Internalization of immunotargeting drugs against hepatoma

Theeffectiveinternalizationoftheimmunotargetingdrugsisthepremiseforthemtodevelopaneffectiveimmunotargetingtreatment.Inrecentyears,scholarsbothhomeandabroadhaveaffirmedthecorrespondingprocessofinternalizationinthecelllinesofmelanoma,leukemia,gastriccarcinoma,etcLI'Zj,butuptonowtheproblemoftheinternalizationofimmunotargetingdrugsagainsthepatomahasnotyetbeenfullyunderstood.WeconjugatedADMparticleswiththemonoclonalantibodiesagainsthumanhepatocellularcarcinoma(HAb18andHAb25)byindirectconjugatin…     

A novel alkaline phosphatase positive granule in rat neutrophils

Neutrophilsplayanimportantroleindefendingthebodyagainstinvadingmicrobesandcanbeactivatedbyanumberofagentssuchaschemoattractantsandcytokines.Theiractivationresultsinavarietyofresponses,includingchemotaxis,phagocytosis,degranulationandtherespiratoryburstllj.Ithasbeenshowninrecentyearsthattheneutrophilsarecapableofcommunicatingwiththeirenvironmentsbymobilizingdifferenttypesofintracellulargranulesandvacuoles[ZJ.Ithasbeenalsosuggestedthatincorporatingofgranulemembraneintothecellplasmamembraneisone…     

HBV感染者血中大颗粒淋巴细胞的测定

分５组测定了乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染者血中大颗粒淋巴细胞（ＬＧＬ）的含量，每组各３０例。其中①组：乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）和核心抗体（ＨＢｃＡｂ）均为阳性；②组：为ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ阳性者；③组：为ＨＢｓＡｇ阳性、抗ＨＢｅ和抗－ＨＢｃ阳性者；④组：为抗－ＨＢｓ阳性者；⑤组：为抗ＨＢｓ和抗－ＨＢｅ阳性者。并且与对照组进行比较。结果表明，①组的ＬＧＬ含量明显高于对照组，差异有极显著性（Ｐ＜０．０１），②组和③组的ＬＧＬ含量也明显高于对照组，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。提示人体感染ＨＢＶ后血中的ＬＧＬ含量显著增高，可能有利于ＨＢＶ的清除。     

rIL－2激活的小鼠粘附性LAK细胞抗瘤活性和扩增的研究

小鼠脾脏淋巴细胞在体外ｒＩＬ－２培养下，可粘附到塑料板或玻璃瓶上，在除去非粘附性淋巴细胞后，粘附性ＬＡＫ细胞（Ａ－ＬＡＫ）在ｒＩＬ－２存在的条件下，４天内可迅速扩增３６倍，与ＬＡＫ细胞抗瘤活性相比，Ａ－ＬＡＫ细胞抗瘤活性明显增强，培养２０天后其抗瘤活性仍可达３３％，从形态学分析，Ａ－ＬＡＫ细胞主要由大颗粒淋巴细胞组成。     

LAK细胞体外杀伤直肠腺癌细胞的透射电镜观察

应用透射电镜观察LAK细胞与HR8348细胞相互作用时超微结构变化。结果显示:(1)效靶细胞接触、结合后,两种细胞质膜接触部位均有不同程度的增厚,电子密度增加,界限不清,形成粘着斑或连结状结构,这种结构是效靶细胞稳定结合的形态学基础。(2)部分LAK细胞突起插入靶细胞深部,少数LAK细胞胞体钻入靶细胞,表明LAK细胞具有与NK、CTL细胞相同的“钻瘤”功能。(3)效靶细胞接触后,两种细胞细胞器及其它细胞颗粒均向效靶接触侧集中,效靶接触部位含有丰富的微丝、微管、微管集中处溶酶体颗粒较多;推测微丝、微管及溶酶体在靶细胞溶解中起一定作用。(4)效靶细胞结合后,靶细胞出现鼓泡和环形穿孔,靶细胞呈凋落状或溶解性坏死。凋落状坏死可能是LAK细胞释放的非穿孔素性物质通过靶细胞膜上的受体,启动靶细胞内源性核酸酶,导致DNA裂解所致。后者可能与穿孔素作用,Ca~H、Mg~H离子内流,细胞水肿及溶酶体导致细胞自溶有关。     

