甘草酸二铵对胰腺癌BxPC-3细胞株的影响

目的探讨甘草酸二铵(DG)对胰腺癌Bx PC-3细胞株的影响。方法胰腺癌Bx PC-3细胞株随机分成对照组,5-氟尿嘧啶(5-FU)组(50μg/ml),DG高、低剂量组(48,24μg/ml)。采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测胰腺癌Bx PC-3细胞株的增殖抑制率;采用细胞划痕法检测胰腺癌Bx PC-3细胞株的运动能力;电子显微镜观察胰腺癌Bx PC-3细胞株镜下形态结构;采用免疫组化和RT-PCR检测胰腺癌Bx PC-3细胞株中Raf-1水平。结果与对照组比较,5-FU组及DG高、低剂量组细胞OD值明显降低(P0.05),运动能力明显降低(P0.05),胰腺癌Bx PC-3细胞株形态结构明显损伤,Raf-1水平明显降低(P0.05)。结论 DG通过抑制Raf-1在胰腺癌治疗中发挥重要作用。     

人肝癌细胞株7721HCV体外感染模型的建立

目的建立接近体内自然感染状态并能稳定支持HCV体外长期复制的感染细胞模型。方法将慢性丙型肝炎患者的血清与人肝癌细胞系7721共同孵育8小时后,分别以反转录-聚合酶链反应、免疫组化、原位杂交检测细胞和/或培养上清中的HCV正、负RNA、HCV抗原的表达及HCV-RNA在感染细胞内的定位。结果感染血清和细胞共同孵育后的第2～65天,从细胞内和培养上清中均可间断地检测出HCV正、负RNA,即使其间细胞传代4次HCV NS_3抗原、NS_5抗原在细胞内能稳定表达,原位杂交显示HCV RNA阳性物质多位于细胞浆。结论 7721细胞不但对HCV易感,而且可以稳定地支持HCV的体外长期复制,此模型可以用于HCV感染、复制机理的研究、抗病毒药物的评价及保护性抗体/疫苗的初步筛选。     

辛伐他汀对胰腺癌BxPC-3细胞株Shh相关蛋白的影响

目的探讨辛伐他汀对胰腺癌Bx PC-3细胞株Shh相关蛋白的影响。方法胰腺癌Bx PC-3细胞株随机分成对照组,5-氟尿嘧啶(5-FU)组(50μmol/L),辛伐他汀高、中、低剂量组(20,10,5μmol/L)。采用台盼蓝染色法和MTT法检测胰腺癌Bx PC-3细胞株的生长曲线和增殖抑制率;采用细胞划痕法检测胰腺癌Bx PC-3细胞株运动能力;采用免疫组织化学、RT-PCR法检测胰腺癌Bx PC-3细胞株Shh、Ptch1、Smo、Gli1水平。结果与对照组比较,5-FU组,辛伐他汀高、中剂量组胰腺癌Bx PC-3细胞OD值、运动能力和Shh、Ptch1、Smo、Gli1水平明显降低(P<0.05)。结论辛伐他汀通过抑制Bx PC-3细胞株Shh、Ptch1、Smo、Gli1水平在胰腺癌治疗中发挥积极作用。     

生长抑素及其类似物对肝癌及胰腺癌的治疗研究进展

近年发现,生长抑素及其类似物能够抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,不仅能抑制具有神经内分泌功能肿瘤的增殖,对普通的实体瘤亦有抑制作用,现已初步应用于临床。其生物学活性是通过靶细胞膜上的特异性受体介导,不同组织受体表达量及种类不同,抑瘤效果也不同。肝癌和胰腺癌是消化系统两大恶性肿瘤,对其治疗及防治具有重要意义。     

人肝癌细胞株HCV体外复制模型的建立

０引言缺乏适宜丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）复制模型的窘况已极大地阻碍了对ＨＣＶ系统和深入的研究．只有建立方便易得、价格低廉、对ＨＣＶ易感的细胞模型,才能更好地研究ＨＣＶ．本研究用自然存在于慢性丙型肝炎患者血清中的ＨＣＶ直接感染培养中的人肝癌细胞７７２１,旨...     

