树突状细胞在榄香烯复合瘤苗主动免疫保护效应中的作用

目的 :树突状细胞 (ＤＣ)是体内抗原提呈功能最强的抗原提呈细胞 (ＡＰＣ) ,是唯一能提呈抗原给初始型Ｔ细胞使之活化扩增为效应细胞的专职ＡＰＣ。ＤＣ在榄香烯复合瘤苗主动免疫保护效应中的作用如何 ,怎样提高其作用水平值得探讨。方法 :以ＨＣａ -Ｆ或Ｌ61 5榄香烯复合瘤苗 (Ｈ -ＴＣＶ或Ｌ -ＴＣＶ)、Ｈ -ＴＣＶ可溶性上清 (ＴＨ)、ＣＰ免疫小鼠 ,分离制备其脾脏ＤＣ ,在体外分别用相应瘤细胞上清 (Ｈ或Ｌ)和瘤苗上清 (ＴＨ或ＴＬ)冲激后 ,以ＭＴＴ法检测其诱导同系小鼠脾不粘附细胞增殖的能力。结果 :1 正常小鼠ＤＣ在体外可诱导同系…     

榄香烯处理瘤苗抗原致敏的树突状细胞的抗肿瘤效应研究

本文采用 β 榄香烯处理小鼠H2 2肝癌亚系HCa F ,提取榄香烯瘤苗可溶性上清作为粗制肿瘤抗原 ,制备抗原冲击(pulsed)的树突状细胞 ,研究其抗瘤作用及机制。结果表明榄香烯瘤苗抗原冲击的树突状细胞可诱导对HCa F瘤株的MHC非限制性免疫应答 ,继承性转输后对HCa F瘤株攻击有免疫保护效应 ;体外可激发脾不粘附细胞活化增殖和加强杀瘤细胞活性。     

TLR4在HSP70_(EC-TCV)冲激的DC成熟过程中的作用

观察TLR4在Hca-F榄香烯复合瘤苗来源的HSP70(HSP70EC-TCV)冲激处理的小鼠骨髓来源的DC成熟过程中的作用。用rmGM-CSF和rmIL-4诱导小鼠骨髓来源的DC,以HSP70EC-TCV或加入抗TLR4抗体30 min后再用HSP70EC-TCV冲激处理DC,流式细胞仪检测DC的CD40和CD86表达,ELISA法检测DC上清中IL-12和T细胞上清中IL-2浓度,MTT法检测T细胞对Hca-F细胞的杀伤率。结果表明,抗TLR4抗体对DC的CD40和CD86表达无明显影响,但对HSP70EC-TCV诱导DC分泌IL-12和进而致敏的T细胞分泌IL-2及产生杀瘤功能有明显的抑制作用。TLR4信号通路参与HSP70EC-TCV诱导DC成熟过程。     

榄香烯复合瘤苗的HSP70表达及其主动免疫预防效应

为进一步阐明本室专利榄香烯复合瘤苗(EC-TCV)的主动免疫效应与其HSP70-肿瘤肽之间的关系,本文以42℃热休克(H)为对照,首先检测了榄香烯(E)、丝裂霉素C(MMC)、戊二醛(G)单独或复合处理时对小鼠HCa-F肝癌、L615白血病细胞膜HSP(HSP70、HSP90)表达的影响,发现只有膜HSP70的表达在两种榄香烯复合瘤苗中均升高,随后以E-MMC复合处理的HCa-F细胞中提纯的HSP70-肿瘤肽(HHSP70)为免疫原,以小鼠HCa-F肝癌细胞为模型,研究了HHSP70的主动免疫预防效应及其特异性。结果表明,E、MMC、G同H相似,也具有应激原作用,能诱导应激蛋白HSP70的表达;而且HSP70在HCa-F和L615两种肿瘤细胞均以E-MMC-G三者复合处理时为最高;HHSP70能诱发机体产生主动抗瘤效应,且这种效应有一定的肿瘤特异性。     

