特异性阻断Hedgehog信号通路对胰腺癌细胞凋亡的影响及分子机制

目的 观察特异性阻断Hedgehog信号通路对人胰腺癌Mia PaCa-2细胞凋亡的影响,探讨其可能的分子机制.方法 应用特异性Hedgehog通路阻断剂KAAD-eyelopamine阻断Mia PaCa-2细胞的Hedgehog信号通路,噻唑蓝(MTT)法检测阻断Hedgehog信号通路对胰腺癌细胞生长情况的影响;流式细胞技术观察细胞凋亡的变化;Western blot方法检测bax和bcl-2表达的变化.结果 KAAD-cyclopamine明显抑制胰腺癌Mia PaCa-2细胞生长,其作用呈剂量依赖性;阻断Hedgehog信号通路后,胰腺癌细胞凋亡显著增加,细胞中bax表达水平上调,bcl-2表达水平明显下调.结论 特异性阻断Hedgehog信号通路使胰腺癌细胞生长抑制,凋亡明显增加,其机制可能为通过上调bax及下调bcl-2的表达水平实现.     

XIAP在膀胱癌中的表达及其与肿瘤增殖活性的关系

目的探讨XIAP在膀胱移行细胞癌(TCC)中的表达及其与TCC增殖活性的相关意义。方法应用免疫组织化学SABC技术检测47例TCC癌组织,6例正常膀胱黏膜组织中XIAP及增殖细胞核抗原Ki-67的表达水平。结果6例正常膀胱组织中仅有1例XIAP表达阳性(16．67%),而在47例TCC癌组织中有37例XIAP表达阳性(78．73%),与正常膀胱组织相比,膀胱癌组织中XIAP表达显著增高(P＜0．01)；复发的TCC癌组织中XIAP的阳性表达率(89．47%,17/19)明显高于初发的癌组织(71．43%,20/28)(P＜0．05)；但是,不同分级和分期的癌组织中XI- AP的表达差异无统计学意义(P＞0．05)；此外,XIAP表达阳性的TCC癌组织中具有较高的核增殖活性,其Ki-67标记指数为(37．51±15．85)%,明显高于XIAP表达阴性的TCC癌组织的(17．76±11．42)%(P＜0．05)。结论XIAP在TCC癌组织中呈高表达,其表达与肿瘤的分级和分期无明显相关,但是与肿瘤的核增殖活性相关,这可能与TCC发生的早期事件及药物耐受机制有关。     

凋亡相关基因在骨肉瘤细胞中的表达及其临床意义

目的 探讨凋亡相关基因在骨肉瘤细胞中的表达及其临床意义.方法 采用3个公认的骨肉瘤细胞株及1个成骨细胞株,提取总RNA,合成生物素标记的cRNA与Affymetrix(R)GeneChip(R) U133A芯片杂交,筛选差异表达的凋亡相关基因.利用MATLAB软件进行细胞凋亡通路的KEGG分析.结果 以表达差异≥2.0倍为限,在Affymetrix(R)HG-U133A芯片包含的所有基因中,3个骨肉瘤细胞株与成骨细胞株比较,一共筛选出7个差异表达的凋亡相关基因:3个上调基因(IKBKB、IL1R1和FAS),4个下调基因(TP53、PPP3CB、PPP3CC和APAF1).利用MATLAB软件将7个差异表达的凋亡相关基因映射到KEGG的凋亡通路上.结论 骨肉瘤足细胞增殖和细胞凋亡间平衡失调的结果,通过调控细胞凋亡相关基因的表达可以诱导肿瘤细胞凋亡,达到抗肿瘤目的 .     