黑色素瘤相关抗原A1在肝癌细胞株中的表达与基因甲基化程度的相关性

目的 探讨人肝癌细胞株中黑色素瘤相关抗原A1(MAGE-A1)表达状况与肝癌细胞基因甲基化的关系。方法 提取10种人肝癌细胞株的总RNA,用逆转录聚合酶链反应对细胞株的MAGE-A1基因的表达进行检测;提取10种人肝癌细胞株的基因组DNA,用限制性酶切和Southern印迹杂交对每种细胞的基因组甲基化程度进行定量分析。另外对基因组DNA行HpaⅡ酶切后,用引物CDS21、EDP4和CDS20、EDP4进行聚合酶链反应扩增,然后用特异性探针杂交来检测肝癌细胞株MAGE-A1启动子的甲基化状态。用特异性序列聚合酶链反应方法检测每一种细胞株的人白细胞抗原-A位点型别。结果 QGY-7703、SMMC-7721、HLE、BEL-7402、BEL-7404、BEL-7405肝癌细胞株的MAGE-A1基因表达阳性,且细胞分化程度均为中低分化;HepG2 2．2．15、HepG2、QGY-7701和Huh7肝癌细胞株的MAGE-A1基因表达阴性,且细胞分化程度均为高中分化。通过定量分析表明,MAGE-A1表达的肝癌细胞株与MAGE-A1不表达的肝癌细胞株比较,前者基因组甲基化程度较低(t=2．896,P=0．02)。肝癌细胞株MAGE-A1基因启动子区甲基化分析结果表明HepG2 2．2．15、HepG2、QGY-7701和Huh7为高甲基化,SMMC-7721、HLE、BEL-7402、BEL-7404、BEL-7405为低甲基化。结论 肝癌细胞株MAGE-A1 mRNA表达与其基因甲基化程度有关。     

毫米波诱导人肝癌细胞株凋亡的研究

目的　研究 35 .8GHz毫米波照射诱导人肝癌细胞株BEL74 0 4凋亡。方法　选取BEL74 0 4人肝癌细胞体外培养 ,随机分为 4组 ,分别为对照组、毫米波照射 30min组、氟尿嘧啶 (5 FU)组、毫米波联合 5 FU组。用荧光显微镜观察细胞核的变化 ;DNA片段化分析检测染色体断裂情况 ;用流式细胞仪检测凋亡率。结果　BEL74 0 4细胞经毫米波照射后诱发的细胞死亡具有细胞凋亡的形态学特征 ;照射 30min组和 5 FU组诱导细胞凋亡的比例高于对照组 ,分别为 (14 .33± 2 .6 6 ) % ,(18.5 8±2 .5 7) %和 (3.2 1± 1.0 6 ) % ,毫米波与 5 FU联合明显增加细胞凋亡率 ,达 (2 7.91± 3.6 6 ) %。结论　 35 .8GHz毫米波照射可诱导BEL74 0 4肝癌细胞凋亡 ,与 5 FU联合使用可明显增加凋亡比例     

转录因子ETS1 RNA干扰质粒的构建及其稳定转染胰腺癌细胞株的建立

目的:构建针对人转录因子ETS1的RNA干扰质粒,鉴定并建立干扰质粒稳定转染的人胰腺癌PANC-1细胞株.方法:分别构建3条针对ETS1基因的shRNA干扰质粒(shRNA-1,shRNA-2,shRNA-3),并将其转染至人胰腺癌PANC-1细胞株,用药物G418筛选出稳定细胞株,Western blot鉴定稳转细胞株中ETS1表达量.结果:3条针对ETS1基因的shRNA干扰质粒转染胰腺癌PANC-1细胞株后,Western blot检测结果显示干扰质粒1(shRNA-1)具有最佳干扰效果.将具有最佳干扰效果的质粒稳定转染人胰腺癌PANC-1细胞株后,经Western blot鉴定相较于对照组稳定细胞株其ETS1表达量明显降低.结论:成功构建了针对人转录因子ETS1的RNA干扰质粒,并建立其稳定转染的人胰腺癌PANC-1细胞株.     