丁酸钠抑制淋巴因子激活杀伤细胞杀瘤活性的研究

目的：探讨低浓度丁酸钠(sodium butyrate)对人结肠腺癌细胞SW1116表面细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和癌胚抗原(CEA)表达的影响及其对淋巴因子激活杀伤(LAK)细胞杀伤活性的改变。方法：噻唑蓝(MTT)比色法检测经不同浓度丁酸钠处理4天后SW1116在不同效／靶比下对LAK细胞杀伤敏感性的改变，流式细胞术和免疫荧光法定量和定性检测丁酸钠对ICAM-1和CEA表达的影响。结果：MTT显示，经0．5、1和2mmol／L丁酸钠处理后，细胞对LAK细胞杀伤敏感性从74．6％下降至15．9％(效／靶为20)，且在一定程度上有浓度依赖性，当效／靶为10时亦呈类似变化，与之对应的ICAM-1阳性细胞数从92．2％下降至7．6％，而CEA阳性细胞数从1．2％上升至16．6％，荧光显微镜下与流式细胞术的改变相一致。结论：丁酸钠减弱LAK细胞对人结肠癌细胞SW1116的杀伤，这种作用可能与其降低ICAM-1同时增加CEA的表达，从而改变效／靶细胞的结合有关。     

VEGF真核表达载体构建及其转染骨髓间充质干细胞的表达

目的 构建大鼠血管内皮细胞生长因子164（vascular endothelial growth factor,VEGF164）真核表达载体pcDNA3.1(-)/VEGF164,观察大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)转染pcDNA3.1(-)/VEGF164基因后,外源性基因VEGF在蛋白水平的表达,为其在治疗肺组织损伤中的应用奠定基础。方法 应用DNA重组技术构建VEGF164真核表达载体并鉴定。采用脂质体介导的转染方法将pcDNA3.1(-)/VEGF164转染大鼠MSCs,并设立空质粒对照组（转染pcDNA3.1空载体）、脂质体对照组,用细胞免疫组化和Western blot检测大鼠MSCs 中VEGF164蛋白的表达情况。结果 重组质粒pcDNA3.1(-)/VEGF164测序结果与基因库(GENEBANK)中序列一致。细胞免疫组化检测显示pcDNA3.1(-)/VEGF164转染组MSCs中可见散在黄色颗粒,而空质粒对照组和脂质体对照组均未见明显黄色颗粒出现。Western blot检测pcDNA3.1(-)/VEGF164转染MSCs 72h后, 细胞裂解产物中VEGF含量明显高于空质粒对照组和脂质体对照组。结论 成功构建了大鼠VEGF164真核表达载体,实现VEGF164基因在大鼠MSCs的成功转染,并有外源性基因及蛋白的表达,具有促进肺组织损伤修复的应用前景。     

VEGF真核表达载体构建及其转染骨髓间充质干细胞并鉴定

目的 构建大鼠血管内皮细胞生长因子164（vascular endothelial growth factor,VEGF164）真核表达载体pcDNA3.1(-)/VEGF164,观察大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)转染pcDNA3.1(-)/VEGF164基因后,外源性基因VEGF在蛋白水平的表达,为其在治疗肺组织损伤中的应用奠定基础。方法 应用DNA重组技术构建VEGF164真核表达载体并鉴定。采用脂质体介导的转染方法将pcDNA3.1(-)/VEGF164转染大鼠MSCs,并设立空质粒对照组（转染pcDNA3.1空载体）、脂质体对照组,用细胞免疫组化和Western blot检测大鼠MSCs 中VEGF164蛋白的表达情况。结果 重组质粒pcDNA3.1(-)/VEGF164测序结果与基因库(GENEBANK)中序列一致。细胞免疫组化检测显示pcDNA3.1(-)/VEGF164转染组MSCs中可见散在黄色颗粒,而空质粒对照组和脂质体对照组均未见明显黄色颗粒出现。Western blot检测pcDNA3.1(-)/VEGF164转染MSCs 72h后, 细胞裂解产物中VEGF含量明显高于空质粒对照组和脂质体对照组。结论 成功构建了大鼠VEGF164真核表达载体,实现VEGF164基因在大鼠MSCs的成功转染,并有外源性基因及蛋白的表达,具有促进肺组织损伤修复的应用前景。     

在单个细胞水平上研究自然杀伤细胞与肿瘤的相互作用

本文报告了自然杀伤细胞(NK)在单个细胞水平上与肿瘤细胞相互作用的特征及机制,以及这一作用与自然抗体及自然进出(emperipolesis)瘤细胞的淋巴细胞(NEC)间的相互关系,提出了一个新的NK杀伤机制假说:“靶细胞自杀模式”。这对指导临床用免疫学方法治疗肿瘤可能有实际意义。本文还对淋巴细胞自然进出瘤细胞的特征及其与NK的关系和与肿瘤细胞相互作用的结局及意义作了详细的讨论.     