钙调神经磷酸酶信号转导通路在结直肠癌组织中的表达

目的检测钙调神经磷酸酶（CaN）信号转导通路在结直肠癌组织中的表达，分析CaN成员与结直肠癌临床病理特征的关系。方法应用Westem blot检测40例结直肠癌组织及其邻近正常黏膜中CaN Aα、CaN Aβ、CaNB与bcl-2蛋白表达，免疫组织化学法检测CaN在细胞水平的分布。结果结直肠癌组织中CaN信号传导通路成员CaN Aα、CaN Aβ、CaN B与bcl-2在结直肠癌组织中表达明显升高，分别为正常黏膜的3，45倍、3．67倍、4．31倍与3，18倍（P〈0．05）；CaN Aα与CaN郐表达水平与TNM分期较晚（Ⅲ／Ⅳ）有关（P〈0．05），CaN Aα与bcl-2在结直肠癌组织中表达情况呈线性相关，相关系数为0．493，P〈0．05。结论CaN信号转导通路持续活化可能在结直肠癌的发生中起重要作用。     

Hedgehog信号传导通路相关基因在肝癌组织中的表达研究

目的 研究Hedgehog信号传导通路相关基因在肝癌组织中的表达,及其抑制剂对肿瘤细胞生长的影响.方法 免疫组化法检测14例肝癌组织切片、4个肝癌细胞系和正常肝细胞中Hedgehog信号传导通路成员Ihh、Ptch、Smo、Gli的蛋白表达;Western blot检测9例新鲜肝癌组织标本、6例正常肝组织标本和肝癌细胞系中Ihh、Ptch、Smo、Gh的蛋白表达;RT-PCR检测3肝癌组织标本和肝癌细胞系中Ihh、Ptch、Smo、Gli、Hip mRNA表达.结果 14例肝癌组织中免疫组化染色阳性的Gli 6例(42.9%),Ptch 10例(71.4%),Ihh 10例(71.4%),Smo 12例(85.7%).Western blot和RT-PCR检测显示,肿瘤组织中Gli基因的mRNA和蛋白表达均高于正常肝脏细胞,Hip基因的mRNA表达低于正常肝细胞.肝癌细胞系HepG2,Bel-7402和QGY-7701免疫细胞化学染色Pteh和Gli同时为阳性,证明为Hedgehog通路活化的细胞系.在环耙明(KAAD-cyclopamine)作用后,3个细胞系Ptch及Gli基因的mRNA表达下调(Ptch基因tHepG2=3.78,tBel-7402=9.03,tQGY-7701=5.63,Gli基因tHepG2=9.61,tBel-7402=4.15,tQGY-7701=20.30,均P＜0.05);QGY-7701组Hip基因RNA表达上调(t=4.70,P＜0.05).环耙明抑制肝癌细胞系QGY-7701的作用最明显.结论 原发性肝癌组织中Hedgehog信号传导通路有多种基因表达,环耙明有抑制肝癌细胞生长的作用.     

环状RNA TADA2A在结直肠癌组织的表达及其对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察环状RNA TADA2A在结直肠癌组织中的表达及其对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测58对结直肠癌组织及癌旁组织中circTADA2A的相对表达量,分析其与患者临床病理特征间的关系。构建circTADA2A过表达质粒及对照质粒并分别转染结直肠癌细胞株(人结...     

雄激素对MCF-7乳腺癌细胞株增殖凋亡的影响

目的 观察睾丸酮对MCF-7乳腺癌细胞株增殖、凋亡的影响,并探讨其机制.方法 将1×10~(-5)、1×10~(-7)、1×10~(-9)、1×10~(-11) mol/L的睾丸酮分别作用于乳腺癌MCF-7细胞24、48、72 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长,流式细胞术检测不同浓度睾丸酮作用48 h时MCF-7细胞的周期分布和凋亡以及该细胞株中细胞周期素D1蛋白和雄激素受体的表达.结果 高浓度睾丸酮抑制MCF-7乳腺癌细胞株的增殖,1×10~(-5) mol/L睾丸酮作用48 h时,细胞生长抑制率为22.21%,细胞凋亡率为(58.60±5.41)%,但可使细胞周期由G_1 期进入S期,并可使细胞周期素D1蛋白表达量增加,雄激素受体蛋白表达量下降.低浓度睾丸酮(1×10~(-9) mol/L)作用后细胞周期素D1蛋白表达量无明显变化,雄激素受体蛋白表达量升高,在短时间内(24 h)可促进MCF-7细胞增殖.结论 高浓度睾丸酮在体外可使MCF-7乳腺癌细胞株细胞周期素D1蛋白表达增加,使细胞周期由G_1进入S期,而同时促使细胞凋亡,表现出抗肿瘤作用.低浓度睾丸酮有短暂的促进MCF-7乳腺癌细胞增殖的作用.     