特异性抗人胰腺癌细胞株8988s突变型K-ras mRNA核酸代酶的设计

目的:设计特异切割人胰腺癌8988s细胞株中突变型K-ras基因mRNA的核酸代酶(ribozyme)。方法:PCR扩增人胰腺癌细胞株8988s的K-ras基因第一外显子,克隆并测序,明确有否突变、突变类型,以该基因mRNA为靶分子,进行计算机二级结构预测分析,选择核酸代酶切点,并进行基因组同源性分析,设计理论上最佳的核酸代酶。结果:人胰腺癌8988s中K-ras基因12密码子有突变,突变类型为GGT→GTT,设计筛选了三种针对人胰腺癌8988s突变型K-ras mRNA的核酸代酶分子,其中一种为特异性的。结论:人胰腺癌8988s中K-ras突变位点可成为特异性核酸代酶切割位点,切割此位点的核酸代酶对野生型K-ras mRNA功能无影响,K-ras编码序列中第199、205、217位点也为核酸代酶切割的理想位点。     

胰腺癌相关危险因素研究及高危评分模型的建立

目的 探索胰腺癌相关危险因素，建立胰腺癌高危评分模型。方法 采用病例对照研究，收集2002年1月至2004年4月胰腺癌患者119例，正常对照238名。对所有研究对象进行流行病学问卷调查，通过两组比较确定胰腺癌相关危险因素。选择相关危险因素和症状进行多元Logistic回归分析，计算各变量的权重分数，建立高危评分模型。结果 高剂量吸烟（〉17包年）人群发生胰腺癌的风险增加（OR 1．98；95％CI 1．11～3．49），尤其是男性高剂量吸烟者（OR 2．11；95％CI 1．18～3．78）；饮酒对胰腺癌的危险性主要表现在高剂量饮洒中（OR 3．681；95％CI 1．604～8．443）。胰腺癌患者中以肉食为主者占31．03％，而对照组中仅为7．61％（P〈0．0001）；有糖尿病史的胰腺癌患者占18．49％，而对照组仅为5．77％（P=0．0003），胰腺癌组中患糖尿病时间中位数为0．5年，对照组为4年；临床症状中厌食、上腹痛、腹胀、黄疽及体重下降两组间差异有统计学意义。根据高危评分模型对两组进行评分，胰腺癌组和对照组平均分分别为80．6（95％CI，74．9～86．3）和7．4（95％CI 6．0～8．7），P〈0．001。初步确定≥45分为胰腺癌高危人群筛查界值。结论 高剂量吸烟、高剂量饮酒、肉食、糖尿病史为汉族人群的胰腺癌相关危险因素。该评分模型町用于胰腺癌高危人群的初筛．可能有助于发现早期胰腺癌患者，但还需进一步验证。     

人胰腺癌细胞株PANC1裸鼠原位模型的建立及磁共振监测

目的 建立一种稳定的人胰腺癌裸小鼠原位移植瘤模型,并探讨无创的磁共振(MRI)对其监测的应用价值.方法 人胰腺癌细胞株PANC1体外常规传代后建立裸鼠皮下种植瘤模型,将皮下种植瘤制成细胞悬液,植入20只BALB/C-nn裸鼠的胰腺包膜下构建人胰腺癌原位移植模型;通过MRI检查监测模型的成瘤率、成瘤时间、肿瘤生长速度、肿瘤形态、信号变化等特征,于第7周末取肿瘤组织行病理学检查.结果 接种后15 d,7只(35%)荷瘤鼠在MRI上显示成瘤,至接种后27 d,成瘤率为100%.肿瘤信号与邻近组织相比,90%(18/20)病灶T1WI呈均匀稍低信号,10%(2/20)呈等信号;75%(15/20)在T2WI呈均匀高信号.移植后2、3、4、5、6、7周经MRI测量的移植瘤体积分别为(12.6±2.4)mm3、(94.3±11.2)mm3、(175.9±82.5)mm3、(395.8±126.6)mm3、(1290.2±167.2)mm3、(1583.4±87.4)mm3.病理学检查确诊为胰腺低分化腺癌,并保持原发瘤的生物学特征.结论 人胰腺癌细胞株PANC1移植瘤制成的细胞悬液种植裸小鼠胰腺包膜下制备胰腺癌模型符合人胰腺癌的特征,且易于无创监测,为临床研究提供了一个有效、稳定的体内实验体系.     