比较高碘酸-雪夫与双花扁豆凝集素反应标记的小鼠蜕膜自然杀伤细胞

目的对比高碘酸-雪夫(Periodic acid-Schiff,PAS)与双花扁豆凝集素(Dolichos Bifows Agglutinin,DBA)组织化学法所显示的小鼠蜕膜自然杀伤(decidual natural killer,dNK)细胞的不同。方法取妊娠第3～19天小鼠子宫,制备成连续的切片,分别经PAS、DBA组织化学法、DBA加PAS双重反应显示dNK细胞。结果典型的dNK细胞含有PAS阳性颗粒,其胞膜、核膜和颗粒膜与DBA特异性结合而呈阳性反应;妊娠早期(妊娠第3～6天)不含颗粒的幼稚dNK细胞也可以被DBA标记。DBA加PAS双重反应时,含颗粒的dNK细胞大部分可以被同时标记。结论 DBA是dNK细胞的一种新的标志物,在妊娠早期可用以显示PAS阳性颗粒尚未出现的幼稚dNK细胞。     

大鼠右心耳肌细胞特殊颗粒的超微结构研究

通过透射电镜研究大鼠右心耳肌细胞特殊颗粒的超微结构。结果观察到在内质网和高尔基复合体的囊腔内存在颗粒或其致密物质。特殊颗粒（ＳＧ）可分为Ａ、Ｂ二型，Ａ型颗粒多见，含电子致密颗粒核心；Ｂ型少见，为一均匀浅淡的纤维状核心。ＳＧ界膜与肌膜紧密接触、融合、裂口释放的胞吐现象。这种现象在横管系统偶被观察到。有些ＳＧ界膜部分溶解或完全溶解，形成一种无包膜的电子致密颗粒。本文研究结果为ＳＧ的产生与分型、心钠素的多种释放方式提供了某些新的形态学资料。     

新生大鼠小脑颗粒神经元原代培养与鉴定

目的:建立一种较为理想的小脑颗粒神经元原代培养方法。方法:取新生5~7天SD大鼠,分离小脑皮质,胰酶消化后差速贴壁,种植在预先涂有左旋多聚赖氨酸的培养板内,第3天加入阿糖胞苷纯化神经元;采用神经元特异性烯醇化酶免疫细胞荧光技术鉴定神经元。结果:细胞存活率达(98±1.07)%;24 h内基本贴壁;第3天细胞突起增多、变长;培养6~8天,细胞突起交织成网,形成典型的神经细胞网络;神经元特异性烯醇化酶鉴定神经元细胞占90%左右。结论:实验获取神经元纯度较高,是小脑颗粒神经元体外培养的一种较理想的方法。     

