LC-MS检测金锁固精丸中非法添加的枸橼酸西地那非

目的 采用液质联用技术检测金锁固精丸中非法添加的枸橼酸西地那非。方法 选用C₁₈色谱柱(2.1 mm×100 mm,5 µm),以乙腈-0.01 mol·L^-1乙酸铵溶液梯度洗脱,对此制剂的提取液进行液质联用分析,通过与对照品的色谱和质谱行为比较,检测此制剂中枸橼酸西地那非成分。结果 在该金锁固精丸中检出枸橼酸西地那非。结论 本方法简便、灵敏、准确,专属性强,可分析检测此制剂中的枸橼酸西地那非。     

补肾壮阳类中药制剂中非法添加化学药物成分的检测

目的采用液质联用法检测补肾壮阳类中药制剂中非法添加的化学成分西地那非、他达拉非。方法色谱柱为AcquityBEHC18柱（2.1mm×50 mm,1.7μm）,以0.01 mol/L的醋酸铵溶液-乙腈梯度洗脱,流速0.3 mL/min,检测波长254 nm。结果在3批补肾壮阳类中药制剂中检测出西地那非或他达拉非。结论液质联用法灵敏准确,可有于补肾壮阳类中药制剂的质量检验。     

检查中药中非法掺入枸橼酸西地那非的方法研究

目的：检查补肾壮阳的中药及中药保健品中非法掺入化学药－枸橼酸西地那非。方法：建立薄层色谱法，高效液相色谱法对可能掺入枸橼酸西地那非的中药及中药保健品进行分离分析，并用高效液相色谱－二极管阵列检测以及直接电喷雾离子阱质谱－质谱联用技术进行定性鉴定。结果：测定了22个厂家，十多种剂型的65批产品，发现其中13批非法掺入了枸橼酸西地那非。结论：所建方法专属性强，灵敏度高（单位制剂中含有μg级的枸橼酸西地那非即可检出），可作为监督检验此类掺假制剂的有效方法。     

RP-HPLC法测定补肾壮阳中药制剂中违法添加的枸橼酸西地那非

目的:建立以反相高效液相色谱法测定补肾壮阳中药制剂中违法添加枸橼酸西地那非的方法。方法:色谱柱为ODS C18(250mm×4·6mm,5μm),流动相为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(60∶40∶0·8∶0·3),流速为0·8mL·min-1,检测波长为290nm,进样量为10μL。结果:枸橼酸西地那非检测浓度在10~100μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系;平均加样回收率为100·52%,RSD=1·20%。结论:本方法可用于检测补肾壮阳类中药制剂中违法添加的枸橼酸西地那非。     

中药中违法添加枸橼酸西地那非的含量测定方法研究

目的:研究补肾壮阳类中药制剂中违法添加枸橼酸西地那非的含量测定方法。方法:将样品经0.01mol/L盐酸提取后采用反相高效液相色谱法进行测定,色谱柱为KromasilC18,流动相为乙腈-水-冰醋酸-三乙胺(35∶65∶0.8∶0.4),流速为0.8ml/min,检测波长为290nm,进样量为10μl。结果:枸橼酸西地那非检测浓度在10～800μg/ml范围内与峰面积积分值线性关系良好,平均加样回收率为98.2%(RSD=0.99%)。结论:本方法可检测该类制剂中违法添加的枸橼酸西地那非。     

同时检查中成药中添加枸橼酸西地那非或他达拉非的方法研究

目的：建立同时检查中成药中添加枸橼酸西地那非或他达拉非的方法。方法：分别采用薄层色谱、高效液相法及高效液相色谱一二极管阵列检测器光谱法以确定是否添加枸橼酸西地那非或他达拉非。结果：薄层色谱中枸橼酸西地那非和他达拉非的斑点分离效果好，斑点清晰、重现性好；高效液相色谱中西地那非和他达拉非分离效果良好，出峰时间合适；二极管阵列检测光谱法对西地那非和他达拉非的紫外吸收光谱进一步确定薄层色谱与高效液相色谱检查结果。采用本文所建立的方法检测出2批中成药中含有他达拉非。结论：所建立的方法简单、可靠，重现性好，可用于同时检查中成药中是否非法添加枸橼酸西地那非或他达拉非。     