健择对胰腺癌细胞株蛋白质表达的影响

目的观察健择致胰腺癌细胞株蛋白质变化的影响,寻找一些在化疗过程中出现的蛋白质,为临床治疗提供理论依据.方法利用蛋白质组学技术,分析胰腺癌细胞株SW-1990在加入健择和5-FU后其蛋白质谱的变化,最后鉴定其差异表达的蛋白质.结果培养细胞受抑制约50%时,健择为1～100 ng/ml,5-FU为250～2 500 ng/ml.质谱鉴定了9个差异表达的蛋白质,其中对照组3个,加药组6个.结论健择对细胞株的作用明显优于5-FU.β-肌动蛋白、MGC:19713等某些高表达的蛋白质可能成为观察化疗效果的重要指标.     

体外培养的肝癌细胞株与正常肝细胞株蛋白质的差异表达

目的:运用SELDI蛋白质芯片技术分析体外培养的肝癌细胞株(HepG2)与正常肝细胞株(L02)蛋白质表达差异．方法:在体外培养HepG2和L02细胞株,收获细胞,将细胞用细胞裂解液裂解后,采用SELDI蛋白质芯片技术用IMAC3 及WCX2芯片检测HepG2、L02的蛋白质谱．结果:体外培养的肝癌细胞株与正常肝细胞株的蛋白质存在差异表达,IMAC3芯片共捕获61个蛋白,发现差异峰7个,与 L02细胞相比,其中3个差异蛋白在肝癌细胞中高表达,4个差异蛋白在肝癌细胞中低表达．WCX2芯片共捕获91个蛋白, 发现差异峰14个,其中3个差异蛋白在肝癌细胞中高表达,11 个差异蛋白在肝癌细胞中低表达．结论:SELDI蛋白芯片技术检测肝癌细胞株与正常肝细胞株蛋白质的差异表达方法简便,敏感性高,重复性好．     

人胰腺癌鸡胚模型的建立及其肿瘤生物学观察

目的 建立人胰腺癌鸡胚移植模型，为临床胰腺癌研究提供一种简便实用的工具。方法 将人胰腺癌细胞系SW1990细胞接种到鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）上，动态观察移植瘤的形态及肿瘤生物学特性，分析影响移植瘤成活的因素，并对瘤组织行组织学检查。结果 成功建立了人胰腺癌鸡胚移植模型，移植瘤组织学结构与人胰腺癌相似；接种癌细胞数量影响接种成瘤率，接种癌细胞数量越大，成瘤率越高；移植瘤可诱发血管生成并向肿瘤呈放射状集中。结论 将SW1990细胞接种到鸡胚上建立鸡胚移植胰腺癌是可行的，本模型可动态观察胰腺癌生长，模拟其在体内生长情况，为胰腺癌研究提供一种简便实用的工具。     

Establishment of risk model for pancreatic cancer in Chinese Han population

AIM: To investigate risk factors for pancreatic cancer and establish a risk model for Han population. METHODS: This population-based case-control study was carried out from January 2002 to April 2004. One hundred and nineteen pancreatic cancer patients and 238 healthy people completed the questionnaire which was used for risk factor analysis. Logistic regression analysis was used to calculate odds ratio (ORs), 95% confidence intervals (Cls) andβvalue, which were further used to establish the risk model. RESULTS: According to the study, people who have smoked more than 17 pack-years had a higher risk to develop pancreatic cancer compared to non-smokers or light smokers (not more than 17 pack-years) (OR 1.98; 95% CI 1.11-3.49, P= 0.017). More importantly, heavy smokers in men had increased risk for developing pancreatic cancer (OR 2.11; 95%CI 1.18-3.78, P=0.012) than women. Heavy alcohol drinkers (>20 cup-years) had increased risk for pancreatic cancer (OR 3.68; 95%CI 1.60-8.44). Daily diet with high meat intake was also linked to pancreatic cancer. Moreover, 18.5% of the pancreatic cancer patients had diabetes mellitus compared to the control group of 5.8% (P= 0.0003). Typical symptoms of pancreatic cancer were anorexia, upper abdominal pain, bloating, jaundice and weight loss. Each risk factor was assigned a value to represent its importance associated with pancreatic cancer. Subsequently by adding all the points together, a risk scoring model was established with a value higher than 45 as being at risk to develop pancreatic cancer. CONCLUSION: Smoking, drinking, high meat diet and diabetes are major risk factors for pancreatic cancer. A risk model for pancreatic cancer in Chinese Han population has been established with an 88.9% sensitivity and a 97.6% specificity.     