CpG寡聚脱氧核苷酸抑制肾癌细胞增殖及肿瘤生长的体内外实验研究

目的 研究CpG寡聚脱氧核苷酸（CpG ODN）在体内外对肾癌细胞增殖及肿瘤生长的抑制作用,并探讨其可能的作用机制.方法 采用CCK-8法检测不同浓度CpG ODN1826和non-CpG ODN1982（ODN1982）干预对体外培养人肾透明细胞癌Caki-1细胞增殖的影响.24只BALB/c裸鼠皮下接种Caki-1细胞建立荷瘤裸鼠模型,4 d后根据每周1次的治疗方式随机分为对照组（PBS）、ODN1982组（50μgODN1982）、小剂量CpG ODN1826组（25 μg CpG ODN1826）和大剂量CpG ODN1826组（50 μg CpGODN1826）,每组6只.于建模后35 d处死动物,比较各组荷瘤裸鼠的肿瘤体积、质量及肿瘤组织学改变;体外分离各组荷瘤裸鼠脾淋巴细胞,乳酸脱氢酶释放法检测不同靶标比例（脾淋巴细胞：Caki-1细胞或脾淋巴细胞：小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞）的荷瘤裸鼠脾淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性.结果 ODN1982对Caki-1细胞的体外增殖活性无显著影响;500μg/mL CpGODN1826干预可显著抑制Caki-1细胞增殖.至实验终止时点,小剂量和大剂量CpG ODN1826组荷瘤裸鼠的肿瘤体积显著小于ODN1982组和对照组（P＜0.05）;各组间肿瘤质量比较差异均具有统计学意义（P＜0.05）;组织学观察显示,小剂量和大剂量CpG 0DN1826组肿瘤组织较多炎性细胞浸润.当靶标比例为50∶1时,大剂量CpG ODN1826组裸鼠脾淋巴细胞对Caki-1细胞和YAC-1细胞的杀伤活性分别为（9.74±1.16）%和（79.65±5.23）%,显著高于对照组的（7.67±0.22）%和（10.12±3.03）%及ODN1982组的（7.66±0.93）%和（27.60±9.83）%（P＜0.05）.结论 CpG ODN对体外肾癌细胞增殖及荷瘤裸鼠肿瘤组织生长均具有明显抑制作用,其机制可能与CpG ODN增强荷瘤裸鼠的固有免疫应答有关.     

肝细胞、肝窦内皮细胞分离培养及肝细胞支架的制备

目的：探究大鼠肝细胞、肝窦内皮细胞的分离培养方法及肝去细胞支架的制备方法。方法：用胶原酶IV消化肝脏组织后经洗涤、过滤、离心等步骤分离出大鼠肝细胞,然后置于培养基内进行纯化、培养后行细胞免疫组织化学检测;通过Percoll密度梯度离心法分离出肝窦内皮细胞置于培养基内纯化、培养后行免疫荧光检测;肝组织经循环灌注去细胞处理制备成大鼠肝细胞去细胞支架后经扫描电镜证实。结果：分离出的大鼠肝细胞在显微镜下呈光亮圆形,饱满,胞核清晰。肝细胞细胞角蛋白18免疫组织化学染色后见胞浆内存在棕黄色颗粒。肝窦内皮细胞呈梭形,细胞核位于中央。内皮素-1免疫荧光染色后细胞表面呈红色信号。制备成的大鼠肝脏去细胞支架在扫描电镜下显示细胞外基质保留,无细胞核及细胞质成分。结论：成功分离出了肝细胞和肝窦内皮细胞并成功制备了肝去细胞支架。     

EFFECT OF HUMAN AMNIOTIC MEMBRANE ON CORNEAL EPITHELIUM AND YAC-1 CELL

Objective To study the effect of the amniotic membrane on enhancing the proliferation ofcorneal epithelia and YAC-1 cell. Methods After the primary culture of the rabbit's corneal epithelia and YAC-1 cells, they were seeded on the upper surface or stromal matrix side of amniotic membrane respectively. The proliferation results were observed by MTT test. Results The amniotic membrane was found significantly enhancing the proliferation of corneal epithelia on the d1 ,d3 , and d5 after culture. The proliferation rate was 28.93% ,23.32% ,23.41 % (P<0 .05) respectively, but the d7 proliferation rate was 20.72% (P> 0.05). On the dl , d3 , d7 after culture , the YAC-1 cells proliferation rate was 34 .87% ,36 .28% ,33 .86% (P< 0.01) respectively. Conclusion Our results demonstrated that the amniotic membrane could enhance the proliferation of both corneal epithelia and YAC-1 cells significantly. Although amniotic membrane has been suggested as an ideal material for reconstruction of ocular surface, special atte     

鹅绒藤中的黄酮苷类诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的观察不同浓度的鹅绒藤中黄酮苷类单体化合物山奈酚-7-O-α-L-鼠李糖苷（Monomer Compounds-Ⅴ,MC-Ⅴ）诱导肿瘤细胞凋亡的形态学变化及其凋亡率的检出。方法用浓度50、100和200μg·mL-1的MC-Ⅴ作用人宫颈癌Hela细胞、人胃癌MGC-803细胞和小鼠淋巴瘤YAC-1细胞48h和72h后,采用细胞凋亡荧光Hoechst33342/PI双染方法,在荧光显微镜下观察肿瘤细胞在加MC-Ⅴ后的形态变化过程,并计算三种肿瘤细胞的凋亡率。结果镜下可见正常对照组细胞质染色均匀,形态规则,呈均匀微弱蓝光;所有MC-Ⅴ作用的肿瘤细胞核固缩,染色质凝集,随着浓度的增加和作用时间的延长,细胞膜损坏加剧;在MC-Ⅴ作用的三种肿瘤细胞中,作用于Hela细胞,染色质边集化,部分染色质裂断;作用于MGC-803细胞,染色质部分高度凝集,核碎裂、边集化严重,呈现不均一的荧光显色结构;作用于YAC-1细胞,细胞核固缩凝集成小团块状结构。三种肿瘤细胞的凋亡率均随MC-Ⅴ浓度的增高及作用时间的延长而增大。结论MC-Ⅴ可以诱导不同的肿瘤细胞显示不同的凋亡形态,并呈时间和剂量依赖性,提示其作用于肿瘤细胞的作用机制不同。     