HPLC法测定枸橼酸西地那非的含量

目的：建立枸橼酸西地那非含量及有关物质测定的方法。方法：采用高效液相色谱法,色谱柱为WatersSymme—tryC18柱（250×4．6mm,5μm）,等度洗脱方法,流速为1．01nL／min;检测波长为290nm,柱温40℃。结果：枸橼酸西地那非的浓度在100～480μg／mL范围内线性关系良好（v=198．22x＋98．02R=0．999）,方法的最低检测限为0．5ng（S／N=3．01）;高、中、低3种浓度的平均回收率（n=3）100．3％（RSD=0．84％）;中间精密度RSD=0．53％（n=6）,各杂质峰与主峰达到基线分离。结论：此法操作简单,灵敏、准确、重复性好,适用于枸橼酸西地那非的含量测定。     

检测壮腰补肾丸中非法掺入的枸橼酸西地那非

目的建立检查壮腰补肾丸中非法掺入枸橼酸西地那非的方法。方法采用薄层色谱、高效液相色谱(二极管阵列检测)和质谱分析方法检查。结果样品中检出了枸橼酸西地那非。结论所用方法专属性强、灵敏度高、操作简便,可作为药检部门监督打假的参考方法。     

参茸鞭丸中非法添加枸橼酸西地那非的鉴别

目的建立参茸鞭丸中添加枸橼酸西地那非的鉴别方法。方法采用高效液相色谱法进行鉴别。色谱柱:DiamonsilTMC18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:0.05 mol/L磷酸三乙胺(取7 mL三乙胺用水稀释至1 000 mL,用磷酸调节pH值至3.0±0.1)-甲醇-乙腈(58∶25∶17);检测波长:290 nm;流速:1.0 mL/min。结果该批参茸鞭丸中添加了处方外化学药品枸橼酸西地那非。结论本方法专属性强,准确性高,可作为参茸鞭丸中添加枸橼酸西地那非的鉴别方法。     

蒙药肋柱花化学成分的研究

目的：通过采用液质联用技术,对蒙药肋柱花的化学成分进行分析,为其药理作用更深一步的研究及临床用药提供科学依据。方法：色谱分离采用Venusil MP C_18（4．6mm×300mm,5μm）,流动相为0．1％甲酸水溶液和甲醇,梯度洗脱,流速为1．0ml／min;质谱定性采用多级离子阱质谱,负离子模式扫描;紫外检测范围为210～400nm。结果：在经过整理的液质联用条件下,经液相色谱／离子阱质谱（LC／MSD Trap）检测出肋柱花中的12个成分。经文献查阅,化合物3、7、9、10、12为已知成分,其余均为首次从蒙药肋柱花中检测到的成分。结论：通过液相色谱／离子阱质谱（LC／MSD Trap）联用技术,为分离和鉴定蒙药肋柱花中化学成分确立一种快速、科学的分析方法。     

低分子质量肝素-枸橼酸铵混合离子梯度法制备阿霉素脂质体

目的制备低分子质量肝素-枸橼酸铵混合离子梯度的阿霉素脂质体,并对其处方和制备工艺进行优化。方法采用离子交换树脂法建立脂质体内外水相低分子量肝素与枸橼酸铵的混合离子梯度,考察建立离子梯度的不同方法、脂质体处方及水化介质种类对阿霉素脂质体包封率的影响。结果最终优化的处方为m(hydrogenated soybean phosphatidylcholine,HSPC)∶m(cholesterol,CH)∶m(polyethylene glycol 2000-cholesteryl hemisuccinate,mPEG2000-CHEMS)=3.0∶1.0∶1.5;制备工艺为以100 mmol.L-1枸橼酸铵联同10 g.L-1低分子质量肝素铵为水化介质,除盐时间为15 min。加入低分子量肝素后,可使枸橼酸铵阿霉素脂质体的包封率由78.0%提高到95.5%。结论低分子量肝素的加入可显著提高枸橼酸铵阿霉素脂质体的包封率。     

HPLC法同时测定强阳保肾丸中淫羊藿苷和补骨脂素的含量

目的建立HPLC法同时测定强阳保肾丸中淫羊藿苷和补骨脂素含量的方法。方法采用Phenomen kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-体积分数为0.05%的磷酸溶液(体积比为25∶75)进行等度洗脱,检测波长:270 nm,柱温:30℃,流速:1.0 mL.min-1。结果淫羊藿苷质量浓度在0.509~20.400 mg.L-1(r=1.000)内、补骨脂素质量浓度在0.416~16.600 mg.L-1(r=0.9999)内与峰面积呈良好的线性关系;淫羊藿苷、补骨脂素的回收率分别为99.0%、101.0%,RSD分别为1.5%、1.6%。结论所建立的定量方法适用于强阳保肾丸中淫羊藿苷和补骨脂素的含量测定。     