凋亡抑制因子XIAP在膀胱癌组织中的表达及其临床意义

目的检测抗凋亡（IAP）家族中XIAP在膀胱癌组织及癌旁正常组织的表达，探讨XIAP的表达在膀胱癌发生发展中的意义。方法采用免疫组织化学和实时荧光定量逆转录．聚合酶链反应（RT-QPCR）对50例膀胱癌患者中XIAP基因在癌组织和癌旁正常组织中的表达进行检测。结果免疫染色标本中，在空白对照、癌旁正常组织和膀胱癌组织中XIAP的阳性表达率分别为0、20％和60％。RT-QPCR显示XIAP在膀胱癌组织中的-△△CT值是癌旁组织的5．7163（4．3081-7．1245）倍，与分级、分期和有无转移没有相关性，但与是否复发有相关性。结论XIAP在癌旁正常组织中有少量表达，而在膀胱癌组织中的表达量高于癌旁组织，其表达量的多少可提肿瘤是否复发。     

塞来昔布对SKBR3细胞增殖、凋亡及核干细胞因子表达的影响

目的 观察塞来昔布对SKBR3细胞增殖与凋亡及核干细胞因子(NS)基因表达的影响.方法 体外培养人乳腺癌SKBR3细胞株高表达[人表皮生长因子受体(Her)-2/neu],应用噻唑蓝(MTT)、细胞形态学观察、免疫印迹、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)酶活性测定、流式细胞术等,观察塞来昔布对 SKBR3细胞增殖与凋亡的影响,并检测NS基因在肿瘤细胞中的定位与表达变化.结果 MTT代谢率测定结果显示塞来昔布能显著抑制SKBR3细胞的增殖,并且呈浓度依赖性,与对照组比较,细胞形态学观察到塞来昔布加药组SKBR3细胞出现典型的凋亡细胞特征.免疫荧光与免疫印迹结果显示NS蛋白和p53蛋白的表达水平随着塞来昔布浓度的增加而逐渐增加(在塞来昔布为1 5、30、60、120 μmol/L时,NS蛋白分别为0.460±0.094、0.695±0.124、0.820±0.161、1.058 ±0.196,p53蛋白分别为0.898±0.166、1.231±0.254、1.518±0.309、1.828±0.362),而环氧合酶-2(COX-2)蛋白(分别为0.252±0.053、0.184±0.032、0.131 ±0.028、0.099±0.019)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白(分别为0.829±0.178、0.661±10.112、0.524 ±0.108、0.378±0.075)则相反.流式细胞仪检测结果显示塞来昔布使SKBR3细胞周期阻滞在G0/G1期结论 塞来昔布以浓度依赖的方式抑制SKBR3细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与NS表达上调有关.     