缺血再灌注引起神经元凋亡及褪黑素抗凋亡的机制

目的 探讨模拟缺血再灌注引起神经元凋亡的途径和褪黑素(melatonin，MT)抗凋亡的作用机制。方法 用原代培养的SD乳鼠小脑颗粒细胞建立以缺氧缺糖模拟缺血再灌注模型，并加不同浓度的MT(10^-5、10^-7、10^-9mol／L)孵育。采用荧光比色法检测其线粒体跨膜电位及细胞内的活性氧；用Western blot及ELISA分别检测线粒体和胞质中的细胞色素C；比色法检测胞质中Caspase-3的活性。结果 在模拟缺血再灌注小脑颗粒细胞模型中，细胞内的活性氧在缺氧缺糖后明显增加；线粒体跨膜电位降低并随再灌注时间延长而加重；线粒体释放入胞质的细胞色素C增加，胞质的Caspase-3活性增加；MT可显著减少活性氧和抑制线粒体释放细胞色素C，抑制线粒体跨膜电位的降低，并呈一定剂量依赖性。结论 ①缺血再灌注引起的神经元凋亡部分是通过线粒体凋亡途径；②MT可通过抗氧化作用和阻止线粒体凋亡而抑制模拟缺血再灌注诱导的小脑颗粒细胞凋亡。     

二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌的病理形态学研究

使用DEN诱发大鼠肝癌,整个诱癌过程分为非特异性药物反应、非癌性增生性改变和肝癌发生3个阶段。非癌性增生性改变表现为由各种异常肝细胞组成的增生结节和小胆管腺瘤样增生,从实验过程和形态学看,增生性改变与癌肿发生具有密切关系。依分化程度,肝癌的超微结构呈多样性改变。在1例胆管细胞癌中发现与APUDoma所见不能区别的致密核心颗粒,推测为1种特殊类型的胆管细胞癌。作者认为,DEN诱发的肝癌具有肝细胞和胆管细胞两种组织起源。     

甘草次酸和甘草酸对离体大鼠肝细胞膜效应的电镜观察

目的研究甘草次酸和甘草酸对离体大鼠肝细胞的膜效应及膜结合位点。方法应用体循环灌注胶原酶法分离正常大鼠肝细胞,在肝细胞培养中分别加入D-Hanks液、猪苓多糖、甘草酸及甘草次酸,24h后收集细胞。分别作扫描电镜和透射电镜观察膜效应,应用胶体金探针法检测正常肝细胞表面甘草次酸及甘草酸的结合位点。结果扫描电镜示加入甘草次酸的肝细胞表面微绒毛缺乏,呈现大量大小不等的光滑的囊泡状隆起;胶体金探针实验示透射电镜下可见加入甘草次酸?牛血清白蛋白-胶体金颗粒探针的正常肝细胞表面覆有密集的黑色胶体金颗粒。结论甘草次酸和甘草酸对大鼠离体肝细胞具有明显的生物膜效应;肝细胞膜上有与甘草次酸、甘草酸相结合的位点;且以甘草次酸更为显著。     

TEM observation on LAK cells killing the human rectal adenocarcinoma cells in vitro

ＴＥＭｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｎＬＡＫｃｅｌｌｓｋｉｌｌｉｎｇｔｈｅｈｕｍａｎｒｅｃｔａｌａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓｉｎｖｉｔｒｏ￥ＤｉｎｇＹａｎｑｉｎｇ（丁彦青），ＬｉＣｈｕｎｄｅ（李春德），ＺｈａｎｇＪｉｎｈｕａ（张进华），ＺｈｕＭｅ...