HPLC法测定穿心莲滴丸中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量

目的建立测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯总含量的方法,用于穿心莲滴丸的质量控制。方法采用HPLC法。色谱柱:Diamonsil ODS柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:甲醇-水(体积比60∶40),流速:1.0 mL.min-1,检测波长:231 nm,柱温:35℃。结果穿心莲滴丸中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯与其他成分分离良好;穿心莲内酯的质量浓度在50.0~300.0 mg.L-1(r=0.999 8)内、脱水穿心莲内酯的质量浓度在20.0~120.0 mg.L-1(r=0.999 7)内与峰面积呈现良好的线性关系;穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的回收率分别为101.62%、97.72%,RSD分别为1.9%、2.1%。结论该方法可有效地控制穿心莲滴丸的质量。     

氧自由基对心室起搏离子流If的影响

应用玻管双微电极电压箝制术，观察氧自由基对正常和模拟缺血绵羊心室心肌传导纤维起搏离子流(I_f)的影响. 结果显示：氧自由基对正常绵羊心室心肌传导纤维I_f无明显影响. 对缺血心室心肌传导纤维I_f的幅值也无明显作用，但在膜电位-90至-110 mV水平,延长起搏离子流达稳态的激活时间和半激活时间(P<0.001),表明氧自由基对心室正常自律组织活动具有抑制作用. 提示缺血再灌性快速性室性心律失常不是由于氧自由基增强正常心室自律组织活动引起.     

三氧化二砷对心肌细胞蛋白激酶C及胞内游离钙的影响

目的　探讨三氧化二砷 (As2 O3)治疗白血病时的心脏不良反应机制。方法　Fluo 3/AM荧光探针标记豚鼠心室肌细胞 ,激光共聚焦显微镜实时测定不同浓度As2 O3干预后的心室肌胞浆 [Ca2 +]i,磷基转移法测定心室肌胞膜和胞浆内蛋白激酶C(PKC)的活性。结果　 0 .5 μmol·L- 1As2 O3对台氏液中豚鼠心室肌细胞 [Ca2 +]i 无明显影响。 2 μmol·L- 1As2 O3持续作用 6min时 ,细胞 [Ca2 +]i 开始升高 ,持续约 9min后恢复到给药前水平。 10 μmol·L- 1As2 O3作用不到 3min时 ,心室肌细胞 [Ca2 +]i 持续升高至扫描结束共 2 7min ,一直没有恢复。As2 O3引起的 [Ca2 +]i 升高可被钙通道阻滞剂维拉帕米和硝苯地平不完全阻断。 2～ 10 μmol·L- 1AS2 O3作用3h可使细胞膜及胞浆相的PKC活性升高 ,10 μmol·L- 1组 ,细胞膜相的PKC升高更明显。结论　一定浓度的As2 O3可使心肌细胞内游离钙升高、PKC活化 ,细胞膜可能是As2 O3最初作用靶点。     

3-氯-1,2-丙二醇在大鼠体内的毒代动力学

目的　为了全面了解 3 氯 1 ,2 丙二醇 ( 3 MCPD)的毒理作用性质。方法　采用毛细管气相色谱 质谱 (GC MS)联用法测定大鼠血液中 3 MCPD的含量。结果　一次性给大鼠ig 75和 3 0 0mg·kg-1的3 MCPD后 ,血药浓度 时间的动力学符合一级吸收一室模型 ,t1/ 2kα 分别是 ( 1 .61± 0 .1 6)和 ( 1 .0 3±0 .1 9)h ,t1/ 2kβ是 ( 3 .40± 1 .0 1 )和 ( 7.3 8± 2 .76)h,tp为 ( 3 .2 4±0 .2 6)和 ( 3 .3 3±0 .3 9)h ,cmax为 ( 3 1±9)和( 2 1 5± 3 2 )mg·L-1,Cl是 ( 0 .2 7± 0 .1 0 )和 ( 0 .1 0±0 .0 4)mg·kg-1·h-1,V为 ( 1 .3 1± 0 .5 0 )和 ( 1 .0 1±0 .0 5 )L·kg-1。结论　结果表明 3 MCPD经胃肠道吸收入血快 ,在动物体内分布广泛。     