静水压对软骨细胞凋亡和增殖细胞核抗原表达的影响

目的 探讨静水压对软骨细胞凋亡和增殖的影响及肿瘤坏死因子(TNF)-á和白细胞介素(IL)-1a与软骨细胞凋亡的关系.方法 兔膝关节软骨细胞放置在压力装置中采用不同持续时间(0、4、16、24h)和不同大小静水压力刺激(0、20、40、70 kp)后观察其凋亡及PCNA表达,测定相应细胞培养基中TNF-á和IL-1a的值.结果 软骨细胞受到不同大小静压力后,作用早期细胞凋亡显著(P＜0.05),随时间延长凋亡值出现不同的变化.PCNA的表达在不同的压力下和对照组比较均有差异有统计学意义(P＜0.05).TNF-á可重复双因素分析,时间和压力的交互作用(F=6.90,P＜0.01).IL-1a可重复双因素分析,时间和压力的交互作用(F=5.80,P＜0.01).结论 软骨细胞在持续高压力应力下凋亡增加,增殖减少;在持续低压力时出现相反的结果 .软骨细胞的凋亡和增殖和TNF-á和IL-1a变化有一定的相关性.     

Hedgehog信号通路在人肝癌细胞株中的表达及意义

目的 探讨Hedgehog信号通路在人肝细胞癌细胞系中的表达及意义。 方法 采用半定量 RT-PCR 法检测PLC/PRF/5、HepG2及 SMMC-7721肝癌细胞株中Shh、Ptch1、Smo、Gli1、Gli2 mRNA 的表达;Western blot法检测PLC/PRF/5、HepG2及 SMMC-7721肝癌细胞株中Gli2蛋白的表达。 结果 除Shh外, Ptch1、Smo、Gli1、Gli2 mRNA在PLC/PRF/5、HepG2及 SMMC-7721细胞中均有不同程度表达。其中,Ptch1、Smo、Gli1、Gli2 mRNA在PLC/PRF/5及SMMC-7721细胞中的表达强度显著高于成人正常肝细胞,而Gli1 mRNA在HepG2细胞中的表达量与正常肝细胞无明显差异;Gli2蛋白在成人正常肝细胞中几乎没有表达,在HepG2细胞中的表达也与正常肝细胞无明显差别,而在PLC/PRF/5及 SMMC-7721细胞中,尤其是SMMC-7721细胞,Gli2的表达量异常增高。 结论 Hedgehog 信号通路的异常激活参与了肝细胞癌的发生发展过程,Gli2可能成为肝细胞癌重要生物学标志和生物治疗靶点。     

Hedgehog信号通路抑制剂HPI-4对软骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 检测Hedgehog (HH)信号通路在人软骨肉瘤中的表达情况,探讨HH信号通路抑制剂HPI-4对于软骨肉瘤细胞SW1353增殖和侵袭能力的影响.方法 应用免疫组化技术检测人软骨肉瘤标本中HH信号通路相关蛋白Ihh及增殖相关蛋白Ki67的表达情况,应用CCK-8实验、平板集落形成实验、Transwell肿瘤细胞侵袭实验及免疫印迹法(Western blot)检测HPI-4阻断HH信号通路后SW1353细胞增殖和侵袭能力的变化.结果 免疫组化结果证实Ihh蛋白及Ki67蛋白在人软骨肉瘤中存在明显表达.经不同浓度HPI-4干预后,CCK-8实验显示软骨肉瘤细胞SW1353的增殖活性随HPI-4浓度的增高而逐渐降低;平板集落形成实验显示单个肿瘤细胞不断克隆形成集落的能力受到抑制;Transwell实验证实肿瘤细胞侵袭能力随着HPI-4浓度的增高而递减;Western blot结果显示肿瘤细胞内增殖与侵袭相关蛋白的表达明显下降.结论 人软骨肉瘤中存在HH信号通路的明显激活,HH信号通路抑制剂HPI-4能够明显抑制软骨肉瘤细胞的增殖和侵袭能力.     