榄香烯复合瘤苗对小鼠腹腔巨噬细胞功能影响的分析

目的 :本室已证明榄香烯复合瘤苗对多种小鼠肿瘤 (如Ｌ61 5白血病、Ｈ2 2 肝癌等 )有明显的主动免疫保护作用。巨噬细胞在抗肿瘤免疫中不仅作为抗原递呈细胞 ,而且也是参与肿瘤杀伤的效应细胞。本实验检测了榄香烯复合瘤苗对小鼠腹腔巨噬细胞 (ＰＥＭΦ)的吞噬、杀瘤及一氧化氮 (ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ ,ＮＯ)产生等功能的影响 ,以期从这一方面研究瘤苗免疫的机制。方法 :ＭＴＴ法检测不同浓度的榄香烯及榄香烯复合瘤苗体外刺激正常小鼠ＰＥＭΦ的活性变化 ;通过ＰＥＭΦ的吞噬功能 (血红蛋白释放法 )、对肿瘤靶细胞(ＨＣａ-Ｆ、Ｌ92 9)的…     

β-榄香烯、丝裂霉素C及热休克对小鼠H22肝癌细胞HSP 70表达的影响

为了进一步阐明肿瘤疫苗的特异性主动免疫治疗机理,采用β-榄香烯、丝裂霉素C(MMC)及热休克在体外单独及复合处理小鼠H22肝癌细胞,经间接免疫荧光染色,流式细胞仪分析,结果显示.上述处理因素均能明显地诱导H22细胞表达HSP70(以阳性率增高表示).在单因素中,以β-榄香烯效果最佳,阳性率为69.16%,MMC次之;在复合因素中.以β-榄香烯与MMC复合处理的效果最佳,阳性率为95.13%;三种因素联合处理的效果为85.34%.提示瘤苗的抗肿瘤免疫作用是与HSP70表达程度有关.     

淋巴细胞趋化因子增强肝癌树突状细胞融合瘤苗体外免疫作用

目的：观察淋巴细胞趋化因子(lymphotactin, Lptn)基因修饰的肝癌树突状细胞(dendritic cells, DC)融合瘤苗的体外生物学特征和免疫作用。方法： 以重组Lptn基因修饰小鼠骨髓来源的DC，在聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)作用下与H22小鼠肝癌细胞融合，分别以RT-PCR及ELISA方法检测Lptn mRNA及蛋白水平表达，流式细胞仪分析细胞表面免疫分子表达。MTT法检测Lptn基因修饰的肝癌树突状细胞融合瘤苗(DCLptn/H22)对同种异体T淋巴细胞的体外刺激作用。LDH法检测DCLptn/H22融合瘤苗诱导产生的杀伤性T淋巴细胞活性。结果： Lptn基因修饰的DC能分泌较高浓度的淋巴细胞趋化因子，并且具有明显的趋化淋巴细胞功能。DCLptn/H22不但增强融合瘤苗刺激同种异体T淋巴细胞增殖, 而且能增强杀伤性T淋巴细胞活性。结论： 淋巴细胞趋化因子基因修饰能增强融合瘤苗体外免疫刺激作用。     

榄香烯复合瘤苗HSP70与卡介苗HSP70免疫效应机制的对比研究

分别从榄香烯复合瘤苗及卡介苗中提取纯化HSP70，并以榄香烯复合瘤作为阳性对照，通过测定免疫小鼠全脾细胞的细胞增殖周期、细胞表型、细胞毒活性，研究两者在免疫效应及机制上的不同之处。     

HTA-HSP70BCG对小鼠骨髓树突状细胞的冲击作用

目的 :用榄香烯复合瘤苗抗原 卡介苗热休克蛋白复合物 (HTA HSP70 BCG)冲击正常小鼠骨髓树突状细胞 ,检测其抗原递呈功能。方法 :用HTA HSP70 BCG刺激 ,并与GM CSM和IL 4联合培养的骨髓树突状细胞 ,用MTT法测增殖活性 ,用透射电镜检查形态学改变 ,用流式细胞仪检测FITC labeleddextran的摄取。结果 :与单用HTA或HSP70 BCG刺激的树突状细胞相比 ,HTA HSP70 BCG刺激的树突状细胞增殖指数明显增大 (2 10 7± 0 0 13) ,对脾不粘附细胞的激活作用明显增强 (增殖指数为 1 92 7±0 0 73) ,FITC labeleddextran摄取率明显增高 (达 5 8 6 1% ) ,形态上更趋于成熟。结论 :HTA HSP70 BCG 对树突状细胞具有较强的冲激作用 ,增强其抗原递呈功能。     

