绝经后骨质疏松症肾阴虚证差异表达基因CLCF1 蛋白表达研究

目的 研究绝经后骨质疏松症肾阴虚证与CLCF1、ASBl和PROK2基因蛋白表达的相关性。方法 病例对照方法,中医辨证肾阴虚证组29例,28例健康绝经后妇女为对照组,Western blot法检测外周血CLCF1、ASB1和PROK2蛋白表达水平。 结果 骨质疏松症肾阴虚组CLCF1蛋白表达水平（0.483±0. 151 )明显低于对照组（0.706± 0.255),P = 0.0001,统计学有非常显著性差异;肾阴虚组ASB1和PROK2蛋白表达与健康对照组比较,差异均无统计学意义（P>0.05>。结论 骨质疏松症肾阴虚证CLCF1蛋白表达水平显著低于健康对照组,骨质疏松症肾阴虚证与CLCF1蛋白下调存在关联。     

绝经后骨质疏松症肾阴虚证关联LincRNA uc431 +的表达研究

目的探讨lincRNA uc431+与绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,POP)肾阴虚证的关系及其二级结构特征。方法在前期研究证实了CLCF1是POP肾阴虚证的重要关联基因,并在血液lncRNA芯片检测中筛选了POP肾阴虚证的特异lincRNAs,本文采用blat软件对靶基因为CLCF1的lncRNA进行分析;采用分析软件RNAfold对lncRNA及其二级结构进行预测;随机选择绝经后骨质疏松症患者,中医辨证分型为肾阴虚证组25例,健康绝经后妇女25例设为正常对照组。用定量PCR技术检测绝经后骨质疏松症肾阴虚证组、对照组外周血lincRNA uc431+及CLCF1的表达水平。结果 blat软件预测lincRNA uc431+的靶基因为CLCF1,相关系数为-0.8192(P=0.0069);RNAfold软件预测发现lincRNA uc431+有多个茎环结构;实时荧光定量PCR结果表明,POP肾阴虚证组CLCF1 mRNA表达水平明显低于对照组(P0.01),lincRNA uc431+在POP肾阴虚证组中表达出现降低,与对照组相比,差异具有统计学意义(P0.01)。结论 lincRNA uc431+的表达下调可能与绝经后骨质疏松症肾阴虚证相关联。     

六味地黄丸对绝经后骨质疏松症肾阴虚证差异表达基因的影响

目的 探讨六味地黄丸对绝经后骨质疏松症肾阴虚证(POP)差异表达基因的影响。方法 用基因芯片技术比较POP肾阴虚证组与POP肾阳虚证组、POP无肾虚证组、健康对照组受试者外周血基因表达谱,筛选出差异表达基因;六味地黄丸治疗 POP肾阴虚证组3个月后,用基因芯片检测六味地黄丸对这些差异表达基因的影响。结果 ①基因芯片筛选POP肾阴虚证组与其他3组比较均有显著性差异的差异表达基因：ASB1、CLCF1、PROK2、GPR27、C3orf35、GSTM5、MUC12,其中ASB1、CLCF1、 PROK2、GPR27和C3orf35表达下调,GSTM5和MUC12表达上调。②六味地黄丸治疗POP肾阴虚证组3个月后,基因芯片检测 ASB1、CLCF1的表达显著上调,CLCF1参与JAK-STAT信号通路中JAK1、CBP显著下调、STAT4显著上调,而PROK2、GPR27、 C3orf35和GSTM5表达水平治疗前后比较无显著性差异。③六味地黄丸治疗POP肾阴虚证组3个月后,与治疗前相比,共有5701个差异表达基因,其中上调基因3072个,下调基因2629个。结论 六味地黄丸上调POP肾阴虚证差异基因ASB1、CLCF1 的表达,其治疗POP肾阴虚证的机理可能与其上调CLCF1介导JAK-STAT信号通路调控下游CBP表达有关。     

绝经后骨质疏松症肾阴虚证的免疫蛋白相关研究

目的探讨绝经后骨质疏松症肾阴虚证与LRG1、SRC蛋白表达变化的关联性。方法随机选择绝经后骨质疏松症患者,中医辨证肾阴虚证组25例,30例健康绝经后妇女为对照组,Western-blot法检测外周血LRG1、SRC的蛋白表达。结果肾阴虚证组LRG1蛋白表达水平(1.2391±1.5860)高于对照组(0.8033±0.7485),有升高趋势,差异无统计学意义(Z=-0.085,P=0.933),肾阴虚证组SRC蛋白表达水平(0.7873±0.6275)与对照组(0.3712±0.4064)比较,差异有统计学意义(Z=-2.874,P=0.004)。结论骨质疏松症肾阴虚证与SRC蛋白表达升高相关联。     