NIR法对补肾壮阳类中成药浓缩丸中非法添加西地那非的定性分析

目的运用近红外光谱法对补肾壮阳类中成药浓缩丸中非法添加西地那非进行快速筛查。方法对补肾壮阳类中成药进行近红外光谱扫描并经液相色谱-质谱联用法确证后,将法定检验结果与近红外光谱结合,建立NIR应急检验模型。结果用该检验模型对实验室判定为合格与不合格的样品进行筛查,准确率达到60%。结论建立的应急检验模型具有方法简单、易操作等特点,适用于药品检测车对补肾壮阳类中成药浓缩丸中是否添加西地那非的快速筛查。     

不同配体对m_5乙酰胆碱受体-G蛋白亚单位G_(11)融合蛋白表达和功能的影响

目的　制备毒蕈碱乙酰胆碱受体m5亚型与G 蛋白亚单位G1 1 (m5AChR G1 1 )融合蛋白 ,探索m5AChR与G1 1 之间的耦联功能、相互作用及其影响因素。方法　两步PCR法建立m5AChR与G1 1 融合cDNAs,并在Sf9细胞内表达。 [3 H]QNB和 [3 5S]GTPγS结合实验检测m5AChR与G1 1 融合蛋白的功能。结果m5AChR G1 1 融合蛋白的表达水平为 (60 .4± 2 .0 )nmol·g-1 膜蛋白。不同配体存在使融合蛋白中G1 1 与GDP的亲和力发生变化。乙酰胆碱(ACh)、卡巴胆碱、毛果芸香碱、异丙铵、异丙嗪及阿托品存在时 ,GDP的IC50值分别为 1 35,63 ,1 82 ,4.1 ,8.9和 5.9μmol·L-1 ,无配体存在时 ,GDP的IC50 值为 2 3.4μmol·L-1 。结论　杆状病毒Sf9细胞系统表达的m5AChR G1 1 融合蛋白具备m受体配体结合特性和组分间耦联的功能。m5AChR G1 1 融合蛋白对GDP亲和力取决于m受体配体的性质 ,分析GDP的亲和力的变化有利于筛选和鉴别m5受体亚型特异性配体     

脑内注射纳米三氧化二铁对大鼠空间学习记忆功能的影响及对腹侧中脑的损伤作用

目的探讨纳米三氧化二铁(nano-Fe2O3)对大鼠空间学习记忆功能的影响及其腹侧中脑的损伤作用。方法 立体定位下,大鼠中脑黒质和腹侧被盖区各一次性注射1μlnano-Fe2O320g.L-1后,分别于1,2,3和4周组进行Morris水迷宫实验;取中脑行Perls反应法和免疫组织化学染色,观察多巴胺(DA)能神经元和胶质细胞的变化情况。结果与正常对照组相比,脑内注射生理盐水对大鼠游泳速度、找到平台时间、潜伏期及搜索平台策略评分无影响。注射nano-Fe2O3后2和3周,大鼠找到平台时间和潜伏期明显延长(P<0.05);正常对照组和溶剂对照组搜索平台策略以趋向式和随机式为主,注射nano-Fe2O3后各组均以趋向式和边缘式为主;各组游泳速度明显下降(P<0.05)。Perls反应和免疫组织化学染色结果显示,正常对照组与溶剂对照组均没有双标阳性细胞;nano-Fe2O3组药后1～4周均出现酪氨酸羟化酶(TH)/铁双标阳性细胞(TH+/铁+)、胶质体丝酸性蛋白质(GFAP)/铁双标阳性细胞(GFAP+/铁+)、OX-42/铁双标阳性细胞(OX-42+/铁+),但各组间数量没有明显统计学差异。与正常对照组相比,溶剂对照组TH+,GFAP+,OX-42+单标细胞无显著差异;而nano-Fe2O3组黒质和腹侧被盖区均出现DA能神经元数量减少,少数DA能神经元胞浆内有nano-Fe2O3沉积,星形胶质细胞和小胶质细胞在注射区数目增加并且吞噬nano-Fe2O3颗粒。结论脑内注射nano-Fe2O3能引起DA能神经元的破坏及胶质细胞数目和形态的改变,影响大鼠的空间学习记忆功能。