Hsp70-肿瘤抗原肽复合物修饰的DC疫苗体内外特异性抗瘤作用

目的 :探讨树突状细胞 (DC)及Hsp70 肿瘤抗原肽复合物修饰后的体内外特异性抗瘤作用。方法 :采用一定的生化技术 ,从H2 2肝癌细胞中提取肿瘤抗原肽 ,并在体外与Hsp70进行结合 ;采用细胞培养技术 ,培养rmGM CSF、rmIL 4诱导的小鼠骨髓细胞 ,体外获取大量的DC ,后者经Hsp70 肿瘤抗原肽复合物修饰后刺激小鼠脾淋巴细胞 ,通过MTT法进行检测淋巴细胞的激活 ;收集上述刺激传代培养的淋巴细胞 ,检测其对H2 2瘤细胞和艾氏腹水癌细胞的杀伤功能 ;采用H2 2瘤细胞肌肉接种和H2 2瘤细胞、艾氏腹水癌细胞腹腔接种 ,对接种小鼠给予经体外修饰的DC回输 ,观察其抑制肿瘤的效果。结果 :Hsp70 肿瘤抗原肽复合物可使DC成熟 ,大量分泌IL 12、TNF α、IL 1β等细胞因子 ,并能够使DC激活小鼠脾淋巴细胞 ;激活后传代培养的淋巴细胞对H2 2瘤细胞能够特异性地杀伤 ,而对艾氏腹水癌细胞无效 ;经Hsp 70 肿瘤抗原肽复合物修饰后的DC可作为一种有效的瘤苗 ,体内能特异性地抑制小鼠H2 2肿瘤生长。结论 :Hsp70 肿瘤抗原肽复合物能够很好地修饰体外诱导获取的DC ,使后者成为一种有效的瘤苗 ,体外能够特异性地激活淋巴细胞 ,体内有效地抑制肿瘤生长     

The role of DCs in the immunoprotective effects of active immunization of elemene combo-tumor cell vaccine

The role of DCs in the immunoprotective effects of active immunization of elemene combo-tumor cell vaccine     

Response to hepatocarcinoma Hca-F of mice immunized with heat shock protein 70 from elemene combo tumor cell vaccine

To analyze immune response to murine hepatocarcinoma Hca-F of mice immunized with heat shock protein 70 （HSP70） derived from elemene combo tumor cell vaccine （EC-TCV） of Hca-F, HSP70 was isolated from EC-TCV by ADP affinity chromatography. Mice were immunized with HSP70 intraperitoneally three times and spleen calls were sampled. For cells, their proliferation and cytotoxicity against Hca-F were measured with MTT assay and their phenotypes were analyzed with flow cytometry. Spleen cells of immunized mice with HSP70 exhibited more potent cytotoxicity against Hca-F and proliferation than that of normal control mice, but less potent than that of mice immunized with EC-TCV. Among three groups, the percent of T6 T lymphocytes in the mice immunized with HSP70 （35.5%） was the highest compared with 6.25% in normal mice, and 28.4% in the mice immunized with EC-TCV. Immunization of HSP70 derived from EC-TCV could elicit potent immune response to Hca-F. HSP70 is one of elements inducing anti-tumor immune responses against Hca-F.     

Experimental study on the effect and mechanism of action of active immunization with elemene combo-tumor cell vaccine

Experimental study on the effect and mechanism of action of active immunization with elemene combo-tumor cell vaccine     

肿瘤细胞冻融裂解物上清对凋亡细胞负载的树突状细胞生物学特性的作用研究

目的:探讨Balb/c小鼠骨髓瘤SP2/0细胞冻融裂解物上清对SP2/0凋亡细胞负载的骨髓来源的树突状细胞(DC)的成熟、生物学特性及功能的影响。方法: 采用小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素4(IL-4)诱导骨髓来源的DC, 100Gyγ射线辐照诱导SP2/0细胞凋亡, 与未成熟DC共育16-20h;SP2/0细胞冻融裂解物上清和脂多糖(LPS)分别作用于DC48h。采用免疫荧光标记和流式细胞术分析DC表型;[³H]-TdR掺入试验和[⁵¹Cr]释放试验测定DC刺激T细胞增殖和细胞杀伤效应。采用腹股沟皮下DC主动免疫治疗SP2/0荷瘤小鼠, 每间隔14d治疗1次, 共3个疗程, 观察肿瘤生长情况及小鼠生存期。结果:(1)经SP2/0冻融裂解物上清和脂多糖(LPS)诱导凋亡肿瘤细胞负载的DC高表达共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ分子, 但抗原摄取能力均下降;(2)SP2/0冻融裂解物上清组和LPS组DC体外刺激T细胞增殖和激活CTL能力均高于对照组(P＜0.05);(3)经SP2/0冻融裂解物上清组主动免疫治疗小鼠存活期长于其它各组(P＜0.05)。结论:小鼠SP2/0细胞冻融裂解物上清可诱导凋亡细胞负载的树突状细胞成熟, 能够刺激T细胞增殖和激发肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL), 主动免疫治疗可激发荷瘤小鼠体内有效的肿瘤特异性免疫力, 延长荷瘤小鼠生存期。     