hsa-miR-655靶向调控绝经后骨质疏松症肾阴虚证关联基因CLCF1的实验研究

目的研究靶向调控绝经后骨质疏松症肾阴虚证关联基因CLCF1的microRNAs。方法通过生物信息学预测可能与CLCF1基因3'非编码区(3'Non encoding area,3'UTR)作用的miRNAs;将人工合成的野生型和突变型CLCF1基因3'UTR区序列克隆至荧光素酶报告质粒;将重组荧光素酶报告载体和miRNAs表达载体共转染293T细胞,用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性,验证miRNA对CLCF1基因翻译水平的抑制作用。结果生物信息学预测结果显示,CLCF1基因3'UTR与hsa-miR-655、hsa-miR-300、hsa-miR-381、hsa-miR-374c、hsa-miR-515等5个miRNAs存在互补结合位点;双荧光素酶实验结果表明,与对照组比较,hsa-miR-655组荧光活性下调至33.09%,差异有显著性意义(P=0.001),当使用突变型CLCF1基因3'UTR,荧光活性上调至67.22%,说明hsa-miR-655对CLCF1 3'UTR的基因表达水平有显著抑制作用;与对照组比较,hsa-miR-374c和hsa-miR-515组荧光活性分别下调27.27%(P=0.000)和27.74%(P=0.006),二者对CLCF1 3'UTR的基因表达水平有一定抑制作用;hsa-miR-300和hsa-miR-381组与对照组相比,荧光活性分别下调6.35%(P=0.213)和9.89%(P=0.127),二者对CLCF1 3'UTR的基因表达无明显抑制作用。结论 hsa-miR-655通过靶向结合CLCF1 mRNA的3'UTR区,在转录后水平负性调控绝经后骨质疏松症肾阴虚证关联基因CLCF1的表达。     

绝经后骨质疏松症肾阳虚证的关联基因LTBP1 mRNA 的表达研究

目的研究绝经后骨质疏松症肾阳虚证的关联基因LTBP1及PCSK6的mRNA表达水平,探讨绝经后骨质疏松症肾阳虚证与LTBP1及PCSK6基因表达的关联性。方法随机选择绝经后骨质疏松症患者,中医辨证肾阳虚证组25例,32例健康绝经后妇女为对照组,RT-PCR法检测外周血LTBP1及PCSK6 mRNA的表达。结果肾阳虚证组LTBP1 mRNA表达水平低于健康对照组(F=7.473,P=0.008),差异有统计学意义;肾阳虚证组PCSK6 mRNA表达水平较健康对照组比较,有降低趋势,但差异无统计学意义;通过GO分析参与到的生物途径有细胞外组织形成、代谢过程、磷酸化作用、蛋白磷酸化、TGF-β的细胞外基质合成、BMP信号通路、细胞分泌等;通过Pathway分析参与到弹性纤维形成、细胞外基质组织、整合胰腺癌的通路、TGF-β信号通路、发育生物学、神经生长因子信号转导等通路相关。结论骨质疏松症肾阳虚证与LTBP1基因表达下调相关联。     

绝经后骨质疏松症肾阳虚证差异表达基因分析

目的通过基因表达谱的差比性分析,探讨绝经后骨质疏松症肾阳虚证相关基因的信息学特征。方法随机选择绝经后骨质疏松症受试者,分为肾阳虚证组3例,肾阴虚证组4例、非肾虚证组3例,并选择健康绝经后妇女3例设为正常对照组。用人全基因组表达谱芯片检测4组基因表达谱,肾阳虚证组分别与其他3组比较,筛选共同的差异表达基因,并对这些差异表达基因进行相关功能分析。结果肾阳虚证组与正常对照组、肾阴虚证组、非肾虚证组的差异表达基因分别为348,355,76条;肾阳虚证组与其他3组比较共同的差异表达基因有46条:与正常对照组相比,表达上调基因有4条,表达下调基因有42条。结论绝经后骨质疏松症肾阳虚证主要与免疫、细胞信号转导、钙离子活性和神经内分泌等方面相关。     

