值。方法　用核酸原位杂交检测了 2 0例甲状腺乳头状癌 ,2 0例甲状腺滤泡状癌 ,9例甲状腺腺瘤端粒酶逆转录酶 (TERT)亚基的mRNA。结果　 2 0例甲状腺乳头状癌阳性检出率为 90 % ,2 0例甲状腺滤泡状癌阳性检出率为 85 % ,明显高于 9例甲状腺腺瘤的阳性检出率 (11.1% ,P <0 .0 1)。结论　端粒酶活化在甲状腺癌的发生过程中起重要作用 ,端粒酶可以作为一种有效的恶性肿瘤标记物用于甲状腺癌的诊断。