HTA-HSP70BCG冲激的小鼠骨髓树突状细胞的生物学活性变化

利用HTA、HSP70BCG、HTA-HSP70BCG体外冲激小鼠骨髓树突状细胞,观察树突状细胞的抗原捕获能力及抗原提呈能力的变化。用流式细胞仪检测不同冲激组树突状细胞对FITC-Dextran的摄取率;用MTT法检测不同冲激组树突状细胞对HCa-F的增殖抑制作用、对脾不黏附细胞的刺激增殖活性及活化后的脾不黏附细胞对HCa-F的杀伤活性;分别用ELISA法和一氧化氮硝酸还原酶法检测树突状细胞培养上清中IL-12和NO的浓度。结果显示,冲激后的树突状细胞对FITC-Dextran的摄取率降低,对HCa-F的增殖抑制率、脾不黏附细胞的刺激增殖指数、活化后的脾不黏附细胞对HCa-F的杀伤率及树突状细胞培养上清中IL-12和NO的浓度均较对照组树突状细胞增高(P<0.05)。结果表明HTA-HSP70BCG及单独HTA、HSP70BCG均能促进小鼠骨髓树突状细胞的成熟,成熟后的树突状细胞抗原捕获能力下降,而抗原提呈能力增强。     

新城鸡瘟病毒瘤苗对小鼠H22肝癌的免疫防治效应及其机理的研究

目的:研究新城鸡瘟病毒(NDV-L)修饰的肿瘤细胞对小鼠肝癌是否具有免疫防治作用。方法:主要采用透射电镜,免疫荧光和噻唑蓝比色法。结果:生理盐水及单纯活NDV-L对照组小鼠全部长瘤死亡,平均存活时间MST分别为16.8d和22.6d;经NDV-L修饰的瘤苗及未经NDV-L修饰的瘤苗免疫组小鼠MST分别为32.4d和19.6d。免疫治疗实验组小鼠NDV-L修饰的H22瘤苗能诱导出较强的抗肿瘤免疫效应,其抑瘤率(57％),生存率(90％),MST(44.0d)和肺转移率(20％)均比其它各组疗效明显。结论:NDV-L修饰的肿瘤细胞对小鼠肝癌具有免疫防治效应。     

615系小鼠脾LAK细胞及LAK一88/DC细胞系抗癌作用的实验研究

本实验研究了转输615系小鼠脾LAK细胞和LAK—88/DC细胞系对615小鼠白血病(L615)的免疫防治效应,以及继承性化学免疫治疗作用。实验结果表明,攻击前二十一天转输LAK细胞或LAK—88/DC细胞系,并每日腹腔注射培养上清液一周,可以诱导正常受鼠产生对L615明显的免疫预防效应,分别使实验组80%的小鼠长期存活;单独注射培养上清液也有效,可使60%的小鼠长期存活。在攻击后五天,用环磷酰胺(CY:180mg/kg)进行化疗并转输LAK细胞或LAK—88/DC细胞系,则能延长晚期L615病鼠的平均存活时间,并可使实验组25%～28.6%的小鼠长期存活。     

MHC I类抗原多肽致敏IL-2基因修饰的树突状细胞对小鼠 引流淋巴结T细胞亚群的影响及其免疫保护作用

目的探讨MHCI类分子限制性肿瘤抗原多肽Mutl体外冲击白细胞介素2(Interleukin-2,IL-2)基因修饰的树突状细胞(Dendrticcells,DC)对小鼠体内特异性免疫的活化机制。方法用腺病毒作为载体介导小鼠IL-2基因修饰DC,用小鼠Lewis肺癌3LL细胞株MHCI类分子限制性八肽Mutl冲击IL-2基因修饰的DC(DC-IL-2-Mutl)免疫小鼠,用流式细胞术(FACS)分析免疫保护小鼠接受3LL细胞再攻击后引流淋巴结内T细胞亚群的比例变化。结果用Mutl冲击的DC免疫的小鼠抵抗3LL细胞再攻击时,引流淋巴结内CD8