lncRNA在绝经后骨质疏松症肾阴虚证中的表达特征 及调控网络分析

目的探讨绝经后骨质疏松症肾阴虚证中lncRNAs的表达特征及基因调控网络。方法随机选择绝经后骨质疏松症 受试者,分为肾阴虚证组3例和肾阳虚证组3例,并选择健康绝经后妇女3例为正常对照组,采用基因芯片技术检测外周血单 个核细胞lncRNAs的表达水平。肾阴虚证组分别与其他2组比较,筛选共同差异表达lncRNAs,并构建lncRNA调控网络;实 时荧光定量PCR检测LINC00334、LINC00189和LOC101929378的表达,验证基因芯片结果。结果肾阴虚证组与正常对照组 和肾阳虚证组比较,筛选出 8 个共同差异表达 lncRNAs： LINC00334、LINC00189、L0C101929378、XLOC _013921、 ENSG00000237489. 2、ENSG00000225278. 2、AK125437 和 RNA95672;这些差异 lncRNAs 参与 Jak/STAT、MAPK、胰岛素通路和 钙离子代谢等12条信号转导通路的调控;实时荧光定量PCR证实,与正常对照组比较,LINC00189在绝经后骨质疏松症肾阴 虚证表达下调（FC =4. 71,P =0. 007) ;LINC00334(FC =6. 83,P =0. 005)和L0C1019293"78绝经后骨质疏松症肾阴虚证表达上 调（FC = 4.51,P = 0.035 ),变化趋势与芯片结果相一致。结论 LINC00334、LINC00189、L0C101929378、XL0C_013921、 AK125437、ENSG00000237489. 2、ENSG00000225278. 2 和 RNA95672 等 8 条 lncRNAs 可能通过调控 Jak/STAT、MAPK、胰岛素通 路和钙离子代谢等信号通路参与绝经后骨质疏松症肾阴虚证的发生发展过程。     

原发性骨质疏松症肾阴虚证骨组织基因表达谱研究

目的：通过检测原发性骨质疏松症患者骨组织基因表达谱的差异,探讨原发性骨质疏松症肾阴虚证相关基因的信息学特征。方法随机选择骨质疏松症患者,中医辨证分型为肾阴虚证组3例、肾阳虚证组3例、无肾虚证组3例,并选择正常骨密度人群3例设为正常对照组。用人全基因组表达谱芯片检测4组人群骨组织基因表达谱,筛选共同的差异表达基因,并对这些差异表达基因进行基因通路等相关功能分析。结果肾阴虚证组与正常对照组、肾阳虚证组、无肾虚证组的差异表达基因分别为2378、4026、4071条,肾阴虚证组与其他3组比较共同的差异表达基因有344条,这些差异基因参与免疫调节、矿物质吸收、激素合成、组氨酸代谢等11条信号通路。结论原发性骨质疏松症肾阴虚证的相关基因主要与免疫调节、激素合成、组氨酸代谢、矿物质吸收等信号通路相关。     

六味地黄丸对绝经后骨质疏松症肾阴虚证JAK/STAT信号通路基因的影响

目的通过观察六味地黄丸对绝经后骨质疏松症肾阴虚证JAK/STAT信号通路基因的影响,探讨六味地黄丸治疗绝经后骨质疏松症肾阴虚证的分子机制。方法随机选择绝经后骨质疏松症肾阴虚证组6例,健康绝经后妇女对照组3例。六味地黄丸治疗肾阴虚证组3个月后,用JAK/STAT信号通路芯片检测其基因表达的变化。结果治疗前肾阴虚证组与正常对照组相比,差异表达基因:PRLR、JUN、JUNB、INSR,表达均下调;肾阴虚证组治疗后与治疗前相比,差异表达基因有25条,上调11条,下调14条,其中JUN、JUNB疗后明显上调。差异表达基因生物学功能分析,免疫相关基因:PRL、PRLR、OSM、ISG15、IL4R;细胞生长增殖与细胞周期相关基因:F2、SOCS3;与STAT蛋白相互作用的转录因子和共同活化基因:JUN、JUNB、SMAD3、SMAD5、SMAD4、SP1、YY1;JAK/STAT信号通路的负反馈调节基因:PIAS1、SOCS4;衔接蛋白基因:SRC、STAM。结论六味地黄丸治疗绝经后骨质疏松症肾阴虚证的机制可能与其调控JAK/STAT信号通路的相关基因有关,这些基因的功能与免疫调节、细胞生长增殖及成骨生长关联。     