阻断Hedgehog信号通路可抑制胆管癌细胞QBC939的生长

目的 研究Hedgehog信号通路特异性阻断剂环靶明(cyclopamine)对人胆管癌细胞系QBC939增殖与凋亡的影响.方法 用MTT比色法检测环靶明对QBC939细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率.RT-PCR法分别检测环靶明处理前后PTCH1、GLI1、EGFR在QBC939中的mRNA表达及变化.Western blot检测环靶明处理前后PTCH1、GLI1、EGFR在QBC939中的蛋白表达及变化.结果 环靶明抑制QBC939细胞的增殖,其作用呈剂量和时间依赖性.经5、10、20 μmol/L的环靶明作用48 h后,QBC939细胞的凋亡率逐渐升高,明显高于对照组的凋亡率(P＜0.01).PTCH1、GLI1、EGFR的mRNA和蛋白均在QBC939中表达,环靶明下调QBC939的PTCH1、GLI1、EGFR表达.结论 阻断Hedgehog信号通路能抑制胆管癌细胞QBC939的增殖,促进其凋亡.     

Hedgehog信号通路转录因子Gli2在肝癌组织中的表达及意义

目的探讨Hedgehog（Hh）信号通路下游转录因子胶质瘤相关癌基因同源蛋白2（Gli2）在肝细胞癌组织中的表达及临床意义。方法采用RealtimeRT—PCR法及Westernblot检测20对肝癌及癌旁组织Gli2基因mRNA及蛋白的表达;采用免疫组织化学法检测52对肝癌及癌旁组织Gli2蛋白的表达情况。结果Gli2mRNA及蛋白在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织。52例肝癌组织中Gli2阳性表达38例（73．1％）,相应的癌旁组织Gli2阳性表达8例（15．4％）,差异有显著性（P〈0．01）;且G1i2蛋白表达与肝癌分化程度、有无血管侵犯及淋巴结转移有相关性（P〈0．05）。结论Gli2的异常表达与肝癌的发生发展及浸润转移密切相关,Gli2可能成为肝癌的重要生物学标志和生物治疗靶点。     

Hedgehog信号通路在胃癌细胞中活化并通过GLI1促进MKN28细胞增殖

目的研究Hedgehog：（HH）信号通路在胃癌细胞中的活化形式及其转录因子GLI1对胃癌细胞增殖和体外成瘤能力的影响。方法通过反转录PCR分析HH通路相关组成分子在7株细胞系中的表达情况．化学合成针对HH信号通路转录因子GLI1的siRNA并转染胃癌MKN28细胞。通过CCK8法和体外克隆形成实验．观察GLII siRNA转染胃癌MKN28细胞后的细胞增殖能力和克隆形成能力的变化。结果在不同胃癌细胞株中．HH信号通路各相关基因的表达情况存在差异,SHH在6株胃癌细胞系中均表达上调．PTCH在KATOⅢ细胞系、SUFU在MKN28和KATOⅢ表达下调。转染GLI1 siRNA后,MKN28细胞中GLI1 mRNA表达受到明显抑制;经GLI1 siRNA作用的MKN28细胞生长明显缓于阴性对照和未处理组（P=0．014）,克隆形成数目及体外克隆形成能力降低（P〈0．001）。结论HH信号通路在胃癌细胞系中被普遍激活,HH信号通路活化后可通过转录因子GLI1促进MKN28细胞增殖．     

miR-1246在肝癌组织中的表达及其对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察微小RNA-1246（miR-1246）在肝癌组织中的表达及其对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响,探讨其在肝癌发生发展中的作用和意义。方法应用实时定量PCR（qRT-PCR）方法检测miR-1246在肝癌以及癌旁组织的表达;对人肝癌细胞株（BEL7402、SMMC7721）转染miR-1246 抑制剂后,采用MTT法观察肝癌细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果 miR-1246 在肝癌组织中表达显著高于癌旁组织[（65.39±8.77）vs（10.23±2.58）,P=0.002]。MTT和凋亡实验结果显示,与阴性对照组相比,转染miR-1246抑制剂后,BEL7402细胞增殖能力下降,凋亡增加（P均＜0.05）;SMMC7721细胞也出现增殖能力下降,凋亡增加（P均＜0.05）。结论 miR-1246 在肝癌组织中高表达,并且与肝癌细胞的增殖及凋亡有关,其表达的上调可能与肝癌的发生发展有关。