Establihment of an experimental liver metastasis model by intraportal injection of a newly derived human pancreatic cancer cell line (KLM-1)

Summary Conclusion It is suggested that this liver metastasis model formed by a highly metastatic variant (KLM-1) is valuable for the study of the liver metastatic processes of human pancreatic cancer. Background Liver metastasis in the early postoperative period is one of the causes for the poor prognosis of patients with resected pancreatic cancer. Therefore, it is necessary to establish an experimental model to study the mechanisms of liver metastasis in pancreatic cancer. Methods Human pancreatic cancer cell lines (PK-1, PK-9, and KLM-1) were injected into the portal vein of nude mice with or without pretreatment with antiasialo GM1, and colonies of liver metastases were counted for comparison of metastatic ability of these cell lines. Biological and histopathological characteristics of the highly liver metastatic cell line (KLM-1) were compared with its parent cell line (PK-1). Results PK-1 cells and PK-9 cells rarely formed liver metastasis foci, but pretreatment with antiasialo GM1 promoted liver metastasis. KLM-1 cells formed liver metastases at the rate of 70% even without antiasialo GM1 pretreatment. KLM-1 cells had such biological characteristics as short doubling time, short lag phase, and resistance to NK cytotoxicity. After intraportal injection of¹²⁵I-labeled KLM-1 cells, radioactivitiy as well as micrometastases were detected in the liver at 72 h.     

KAI1基因转染的胰腺癌细胞系的建立

目的转染pCMV—KAI1重组质粒入人胰腺癌细胞株MiaPacaⅡ和Panc1，观察KAⅡ基因的表达，为进行KAI1基因在胰腺癌中抗转移作用的有关研究提供实验用靶细胞，并为今后利用KAI1基因治疗胰腺癌提供实验和理论依据。方法采用Western blot方法从7种胰腺癌细胞中筛选出无KAI1表达的MiaPacaⅡ和Panc1细胞株，通过脂质体转染法将pCMV—KAI1重组质粒转染到MiaPacaⅡ和Panc1中，经G418筛选4周，获得单克隆细胞系，应用Western blot、免疫荧光及免疫细胞化学方法检测转染细胞系KAI1蛋白的表达。结果获得了稳定表达KAI1基因的MiaPacaⅡ和Panc1胰腺癌细胞克隆；经Western blot分析显示转染后的胰腺癌细胞株MiaPacaⅡ与Panc1有明确的分子质量为29100KAI1蛋白表达，而未转染细胞无KAI1蛋白表达；免疫荧光显示，转染的胰腺癌细胞质中可见明显的荧光，而无转染的母细胞无荧光；免疫细胞化学检测显示，无转染的细胞呈阴性反应，转染的细胞呈中到强度的阳性反应。结论pCMV—KAI1重组质粒经转染人人胰腺癌细胞株MiaPacaⅡ和Panc1后可表达KAI1蛋白，从而建立了KAIl蛋白表达的MiaPacaⅡ和Panc1细胞系。     

胰腺癌肿标志物单项和联合检测的价值

目的 评价血清肿瘤标志物单项检测和联合检测对胰腺癌诊断的意义。方法 对10例慢性胰腺炎和51例胰腺癌病人用放免法测定血清CA199,CA50,CA125和CEA含量,分析并比较单项检测和联合检测的意义。结果 4种肿瘤标志物单项检测以CA199对胰腺癌诊断意义最大,敏感性和特异性最好,分别达92．5％和81．81％,误检率18．18％,漏检率7．5％,阳性预测值94．87％,阴性预测值75％,研究还发现CA199特别是胰体癌诊断有较大意义;联合检测以CA199＋x(CA50,CA125,CEA任一阳性）意义较大,敏感性87．5％,特异性81．81％,误检率18．18％,漏检率12．5％,阳性预测值94．59％,阴性预测值64．28％;但诊断 价值不大于CA199单项检测（P＞0．05）。结论 CA199检测对胰腺癌诊断意义较大,特别是对早期胰体癌诊断有较大意义;联合检测并不能提高CA199的诊断价值,却增加医疗费用,意义不大。