miRNA在绝经后骨质疏松症肾阴虚证中的表达谱特征及生物信息学分析

目的探讨绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)肾阴虚证miRNA的表达谱特征,及对差异表达的miRNA进行生物信息学分析。方法随机选择绝经后骨质疏松症受试者,中医辨证,分为3组:PMOP肾阴虚组3例,PMOP肾阳虚组3例,健康绝经后妇女3例作为对照组。采用人miRNA芯片检测外周血单个核细胞miRNA的表达水平。肾阴虚证组分别与其他两组比较,筛选共同的差异表达基因,实时荧光定量PCR验证芯片结果,并对差异表达的miRNA进行pathway分析及靶基因预测。结果肾阴虚证组与对照组、肾阳虚证组两组比较,筛选出20条共同差异表达miRNA;实时定量PCR验证hsa-miR-411-5p、hsa-miR-143-3p、hsa-miR-95-3p表达的结果与芯片结果相符;pathway分析结果显示,这些差异miRNA主要参与代谢通路、癌症通路、Rap1信号通路、粘着斑信号通路、PI3K-Akt、MAPK信号通路、钙离子信号通路、内质网蛋白加工、c GMP-PKG信号通路、Ras信号通路、Wnt信号通路的调控;结合多个数据库对差异表达的miRNA进行靶基因预测,最终筛选出9个靶基因(RC3H1、SOX11、FUT4、GABRA4、NUFIP2、ONECUT2、PHF20、PURB、ZNF148)。结论建立了PMOP肾阴虚证的miRNA基因表达谱,且这20个差异表达的miRNA可能通过调控PI3K-Akt、MAPK、Wnt等与骨代谢相关信号通路参与PMOP肾阴虚证的发生发展过程。     

长链非编码RNA GAS5在绝经后骨质疏松症肾阴虚证的表达及对骨免疫细胞因子的调控作用

目的 研究长链非编码RNA GAS5 (long non-coding RNA GAS5,lncRNA GAS5)在绝经后骨质疏松症（postmenopausal osteoporosis,PMOP）肾阴虚证的表达及其对骨免疫相关细胞因子的调控作用。方法 随机选择绝经后妇女,经骨密度检测和中医辨证分型,分为肾阴虚证组（38例）、肾阳虚证组（32例）和健康对照组（35名）。通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测外周血单核细胞中lncRNA GAS5的表达。通过慢病毒介导的RNA干扰技术,抑制THP-1人单核细胞中lncRNA GAS5基因的表达,并应用细胞因子抗体芯片技术检测骨免疫相关细胞因子的表达变化。结果 与对照组比较,lncRNA GAS5在PMOP肾阴虚证组和肾阳虚证组的表达水平均明显降低（P<0.01）;与肾阳虚证组比较,肾阴虚证组lncRNA GAS5的降低趋势更明显（P<0.05）;RNA干扰抑制lncRNA GAS5表达后,与对照组比较,干扰组lncRNA GAS5的表达下调67.58%,而白细胞介素(IL-6、IL-7、IL-17)、转化生长因子β(TGF-β1)、集落刺激因子（G-CSF 、M-CSF）等23种骨代谢相关细胞因子的表达水平显著上调,重组人巨噬细胞炎症蛋白-1β（MIP-1b）、白细胞介素1 b （IL-1 b）、胞间黏附分子-1（ICAM-1）等3种因子的表达下调。结论 lncRNA GAS5在PMOP肾阴虚证中低表达;体外抑制lncRNA GAS5的表达可影响骨免疫相关细胞因子水平。     

基于UPLC-MS骨质疏松症阴虚证临床代谢标志物筛查研究

目的 筛查“肝肾阴虚证”原发性骨质疏松症患者的血清小分子差异代谢物。方法 筛选门诊符合“肝肾阴虚”证型的患者。通过纳入排除标准,筛选出肝肾阴虚组（I组）、正常组（CK组）各30例。运用UPLC-MS技术检测两组受试者血清小分子代谢物,并进行差异分析,筛选肝肾阴虚证型的差异代谢物。结果 共鉴定出小分子代谢物6 478个。初始筛选标准为OPLS-DA模型第一主成分的VIP > 1,t检验的P < 0.05。筛选I-CK组差异代谢物418个。进一步筛选标准为：①VIP > 1;②P＜0.05;③log2(FC) > 1 或者 < ?1;④Fragment score ≠ 0。共筛选出15个肝肾阴虚证差异性代谢物（氨基酸类6个：甘氨胆酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、氨基吡唑基丙酸;生物碱类2个：茶碱,骆驼蓬总碱;胆红素类2个：胆红素、(4E,15Z)-胆红素;磷脂类1个：溶血磷脂酰乙醇胺;恶唑类1个：2-甲基-4-戊氯恶唑;酚酯类1个：二苯氧苯胺;低聚肽类1个：乳基谷胱甘肽;二萜类1个：15-O DC。结论 筛选出骨质疏松症阴虚证的潜在临床代谢标志物,可用于下一步代谢通路研究。提示代谢组学技术在探索传统中医理论本质及中医药临床研究方面,具有较为广泛的应用前景。     

复方补肾活血颗粒对肾虚血瘀证绝经后非老年骨质疏松症患者视觉模拟评分和骨密度影响的临床观察

目的观察复方补肾活血颗粒对绝经后非老年骨质疏松症患者视觉模拟评分(Visual Analog Scale,VAS)和骨密度(Bone Mineral Density,BMD)的影响。方法研究对象选自2015年6月-2015年12月在本院诊治的肾虚血瘀证绝经后非老年骨质疏松症患者60例,将患者按照随机函数随机分为两组(对照组和治疗组),每组30例。两组均给予一般治疗,对照组予仙灵骨葆胶囊治疗,治疗组予复方补肾活血颗粒。两组观察时限均为6个月,治疗前后需按照研究方案定期计算中医证候积分,BMD和VAS等指标。结果临床观察表明,复方补肾活血颗粒治疗组中医证候有效率为90%,对照组为60%,与对照组相比,疗效明显优于对照组(P0.01)。治疗组中医证候积分为7.96±3.86分,对照组为10.16±3.85分,两组比较具有统计学差异。治疗后治疗组BMD和VAS分别为2.24±0.55 g/cm~2、1.96±1.47分,对照组为2.50±0.41 g/cm~2、2.86±1.79分,治疗组改善情况优于对照组。结论复方补肾活血颗粒能显著改善绝经后非老年骨质疏松症患者中医临床症状、BMD和VAS,未见不良事件的发生,复方补肾活血颗粒治疗绝经后非老年骨质疏松症是安全有效的。     

男性原发性骨质疏松肾虚三证与性激素变化关系的临床研究

目的 探讨男性原发性骨质疏松（ＰＯＰ）肾虚三证与性激素变化的关系,为临床辨证施治提供客观诊断依据。方法 选择７８例有肾虚证的老年男性ＰＯＰ患为研究对象,平均年龄６３．６８±５．９岁（５６～７２岁）,其中肾气虚３０例,肾阴虚２８例,肾阳虚２０例,另选正常对照组３０例,平均年龄６４．３６±５．６岁（５６～７３岁）,同步检测血清Ｅ２、Ｔ、Ｔ／Ｅ２并进行统计学分析。结果 与对照组相比,肾虚三型Ｔ、Ｔ／Ｅ     

绝经后骨质疏松与胰岛素样生长因子

目的骨质疏松是老年妇女常见病。绝经后骨丢失主要原因是骨重建单位的骨吸收与骨形成之间平衡失调。胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ－１）是由肝和骨骼合成的生长因子,它参与骨重建,增强成骨细胞活性。方法应用单光子骨密度仪测量非优势前臂桡尺骨中远端１／３交界处桡骨骨密度（ＢＭＤ）,ＢＭＤ低于０．６０１ｇ／ｃｍ２（ｘ－２ｓ）则诊断为骨质疏松。据此将７６名妇女分为绝经前正常妇女（ＮＯＰ１）、绝经后非骨质疏松妇女（ＮＯＰ２）和绝经后骨质疏松妇女（ＯＰ）三组,测定受试者ＩＧＦ－１水平及其他骨代谢指标。结果随着增龄和绝经年限延长,ＩＧＦ－１是维持骨质的重要因子,绝经后妇女增龄,雌激素缺乏,Ｅ２、ＰＴＨ升高可引起血清ＩＧＦ－１水平下降,ＯＰ组低于ＮＯＰ１、ＮＯＰ２组（Ｐ＜０．０５）。所有受试者的ＩＧＦ－１与ＢＭＤ、Ｅ２呈显著正相关（Ｐ＜０．００１）、与年龄（Ａｇｅ）、甲状旁腺激素（ＰＴＨ）呈显著负相关。结论绝经后骨质疏松为高转换率骨质疏松,ＩＧＦ－１水平下降,导致骨吸收超过骨形成,引起骨丢失和骨质疏松。表明ＩＧＦ－１合理用药可以预防骨质疏松     

绝经后骨质疏松症生存质量的调查研究

目的对约经后骨质疏松症患的生存质量进行调查和评价。方法对４２１名社区绝经后妇女进行腰椎双能Ｘ线扫描测定骨密度,利用ＳＦ－３６生存质量调查量进行了生存质量调查。结果４２１名绝经后妇女中骨质疏松症的发病率为６０％。同时,骨质疏松症患生存质量低于非骨质疏松症患。结论绝经后骨质疏松症患的生存质量与正常人相比下降,生存质量的进一步的研究有可能引入骨质疏松症的诊断与疗产评价。